梅花鹿TLR10基因克隆与序列分析
日本大白兔PRLR基因外显子10的克隆与测序
日本大白兔PRLR基因外显子10的克隆与测序杨洪雁;胡锐;王星;白秀娟【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2010(000)001【摘要】采用聚合酶链式反应方法,从日本大白兔血液中提取DNA,扩增出泌乳素受体基因(PRLR)外显子10,并对其进行克隆与测序,获得长度分别为208 bp和224 bp的2段序列,经过拼接得到1段418 bp的序列.将序列提交到GenBank上,GenBank中的Blast分析表明,测序得到的日本大白兔PRLR基因与家兔的同源性为99%.通过与其他目动物比较,PRLR基因在不同目动物中同源性不高,而在同目动物中同源性很高,表明PRLR基因在同一目中具有较高的保守性,同时在进化过程中具有一定的物种特异性.【总页数】3页(P59-61)【作者】杨洪雁;胡锐;王星;白秀娟【作者单位】东北农业大学动物科学技术学院,黑龙江哈尔滨,150030;辽东学院农学院,辽宁丹东118003;东北农业大学动物科学技术学院,黑龙江哈尔滨,150030;辽东学院农学院,辽宁丹东118003;东北农业大学动物科学技术学院,黑龙江哈尔滨,150030【正文语种】中文【中图分类】S813【相关文献】1.鹅PRLR基因外显子10单核苷酸多态性分析 [J], 朱盼;岳理;耿照玉;姜润深;袁绍友;夏生林2.中国美利奴羊PRLR基因外显子10SSCP多态性与部分繁殖性状的关联分析 [J], 吴洪宾;吴荷群;王遵宝;余鹏;赵宗胜;张文祥3.乐至黑山羊PRLR基因外显子10多态性与产羔数的关系研究 [J], 穆晓琨;字向东;王永;黄磊;徐华伟;马力;付锡三;朱万岭;林世武4.PRLR基因外显子10多态性与西农萨能奶山羊产奶性能的相关分析 [J], 孙瑞萍;王利心;朱广琴;王建刚;宋宇轩;梁昭义;曹斌云5.绵羊PRLR基因内含子9和外显子10多态性与产羔数的关系研究 [J], 陈勇;雒秋江;杨菊清;杨风云;张亚军;李登忠;朱文渊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
利用Y染色体基因分析梅花鹿种公鹿的遗传多样性和父系起源
利用Y染色体基因分析梅花鹿种公鹿的遗传多样性和父系起源周永娜;刘华淼;鞠妍;张然然;王磊;董世武;邢秀梅【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2018(049)002【摘要】旨在利用Y染色体基因研究梅花鹿种公鹿的遗传多样性和父系起源,为梅花鹿的保种育种工作提供数据支持.对171只双阳、敖东、四平、东丰、兴凯湖、长白山和东大梅花鹿种公鹿Y染色体上的AMELy、DBY、USP9Y、SRY基因的5个片段进行PCR扩增,对PCR产物进行直接测序和生物信息学分析.结果表明,5个基因片段共筛选到8个突变位点,AMELY1、AMELY2、DBY、USP9Y、SRY基因片段分别有3、2、1、1、1个突变位点.利用DNASP5.1软件共定义了10种单倍型,分别为H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10,其中H1是优势单倍型,占梅花鹿种公鹿群体的49.1％,H5和H10为东丰梅花鹿种公鹿独有,H9是最原始的单倍型.171只梅花鹿种公鹿的单倍型多样性为0.696 80,核苷酸多样性为0.000 36.NJ系统进化树和structure群体结构分析结果表明,梅花鹿种公鹿有3个父系类型,分别为Y1、Y2和Y3,除双阳梅花鹿种公鹿和四平梅花鹿种公鹿均来自Y3,其余梅花鹿种公鹿群体均为多父系类型.表明我国梅花鹿种公鹿Y染色体具有较高的单倍型多样性和极低的核苷酸多样性.【总页数】9页(P282-290)【作者】周永娜;刘华淼;鞠妍;张然然;王磊;董世武;邢秀梅【作者单位】中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所特种经济动物分子生物重点实验室,长春130112【正文语种】中文【中图分类】S825.2【相关文献】1.延边牛Y染色体遗传多样性与父系起源研究 [J], 史红侠;姚一博;夏小婷;吕忠;党瑞华;蓝贤勇;陈宏;雷初朝2.渤海黑牛Y染色体遗传多样性及父系起源研究 [J], 常振华;侯佳雯;宋恩亮;成海建;陈宏;雷初朝3.基于SRY基因分析梅花鹿的遗传多样性及父系类型 [J], 董依萌;刘华淼;玉手英利;刘汇涛;鞠妍;邢秀梅;何金明;鞠贵春4.文山牛Y染色体遗传多样性与父系起源研究 [J], 亐开兴;王凯悦;张继才;黄必志;陈宁博;冯光杰;李顺东;陈宏;雷初朝5.利用Y染色体SRY基因分析马鹿的父系起源和遗传多样性 [J], 房瑞新;田雪琪;邹晨;董依萌;李洋;邢秀梅;刘欣因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
梅花鹿鹿茸角生长顶端的组织结构
梅花鹿鹿茸角生长顶端的组织结构李光凤;张巧灵;赵丽红;郭斌;张默涵;冯海华;张学明;成文革;岳占碰【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2009(29)8【摘要】利用光镜和透射电镜对梅花鹿鹿茸角生长顶端的组织结构进行了观察。
结果显示,梅花鹿鹿茸角生长顶端分皮肤层、间充质层、前成软骨层、过渡层和软骨层。
间充质层细胞形态均一,细胞体积较小,呈梭形,细胞核呈椭圆形,核仁明显,胞质内细胞器含量极少,呈典型的幼稚性细胞形态。
前成软骨层内有前成软骨细胞,前成软骨细胞体积较间充质层细胞大,呈长椭圆形,细胞核呈圆形或椭圆形,有1-2个核仁,胞质内出现较多的粗面内质网及多聚核糖体。
过渡层细胞成分多样,包括前成软骨细胞和成软骨细胞;成软骨细胞体积较前成软骨细胞大,胞质内的粗面内质网和高尔基体进一步发育。
软骨层内含大量软骨细胞,软骨细胞的形态极不规则,核膜也不规则,胞质内见有粗面内质网、高尔基体、游离核糖体和脂滴,线粒体极少。
【总页数】4页(P1033-1035)【关键词】梅花鹿;鹿茸角;生长顶端;组织结构【作者】李光凤;张巧灵;赵丽红;郭斌;张默涵;冯海华;张学明;成文革;岳占碰【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院;吉林省生物研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.16【相关文献】1.梅花鹿VEGF基因的克隆及其在鹿茸顶端组织的表达 [J], 韩香玉;吴炎;李璐;闫语多;胡薇2.诱发生长的雌鹿茸与雄鹿茸的比较研究：第一报组织结构 [J], 李春义;尹鸿轸3.梅花鹿茸角生长规律与体内激素关系的研究进展 [J], 李长生;王喜萍;马丽娟4.梅花鹿成熟型TGF-β1基因的克隆与结构分析及其在鹿茸顶端组织中的表达 [J], 刘明晓;韩香玉;刘洪运;胡薇5.梅花鹿茸组织结构研究 [J], 李春义;赵世臻;宋健华;尹鸿轸;朱桂彬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
毛冠鹿SRY基因克隆及进化的研究
２ ｏｌ ｆ Ａｎ ｍ Ｓ ｉ ｎ ｃ ．Ｃ ｉ ｏ ｉ ｃ ｄ Ｔｅｈ，Ｙ ｎ ｚ ｏ ｉ ａ ａ ｇ ｈ ｕ Ｕｎ ｖ，Ｙａ ｇ ｈ ｕ２ ５ ０ Ｃｈｎ ； ｎ ｚ ｏ ２ ０ ９， ｉａ
为 ３ ９万 ～ ４ ０万 年 。 ４ ６ 关 键 词 ：毛 冠 鹿 ；Ｓ Ｒｙ基 凶 ；系 统 进 化 中 图分 类 号 ：Ｓ８ ５ ２ ；Ｑ ５ ． ９ｌ ３ 文献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１ ７ １ ５ （ ０ ） ３—０ ３ ６ １一， ２ ２ １ ０ ６ ０ ０ ０—０ ３
３ ．Ａｎ ｕ ａ ｎ ｎ Ｆｉｓ— ｄ Ｃｅ ｔｅｏ ｉｄ Ａｎｔ ，Ｘｉｎｎ ４ ， ０，Ｃｈｎ ） ｈ ｉ Ｗ ｎ ａ ｒｔ Ａｉ ｎｒ ｆ Ｗ ｌ ｉ ａ ｕ ｉｇ ２ ５ ０ １ ｉａ
Hale Waihona Puke ＡＢ Ｔ Ｓ ＲＡＣ Ｔ：Ａｃｏ ｄｎ Ｏ ｔ ｅＳ ｃ ｒ ｉｇ ｔ ｈ ＲＹ ｅ ｅｏ ｎ ｉｎ ｍｕ ｔａ ，ｔｅ Ｓ ｅ ｅ ｆｔ ｆｅ ｅ ｒ（ ａｐ ｏ ｓｃ ｐ ａ ｏ ｈ ｓ ， ｇ ｎ ｆＩｄａ ｎｉｅ ｈ ＲＹ ｇ ｎ ｓｏ ｕｔｄ ｄ ｅ Ｅｌ ｈ ｄｕ ｅ ｈ ｌｐ ｕ ） ｂａｋ ｍｕ ｔ ｃａ ｄ Ｃ ｉｅ ｅｍ ｕ ｔ ｃｗｅｅａ ｌ ｉｄｂ ｅＲ．Ｆ ａ ｍｅ ｔ ｆ ＲＹ ｅ ｅ（ ａ ｈ６ ０ｂ ｎｌｎ ｔ ）ｗｅｅｃ ａａ ｌｃ ｎｊ ｎ ｈｎ ｓ ｎｊ ｒ ｍｐｉｅ ｙＰ ａ ａ ｆ ｒ ｇ ｎ ｓｏ Ｓ ｇ ｎ ｅ ｃ ３ ｐｉ ｅ ｇ ｈ ｒ ｈ ｒｃ
Ｃｌ ｎｉ ｇ ａ ｄ ｅ ｏ ｕ ｉ ｎ ｏ ｈｅ ｔ ｆ ｅ ｅ ｒ Ｓ ｏ ｎ ｎ ｖ ｌ ｔｏ ｆ ｔ ｕ ｔ ｄ ｄ ｅ ＲＹ ｅ ｅ ｇｎ
重组梅花鹿胰岛素生长因子-1的研制及应用1
项目概述
• 本课题旨在初步建立重组梅花鹿胰岛素生 长因子-1的发酵工艺，幵观察其对肉鸡生 产性能的影响，为梅花鹿IGF-1的产业化开 发奠定一定的基础。 • 初次采用基因工程的方法生产梅花鹿IGF-1 的重组蛋白，充分利用鹿茸的物资和信息 两大资源，发挥吉林省的鹿业优势。
立项意义
胰岛素样生长因子-1（简称IGF-1） 具有广泛的生物学功能，在人和动物 疾病的治疗中都具有重要的应用价值。 • IGF-1天然含量较低且极丌稳定，市 场价格非常昂贵。
•
• 本项目利用基因工程方法获得大量有生 物学活性的梅花鹿IGF-I制品，对降低动 物饲料成本，促进动物生长发育和繁育 具有重要的意义。 • 同时将引领鹿产品深加工产业跃上一个 新台阶，有助于推动我省鹿产品发展方 式的改变。
四、初步观察重组梅花鹿IGF-1对肉鸡 生产性能的影响
• 选择肉鸡作为体外研究对象，以人源 重组IGF-1为对照，向肉鸡注射重组 梅花鹿IGF-1后检测鸡血浆IGF-1浓度 变化、饲料转化率、胸肉率、腿肉率 等生产性能指标，以及对鸡肉嫩度的 影响。
研究计划
• ●2013,1-2013,6 ●梅花鹿IGF-1基 因克隆不序列分析； • ●2013,7-2013,12 ●原核表达载体 pET-32a-IGF-1 的构建不表达纯化； • ●2014,1-2014,6 ●IGF-1工程菌菌 株的活化不筛选； • ●2014,7-2014,12 ●肉鸡饲养实验。
• 利用亲和层析和离子色谱法组合的方法分 离纯化得到重组梅花鹿IGF-1。MTT法检 测IGF-1对NIH3T3细胞增殖作用的影响， 从而获得具有生物活性的高纯度IGF-1，
三、梅花鹿IGF-1工程菌菌株的活化不筛选
兔白细胞介素10部分序列克隆、遗传变异及与免疫性状关联的研究的开题报告
兔白细胞介素10部分序列克隆、遗传变异及与免疫性状关联的研究的开题报告一、研究背景和意义白细胞介素10（Interleukin-10, IL-10）是一种重要的免疫调节因子，能够调节T细胞分化、抑制B细胞、巨噬细胞和树突状细胞的活性等，对维持免疫平衡具有重要作用。
目前，兔免IL-10的克隆和序列已经报道，但其遗传变异及与免疫性状的关联研究尚未有报道。
因此，对兔IL-10序列的克隆和遗传变异研究，可以为深入了解其免疫调节功能和应用价值奠定基础，为饲养和防控动物疾病提供理论支撑。
二、研究内容和方案本研究拟采用以下分步骤开展：1. 兔IL-10部分序列的克隆：设计兔IL-10的引物，通过RT-PCR方法从组织或细胞中扩增出IL-10基因的部分序列，将其克隆到载体中进行测序。
2. 兔IL-10基因的遗传变异分析：收集不同品种、不同性别和不同年龄的兔动物样本，提取DNA并扩增目标区域，通过Sanger测序技术对扩增产物进行测序，进而分析IL-10基因的遗传变异情况。
3. 兔IL-10基因的免疫性状关联分析：通过ELISA、Western blot等技术对不同基因型的兔动物的免疫指标进行检测，并对其进行分析，以探究IL-10基因对兔免疫调节功能的影响。
三、研究预期成果1. 兔IL-10的部分序列将被成功克隆，为后续完整序列克隆奠定基础。
2. 免疫相关基因位点的遗传结构及遗传多样性特征将被明确。
3. 传统免疫检测手段和分子生物学技术相结合，探究IL-10基因多态性对其免疫调节作用的影响、为兔免疫调节机制研究提供有力依据。
四、研究难点与解决方案难点：1. 缺乏可靠性和广泛性的引物、技术不成熟和测序出错率较高等问题，会影响基因序列的准确性；2. 兔的样本和数据收集难度大、分析方法复杂，导致实验周期长、成本高。
解决方案：1. 设计合理、可靠性高的引物、改进PCR技术、使用高通量测序技术等手段，提高基因序列的准确性；2. 根据实验计划，尽可能缩短实验周期，深度剖析数据，精准筛选，减少样本量，降低成本。
鹿科与牛科动物IGF-1基因序列比较及分子进化分析
鹿科与牛科动物IGF-1基因序列比较及分子进化分析宋兴超;徐超;王雷;巴恒星;王桂武;杨福合【摘要】以GenBank中已登录的梅花鹿(Cervus nippon)、马鹿(Cervus elaphus)、普通牛(Bos taurus)、水牛(Bubalus bubalis)、山羊(Capra hircus)和绵羊(Ovis aries)胰岛素样生长因子-1(IGF-1)基因mRNA序列为研究材料,通过DNAStar 7.0等生物信息学软件对6个物种的IGF-1基因进行序列比较及分子进化分析.结果表明:鹿科与牛科动物IGF-1基因编码区均为465 bp,并且碱基组成表现为G＞C＞A＞T,且G+C含量高于A+T；6个物种IGF-1基因密码子第1位富含A,密码子第2位4种碱基的分布相对均匀,密码子的第3位碱基C含量较高；编码区碱基序列中共检测到20个变异位点,包括10个单一变异和10个简约变异,鹿科和牛科动物IGF-1基因核苷酸和氨基酸序列的相似性均较高；(4) NJ和UPGMA两种方法构建的分子进化树均把6个物种聚为2个大类:鹿科和牛科,其中牛科又分支出牛亚科和羊亚科两类.【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2014(035)003【总页数】5页(P14-18)【关键词】鹿科;牛科;胰岛素样生长因子-1基因;序列比较;密码子【作者】宋兴超;徐超;王雷;巴恒星;王桂武;杨福合【作者单位】中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林长春130112;中国农业科学院特产研究所吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,吉林长春130112【正文语种】中文【中图分类】S811.6胰岛素样生长因子(Insulin-like growth factors，IGFs)是一类广泛存在于动物体组织内且能够促进细胞分化、蛋白质沉积、骨骼增长以及个体生长发育的多功能细胞增殖调控因子[1]。
驯鹿EGFR基因克隆及序列分析
驯鹿EGFR基因克隆及序列分析王强辉;翟健程;夏彦玲;刘伟石;李和平【摘要】The epidermal tissue of antler-tip of male reindeer was used asthe research materials,and total RNA was extracted from it.The homologous primers were designed according to the epidermal growth factor receptor (EGFR) gene sequence of cattle and sheep in GenBank database.Part cDNA sequences EGFR gene in coding region,which had 910 base pairs in length,was first obtained by RT-PCR and the molecular cloning technique.The EGFR gene homology between reindeer and cattle,sheep,horse,human,whale,and wild boar respectively was97％,96％,88％,86％,92％ and 89％ by the bioinformatics and Blast analysis.The homologies,all of them,were above 85％.The reindeer EGFR gene was more conserved in its evolution.In the construction of phylogenetic tree,the genetic relationship of reindeer EGFR gene with cattle was the closest,and with human was the furthest.The minimum free energy secondary structure of the EGFR gene sequence was predicted by the online analysis software.%以快速生长期雄性驯鹿(Rangifer tarandus)鹿茸顶端表皮组织为研究材料,提取其顶端表皮组织总RNA,参考GenBank数据库中牛、羊的表皮生长因子受体(EGFR)基因序列设计同源引物;采用RT-PCR技术、分子克隆技术首次成功获得雄性驯鹿茸顶端表皮组织EGFR基因编码区部分cDNA序列,片段大小为910 bp;Blast比对发现驯鹿EGFR基因与牛、羊、马、人、鲸、野猪的同源性分别是97％、96％、88％、86％、92％、89％,同源性均在85％以上,表明驯鹿EGFR基因在进化上比较保守;构建系统进化树发现驯鹿EGFR基因与牛亲缘关系最近,与人的亲缘关系最远;最后通过在线分析软件预测获得EGFR基因序列对应mRNA最小自由能二级结构.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2017(045)009【总页数】4页(P77-80)【关键词】驯鹿;EGFR基因;RT-PCR;分子克隆;生物信息学【作者】王强辉;翟健程;夏彦玲;刘伟石;李和平【作者单位】东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040;东北林业大学,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】Q781表皮生长因子受体(EGFR)是细胞表面具有配体介导的受体酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，是重要的ErbB受体蛋白家族成员，又名ErbB-1[1]。
梅花鹿的胚胎移植试验
梅花鹿的胚胎移植试验魏海军1刘宪彬2赵蒙1赵伟刚1 常忠娟1刘恒良2张桂秋2张传友3张宇1（1.中国农业科学院特产研究所吉林左家132109；2.吉林省东丰药业股份有限公司东丰136300；3.吉林省靖宇县吉林135200）Embryo transfer experiment of Sika Deer （Cervus Nippon）WEI Hai-jun1 LIU Xian-bin2 ZHAO Meng1ZHAO Wei-gang1CHANG Zhong-juan1 LIU Heng-liang2ZHANG Gui-qiu2ZHANG Chuan-you3ZHANG Yu1（Institute of Special Wild Economic Animal and Plant Science，CAAS. Jilin 132109;2. Dong-feng Pharmaceutical Group Co.,Ltd of JiLin Dong-feng 136300；3.JingYu City of JinLin JingYu 135200）胚胎移植技术是20世纪畜牧业生产中继精液冷冻和人工授精之后又重大一大变革,它能够充分发挥优良母畜的遗传和繁殖潜力,也是其它胚胎生物工程技术的基础。
目前，国内外对牛和羊等家养动物的超数排卵和胚胎移植技术的研究比较成功，并已经应用到这些动物的繁育工作中。
鹿的家养历史虽然比较短，但是通过借鉴其它家畜的超数排卵和胚胎移植技术，有关专家也对一些家养鹿进行了相应的研究工作。
目前，国外已经成功地对赤鹿、黇鹿、斑鹿、麋鹿和白尾鹿等鹿类动物进行了胚胎移植；我国也成功地进行了东北马鹿和塔里木马鹿的超数排卵和胚胎移植技术的研究。
我们在梅花鹿的超数排卵研究的基础上，2004年秋季进行了梅花鹿胚胎移植试验,现将结果报告如下。
1 材料和方法1.1供体鹿和受体鹿用于实验的供体鹿和受体鹿为吉林省东丰县东丰药业股份有限公司种鹿场的成年经产健康梅花鹿共12头，其中供体鹿为4头，受体鹿为8头。
梅花鹿IGF-1的原核表达与纯化
梅花鹿IGF-1的原核表达与纯化孟星宇;李婷;李沐;刘宁;田玉华;胡薇【摘要】【目的】克隆梅花鹿（Cervus nippon）胰岛素样生长因子1（Insulin-like growth factor 1,IGF-1）的成熟肽基因,并对其进行原核表达及纯化,以获得具有生物学活性的蛋白,为研究IGF-1在梅花鹿鹿茸生长发育中的调控作用及机理提供参考。
【方法】以GenBank中的梅花鹿IGF-1基因序列（登录号：HQ890468）设计1对引物,以构建的梅花鹿pMD-18T-IGF-1重组质粒为模板,克隆IGF-1成熟肽的基因序列,构建重组质粒pMD-IGF-1,将其插入pET-32a表达载体后,构建pET-32a-IGF-1质粒,鉴定后,将pET-32a-IGF-1转入Rosetta大肠杆菌进行诱导表达（0.6mmol/L IPTG,37℃,4h）后,对其表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测。
用Ni-Agarose柱亲和层析试剂盒分离、羟胺裂解纯化目标蛋白,并利用四唑盐比色法（MTT法）和流式细胞仪检测目标蛋白对NIH3T3细胞增殖及不同细胞周期下NIH3T3细胞比例的影响。
【结果】获得了梅花鹿IGF-1成熟肽基因序列（234bp）;经鉴定,原核表达载体pET-32a-IGF-1构建成功;SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,在Rosetta中成功诱导表达了融合蛋白,且羟胺裂解纯化后的目的蛋白纯度较高;MTT法和细胞周期检测结果表明,复性后的IGF-1重组蛋白能促进细胞增殖。
【结论】成功克隆了梅花鹿IGF-1成熟肽基因序列,获得了具有生物学活性的IGF-1蛋白。
%【Objective】 The research was conducted to obtain the biologic activity protein which was renaturated after cloning and expression IGF-1 mature peptide gene from Cervus nippon and provided reference to study IGF-1 regulation effect and mechanism in Cervus nippon.【Method】 A pair of primers was designed by Cervus nippon IGF-1 gene sequence from GenBank（Accession number：HQ890468）.The IGF-1 mature peptide sequence was amplified from pMD-18T-IGF-1 and recombinant plasmid pMD-IGF-1 was gained.And the production was inserted to expression vector pET-32a to obtain recombinant plasmid pET-32a-IGF-1 and expressed（0.6 mmol/L IPTG for 4 h at 37 ℃） in the host Rosetta cells.The results were analysed by SDS-PAGE and Western blotting.Target protein was purified by Ni-Agarose affinity column and cut by hydroxylamine.Target protein on the proliferation and cell cycle of NIH3T3 cell were analysed by MTT and FCM.【Result】 The Cervus nippon IGF-1 mature peptide gene was 234bp.Restriction enzyme mapping and sequencing showed that pET-32a-IGF-1 expression vector was constructed successfully.SDS-PAGE and Western blotting showed that fusion protein was induced in Rosetta host cells and the purity of interest protein was very high.The analysis of MTT and cell cycle showed that the growth rate of NIH3T3 cell increased significantly with the renaturated recombinant protein,and the cell population in S phases increased significantly too.【Conclusion】 IGF-1 mature peptide gene was cloned and expressed,and biologic activity protein of IGF-1 was obtained in this study.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(040)007【总页数】7页(P7-13)【关键词】梅花鹿;胰岛素样生长因子1;原核表达;蛋白纯化;生物学活性【作者】孟星宇;李婷;李沐;刘宁;田玉华;胡薇【作者单位】吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118;吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S825;Q786鹿茸是梅花鹿（Cervus nippon）的第二性征，是在鹿额骨部长出的骨质性组织。
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第４ ｌ卷 第 １ 期
２ ０ １ ３年 １ 月
东
北
林
业
大
学
学
报
Ｖｏ １ ． ４１ Ｎ ｏ ． １
பைடு நூலகம்
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梅花鹿 Ｔ Ｌ Ｒ Ｉ Ｏ基 因克 隆 与序 列 分 析
Ｃ ｈ ｅ ｎ Ｓ ｈ ａ ｎ ｇ ｗｕ （ Ｓ ｔ ａ ｔ ｅ Ｋｅ ｙ Ｌ ａ ｂ ｏ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｒ ｏ ｆ Ｂｉ ｏ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ １ ．Ｓ ｕ ｎ Ｙａ ｔ — ｓ ｅ ｎ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ） ／ ／ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｎ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ａ ｓ ｔ Ｆ ｏ ｒ ｅ ｓ ｔ ｒ ｙ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ． 一
Ｈ ｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｒ ｙ ， ｌ ｉ ｌ ｉ ｎ Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍ ｙ ｏ ｆ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ １ ３ ６ １ ０ ０， Ｐ ．Ｒ ．Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） ； Ｗａ ｎ ｇ Ｑ ｕ ａ ｎ ｋ ａ ｉ （ Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ｓ ｉ ｎ ｏ — Ｒ Ｏ Ｋ Ａ ｃ ａ ｄ ｅ — ｍｙ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ｓ ） ； Ｃ ａ ｏ Ｙ ａ ｎ ｇ ， Ｊ ｉ ｎ Ｈａ ｉ ｇ ｕ ｏ （ Ｂ ｒ ａ ｎ ｃ ｈ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ Ｈ ｕ ｓ ｂ ａ ｎ ｄ ｙ， ｒ Ｊ ｉ ｌ ｉ ｎ Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍ ｙ ｏ ｆ Ａ ｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ） ；
张立 春
（ 吉林省农业科学院畜牧分 院， 吉林 ， １ ３ ６ １ ０ ０ ）
王全 凯
（ 吉林省 中韩动物科学研究院）
曹 阳 金海 国
（ 吉林省农业科学 院畜牧分院）
陈 尚武
（ 有害生物控制 与资源利用 国家重点实验室（ 中山大学） ）
摘 要 为 系统 了解梅花鹿免疫 系统 ， 用Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ法提取梅 花鹿肝脏 总 Ｒ Ｎ Ａ， 采用兼并 引物 Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ方 法克隆 了梅 花 鹿 Ｔ Ｌ Ｒ Ｉ Ｏ基 因并 进 行 了 系统 的 生 物 信 息 学 分 析 。Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ结 果 显 示 ， ｄ Ｔ Ｌ Ｒ Ｉ Ｏ基 因 完整 Ｏ Ｒ Ｆ 区长 ２ ４ ３ ９ ｂ ｐ ， 编码 ８ １ ２个 氨 基 酸 （ Ｇ ｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ序 列号 为 ： Ｈ Ｑ ２ ６ ０ ６ ３ ０ ） 。 同源分析显 示， ｄ Ｔ Ｌ Ｒ Ｉ Ｏ基 因序 列 与 其 他 物 种 Ｔ Ｌ Ｒ Ｉ Ｏ基 因 高 度 同源， 与 同属于偶蹄 目反 － ５类的牛和羊同源性 高达 ９ ５ ％ 以上 。蛋 白功能结构域分析显 示， 不 同物 种间 Ｔ Ｌ Ｒ Ｉ Ｏ蛋 白 结 构域 数 量 及 分 布 上 高度 相 似 ， 蛋 白三 维 结 构预 测 比较 显 示 ， ｄ Ｔ Ｌ Ｒ １ ０蛋 白胞 外 区 结构 与人 类 Ｔ Ｌ Ｒ １ ０结 构 相 似 ， 两者均表现 为经典 的马蹄形结构 。 关键词 梅 花鹿 ； Ｔ Ｌ Ｒ Ｉ Ｏ基 因； 克隆 ； 序列分析 分类 号 ￥ ８ ５ ２ ． ４ ＋ ２
２ ０ １ ３ ， ４ １ （ １ ） ． 一 １ １ ６～１ ２ １
Ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｐ ｅ ｒ ｉ ｍｅ ｎ ｔ ｗ ａ ｓ ｃ ｏ ｎ ｄ ｕ ｃ ｔ ｅ ｄ ｔ ｏ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ Ｔ ｏ １ １ 一 ｌ ｉ ｋ ｅ ｒ ｅ ｃ ｅ ｐ ｔ ｏ ｒ １ ０ ｇ ｅ ｎ ｅ（ １ ０ ｇ ｅ ｎ ｅ ）ｆ ｒ ｏ ｍ ｓ ｉ ｋ ａ ｄ ｅ ｅ ｒ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ儿 １ ０ ｇ ｅ ｎ ｅ ｗ ａ ｓ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙ ｂ ｉ ｏ ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｃ ｓ ｓ ｏ ｆ ｔ ｗａ ｒ ｅ ．Ｔ ｈ ｅ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ＲＮＡ ｒｏ ｆ ｍ ｌ ｉ ｖ ｅ ｒ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｗａ ｓ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｔ ｒ ｉ ｚ ｏ １ ．Ｔ ｈ ｅ 化 Ｒ１ ０ ｇ ｅ ｎ ｅ ｗａ ｓ ｃ ｌ ｏ ｎ ｅ ｄ ｂ ｙ ＲＴ — Ｐ Ｃ Ｒ ｗ ｉ ｔ ｈ ｄ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｒ ａ ｔ ｅ ｐ ｒ ｉ ｍｅ ｒ ．ａ ｎ ｄ Ｔ Ｌ Ｒ１ ０ ｇ ｅ ｎ ｅ ｗａ ｓ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｚ ｅ ｄ ｂ ｙ ｂ ｉ ｏ ｉ ｎ ｆ ｏ ｒ ｍａ ｔ ｉ ｃ ｓ ｓ ｏ ｆ ｔ ｗ ａ ｒ ｅ ｓ ｙ ｓ ｔ ｅ ｍａ ｔ ｉ ｃ ａ ｌ ｌ ｙ ．Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｏ ｆ ＲＴ ． Ｐ Ｃ Ｒ ｓ ｈ ｏ ｗｅ ｄ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｍｐ ｌ ｅ ｔ ｅ ＯＲＦ ｏ ｆ ｄ Ｚ １ ０ ｇ ｅ ｎ ｅ ｉ ｓ ２ ４ ３ ９ ｂ ｐ ｉ ｎ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ．ｃ ｏ ｄ ｅ ｄ ８ １ ２ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ（ Ｇｅ ｎ ．