酵母菌培养操作
酵母菌表面展示操作步骤之菌株培养条件设定
酵母菌表面展示操作步骤之菌株培养条件设定酵母菌表面展示是一种常用的生物技术手段，用于将外源蛋白在酵母菌表面进行展示。
为了确保表面展示效果的高效和稳定，必须设置适当的菌株培养条件。
本文将介绍酵母菌表面展示操作步骤中的菌株培养条件设定。
1. 选择合适的酵母菌菌株：在进行酵母菌表面展示操作前，首先需要选择合适的酵母菌菌株。
常用的酵母菌菌株有Saccharomyces cerevisiae和Pichia pastoris等。
选择酵母菌菌株时要考虑其生长速度、分泌能力和表面展示效果等因素。
2. 菌株预处理：将所选的酵母菌菌株从冰冻保存状态中取出，接种到适当的培养基中。
培养基的选择要根据具体的酵母菌菌株和表面展示目的而定，一般应包含适宜的碳源、氮源和其他必要的营养物质。
3. 菌株预培养：为了确保菌株的健康和活力，需要进行菌株的预培养。
将接种培养基的酵母菌菌株在适当的条件下进行预培养，通常是在摇床上以适当的转速和温度下培养一段时间，使菌株适应培养环境。
4. 菌株菌种扩大：预培养后的酵母菌菌株需要进行菌种扩大，以获得足够的菌量用于后续的表面展示实验。
通常将预培养菌种接种到适当体积的培养基中，继续在摇床上进行培养，直到菌株的菌量达到要求。
5. 菌株维持：在菌种扩大后，需要定期维护酵母菌菌株的健康状态，以保证菌株的活力和表面展示效果。
定期的菌株传代或重新冷冻保存是常见的维护方式。
6. 培养条件设定：酵母菌表面展示的培养条件需根据具体的实验要求进行设定。
下面是一些常见的因素和条件的考虑：- 温度：酵母菌的培养温度通常在25-30摄氏度之间，具体的温度要根据菌株和表面展示目的而定。
- pH值：不同的酵母菌菌株对pH值有不同的要求，一般在6.0-7.0之间。
可以通过添加缓冲溶液或者酸碱调节剂来调节培养基的pH值。
- 摇床转速：适当的摇床转速可以促进酵母菌菌株的生长和表面展示效果。
一般来说，摇床转速在150-200转/分钟之间。
酵母菌表面展示操作步骤中的培养条件设定
酵母菌表面展示操作步骤中的培养条件设定酵母菌表面展示是一种重要的分子生物学技术，用于在酵母菌表面展示外源蛋白质。
这种技术可以用于研究蛋白质的功能、交互作用以及抗原表位的鉴定等。
在进行酵母菌表面展示实验时，设定适当的培养条件非常重要，下面将为您介绍一些常用的培养条件设定步骤。
1. 培养基选择：选择适合酵母菌生长的培养基。
常用的培养基包括YPD培养基（酵母提取物、蛋白胨和葡萄糖的混合物）和SD培养基（缺乏氨基酸和碳源的培养基）。
另外，还可以根据实验需要添加对应的营养物质，如有需要可添加适量的抗生素筛选。
2. 培养温度设定：酵母菌一般在30°C下培养。
如果需要进行过表达蛋白的酵母菌的培养，则可以降低培养温度至20°C。
培养温度的选择应取决于所研究蛋白质的最适生长条件。
3. pH设定：pH值是培养条件的重要参数之一。
酵母菌一般在pH 5-7的条件下生长。
在实验中，可以根据所研究蛋白质的最适生长条件来调整培养基的pH值。
4. 搅拌速度：对于酵母菌表面展示的培养过程，适当的搅拌速度可以提高酵母菌的生长和蛋白表达。
常用的搅拌速度为150-200rpm，但也可以根据实验需要进行调整。
5. 培养时间：培养时间的长短取决于所研究蛋白质的表达情况。
一般来说，培养时间应至少为48小时，以保证酵母菌能够充分生长和表达外源蛋白。
6. 培养体积：培养体积的选择应取决于研究需求。
如果需要大规模表达蛋白，则需要选择大容量的培养体积。
通常，培养液的体积不宜超过容器容积的1/3。
7. 氧气供应：酵母菌是好氧生物，因此充足的氧气供应对于其生长和表达外源蛋白非常重要。
可以通过适当的搅拌和通气来提供足够的氧气。
8. 原代菌种的选择：在进行酵母菌表面展示前，通常需要从冷冻甘油保存的菌种中提取出活菌。
选择适当的培养条件，如培养基和温度等，对于原代菌种的复苏和培养非常重要。
以上是酵母菌表面展示操作步骤中的常见培养条件设定步骤。
酵母分离培养
YPD培养基YPD 或YPED，：Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L)，又叫酵母浸出粉胨配方：1% Yeast Extract（酵母膏），2% Peptone（蛋白胨），2% Dextrose (glucose)（葡萄糖），若制固体培养基，加入2%琼脂粉配制方法：1 .溶解10gYeast Extract（酵母膏）, 20gPeptone（蛋白胨）,20g琼脂粉于900ml水中2 .高压 115度 20min3.加入100ml 10×Dextrose (glucose)（葡萄糖），(葡糖糖溶液灭菌后加入) ,注：葡萄糖，yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
酵母的分离与纯化1、接种：取酵母0.5克，加入到5ml的YPD培养液中，在30℃摇床中过夜培养，可见培养液变浑浊。
2、计数：将酵母菌液稀释到合适的倍数（约102-103倍）以每小格的菌数可数为度，涂于血球计数板上，在高倍显微镜下计数酵母菌数。
3、涂皿：将培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml稀释合适倍数的菌液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。
做平行样。
4、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上三区划线，培养后分离得到单个菌落。
5、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。
6、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。
血球计数板使用1.取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液，然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
2.静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。
将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
酵母菌表面展示操作步骤之表面展示与分析
酵母菌表面展示操作步骤之表面展示与分析表面展示与分析在酵母菌表面展示操作步骤中扮演着重要的角色。
通过表面展示与分析的步骤，我们可以确定酵母菌表面展示的蛋白质、酸性糖和其他小分子的存在与浓度，并进一步研究它们在酵母菌表面的功能以及与其他生物体的相互作用。
下面将介绍酵母菌表面展示与分析的详细操作步骤。
步骤一：酵母菌培养和收获首先，我们需要培养酵母菌株。
将所需酵母菌株接种到含有适宜培养基的培养皿中，在恒温摇床上以适宜的温度和速度培养酵母菌。
随着时间的推移，我们可以看到酵母菌的增殖。
当培养时间达到一定程度时，需要收获酵母菌。
通过离心将培养基与酵母菌分离，然后去除上清液，保留酵母菌沉淀。
步骤二：酵母菌预处理将酵母菌沉淀洗涤数次，去除杂质和培养基残留物。
洗涤过程通常使用PBS等缓冲液进行多次离心。
这步骤的目的是为了准确检测酵母菌表面的分子，去除可能干扰的物质。
步骤三：标记酵母菌表面分子标记是表面展示与分析过程中的关键步骤。
可以使用生物素化学方法，将生物素（biotin）与酵母菌表面的分子结合。
这样，酵母菌表面的分子就被标记为生物素化的形式。
步骤四：生物素-亲和素标记在进行生物素-亲和素标记之前，需要进行一次阻断。
将酵母菌与一定浓度的牛血清白蛋白（BSA）或其他蛋白质混合，以防止非特异性吸附的发生。
然后，将生物素-亲和素与酵母菌混合，让其发生特异性结合。
亲和素以及其他特异性结合剂可以根据实际需求进行选择。
步骤五：洗涤和检测洗涤是为了去除非特异性结合的物质。
可以使用PBS等缓冲液进行多次洗涤，确保只有特异性结合的生物素-亲和素留在酵母菌表面。
最后，使用适宜的检测方法来分析酵母菌表面的生物素-亲和素。
常用的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光染色、免疫共沉淀等。
这些方法可以定量检测酵母菌表面特定分子的存在以及其浓度。
此外，还可以使用其他分析方法，如质谱分析和核磁共振等，进一步鉴定和分析酵母菌表面的分子。
总结起来，酵母菌表面展示与分析的操作步骤主要包括酵母菌培养和收获、酵母菌预处理、标记酵母菌表面分子、生物素-亲和素标记、洗涤和检测。
初中生物培养酵母菌教案
初中生物培养酵母菌教案教学目标：1. 了解酵母菌的生活习性和在自然界中的作用。
2. 学习如何培养酵母菌，并掌握实验操作技能。
3. 通过对酵母菌的观察，理解其结构特点。
4. 培养学生的观察能力、实验操作能力和团队协作能力。
教学重点：1. 酵母菌的生活习性和在自然界中的作用。
2. 培养酵母菌的实验操作步骤。
3. 酵母菌的结构特点。
教学难点：1. 酵母菌的显微镜观察。
2. 实验操作步骤的掌握。
教学准备：1. 实验室用具：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、碘液、吸管、吸水纸、烧杯、试管等。
2. 实验材料：酵母菌、蔗糖、发酵的面肥等。
教学过程：一、导入（5分钟）1. 引导学生思考：什么是酵母菌？酵母菌在自然界中有什么作用？2. 学生回答后，教师总结：酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界中，尤其在食品发酵中有重要作用。
二、探究酵母菌的生活习性（5分钟）1. 学生分组讨论：酵母菌的生活习性是什么？它们需要什么样的生活环境？2. 学生回答后，教师总结：酵母菌喜欢生活在温暖、潮湿的环境中，它们可以通过发酵分解糖类产生能量。
三、实验操作（15分钟）1. 教师演示如何培养酵母菌：将一小块鲜酵母或发面面肥溶于蔗糖溶液中，然后置于温暖处培养。
2. 学生分组进行实验操作，教师巡回指导。
四、显微镜观察酵母菌（10分钟）1. 教师演示如何制作酵母菌临时装片，并使用显微镜观察酵母菌。
2. 学生分组进行显微镜观察，记录观察结果。
五、总结与讨论（5分钟）1. 教师引导学生总结实验结果：酵母菌的形态特点是什么？它们在培养液中的生长情况如何？2. 学生回答后，教师总结：酵母菌是一种单细胞真菌，具有细胞壁、细胞膜、细胞质和细胞核等结构。
在培养液中，酵母菌会迅速繁殖，形成悬浮颗粒。
六、拓展与应用（5分钟）1. 教师提出问题：酵母菌在食品发酵中有哪些应用？2. 学生回答后，教师总结：酵母菌在面包、啤酒、葡萄酒等食品的制作中具有重要作用。
教学反思：本节课通过培养酵母菌的实验，使学生了解了酵母菌的生活习性和在自然界中的作用，掌握了实验操作技能，并通过对酵母菌的观察，理解了其结构特点。
酵母菌的培养及观察
酵母菌的培养及观察酵母菌的培养和观察⽬的认识酵母菌的形态特征，了解培养酵母菌的⽅法。
实验前的思考⼈类认识和利⽤酵母菌的历史悠久，早在史前时期，先⼈们就学会酿酒。
约在6000年前，就发明发⾯的⽅法。
直到⼗九世纪有了显微镜，⼈们才窥探到醉母菌的真⾯⽬。
对酵母菌做纯系培养分类研究的是与巴斯德同时代的丹麦⼈汉斯，他是为寻求酿造⾼品质啤酒的途径才去深⼊研究酵母菌的。
材料器具甜酒酿汁液，新鲜酵母，⾖芽；显微镜，载玻⽚，盖玻⽪，玻璃棒，镊⼦，滴管，吸⽔纸，酒精灯，⽯棉⽹，⽕柴，漏⽃架，玻璃⽃，量杯，三⾓烧瓶，烧杯，天平，量筒，棉絮；蔗糖，乳酸，碘液。
步骤1．观察酵母菌（1）⽤滴管从甜酒酿的汁液中吸取⼀滴汁液，滴在载玻⽚上，⽤针摊开，盖上盖玻⽚，在低倍镜下就能清楚地看到甜酒酿的汁液中悬浮着⽆数酵母菌。
再换⾼倍镜仔细观察⼀个酵母菌，可以看到酵母菌是椭圆形的单个细胞，细胞中有许多⼩颗粒，也有⼏个⼤的液泡（图⽰）。
有的酵母菌的⼀端长出⼤⼩不同的突起，这是酵母菌的芽体。
芽体成长脱落，就成为新的个体，有的芽体在从母体脱落前⼜长出突起。
这种繁殖⽅法叫出芽繁殖。
（2）在盖玻⽚⼀边加⼀滴碘液，从另⼀边⽤吸⽔纸把染液引⼊盖玻⽚下。
不久就能看到被染成棕褐⾊的细胞核和变成蓝紫⾊的淀粉粒。
2．培养酵母菌（1）⽤蔗糖液培养在盛有100毫升的三⾓烧瓶⾥加5克蔗糖，煮沸。
等到溶液稍稍冷却，加⼀⼩块鲜酵母，⽤玻璃棒搅拌均匀；再⽤棉絮塞紧瓶⼝。
然后把烧瓶放在25～30℃的温暖地⽅，数⼩时后就可见到溶液⾥有⽓泡产⽣，并散发出酒味。
这是因为酵母菌正在把糖分解成⼄醇和⼆氧化碳。
（2）⼆三天后吸取溶液在显微镜下观察，就可看到已培养出⼤量酵母菌。
注意事项1．观察酵母菌时，视野⾥杂质较多，有淀粉粒、半分解的淀粉团块、曲霉孢⼦和其它杂菌等等，只要掌握住酵母菌的形状和体内具有液泡，尤其是染⾊后体内具有褐⾊的核和蓝⾊的淀粉粒这些特点，就可以跟其它杂菌区分开来。
2．发酵在缺氧的环境⾥仍能良好地进⾏，不必为了增加氧⽓去搅拌已放⼊菌种的培养液。
八年级酵母菌实验知识点
八年级酵母菌实验知识点酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界中。
它们在工业生产、医药、生物学等方面具有重要的应用价值。
在我们的课程中，酵母菌实验成为了十分重要的一个环节，接下来我们将会介绍一些八年级常见的酵母菌实验知识点。
一、酵母菌实验简介酵母菌实验通过培养酵母菌以进行相关研究，是生物学中的重要实验之一。
通过酵母菌实验，可以了解酵母菌的生长发育、代谢过程以及遗传机制等。
酵母菌实验具有不同的目的，用于科学研究、生产和生命科学教育。
二、酵母菌的分类酵母菌是一类单细胞真菌，主要分为两大类，酿酒酵母和面包酵母。
在实验中，我们通常使用的是西风漠酵母，也称为萨克斯酵母或啤酒酵母。
三、酵母菌培养基的制备酵母菌可以在不同的培养基上进行培养，常用的培养基有YPD 培养基、SD培养基和SC培养基等。
在酵母菌实验中，我们通常使用的是YPD培养基，制备方法如下：1. 准备YPD粉末（yeast extract、peptone、dextrose）2. 在1L三角瓶中加入YPD粉末，用蒸馏水调制，制成YPD 培养液3. 放入高压灭菌器中进行高压灭菌4. 酵母菌接种到YPD培养基中，进行培养。
四、酵母菌的生长条件酵母菌的生长需要适宜的温度、光照和营养物质。
我们通常在30°C下，使用遮光的条件下进行培养，酵母菌需要足够的营养物质来生长和繁殖。
五、酵母菌的寿命和繁殖酵母菌的生命周期有限，控制酵母菌的繁殖速度可以控制酵母菌的使用寿命。
酵母菌的繁殖方式有两种，单倍体和二倍体。
单倍体繁殖需要在特定的条件下，在亿级的数量下增长，而二倍体繁殖可以自我繁殖和交配繁殖。
六、酵母菌的遗传机制酵母菌的遗传机制是酵母菌实验的一个重要研究内容。
酵母菌是真核细胞，具有双倍体染色体和单倍体性状的特征。
酵母菌的遗传机制通过杂交和基因突变来确定。
七、酵母菌实验的应用价值酵母菌是一类重要的生物模型，可以用于研究细胞分裂、细胞死亡等生命科学领域的基础研究。
酵母菌的培养与分离
微生物学大实验实验指导编者：生物技术教研室2007.3目录实验一酵母菌的培养与分离‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥2 实验二酵母菌的鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥7 实验三酵母菌耐受能力的测定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥19 实验四酵母菌发酵工艺条件的优化‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥22 实验五耐高温酵母菌株的诱变选育‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥24 实验六酿酒酵母细胞固定化与酒精发酵‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥27耐高温酒精酵母菌的选育及发酵条件的研究实验一酵母菌的培养与分离一、实验目的学习培养和分离酵母菌的技术和方法二、基本原理大多数酵母菌为腐生;其生活最适pH为4.5－6;常见于含糖分较高的环境中;例如果园土、菜地土及果皮等植物表面..酵母菌生长迅速;易于分离培养;在液体培养基中;酵母菌比霉菌生长得快..利用酵母菌喜欢酸性环境的特点;常用酸性液体培养基获得酵母菌的培养液这样做的好处是酸性培养条件则可抑制细菌的生长;然后在固体培养基上用划线法分离之.. 三、实验主要内容和要求一本次实验的方案由同学们自己制定;实验包括：1．马铃薯葡萄糖培养基; 乳酸马铃薯葡萄糖培养液的配制..2.菌株的筛选;根据一定的生产目的并从特定的样品筛选出高产酒精的适宜的酵母菌株..3.酵母菌的分离;要求接种一次; 28-30℃;培养24小时;转接一次;28-30℃;培养24小时;并用镜检的方法独立判定所分离菌株是否为酵母菌..4.用划线分离法对酵母菌进行纯化;要求每组挑取单个菌落;连续划线分离4代;镜下为单一纯菌株;每组扩繁10支斜面菌种;备用..四、实验的准备1、甘蔗、成熟葡萄或苹果等果皮、0.1%美蓝染液、1ml的无菌吸管、无菌培养皿等..2、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：原料：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15-20克、蒸馏水1000ml..配制方法：1先将马铃薯去皮;切片;称200克并加蒸馏水1000ml;煮沸半小时;用纱布过滤;补足蒸馏水量至1000ml ;制成20%的马铃薯汁..2在20%的马铃薯汁中加入琼脂;煮沸溶化;补足水分并在115℃条件下高压灭菌20分种..3加入葡萄糖;制成培养酵母菌的马铃薯葡萄糖琼脂培养基..3、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上;但不加琼脂而加乳酸;按每1000ml培养液中含5ml乳酸的量加入;并分装试管..五、实验设计l、接种：取一小块果皮;不需冲洗;直接接入乳酸马铃薯葡萄糖培养液管中;置28-30℃;培养24小时;可见培养液变混浊..2、培养;用无菌吸管取上述培养后培养液0.lml;注入另一管乳酸马铃薯葡萄糖培养液中;置28一30℃再培养24小时或稍长过长则霉菌长出..3、观察：用无菌操作法取少许菌液置于载玻片中央的0.l%美蓝染色液中;混匀后加盖玻片制成水浸片;先用低倍镜后换高倍镜观察酵母菌的形态和出芽生殖情况..活酵母菌可使美蓝还原;从而使菌体不着色;用此方法可判断酵母菌的死活..4、分离：马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板..用划线法分离酵母菌培养液;从而得到单个菌落..挑取单个菌落反复再次划线分离纯化;最终可获得纯培养..六、实验注意事项1.配制培养基时;应注意琼脂的加量;不同规格及批次的琼脂的加量应由实验确定;不能照搬书上的加量..2.对培养基加热时应注意琼脂的糊底与暴沸..3.灭菌锅操作时;首先应注意水一定要加足够;排气要彻底;其次灭菌期间不要离开人;灭菌结束后;关闭电源;拔掉插头;最后放气一定要缓慢;均匀;气放彻底才能开锅;取锅内物品;应小心;防止烫伤..4.接种前应注意无菌工作台的消毒与杀菌;接种时应注意手与接种工具的消毒..七、实验结果的观察及记录1.24小时;观察试管内培养液的情况并作记录;每组转接2支试管..2.48小时;观察试管内培养液的情况;镜检培养液内菌的数量;粗略判断是否为酵母菌并作记录;每人蘸取培养液进行划线分离;并作记录..3.72小时后;观察培养皿内菌的生长的情况;挑取单个菌落进一步划线分离;直到为纯菌落..4.每组转接10支斜面试管;备用..八、实验的延伸自然条件下酿造苹果酒;葡萄酒、猕猴桃酒..七实验报告要求1.实验完毕后;每位同学都应独立作出实验报告;实验报告应类似于小型论文格式..2.实验报告内容包括：1立题意义..2实验设计..3实验步骤详细记录..4对实验结果的分析讨论和总结..5实验延伸..6实验心得体会..附1：果酒的酿制方法—、目的要求了解果酒酿制原理;学习苹果酒酿制技术..二、基本原理果酒是一类营养丰富、含酒精度低的上乘饮料..它是用含一定糖分和水分的果实压汁;经微生物发酵而成..其生化作用;除酒精发酵的主产物外;还有甘油、醋酸、琥珀酸、杂醇油等的形成；同时;陈酿期中;各种酸类与醇类的酯化反应;赋予果酒特殊的香味；果酒中的单宁、色素、果屑微粒及蛋白质包括酵母尸体等的氧化和下沉;使酒液澄清、风味增浓..各种果酒以原料而称名..除坚果外;所有栽培果;野生果均可做酿果酒的原料..本实验以苹果酒为例;学习其酿制方法..三、实验材料1、菌种在7°Be’麦芽汁琼脂斜面培养基上的葡萄酒酵母s.cerevisae ellipsoieleus..2、器材苹果汁培养基;7°Be’麦芽汁培养基;10ml／管、100ml／三角瓶等装量;白糖;食用酒精;亚硫酸;果胶酶;发酵缸;破碎机;果汁分离器等..a.苹果汁培养基粗滤新鲜果汁蔗糖调至13°Be;酸度0.5%以下1000mlK2HPO4 0.1g MgSO4·7H2O 0.1g配好后;加热煮沸3～5分钟;静置10小时以上;过滤、分装;0.7Kg／cm2灭菌20分钟..四、实验步骤一酒母培养1、菌种活化一级种取装有10ml苹果汁或7°Be’麦芽汁培养基1支;按无菌操作法接种葡萄酒酵母菌一环;混匀后置28～30℃下培养2～5天用苹果汁活化菌种时需培养5天以上;镜检酵母繁殖良好;无杂菌即可..2、母发酵剂制备二级种在装有100ml苹果汁培养基的三角瓶中;接1～2ml经活化的葡萄酒酵母菌液;于28℃下培养2～3天;当培养液表面有气泡产生;嗅之有酒香味、取样镜检无杂菌时使用..3、生产发酵剂的制备三级种方法与母发酵剂相同;只是采取更大的容器..一般采用500～1000ml的三角瓶或卡氏罐;盛装占容积1／2～3／5的果汁培养液;灭菌冷却后;按10％接种量接人母发酵剂;在25～28℃下培养24～48小时;待发酵正常;镜检无杂菌方可使用..4、如果使用活性干酵母;添加量为20g/L发酵醪;复水用水量是干酵母重量的5～10倍..复水用水的温度应保持在40℃左右38～43℃;将酵母静置5～10min后搅拌;酵母在水中的时间不能超过30min..然后使酵母溶液缓慢冷却到与将被接种发酵醪的温差小于10℃;然后直接加入发酵醪..二果酒生产工艺流程如下：果胶酶↓苹果→分选除杂下清洗→破碎→压榨→粗果汁→果楂、苹果酸、丹宁↑活化酵母→母发酵剂→生产发酵剂↓蔗糖→发酵→皮渣分离→后发酵→原酒→→换捅除渣→贮存陈酿→配制→贮存→澄清过滤→装瓶→巴氏灭菌→封口→成品..2～3次操作要点：1、分选取成熟苹果;除去腐烂、干疤和伤果..2、清洗清水充分洗涤;除去果皮上的污物、杂质及药剂;以保证原料干净卫生..3、破碎为易于压榨;提高出汁率;需进行破碎..用破碎机破碎至果块粒度0．5cm3左右;并除去果籽..4、压榨分离破碎后立即进行压榨分离..分离出的果汁中不得夹带果肉;同时需添加适量苹果酸调整含量要求果汁总酸含量为5g／L;并加入0.1～0.15g／L的果胶酶;促进果胶分解;使果汁澄清并提高酒的风味..由于苹果汁易被自身含有的多酚氧化酶氧化;故需加SO2还原剂抑制酶活性;同时SO2也具有杀菌、防腐和澄清果汁作用..SO2来源;除工厂应用液态SO2外;实验室常加入亚硫酸钠Na2SO3和偏重亚硫酸钾K2S2O5;其用量为果汁量的0.02％即可..5、前发酵取澄清果汁放入经干热灭菌的发酵缸中;装量占缸容积的4／5;按3～5％的接种量接入酵母生产发酵剂进行发酵;保持品温在18～22℃之间;最高勿超过25℃;发酵应在7～12天内结束..一般苹果汁糖分约为11％;经发酵后;酒精含量约达6％以上;前发酵结束后;原酒酒度应大于8％V;残糖＜20g／L;总酸苹果酸＞5g／L..6、后发酵前发酵结束后;迅速将酒液与皮渣分离;酒汁转入经干热灭菌的发酵缸中;进行后发酵;使残糖继续分解..期间;控制品温在18～22℃之间;不要超过25℃;时间1个月;即得原酒..要求残糖含量小于2g／L以下;挥发酸以醋酸计小于0.6g／L;总酸以苹果酸计大于5g／L..7、换桶除渣为使已澄清的原酒与其酒脚沉淀物及时分离;以免酒脚产生异味而影响酒质;故需进行换桶缸..换桶次数新酒每年换三次..8、贮存陈酿应满桶贮存..陈酿即酒的老熟;经长期密闭贮存;可使酒质澄清、风味醇厚..贮存室温8～16℃;存期半年以上..9、配制原酒贮存半年后可开始配制..配制时;按工艺规定将不同原酒按一定配比相混;然后添加适量的糖、酒精、继续贮存半年以上..10、澄清过滤可采用冷冻法使其澄清;即于-4℃左右存放7天;然后冷过滤..澄清后的酒置-5～-7℃下冷冻3天不发生混浊沉淀;或暴露空气中氧化4天不变混浊即为合格..11、装瓶灭菌装瓶后需进行巴氏灭菌;即在63℃下处理15分钟;冷却后封口保存..五、实验报告1、简述苹果酒的酿制法..2、二氧化硫在果酒酿制中的作用是什么六、思考题1、酵母菌酿酒的原理是什么2、果酒酿制中为何要加入果胶酶实验二酵母菌的鉴定酒精生产中所用酵母菌在微生物学中的分类依据是什么微生物学的类别分门、纲、目、科、属、种;生产酒精用酵母菌属于微生物中的真菌门、子囊菌纲、原子囊菌亚纲、内孢霉目、内孢霉科、啤酒酵母属、卡尔斯伯酵母属等..酵母菌的分类依据是根据它的形态特征、生理生化反应特征来确定的..在分类前将菌体细胞进行分离纯化;得到由单细胞长成的菌落;然后再进行形态特征和生理生化鉴定..一形态特征的鉴定把酵母菌接种到麦芽汁固体培养基上;让它长成菌落;观察其菌落的形态、颜色、质地、边缘、表面等特征..把它再接种到液体麦芽汁培养基中;观察是否能产生醭、试管或培养仪器表面壁上能否形成菌环;培养液中是否产生沉淀、混浊程度等..另外;还要取样在显微镜下观察其单细胞的形态、大小、能否形成孢子、孢子的大小以及繁殖方式等.. 二生理生化特征的鉴定酵母菌的生理生化特征主要表现为发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖等糖类的能力..同时;还需测定利用其它碳水化合物、同化酒精、耐酒精;利用硝酸盐还是硫酸盐;发酵产酸、产醋、耐温、耐酸、抗重金属离子、抗杂菌性等的能力..最后;根据以上得出的形态特征和生理生化特征;查阅有关资料;把具有相同特征的一类酵母菌;就可以归属于某一属..怎样鉴定酵母菌在液体培养基中的培养特征将酵母菌种接种于米曲汁或麦芽汁液体培养基中;放于恒温培养箱内以28—30℃保温培养18—24、24—48、48—72小时;取出观察各个时期液体培养基表面有无白色浮膜物-醭的存在;各个不同时期培养基中有无沉淀或沉淀的多少、有无混浊和混浊程度、试管或其它培养器壁上有无菌环形成;最后取出各个不同时期的样液;注入酵母细胞计数器--血球计中;放置显微镜下观察单个细胞的形态变化情况、液泡的大小、细胞数增加的多少以及培养基中pH值的变化情况等;并测定其酒精和二氧化碳的生产量..然后根据不同的反应情况;作好详细的原始记录;便于以后培养菌种时比较和参考..酵母菌生理生化试验一、酵母菌糖发酵试验一实验目的了解鉴别酵母菌的实验方法..二实验原理酵母菌在厌氧条件下能分解糖类;产生各种有机酸、气体和其它产物..酵母菌种类不同对各种糖类的发酵能力各异..因此;这是鉴别酵母菌种类的一项重要依据..酸的产生可根据培养基中溴甲酚紫pH6.8-5.2由紫变黄或溴麝香草酚蓝pH7.6-6.0由蓝变黄指标剂颜色的改变来确定..产气可由发酵管气泡的产生予以证实..三材料糖发酵基础液;1.6%溴甲酚紫或0.2%溴麝香草酚蓝溶液;葡萄糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖;啤酒酵母斜面菌种..四实验内容1、糖发酵基础液配制好后;按培养液容量的1%加入糖;分装于杜氏发酵管中培养液的高度约为4-5厘米;再在试管内加入倒置的小玻管约0.4×2.0－2.5厘米一支..每种糖设三个重复管;<121℃>高压灭菌15分钟..2、将酵母分别接入上述各发酵管中;置<30℃>下培养48-72小时;另以不接种者作对照3、如产酸则培养液pH值下降而变黄色；如产气;则必先产酸;并在杜氏小管顶端出现气泡..4、结果记录..以“”表示产酸;“<0”>表示产气;“＋”表示产酸产气;“－”表示无变化;“碱”表示产碱..二、酵母菌碳源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种碳源的利用情况..二实验原理碳是酵母菌细胞的重要组成成分;约占酵母菌体重量的50%;为酵母菌生命活动提供所需的能量和组成其结构的物质..酵母菌对各种碳源的利用;因种类不同而异..这是酵母菌分类鉴定的一个重要依据..三材料无碳基础培养基;啤酒酵母斜面菌种;0.5%的葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖溶液.. 四实验内容1、液体试管法1每管加无碳基础培养基5毫升;加被测试的某种碳源;并以葡萄糖作为对照..2接入啤酒酵母;<28℃>下培养1-2周;观察结果..2、生长图谱法1无碳培养基内加入2%的水洗琼脂;融化后冷却至45<-50℃>;到至平板..2接种新鲜培养的啤酒酵母于1毫升无菌生理盐水内;搅匀后倒入上述未凝平板内;摇匀待凝..3皿底用特种蜡笔写上被测试各种碳源的标记..4用不锈钢匙;按标记加入相应的米粒大小的碳源;并以葡萄糖作对照..5<28℃>下培养24-48小时后观察结果..3、结果观察1液体试管中是否形成醭;环岛等..2生长图谱中测量菌落大小;说明对碳源的利用情况..三、酵母菌氮源同化试验一实验目的了解酵母菌对各种氮源的利用情况..二实验原理酵母菌蛋白酶不分泌于菌体外;故酵母菌对复杂的蛋白质不能利用;酵母菌对一些较简单的含氮化合物的利用程度也不一致..三材料无氮基础培养基;啤酒酵母斜面菌;0.5%的蛋白胨、硫酸铵、硝酸铵和尿素溶液..四实验内容1、液体试管法方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮源作空白对照..2、生长图谱法方法同二;以被测试的氮源代替碳源;不加任何氮化物作空白对照..3、结果观察1液体试管中溶液pH值的变化..2生长图谱中测量形成菌落的大小;说明对各种氮源的利用情况..四、酵母菌生长曲线的测定试验一实验目的掌握单细胞微生物群体生长曲线的几种测定方法..二实验原理酵母菌属于单细胞真核型微生物;把一定数量的酵母菌接种于的液体培养基中;在适宜的温度下培养时;它的生长过程具有一定的规律性..在其生长过程中;定时取样测定酵母菌细胞数量;然后以酵母菌细胞数的对数作纵坐标;生长时间作横坐标;绘制所得的曲. . .线叫生长曲线..此生长曲线大致可划分为四个阶段：调整期、对数生长期、稳定期和衰退期..三材料酵母菌增殖培养基;苹果酒酵母斜面菌种..四实验内容1、将培养24小时左右的酵母斜面菌种;用无菌水洗下菌苔;以3000转/分的速率离心;得菌体..将酵母菌体沉淀物再用无菌水洗2-3次后;制备酵母菌悬液细胞数量约106左右/毫升;测数备用..2、取上述菌悬液1毫升于盛有清亮的酵母增殖培养液的试管中;<25℃>下培养;以此为起始时间;记录起始溶液的细胞数..并在培养1;2;4;6;8;9;10;11;12;14;16;20;22;24小时时分别取样检测酵母菌细胞数量..3、酵母菌细胞数量的检测方法①：活菌计数法..此法是将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;取一定量体积在0.1-1毫升之间的稀释液涂布于盛有固体培养基的培养皿内;在<25℃>下培养24小时左右;计算培养皿内菌落数就可测出溶液中活菌数量..方法②：血球计数板计数法..此法是先将以上定时取出的被检样品作一系列稀释后;使菌落数约为105-106个/毫升;取一滴稀释液滴于血球计数板内;在显微镜下直接计算细胞总数..4、绘制生长曲线以酵母菌细胞数的对数作为纵坐标;以培养时间作为横坐标;画出酵母菌的生长曲线..并分析酵母菌群体的生长规律..五、实验结果的观察及记录见表1－2六、思考题1. 为什么碘液反映无色糖化即可结束2. 煮沸强度对麦芽汁质量有什么影响. . ...........附1麦芽汁培养基的制备：麦芽汁制备俗称糖化..所谓糖化是指将麦芽和辅料中高分子贮藏物质如蛋白质、淀粉、半纤维素等机器分解中间产物通过麦芽中各种水解酶类或外加酶制剂作用降解为低分子物质并溶于水的过程..溶解于水的各种干物质称为浸出物;糖化后未经过滤的料液称为糖化醪;过滤后的清夜称为麦芽汁;麦芽汁中浸出物含量和原料干物质之比质量分数称为无水浸出率..方法一1取50g麦芽;在EBC标准磨上粉碎；2将已经粉碎好的麦芽粉放入已称重的糖化杯中;加200mL46℃水;不断搅拌并在46℃水浴中保温30min；3使醪液以1℃/ min速率升温到70℃..此时杯内加入100mL70℃水;保持恒温..45min后用玻璃棒取麦芽汁1滴;置于白滴板上;再加碘液1滴;混合后观察碘液颜色变化..直到碘液呈纯黄色不再变色;停止保温;糖化结束..5在10~15min内急剧冷却到室温；6冲洗搅玻璃棒拌器;擦干糖化杯外壁;加水使其内容物准确称量为450g；7用玻璃棒搅拌糖化杯;并注于漏斗中进行过滤;即获得麦芽汁..方法二称取市售麦芽粉或大麦经浸泡、发芽、干燥、粉碎的麦芽粉;按每Kg麦芽粉加入60—65℃温热水3.5—4kg..于55—60℃保温糖化3-4小时;用碘液检查;然后4层纱布过滤;过滤液中加鸡蛋白加水20 mL;调匀之生出丰富的泡沫为止;然后倒在糖化液中搅拌煮沸后用4层纱布过滤;即得到澄清、透明的麦芽汁;灭菌后方可备用..附2 酵母菌鉴定常用培养基1.酵母菌生孢培养基1麦氏琼脂葡萄糖 1gKCL 1.8g酵母浸膏 2.5g醋酸钠 8.2g琼脂 12g蒸馏水 1000ml115℃灭菌20min2胡萝卜培养基将葫萝卜切成的6~7cm的长条;下后上薄;装入培养管中;加水1ml;杀菌;即成..3Gorodkowa氏培养基消化蛋白 1g葡萄糖 0.1g氯化钠 0.5g琼脂 1.2g水 100ml2.12.5％豆芽汁培养基黄豆芽125g加1L;煮沸半小时;过滤后补足水至1L..115℃灭菌30min3.0.6％酵母浸汁加60g干酵母粉于1L水中;必要时加入一些蛋清以澄清滤液;121℃灭菌15min;趁热用双层滤纸过滤；115℃灭菌15min..4.同化碳源基础培养基NH42SO40.5%;KH2PO40.1％;MgSO4-7H2O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..115℃灭菌15min同化碳源液体培养基NH42SO40.5%;KH2PO4;MgSO4-7H2O0.05%;CaCl2-2H2O0.01%.NaCl0.01%;酵母膏0.02％;糖或其它碳源0.5％..用蒸馏水配;培养基过滤后分装小试管;每管3 ml; 115℃灭菌20min..5. 同化氮源基础培养基葡萄糖2％;KH2PO40.1％;MgSO4-7H2O0.05%;酵母膏0.02％;水洗琼脂2％..用蒸馏水配;培养基过滤后分装大试管;每管20 ml; 115℃灭菌15min..附3酵母各属检索表一 1.生子囊孢子简称孢子;营养细胞芽殖二..2. 生子囊孢子;营养细胞裂殖或兼有芽殖三..3.不生子囊孢子;但生掷孢子营养细胞芽殖四4.不生子囊孢子及掷孢子五二营养细胞芽殖;生子囊孢子1.除芽生细胞外;有真菌丝……………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis..2.无真菌丝1营养细胞多边芽殖A2营养细胞两极芽殖BA1.孢子圆卵形;光面;无凸线Ⅰ2. 孢子半圆形;光面;无凸线Ⅱ3. 孢子痣面Ⅲ4. 孢子有凸线Ⅳ5. 孢子长条形Ⅴ6.生袋状子囊;孢子多到16个;圆形………………………2油脂酵母属LipomycesⅠ1. 孢子1～4个;圆;卵形;光面;无凸线；营养细胞多边芽殖;圆形;卵形;长形..……………………………………………………………3酵母菌属Saccharomycesa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………结合酵母亚属Zygosaccharomycesb孢子生成时;子囊生试探接合枝;但无二细胞结合现象…孢子圆酵母亚属Torulaspora c孢子生成时;子囊直接有营养细胞变成;无试探枝及结合现象……………酵母菌亚属Saccharomyces2.孢子1～4个;光面;无凸线；圆卵形;但营养细胞两极芽殖;为柠檬形………………………………………………4类酵母属SaccharomycodesⅡ孢子为半圆形或肾形1. 孢子为半圆形;多角形;或兼有圆形的…………………………5毕氏酵母属Pichiaa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..………接合毕氏酵母亚属Zygopichiab孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………………毕氏酵母亚属Pichia2. 孢子为肾形………………………………………………………a孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成..……接合肾孢酵母亚属Zygofabosporab孢子生成时;子囊有营养细胞直接变成………………肾孢酵母亚属FabosporaⅢ孢子痣面1. 孢子痣面;无凸线；营养细胞多边芽殖……7德巴利酵母属Debaryomyces2. 孢子痣面;无凸线;子囊由接合子的芽子而成;营养细胞两极芽殖……8纳酵母属Nadsonia3.孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线；营养细胞多边芽殖;…………9施氏酵母属SchwanniomycesⅣ孢子有凸线1. .孢子痣面;圆或卵形;中腰有凸线…………………………………………施氏酵母属2. .孢子光面;圆或卵形;中腰有凸线;使整个形体如土星状………10魏氏酵母属Williopsisa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成………………接合魏氏酵母亚属Zygowilliopsisb孢子生成时;子囊直接由营养细胞变成…………………魏氏酵母亚属Williopsis3. 孢子光面;凸线生在一边;使孢子形如草帽;营养细胞多边芽殖……11汉氏酵母属Hansenulaa孢子生成时;子囊有二营养细胞结合而成……接合汉氏酵母亚属Zygohansenulab孢子生成时;子囊直接由营养细胞直接生成………汉氏酵母亚属Hansenula4. 孢子光面;凸线生于一边;使孢子形如草帽;营养细胞两极芽殖;…………………………………………………………………12孢子柠檬形酵母属HanseniasporaⅤ孢子长条;梭形或鞭形..1. 一个子囊中只有一个孢子…………………………13单孢酵母属Monosporellu2. 孢子2～8个;长条带鞭毛;如鞭子……………………14鞭子酵母属Nematospora3.孢子无鞭毛………………………………………………15蝇肠酵母属Coccidiasous B营养细胞;两极芽殖;柠檬形..1. 孢子生成时;营养细胞直接变成子囊…………………4类酵母属Saccharomycodes2. 孢子上有凸线;使之成草帽形………………12孢子柠檬形酵母属Hanseniaspora3. 孢子痣面;子囊由接合子的芽子而成…………………………8纳酵母属Nadsonia三营养细胞裂殖;或兼及芽殖;生子囊孢子..1.由真菌丝Ⅱ2.假菌丝发达Ⅱ无真菌丝ⅠⅠ只有裂生子;无真菌丝..1. 孢子圆形卵形…………………………………16裂殖酵母属Schizosaccharamyces2. 孢子肾形…………………………………………………………17北港酵母属Ⅱ有真菌丝1. 有真菌丝;只裂殖生裂生子……………………………………18内孢霉endomyces2.有真菌丝;芽殖兼及裂殖………………………………1拟内孢霉属Endomycopsis.. 四生掷孢子1. 掷孢子肾形;不对称;菌落红色或红………………19掷孢酵母属Sporobolomyces2. 掷孢子圆形或卵圆形;菌落无色或浅黄色…………………20布尔酵母属Bullera.. 五不生子囊孢子或掷孢子1. 芽殖细胞及假菌丝外生真菌丝且分裂生裂生子……21芽裂酵母属Trichosporon2. 芽殖细胞;假菌丝及真菌丝可能有;但无裂生子Ⅰ..Ⅰ1. 普通假菌丝甚发达;真菌丝可能有………………………22假丝酵母属Candida2. 无真菌丝;假菌丝原始型或无Ⅱ..Ⅱ1. 生类胡萝卜素………………………………23红酵母属Rhodotorrula2. 无类胡萝卜素Ⅲ..Ⅲ1. 两极芽殖;普通细胞常为柠檬形…………………24无孢柠檬形酵母属Kloeckera2. 三角芽殖;营养细胞常为三角形………………………25三角酵母属Trigonopsis3.营养细胞瓶形;芽殖;子母细胞基部甚宽;生横膜……26瓶形酵母属Pityrosporum4. 营养细胞一端为尖穹窿状;含糖培养基中生大量的酸…………27瓶形酵母属Brettanomyces5. 营养细胞圆形或卵圆形Ⅳ..Ⅳ1. 生荚膜及淀粉样物质;不发酵………………………28隐球酵母属Cryptococcus..2. 无淀粉样………………………………………………29圆酵母属Torulopsis..酵母菌亚属各种检索表Ⅰ1. 只发酵葡萄糖包括果糖及甘露糖及半乳糖：a细胞圆形;子囊孢子一个;…………………………………单孢子酵母S.unisporus b细胞圆形;子囊孢子2或多个………………………………大连酵母 S.dairensc细胞卵形………………………………………………球形酵母S.globosus..Ⅱ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖及蔗糖………………………………S.ribis2. 发酵糖类不同Ⅲ..Ⅲ1. 只发酵葡萄糖、半乳糖、蔗糖及棉子糖：。
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酵母菌培养操作
一、引言
酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中，是生物学研究中常用的模式生物。
酵母菌在许多领域都有重要的应用，如发酵工业、食品工业和生物医学研究等。
为了研究酵母菌的生物学特性和开发应用，科学家们需要进行酵母菌的培养操作。
本文将介绍酵母菌培养操作的步骤和注意事项。
二、酵母菌培养操作步骤
1. 选择培养基：选择适合酵母菌生长的培养基，常用的培养基包括YPAD培养基、YPD培养基和SD培养基等。
培养基的选择应根据具体实验目的和需求进行。
2. 预处理培养基：按照配方将培养基加入蒸馏水中，加热煮沸，然后冷却至室温。
在培养基中加入抗生素可以抑制杂菌的生长。
3. 接种酵母菌：将酵母菌从冰冻保存的培养物中取出，用一次性接种环或一次性吸管接种酵母菌到培养基中。
注意避免杂菌的污染。
4. 培养酵母菌：将接种好的培养基置于恒温摇床中，设置适当的温度和摇动速度，促进酵母菌的生长。
培养时间根据实验需求而定，通常为24小时。
5. 酵母菌的分离和传代：将培养好的酵母菌涂布在含有琼脂的培养
基上，通过酵母菌的单个菌落分离得到纯化的酵母菌株。
然后，将纯化的酵母菌株传代至新的培养基中，以维持酵母菌的生长。
6. 储存酵母菌：将酵母菌株保存在低温下，通常为-80℃的冰箱或液氮罐中，以便长期保存和使用。
三、酵母菌培养操作注意事项
1. 严格遵守无菌操作：在培养酵母菌过程中，必须保持无菌操作，避免杂菌的污染。
使用消毒柜、酒精灯和一次性试验用具等设备进行消毒和无菌操作。
2. 注意培养条件：酵母菌对培养条件较为敏感，温度、pH值和氧气含量等因素都会影响酵母菌的生长。
因此，在培养酵母菌时，应根据不同酵母菌株的生长特性进行优化培养条件。
3. 避免过度培养：过度培养会导致酵母菌的老化和死亡，影响实验结果。
因此，在培养酵母菌时，应根据实验需要确定合适的培养时间。
4. 酵母菌的纯化：为了获得纯化的酵母菌株，必须进行酵母菌的分离和传代。
在分离过程中，要注意避免不同菌株之间的杂交和杂交菌株的产生。
5. 储存酵母菌：为了长期保存酵母菌株，必须将其保存在低温和无菌的环境中。
在储存过程中，应注意防止冷冻和解冻过程中的细胞
损伤。
四、结论
酵母菌培养操作是进行酵母菌研究和应用的基础工作。
通过选择适当的培养基和培养条件，合理进行酵母菌的分离、传代和储存，可以获得高质量的酵母菌株，为后续的实验和应用提供可靠的基础。
在进行酵母菌培养操作时，需要严格遵守无菌操作规范，注意实验细节和操作技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。