沙地葡萄茎痘相关病毒PCR检测及外壳蛋白基因变异分析
苹果茎痘病毒苹果分离物的基因组序列测定及分析
第41卷第2期2014年4月植物保护学报ACTA PHYTOPHYLACICA SINICAVol．41No．2Apr．2014基金项目：公益性行业（农业）科研专项（201203076-02）作者简介：陈姗姗，女，1988年生，硕士研究生，研究方向为果树病毒学，E-mail ：chenss45836@126．com *通讯作者（Author for correspondence ），E-mail ：wanghq@cau．edu．cn 收稿日期：2013－12－02苹果茎痘病毒苹果分离物的基因组序列测定及分析Identification and analysis of complete genomic sequence ofApple stem pitting virus isolated from apple in China陈姗姗1，2张志想2刘国杰1卢美光2李世访2王红清1*（1．中国农业大学农学与生物技术学院果树系，北京100193；2．中国农业科学院植物保护研究所，北京100193）Chen Shanshan 1，2Zhang Zhixiang 2Liu Guojie 1Lu Meiguang 2Li Shifang 2Wang Hongqing 1*（1．Department of Fruit Science ，College of Agronomy and Biotechnology ，China Agricultural University ，Beijing 100193，China ；2．State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests ，Institute of Plant Protection ，Chinese Academy of Agricultural Sciences ，Beijing 100193，China ）苹果茎痘病毒（Apple stem pitting virus ，ASPV ）是一种严重危害果树生产的潜隐性病毒，常与苹果褪绿叶斑病毒（Apple chlorotic leaf spot virus ，ACLSV ）、苹果茎沟病毒（Apple stem grooving virus ，ASGV ）等混合侵染苹果和梨，不仅削弱树势，降低产量，而且使得果实品质变差。
PCR技术及其在食品微生物检测中的应用
PCR技术及其在食品微生物检测中的应用 马健聪 佛山市食品药品检验检测中心物质生活的高速发展所带来的不仅仅是人们生活水平的不断提高，同时也促使人们对于食品安全问题越发重视。
在当前社会生活中人们已经意识到食品安全对于健康生活的重要影响，同时也能够促进我国快速建成小康社会。
在食品安全检测中，其主要的检测目的是检测食品中的微生物成分。
利用ＰＣＲ技术能够高效快捷且准确的检测出食品中所存在的微生物以及相关病菌，提高了食品安全检测的质量以及效率，同时也能够让人们在日常食用食品时更加的安全放心。
食品安全检测的重要性正所谓民以食为天，保证食品安全，就是在保证我国社会的有序发展。
在当前我国食品种类繁多，但是很多商家的其自身的安全意识不够，进而导致食品问题频发。
ＰＣＲ技术在各种微生物检测中的应用在金黄色葡萄球菌检测中的应用。
在食品中出现金黄色葡萄球菌的情况多存在与日常食用的蔬菜和瓜果中，作为人们日常必须要补充的食物，一旦其中所蕴含的金黄色葡萄球菌难以被清除干净就会导致人们的身体健康出现问题。
金黄色葡萄球菌在经过变异之后，其难去除程度相对于较大，多数情况下普通的农药难以彻底的清除，如果使用过量的农药会导致其中存在农药残留，这种残留物会直接影响人类的身体健康，为此必须要对瓜果和蔬菜的中的金黄色葡萄球菌进行仔细的检查，防止其中存在金黄色葡萄球菌没有清除干净。
金黄色葡萄球菌会在瓜果和蔬菜中大量的繁殖并且会产生对人体有害的ＳＥ类型毒素，这种毒素会导致人类在食用食物的时候直接出现食物中毒，而利用ＰＣＲ技术则可以清楚的检测出在瓜果和蔬菜中是否含有金黄色葡萄球菌，在多数情况下利用ＰＣＲ技术能够准确的检测出金黄色葡萄球菌的实际含量，其能够检测出±１ｐｇ的金黄色葡萄球菌，保证整体的测量结果精确且符合实际情况。
在绿脓杆菌检测中的应用。
在我们当前使用的食品中，还存在着绿脓杆菌这一对于人体有着极大危害的微生物。
绿脓杆菌长时间存在在食物中会对人体产生极大危害，利用ＰＣＲ技术对食品药品进行基因序列进行扩增，能够快速地检测出食品中是否含有绿脓杆菌。
2023届甘肃省白银市景泰县高三3月份第一次模拟考试生物试卷含解析
2023年高考生物模拟试卷考生请注意：1．答题前请将考场、试室号、座位号、考生号、姓名写在试卷密封线内，不得在试卷上作任何标记。
2．第一部分选择题每小题选出答案后，需将答案写在试卷指定的括号内，第二部分非选择题答案写在试卷题目指定的位置上。
3．考生必须保证答题卡的整洁。
考试结束后，请将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求）1．下列有关生物组织中有机物的检测实验的叙述，错误的是（）A．“检测生物组织中的油脂”实验，选择了多种植物的种子做实验材料B．苏丹Ⅲ染液的染料分子可以进入活细胞中C．不是所有的糖都可以用本尼迪特试剂鉴定D．向蛋清液中先加入适量双缩脲试剂A液，然后再加入等量的双缩脲试剂B液2．“探究DNA的复制过程”实验是最早证明DNA半保留复制的证据，下列有关该实验叙述错误的是（）A．该实验需对细菌的DNA进行提取和分离操作B．将大肠杆菌转入以15NH4Cl为唯一氮源的培养基中培养若干代，使其DNA都被15N标记，得到第一代细菌C．将第一代细菌转入以14NH4Cl为唯一氮源的培养基中培养，分别取第二代和第三代细菌的DNA进行密度梯度超速离心和分析D．将第二代或第三代细菌的DNA双链打开后再进行离心分离，也会出现中间条带3．下表各选项中，符合“M-定能推理得出N结论”的是（）A．A B．B C．C D．D4．组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成组氨酸。
将其接种在缺乏组氨酸的平板培养基上进行培养，有极少量菌落形成。
2-氨基芴是一种致突变剂，将沾有2-氨基芴的滤纸片放到上述平板培养基中，再接种组氨酸缺陷型沙门氏菌进行培养，会有较多菌落出现。
以下叙述不正确的是A．在接种前，2-氨基芴和滤纸片须进行灭菌处理B．基因突变的可逆性与是否存在致突变剂无关C．若用划线法接种可以根据菌落数计算活菌数量D．此方法可以用于检测环境中的化学致突变剂5．下列有关DNA研究实验的叙述，正确的是A．根据DNA衍射图谱有关数据推算出DNA呈双链B．通过DNA酶处理叶绿体，发现细胞质DNA的存在C．运用同位素示踪技术和差速离心法证明DNA半保留复制D．用32P和35S同时标记噬菌体并侵染细菌，证明DNA是遗传物质6．下列关于艾滋病及HIV的叙述，错误的是（）A．HIV外层脂类膜中的蛋白质是HIV的RNA控制合成的B．感染HIV的妇女，不会通过人工哺乳将病毒传播给婴儿C．HIV病毒的RNA不能直接整合到人的DNA上形成前病毒D．辅助性T淋巴细胞的核糖体合成HIV蛋白质不需要逆转录酶二、综合题：本大题共4小题7．（9分）高果糖浆是一种营养性甜味剂，它被广泛运用在碳酸饮料、果汁饮料和运动饮料以及小吃、果冻和其他含糖产品中。
吉林省长春市文曲星名校2022-2023学年高三六校第一次联考生物试卷含解析
2023年高考生物模拟试卷注意事项：1．答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。
2．回答选择题时，选出每小题答案后，用铅笔把答题卡上对应题目的答案标号涂黑，如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。
回答非选择题时，将答案写在答题卡上，写在本试卷上无效。
3．考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求）1．蝗虫繁殖快，对农作物危害大。
我国实施“改治结合、根除蝗害”的战略，取得了良好的效果，即一方面通过化学防治和生物防治降低成年飞蝗密度，一方面改造飞蝗发生地，如修筑堤坝、控制水位、耕垦湖滩荒地等。
下列有关叙述正确的是（）A．降低成年飞蝗密度、改造发生地都有利于降低种群出生率B．生物防治飞蝗是指利用捕食动物的捕食性来控制飞蝗C．飞蝗迁移能力强，调查其幼虫的密度宜用标志重捕法D．控制蝗灾利于调整能量流动方向、提高能量传递效率2．在细胞周期中有一系列的检验点对细胞增殖进行严密监控，确保细胞增殖有序进行。
周期蛋白cyclin B与蛋白激酶CDK1结合形成复合物MPF后，被激活的CDK1促进细胞由G2期进入M期；周期蛋白cyclin E与蛋白激酶CDK2结合形成复合物后，被激活的CDK2促进细胞由G1期进入S期。
上述调控过程中MPF的活性和周期蛋白的浓度变化如下图所示。
有关叙述错误的是（）A．抑制cyclin B基因的表达或CDK1的活性都可使细胞周期停滞在G2/M检验点B．cyclin E可能与细胞内染色质螺旋化和纺锤体的形成密切相关C．若将G2期和M期细胞融合，则G2期细胞进入M期的时间会提前D．蛋白激酶CDK2可能参与了中心体复制的起始调控3．下图所示DNA分子片段中一条链含15N，另一条链含14N。
下列有关说法错误的是（）A．DNA连接酶和DNA聚合酶都催化形成①处的化学键B．解旋酶作用于③处，而②是胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸C．若该DNA分子中一条链上G+C=56%，则无法确定整个DNA分子中T的含量D．把此DNA放在含15N的培养液中复制两代，子代中含15N的DNA占100%4．研究人员将含15N-DNA的大肠杆菌转移到含14NH4Cl的培养液中，培养x分钟后提取子代大肠杆菌的DNA进行热变性处理，然后进行密度梯度离心，离心管中出现的两个条带分别对应图中的两个峰。
侵染安康魔芋的芋花叶病毒外壳蛋白基因克隆及分析
侵染安康魔芋的芋花叶病毒外壳蛋白基因克隆及分析
刘欢;吴薇
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2022(50)18
【摘要】采用RT-PCR方法克隆了侵染安康魔芋的芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus, DsMV)cp完整基因序列,结果表明:DsMV魔芋分离物cp基因大小为903 bp,推导编码的外壳蛋白由301个氨基酸组成。
Blast比对结果显示,覆盖度仅有72%~80%,一致性为80.30%~87.98%;系统发育分析显示DsMV安康魔芋分离物独立于组III中,具有较大的分子变异,且不同寄主分离物和不同地理位置来源的DsMV在进化树中没有明显相关性。
【总页数】3页(P90-92)
【作者】刘欢;吴薇
【作者单位】安康学院现代农业与生物科技学院
【正文语种】中文
【中图分类】S435.39
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中国野生葡萄果实抗白腐病基因的分子标记
园 艺 学 报 2003,30(1):6～10Acta H orticulturae S inica中国野生葡萄果实抗白腐病基因的分子标记徐 炎1 王跃进1,3 周 鹏2 张剑侠1(1西北农林科技大学园艺学院,杨凌712100; 2热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口571101)摘 要:以感病×抗病的葡萄种间杂交组合白玉霓×塘尾的F1代17个单株及塘尾自交一代16个单株为试材,采用BS A法和RAPD技术,通过对155个随机引物的筛选,获得了一个与中国野生葡萄抗白腐病基因连锁的RAPD标记OPP092760,并在中国野生葡萄8个种的32个株系及欧洲葡萄16个品种中得到验证。
进一步将该DNA片段克隆并测序,根据两端序列,设计了一对长26bp的特异引物分别扩增供试材料,获得了与该RAPD标记相同大小的DNA片段,成功地将RAPD标记转化为SC AR标记,可以用作抗白腐病基因的分子辅助选择的依据。
关键词:葡萄;中国野生葡萄;白腐病;RAPD;SC AR;抗病基因中图分类号:S663.1;Q943 文献标识码:A 文章编号:05132353X(2003)0120006205葡萄白腐病〔Coniothyrium diplodiella(S peg)Sace〕是世界性的葡萄重要真菌病害,每年因该病造成产量损失20%～50%,严重年份达到80%以上〔1,2〕。
目前生产上对该病的防治主要以化学药剂防治为主,易引起果实农药残毒和环境污染,而且真菌能产生耐药性。
利用抗病基因选育抗病品种是防治白腐病根本有效的措施。
中国野生葡萄是葡萄抗白腐病育种的重要种质资源〔3,4〕,分子标记技术的应用〔5,6〕为基因分析和鉴定提供了新手段。
本研究利用RAPD、SC AR分子标记技术,对中国野生葡萄及其杂种后代进行抗病基因的快速标记,以达到分子标记辅助抗病育种早期鉴定选择杂种的目的。
1 材料与方法试材为葡萄种间杂交组合欧洲葡萄品种白玉霓×刺葡萄塘尾的F1代17个单株,塘尾自交一代16个单株,中国野生葡萄8个种32个株系和欧洲葡萄16个品种(表1,表2),均取自西北农林科技大学葡萄种质资源圃。
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沙地葡萄茎痘相关病毒PCR检测及外壳蛋白基因变异分析
沙地葡萄茎痘病(Grapevine rupestris stem pitting, GRSP)是嫁接传染性
病害,为皱木复合病(Rugose wood complex disease)中最为普遍的一种,在栽培
品种中一般潜伏侵染。以沙地葡萄圣乔治(Vitis rupestris cv. St. George)
为砧木时,嫁接口以下剥去树皮可见木质部有星状穴和条状槽沟,会造成嫁接口
部位逐渐坏死,植株长势衰弱,树体矮小等。
沙地葡萄茎痘相关病毒(Grapevine rupestris stem pitting associated
virus, GRSPaV)与GRSP有关,该病毒隶属凹陷病毒属(Foveavirus),基因组大小
为8.4～9.3kbp,为正义单链RNA病毒,编码五个开放阅读框(Open reading
frame.ORF),含一个Poly(A); ORF1编码病毒复制酶蛋白(RP), ORF2～ORF4组成
一个三基因框(Triple-gene block,TGB),编码TGBpl-p3, ORF5编码外壳蛋白
(CP)。多样性分析表明,GRSPaV的序列多变,目前存在10个不同的序列变异体。
为调查我国沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)侵染状况以及不同分离株外壳
蛋白(coat protein, CP)基因变异情况,并为今后该病毒的致病性、病害的防控
及抗病毒转基因工程等研究提供依据,本研究对采自我国16个省市自治区的葡
萄样品中的GRSPaV进行RT-PCI检测,选择部分样品进行了印基因的克隆与测序
分析,并对三种不同RNA提取方法进行了比较,主要取得了以下研究结果：1、比
较研究了CTAB法、SDS法以及SiO2吸附法的提取效果,结果显示,SDS法提取的
RNA条带不清晰,有拖尾现象,此外,在核酸溶解的过程中,该方法得到的RNA黏性
大,杂质较多,呈褐色；CTAB法提取的RNA在电泳图上无任何条带；SiO2吸附法
提取的RNA,28S和18S条带完整且清晰,溶于水后无杂质,表明所提RNA质量较好,
可用于后续研究。2、对我国16个省市自治区的65个葡萄品种305株葡萄样品
进行RT-PCR的检测结果显示,除新疆的样品外,其余15个地区的葡萄中均检测到
GRSPaV。
有114株样品带毒,平均带毒株率为37.4%。对检测结果进行分析发现,不同
地区的葡萄品种带毒情况不同,品种带毒率最高的为88.9%,最低的为20.0%；不
同地区的葡萄植株带毒情况也存在差别,葡萄植株带毒率最高的为75.0%,最低
的为6.7%。
3、通过对不同时期、不同部位的葡萄样品中的GRSPa(?)进行检测,结果显
示,五月份采取的样品中,只在叶柄处检测到病毒；在八月份的样品中,分别在卷
须、叶柄以及果实中检测到病毒。综合重复试验得出以下结论：对于GRSPaV的
检测,春季的最佳部位为叶柄,而秋季可采用卷须、叶柄或果实,其中,果实的检测
结果最好。
4、本研究共克隆了来自10个省市的27个葡萄品种41个样品,与来自六个
国家的12个分离物的CP序列进行序列比对分析,其核苷酸序列同源性为
80.4%～99.7%,氨基酸序列同源性为81.9%～100%。所有的分离物在系统发育树
上聚为三个大组(组Ⅰ、组Ⅱ和组Ⅲ)。
各个分离物间的遗传距离无明显的地域以及品种差异,此外,以氨基酸序列
和核苷酸序列构建的系统发育树基本一致。部分分离物内各个克隆间的同源性差
异较大,表明植株存在不同序列变异体的复合侵染。
此外,同一分离物内部不同克隆的SSCP以及RFLP研究,两者的分型结果基本
一致。