分子生物学整理(1)
分子生物学总结(朱玉贤版)(2020年10月整理).pdf
结合着下载的资料复习吧~~~~绪论分子生物学的发展简史Schleiden和Schwann提出“细胞学说”孟德尔提出了“遗传因子”的概念、分离定律、独立分配规律Miescher首次从莱茵河鲑鱼精子中分离出DNAMorgan基因存在于染色体上、连锁遗传规律Avery证明基因就是DNA分子，提出DNA是遗传信息的载体McClintock首次提出转座子或跳跃基因概念Watson和Crick提出DNA双螺旋模型Crick提出了“中心法则”Meselson与Stah用N重同位素证明了DNA复制是一种半保留复制Jacob和Monod提出了著名的乳糖操纵子模型Arber首次发现DNA限制性内切酶的存在Temin和Baltimore发现在病毒中存在以RNA为模板，逆转录成DNA的逆转录酶哪几种经典实验证明了DNA是遗传物质? (Avery等进行的肺炎双球菌转化实验、Hershey 利用放射性同位素35S和32P分别标记T2噬菌体的蛋白质外壳和DNA)第二章染色体与DNA第一节染色体一、真核细胞染色体的组成DNA：组蛋白：非组蛋白：RNA = 1：1：(1-1.5)：0.05 （一）蛋白质（组蛋白、非组蛋白）（1）组蛋白：H1、H2A、H2B、H3、H4功能：①核小体组蛋白（H2A、H2B、H3、H4）作用是将DNA分子盘绕成核小体②不参加核小体组建的组蛋白H1，在构成核小体时起连接作用（2）非组蛋白：包括以DNA为底物的酶、作用于组蛋白的酶、RNA聚合酶等。
常见的有（HMG蛋白、DNA结合蛋白）二、染色质染色体：分裂期由染色质聚缩形成。
染色质：线性复合结构，间期遗传物质存在形式。
常染色质（着色浅）具间期染色质形态特征和着色特征染色质异染色质（着色深）结构性异染色质兼性异染色质（在整个细胞周期内都处于凝集状态）（特定时期处于凝集状态）三、核小体由H2A、H2B、H3、H4各2 分子组成的八聚体和绕在八聚体外的DNA、一分子H1组成。
yes分子生物学课件重点整理__朱玉贤
代谢上的稳定性，保证亲代的遗传信息稳定地传递给后代。
（二）与 DNA 复制有关的物质
1、原料：四种脱氧核苷三磷酸（ dATP、 dGTP、dCTP 、dTTP)
2、模板：以 DNA 的两条链为模板链，合成子代 DNA
3、引物： DNA 的合成需要一段 RNA 链作为引物
4、引物合成酶（引发酶） ：此酶以 DNA 为模板合成一段 RNA, 这段
4、真核生物有多种 DNA 聚合酶。
5、真核生物 DNA 复制过程中的引物及冈崎片段的长度均小于原核
生 物 。（ 真 核 冈 崎 片 段 长 约 100-200bp ， 原 核 冈 崎 片 段 长 约
1000-2000bp。）
（六）原核和真核生物 DNA 的复制特点比较
① 复制起点（ ori）：原核一个，真核多个；
双链的解开 RNA 引物的合成 DNA 链的延伸 切除 RNA 引物，填补缺口，连接相邻的 DNA 片段
1、双链的解开 ------ ftju 制有特定的起始位点， 叫做复制原点。 ori(或 o）、富含 A、 T 的区段。 从复制原点到终点，组成一个复制单位，叫复制子 复制时，解链酶等先将 DNA 的一段双链解开，形成复制点，这个复 制点的形状象一个叉子，故称为复制叉 双链解开、复制起始 P44 大约 20 个 DnaA 蛋白在 ATP 的作用下与 oriC 处的 4 个 9bp 保守序 列相结合 在 HU 蛋白和 ATP 的共同作用下 ,Dna 复制起始复合物使 3 个 13bp 直接重复序列变性 ,形成开链 解链酶六体分别与单链 DNA 相结合 (需 DnaC 帮助 ),进一步解开 DNA 双链 2、RNA 引物的合成 DnaB 蛋白活化引物合成酶，引发 RNA 引物的合成。 引物长度约为几个至 10 个核苷酸， 3、DNA 链的延伸 DNA 的半不连续复制（ semi-discontinuousreplication)：DNA 复制
分子生物学考试整理笔记
分⼦⽣物学考试整理笔记第⼀章1.请定义DNA重组技术和基因⼯程技术。
DNA重组技术：是将不同的DNA⽚段按照⼈们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表的，产⽣影响受体细胞的新的遗传性状。
基因⼯程技术：是将不同的DNA⽚段按照⼈们的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表的，产⽣影响受体细胞的新的遗传性状。
还包括其他可能使⽣物细胞基因组结构得到改造的体系。
第⼆章2.什么是核⼩体？简述其形成过程。
由DNA和组蛋⽩组成的染⾊质纤维细丝是许多核⼩体连成的念珠状结构。
核⼩体是由H2A,H2B,H3,H4各两个分⼦⽣成的⼋聚体和由⼤约200bp的DNA组成的。
⼋聚体在中间，DNA分⼦盘绕在外，⽽H1则在核⼩体外⾯。
每个核⼩体只有⼀个H1。
所以，核⼩体中组蛋⽩和DNA的⽐例是每200bpDNA有H2A,H2B,H3,H4各两个，H1⼀个。
⽤核酸酶⽔解核⼩体后产⽣只含146bp核⼼颗粒，包括组蛋⽩⼋聚体及与其结合的146bpDNA，该序列绕在核⼼外⾯形成1.75圈，每圈约80bp。
由许多核⼩体构成了连续的染⾊质DNA细丝。
核⼩体的形成是染⾊体中DNA压缩的第⼀阶段。
在核⼩体中DNA盘绕组蛋⽩⼋聚体核⼼，从⽽使分⼦收缩⾄原尺⼨的1/7。
200bpDNA完全舒展时长约68nm,却被压缩在10nm的核⼩体中。
核⼩体只是DNA压缩的第⼀步。
核⼩体长链200bp→核酸酶初步处理→核⼩体单体200bp→核酸酶继续处理→核⼼颗粒146bp3. 简述DNA的⼀,⼆,三级结构的特征DNA⼀级结构：4种核苷酸的的连接及排列顺序，表⽰了该DNA分⼦的化学结构DNA⼆级结构：指两条多核苷酸链反向平⾏盘绕所⽣成的双螺旋结构DNA三级结构：指DNA双螺旋进⼀步扭曲盘绕所形成的特定空间结构4.原核⽣物DNA具有哪些不同于真核⽣物DNA的特征？（1）结构简练：原核DNA分⼦的绝⼤部分是⽤来编码蛋⽩质，只有⾮常⼩的⼀部分不转录，这与真核DNA的冗余现象不同。
分子生物学名解——自己整理
分生考点Copyright by 孙倩1.顺式作用元件（cis-acting elements）: 存在于基因内外，与基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特定的DNA序列称为顺式作用元件。
2.启动子(promoter)：真核基因的启动子指的是RNA聚合酶识别、结合的基因转录调控区中启动基因转录的一段特异DNA序列，包含一组转录调控功能组件，其中每一个功能组件的DNA序列约7~20 bp。
3.典型的启动子核心序列（core sequences）是在转录起始位点上游25~35 bp处，有一保守的TATA序列，被称为TATA盒（TATA box），真核细胞的TATA盒多为TATAAAA序列。
TA TA盒与原核细胞的启动子一样，对RNA聚合酶II的转录起始位点起定位作用。
4. 有一些编码蛋白质基因不含TA TA盒或起始子，多在起始位点上游约100bp内含有20~50个核苷酸的CG序列，被称做CpG岛（CpG island）。
此种基因可有多个转录起始点，可产生含不同5’末端的mRNA。
这些基因大多为低转录基因，编码中间代谢酶的管家基因。
5.启动子上游元件（promoter-proximal elements, 或upstream promoter elements）是一些位于TATA盒上游的DNA序列，与调节蛋白结合，调节通用转录因子与TATA盒的结合、RNA聚合酶与启动子的结合，以及转录起始复合物的形成，从而决定基因的转录效率与专一性。
常见的序列是CAA T盒和GC盒。
6.一些真核细胞基因含有另一种启动子元件，称为起始子(initiator,Inr)，决定启动子的强度。
7.增强子（enhancer）：是能够结合特异基因调节蛋白，促进邻近或远隔特定基因表达的DNA 序列。
在酵母中，被称为上游活化序列（upstream activator sequences, UASs）。
增强子的作用通常与其所处的位置和方向无关。
分子生物学整理
阮病毒是一类小型蛋白质颗粒，约由250个氨基酸组成。
朊病毒蛋白有两种构象：正常型和致病型。
两者的主要区别在于其空间构象上的差异。
正常型仅存在a螺旋，而致病型有多个β折叠存在，后者溶解度低，且抗蛋白酶解；②致病型可胁迫正常型转化为致病型，实现自我复制，并产生病理效应；③基因突变可导致细胞型PrPc中的α螺旋结构不稳定，至一定量时产生自发性转化，β片层增加，最终变为致病型。
因此，合成朊病毒所需的信息，存在于寄主细胞之中的，而朊病毒的作用，仅在于激活在寄主细胞中为朊病毒的编码的基因，使得朊病毒得以复制繁殖。
MicroRNAs（miRNAs）是在真核生物中发现的一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，其大小长约20~25个核苷酸。
成熟的miRNAs是由较长的初级转录物经过一系列核酸酶的剪切加工而产生的，随后组装进RNA诱导的沉默复合体，通过碱基互补配对的方式识别靶mRNA，并根据互补程度的不同指导沉默复合体降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻译。
特点：1广泛存在于动物、植物、真菌及病毒的基因组中，miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中，而且绝大部分定位于基因间隔区。
2高度的保守性、时序性和组织特异性。
3成熟的miRNA 5′端有一磷酸基团, 3′端为羟基, 这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA 的降解片段区别开来。
产生和：miRNA基因通常是在核内由RNA聚合酶II(polII)转录的，最初产物为大的具有帽子结构(7MGpppG)和多聚腺苷酸尾巴(AAAAA)的pri-miRNA。
pri-miRNA在核酸酶Drosha和其辅助因子Pasha的作用下被处理成70个核苷酸组成的pre-miRNA。
RNA–GTP和exportin 5将pre-miRNA输送到细胞质中。
随后，另一个核酸酶Dicer 将其剪切产生约为22个核苷酸长度的miRNA:miRNA双链。
这种双链很快被引导进入沉默复合体(RISC)复合体中，其中一条成熟的单链miRNA保留在这一复合体中。
基础分子生物学重点整理
基础分子生物学重点整理Key Notes for Molecular Biology——Filed by Double Smile·Lee1.作为遗传物质染色体特征·分子结构相对稳定·能够自我复制，使亲子代之间保持连续性·能够指导蛋白质合成，从而控制整个生命过程·能够产生可遗传变异2.染色体在细胞分裂间期表现为染色质。
伸展的染色质形态上有利于在它上面的DNA储存的信息的表达。
而高度螺旋化了的棒状染色体则有利于细胞分裂中的遗传物质的平分。
3.原核细胞染色体：·一般只有一条大染色体且大都带有单拷贝基因；·整个染色体DNA几乎全部由功能基因和调控序列所组成；·几乎每个基因序列都与它所编码蛋白质序列呈线性对应关系。
4.真核细胞染色体的组成：真核生物染色体中DNA相对分子质量一般大大超过原核生物，并结合有大量的蛋白质，结构非常复杂。
其具体组成成分为：组蛋白、非组蛋白、DNA5.组蛋白是染色体的结构蛋白，其与DNA组成核小体。
根据其凝胶电泳性质可将其分为H1、H2A、H2B、H3及H4。
6.组蛋白的特性：·进化上极端保守性，其中H3、H4最保守，H1较不保守。
·无组织特异性。
精细胞染色体的组蛋白是鱼精蛋白。
·肽链上氨基酸分布的不对称性。
碱性氨基酸集中分布在N端的半条链上。
·组蛋白的修饰作用·组蛋白H5富含赖氨酸7.基因组含有两类遗传信息：一类是传统意义上的遗传信息：即DNA序列所提供的遗传信息。
另一类是表观遗传学信息：它提供了何时、何地、以何种方式应用遗传信息的指令。
8.非组蛋白的量大约是组蛋白的60%-70%，具有组织专一性和种属专一性。
非组蛋白包括酶类、骨架蛋白、核孔复合物蛋白以及肌动蛋白、肌球蛋白等。
它们也可能是染色质的组成成分。
几类常见的非组蛋白：HMG蛋白与超螺旋结构有关；DNA结合蛋白，与复制与转录有关的酶或者调节物质。
现代分子生物学 第三版 课后习题及答案(整理版)
朱玉贤-现代分子生物学第三版课后习题及答案（整理版）现代分子生物学课后习题及答案（共10章）第一章绪论1．你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？答：分子生物学是从分子水平研究生命本质的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。
狭义：偏重于核酸的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调节控制等过程，其中也涉及与这些过程有关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。
分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。
所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。
这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。
这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。
阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。
2．分子生物学研究内容有哪些方面？答：分子生物学主要包含以下三部分研究内容：A.核酸的分子生物学，核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。
由于核酸的主要作用是携带和传递遗传信息，因此分子遗传学（moleculargenetics）是其主要组成部分。
由于50年代以来的迅速发展，该领域已形成了比较完整的理论体系和研究技术，是目前分子生物学内容最丰富的一个领域。
研究内容包括核酸/基因组的结构、遗传信息的复制、转录与翻译，核酸存储的信息修复与突变，基因表达调控和基因工程技术的发展和应用等。
遗传信息传递的中心法则（centraldogma）是其理论体系的核心。
现代分子生物学整理的名词解释及问答
名词解释：DNA聚合酶：指以脱氧核苷三磷酸为底物，按5’→3’方向合成DNA的一类酶，反应条件：4种脱氧核苷三磷酸、Mg+、模板、引物。
DNA聚合酶是多功能酶，除具有聚合作用外，还具有其它功能，不同DNA聚合酶所具有的功能不同。
解旋酶：是一类通过水解ATP 提供能量，使DNA双螺旋两条链分开的酶，每解开一对碱基，水解2分子ATP。
拓扑异构酶：是一类引起DNA 拓扑异构反应的酶，分为两类：类型I的酶能使DNA的一条链发生断裂和再连接，反应无需供给能量，类型Ⅱ的酶能使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，当它引入超螺旋时，需要由ATP供给能量。
单链DNA结合蛋白：是一类特异性和单链区DNA结合的蛋白质。
它的功能在于稳定DNA解开的单链，阻止复性和保护单链部分不被核酸酶降解。
DNA连接酶(DNAligase)：是专门催化双链DNA中缺口共价连接的酶，不能催化两条游离的单链DNA链间形成磷酸二酯键。
反应需要能量。
前导链：在DNA复制过程中，以亲代链(3’→5’为模板时，子代链的合成(5’→3’)是连续的．这条能连续合成的链称前导链。
冈崎片段、后随链：在DNA复制过程中，以亲代链(5’→3’)为模板时，子代链的合成不能以3’→5’方向进行，而是按5’→3’方向合成出许多小片段，因为是冈崎等人研究发现，因此称冈崎片段。
由许多冈崎片段连接而成的子代链称为后随链。
半不连续复制：在DNA复制过程中，一条链的合成是连续的，另一条链的合成是不连续的，所以叫做半不连续复制。
修复：除去DNA上的损伤，恢复DNA的正常结构和功能是生物机体的一种保护功能。
切除修复：在一系列酶的作用下，将DNA分子中受损伤部分切除，以互补链为模板，合成出空缺的部分，使DNA恢复正常结构的过程。
重组修复：DNA在有损伤的情况下也可以复制，复制时子代链跃过损伤部位并留下缺口，通过分子间重组，从完整的另一条母链上将相应的核苷酸序列片段移至子链缺口处，然后用再合成的多核苷酸的序列补上母链的空缺，此过程称重组修复。
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二、综合(问答、选择等)1.试述真核生物基因的结构，下图中数字分别代表什么？模仿此图，画出原核生物基因的结构①转录区②外显子③内含子④增强子⑤启动子⑥非翻译区2.以下分别是什么生物基因组的特征①多数都是断裂基因（真核生物）②基因为单拷贝；（病毒）③存在重叠基因；（病毒）④具有操纵子结构；（原核生物）⑤大量非编码序列，编码序列仅占10%不到；（真核生物）⑥多顺反子；（原核生物）⑦重复序列少；大多数蛋白质基因保持单拷贝形式；（原核生物）⑧多为单拷贝，单顺反子（真核生物）⑨大量重复序列；（真核生物）⑩基因组大，多个复制起点（真核生物）DNA多态性主要有哪些分子遗传标志？RFLP, VNTR, SNP3.简述DNA生物合成的特点？答：①复制的结果：半保留复制。
即以1分子DNA为模板合成2分子序列完全相同的DNA分子，其中每个分子中一条链是原来的母链，另一条链是新合成的。
②复制的过程：半不连续复制。
即一条链是连续合成的（前导链），另一条链则是先合成短的冈崎片段，再由DNA连接酶连接而成的（后接连）③复制从特定复制起始序列开始，复制起始序列通常富含A-T对，首先在此处解链产生单链模板，起始DNA 合成。
4.请比较原核生物DNA聚合酶Ⅰ与DNA聚合酶Ⅲ的活性及它们在大肠杆菌DNA合成中的作用。
答：DNA聚合酶Ⅰ的活性：①5’→3’DNA聚合酶活性②3’→5’核酸外切酶活性（矫正作用）③5’→3’DNA 核酸外切酶活性（缺口平移或切除冈崎片段5’引物）作用：①切除RNA引物，填补空缺②DNA损伤的修复DNA聚合酶Ⅲ的活性：①5’→3’DNA聚合酶活性②3’→5’核酸外切酶活性作用：DNA复制的主要酶5.逆转录酶具有哪几种活性？答：①逆转录活性②水解活性③复制活性6.以下DNA分子复制的方式是怎样的？①大肠杆菌基因组DNA θ型复制②真核细胞染色体DNA 多起点双向③真核细胞线粒体DNA D环复制④λ噬菌体σ复制⑤质粒DNA θ型复制⑥φX174噬菌体σ复制7.转录具有哪四项基本特征？答：①选择性转录②不对称转录③连续性转录④转录后加工8.与转录有关的主要DNA调控序列有哪些？答：①启动子：RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列②终止子：DNA上与转录终止有关的序列③增强子：能使与其邻近的基因转录频率明显增加的DNA序列9.真核生物有哪三种RNA聚合酶，其主要功能分别是什么?答：①RNA聚合酶Ⅰ在核仁中催化转录rRNA前体②RNA聚合酶Ⅱ在核质中催化转录mRNA前体③RNA 聚合酶Ⅲ在核质中催化转录55rRNA，tRNA前体，SnRNA10.大肠杆菌终止子可以分为哪两类？答：①不依赖ρ因子的转录终止②依赖ρ因子的转录终止11.真核生物mRNA的前体需要经过哪些加工？答：①5’端加帽：m7G②3’加尾：polyA③剪接：剪除内含子，拼接外显子④链内部核苷酸碱基化修饰12.试述原核生物mRNA的一级结构。
答：①5’非翻译区（5’-UTR）前导序列：a.含有核糖体结合位点<RBS>b.作用：核糖体赖以组装及启动翻译所必需②编码区：a.从起始密码到终止密码的一段序列，开放阅读框b.原核生物mRNA为多顺反子，真核生物mRNA为单顺反子③3’非翻译区（3’-UTR）尾随序列13.如何理解大肠杆菌中32种tRNA分子、20种氨基酸、61个密码子之间的对应关系。
答：①由于密码子的简并性，不同密码子可以编码同一种AA，所以除去3个终止密码子的61种密码子只可以编码20种AA。
②由于同工tRNA，一种氨基酸有n种tRNA，20种氨基酸有32种tRNA分子。
③由于密码子第三位碱基与反密码子第二位碱基存在“摆动碱基配对”，一种tRNA能识别n种密码子，故61种密码子需32中tRNA14.tRNA在蛋白质合成中起到了怎样的作用？答：①tRNA转运氨基酸酶：tRNA中的3’-OH与氨基酸上的COOH反应形成共价连接，生成氨酰tRNA②tRNA对相应氨基酸结合的特异性：由氨酰tRNA合成酶的高度特异性保证③tRNA具有读码作用：利用反密码子识别mRNA上相应的密码子④tRNA具有接头作用：识别核糖体的位点，将特定氨基酸转运到核糖体上，并按照mRNA上密码顺序准则无误地配成多肽15.什么是核糖体的A位和P位？答：①A位/氨酰位：结合或接受AA-tRNA的部位②P位/肽酰位：结合或接受肽基的位置16.什么是多肽链合成前的氨基酸活化？答：氨酰-tRNA合成酶催化氨基酸与相应的tRNA缩合生成氨酰-tRNA，氨酰-tRNA是氨基酸的活化形式，故此过程也称氨基酸活化。
17.简述乳糖操纵子的结构。
答：①lac启动子（lacP），RNA聚合酶结合位点②lac操纵基因（lacO）,阻遏蛋白结合位点③结构基因（lacZ,lacY,lacA）④CAP结合位点，CAMP受体蛋白（激活蛋白）结合位点⑤调解基因（lacL）18.试述乳糖操纵子的负调控机制（诱导调控）答：①缺乏乳糖时：lacl基因指导合成的阻遏蛋白与lacO序列结合，阻止RNA聚合酶的结合，抑制结构基因转录②乳糖存在时：乳糖（诱导剂）与阻遏蛋白结合使其构象变化，阻遏蛋白无法与lacO结合，结构基因开放表达合成利用乳糖的酶19.试述乳糖操纵子的激活调控机制答：①当缺乏葡萄糖时：CAP与cAMP结合而激活，才可结合到CAP结合位点上，促进转录，使转录效率提高50倍②当有葡萄糖可供分解时，cAMP浓度降低，CAP不能被活化，lac操纵子的结构基因表达水平下降“乳糖操纵子的激活调控机制”要点：① Lac P 是弱启动子→激活调控的必要性；② 乳糖操纵子上的激活位点——CAP 结合位点③ CAP 蛋白必须被cAMP 激活④ 葡萄糖代谢与cAMP 的关系20. 简述色氨酸操纵子的结构。
答：①trp 操纵子是由一个控制区和五个结构基因组成，其调节基因trp R （阻遏物基因）与其不连锁a.五个结构基因trp A-E ：编码色氨酸生物合成需要的5种蛋白的多顺反子mRNAb.控制区由启动子trp P 、操纵基因trp O 、前导区trp L 和衰减子trp a 构成②调节基因trp R 和trp ABCDE 不连锁，trp R 编码的阻遏蛋白只有在与辅阻遏物色氨酸结合后才具有活性，可结合到trp O 上阻遏转录21. 试述色氨酸操纵子可阻遏的负调控和衰减调控作用机制。
答：可阻遏的负调控：①trp R 编码阻遏蛋白②色氨酸作为辅阻遏物，激活阻遏蛋白③激活的阻遏蛋白才能结合到trp O 上，从而阻止RNA 聚合酶与trp P 的结合，因此转录被抑制衰减调控作用：①衰减子作用于前导区转录的二级结构密切相关②前导肽mRNA 中有2个色氨酸密码子，因此其翻译对Trp-tRNA 浓度敏感③充足的Trp-tRNA 使前导肽顺利翻译，于是新转录的mRNA 形成了终止子的茎环结构，衰减作用由此产生④衰减作用的决定因素是Trp-tRNA 水平，细胞内Trp-tRNA 浓度增加，是衰减作用的信号，环境中的色氨酸浓度与细胞内的Trp-tRNA 水平呈正相关22. 一位同学将分离纯化的核酸样品进行10倍稀释后，进行紫外分光光度法检测，结果如下：A260/A280=1.8 ，OD260=0.2 。
该同学的核酸样品什么？浓度多少（单位：μg/μl ）？答：是纯DNA双链DNA 样品浓度=OD 260×10×50/100=0.2×10×0.05=0.1μg/μl23. 简要说明琼脂糖凝胶电泳有哪些常规应用。
答：①分析样品的含量②分析样品的纯度③分析样品的分子量④分析核酸的转录⑤核酸的分离纯化24. 试述末端终止法测序原理、体系。
下图为该方法测序产物的电泳结果，请写出该测序DNA 样品的碱基序列（注明方向）。
答：原理：双脱氧核苷酸能像单脱氧核苷酸参入链的末端体系：①待测模板②测序引物③DNA 聚合酶④4种dNTP ⑤反应缓冲液⑥一种ddNTP （4个体系中，各一种）碱基序列：TAGCATAGCG“末端终止法测序原理”要点：① 以待测DNA 样品为模板，通过互补链的合成进行测序。
② ddNTP 能像dNTP 一样参入到链的3’末端，但因其缺乏3’-OH ，下一个核苷酸无法加入，从而引起链延伸的终电泳方向止。
③建立4个DNA合成反应体系，另每个体系中分别加入一种ddNTP，于是每个体系可以得到一系列5’末端相同且终止于同一种碱基的，不同长度的片段。
④将4个反应体系的产物分别加样到4个泳道同时电泳，即可从电泳结果读出待测样品的碱基序列。
25.简述焦磷酸测序的原理。
答：①建立一个连锁的酶促反应系统，使DNA合成过程中每一个dNTP的聚合时释放的焦磷酸，与一次荧光信号释放的偶联，检测荧光信号实现时测序②每一轮测序中，只加入一种已知的dNTP，若与待测DNA互补，即可掺入到链中，产生ppi，经过连锁反应后，有荧光产生26.请简述下列探针标记方法：（切口平移法，随机引物法）答：切口平移法：①DNA聚合酶Ⅰ在探针DNA上随机水解磷酸二酯键，形成切口②随着反应的进行，底物中被标记的dNTP随机掺入③DNA聚合酶Ⅰ的两种作用交替进行，探针即被标记④变性解链，获得DNA探针随机引物法：6-7nt寡核苷酸序列的集合①将待标记的DNA（探针）变性成单链，引物与模板结合，Klenow催化合成DNA新链②反应体系中含有一种标记的dNTP，随机掺入新合成的DNA链中，探针合成的同时即被标记③变性解链，即可获得DNA探针27.简述Southern Blotting操作基本程序。
答：①将待检测的DNA分子用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳后进行分离②继而将其碱变性并按其在凝胶中的位置印迹到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定③预杂交，再与同位素或其他标记物标记的DNA或RNA探针进行杂交④如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其他合适的技术进行检测，从而显示出待测的片段及其相对大小28.为下列工作选择合适的印记杂交方法①②③④⑤⑥①检测点突变——等位基因特异性寡核苷酸探针杂交法②基因表达研究——斑点杂交和狭缝杂交③阳性重组子筛选——菌落杂交和噬菌斑杂交④检测某种蛋白质——蛋白质印迹法⑤基因的染色体定位——原位杂交⑥病原体检测和筛选——斑点杂交29.为了研究组织细胞基因表达的情况，不宜选用下面（A ）。
A.Southern BlottingB. Northern BlottingC. Western BlottingD. 原位杂交30.关于斑点杂交，不正确的说法是（C）。
A. 可用于大规模病原体检测B.可用于多位点基因定位C. 可用于大规模突变基因检测D.可用于基因测序31.试述PCR反应的原理、反应体系组成、基本反应程序。