硒多糖HPLC液相谱图(蔗糖测定)

HPLC-RID法测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖含量

分析检测HPLC-RID法测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖含量赵　芳（晋中市综合检验检测中心，山西晋中 030600）摘　要：建立了高效液相色谱-示差折光检测法（High Performance Liquid Chromatography Differential Refractive Detector，HPLC-RID）测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖5种还原糖含量的分析方法。

蜂蜜试样用水提取，摇匀过滤后，经Kromasil 100-5-NH2色谱柱分离，用示差折光检测器测定。

结果表明，果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖及乳糖在1.0～10.0 mg/mL线性关系良好，5种还原糖的方法检出限均为0.5 g/100 g，加标回收率为82.4%～109.7%，相对标准偏差RSD为0.87%～3.77%。

该方法前处理过程简单、准确度高、精密度好，适用于蜂蜜中5种还原糖的定量检测。

关键词：蜂蜜；还原糖；高效液相色谱-示差折光检测器法Determination of Fructose, Glucose, Sucrose, Maltose andLactosein Honey by HPLC-RIDZHAO Fang(Jinzhong General Inspection and Testing Centre, Jinzhong 030600, China) Abstract: The method was established for the determination of fructose, glucose, sucrose, maltose and lactose in honey by HPLC-RID. Honey samples were extracted with water, shaken and filtered, separated by Kromasil 100-5-NH2 chromatographic column and determined by diﬀerential refractive detector. The results showed that the linear relationship among fructose, glucose, sucrose, maltose and lactose was good in the concentration range of 1.0～10.0 mg/mL. The detection limits of the ﬁve reducing sugars were 0.5 g/100 g, the spiked recoveries were 82.4%～109.7%, and the relative standard deviation RSD was 0.87%～3.77%. The method has the advantages of simple pretreatment process, high accuracy and good precision. It is suitable for the quantitative determination of the above ﬁve reducing sugars in honey.Keywords: honey; reducing sugar; high performance liquid chromatography diﬀerential refractive detector蜂蜜中富含多种糖类、氨基酸、维生素等营养成分，清甜爽口、老少皆宜，饮用蜂蜜具有缓解疲劳、有益身体健康和抗菌消炎、保养皮肤的功效[1-3]。

高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt

色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
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色谱法的分类示意图
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统
▪ 高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个泵。）
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▪安捷伦泵：小视频 ▪色谱学堂：泵
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色谱法原理及分类
什么是色谱法色谱法溯源 Tswett（茨维特)的实验色谱法原理色谱法的分类
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛时间里得分多少来决定胜负的，因此，篮球比赛的计时计分系统是一种得分类型的系统
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器：
①固定波长：254nm ，低压汞灯。
② 可调波长： 190 ～ 800mm ，钨灯，氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器： 190～700nm。
接色谱柱石英窗光电倍增管
废液
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柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成

柱前衍生化高效液相色谱法分析多糖中的单糖组成马定远　陈　君　李　萍3胡卓逸(中国药科大学生药药用植物教研室,南京210038)(中国药科大学生化研究室,南京210009)摘　要　报道了多糖中单糖组成的柱前衍生化高效液相色谱测定方法。

采用反向高效液相色谱250nm 紫外检测和使用梯度洗脱,6种还原单糖的12苯基232甲基252吡唑啉酮衍生实现了良好的分离并具有良好的峰形。

对单糖组成的定量测定进行了方法学考察,建立了单糖组成分析的数据分析方法,并用所建立方法对一个多糖中的单糖组成进行了分析,获得良好的重复性。

关键词　单糖,多糖,衍生化,高效液相色谱　2001207204收稿;2002201209接受1　引言单糖的组成分析是糖分析中的一项重要内容。

已有的糖组成分析方法以气相色谱法和高效液相色谱法为主。

由于单糖分子的多样性,关于糖的分析方法仍在不断发展。

12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP )衍生化方法自运用以来,得到不断完善1～3。

Strydom 运用此法对中性、酸性和碱性醛糖进行了分析,可以使15种单糖得到很好的分离2。

本文首先建立了6种常见单糖(包括一种酸性糖)的分离模式,通过内标法对3种中性单糖的定量进行了方法学考察,并应用所建立的方法对多糖中的单糖进行了组成分析,为此法的更好运用提供了依据。

2　实验部分2.1　仪器与试剂HP1100型高效液相色谱系统,包括G 1312A 二元泵,G 1315A DAD 检测器,HP ChemStation 色谱工作站(Hewlett 2Packard )。

衍生化试剂12苯基232甲基252吡唑啉酮(PMP ,上海化学试剂采购供应站试剂厂),甲醇重结晶两次。

色谱用乙睛(T edia )、三氟乙酸(CP 级,上海化学试剂公司)。

单糖对照品:葡萄糖(G lc ,上海化学试剂公司)、甘露糖(Man ,Sigma 公司)、半乳糖(G al ,Sigma 公司)、鼠李糖(Rham 公司)、葡萄糖醛酸(G lcUA )和木糖(Xyl )(上海化学试剂二厂产品)。

HPLC-ELSD法测定微胶囊中阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖含量

HPLC-ELSD法测定微胶囊中阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖含量陈梦1，张晓芳1，*，韩艳超1，栗星2，程远欣2（1.晨光生物科技集团股份有限公司，邯郸 057250；2.河北省植物天然色素技术研究院，邯郸 057250）摘要：建立高效液相色谱-蒸发光散射法（High performance liquid chromatography with evaporative light-scattering detection，HPLC-ELSD）同时测定微胶囊中阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖含量的高效液相色谱方法。

样品经乙腈水超声波浸取，采用Waters Amide色谱柱（4.6×250mm3.5μm）分离，以1%氨水和乙腈为流动相，使用蒸发光散射检测器进行检测。

结果表明，阿拉伯糖：0.44～7.06mg/mL、果糖：0.30～4.74mg/mL、葡萄糖：0.40～6.45mg/mL、蔗糖：0.32～5.04mg/mL、麦芽糖：0.40～6.47mg/mL 及乳糖：0.41～6.61mg/mL范围内线性关系良好；方法检出限为0.02～0.03mg/mL；回收率为95.31%～ 105.33%，6种糖含量相对标准偏差在2.30%～3.50%之间。

该方法前处理简单、灵敏度高和检测速度快，适用于微胶囊中阿拉伯糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的定量检测。

关键词：高效液相色谱-蒸发光散射法（HPLC-ELSD）；微胶囊；阿拉伯糖；果糖；葡萄糖；蔗糖；麦芽糖；乳糖中图分类号：TS202.3/O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2020）05-0095-06doi：10.19804/j.issn1006-2513.2020.05.017Determination of arabinose，fructose，glucose，sucrose，maltose and lactose in microcapsules by HPLC-ELSD CHEN Meng1，ZHANG Xiao-fang1，*，HAN Yan-chao1，LI Xing2，CHENG Yuan-xin2（1. Chenguang Biotech Group Co.，Ltd.，Handan 057250；2. Hebei Province Natural Pigment Industry Technology Research Institute，Handan 057250）Abstract：A high performance liquid chromatography with evaporative light-scattering detection （HPLC-ELSD）was developed for simultaneous detecting of 6 sugars including arabinose，fructose，glucose，sucrose，maltose，lactose in microcapsules. The samples were hydrolyzed by acetonitrile water leaching，separated by a Waters Amide column （4.6×250 mm 3.5 μm），with 1% ammonia and acetonitrile as mobile phase，and evaporative light scattering detector. The results showed that the linear ranges were：arabinose 0.44～7.06mg/mL fructose 0.30～4.74 mg/mL，收稿日期：2019-12-17作者简介：陈梦（1991-），女，硕士。

分子排阻色谱法测定多糖分子量及其分布--梁翠荣

色谱柱的选用
亲水性球型高聚物为填充剂（TSK G PWXL柱, Shodex OHpak SB HQ柱）
右旋糖酐铁右旋糖酐20 右旋糖酐40 右旋糖酐70 TSK G2500 PWXL TSK G3000 PWXL TSK G4000 PWXL TSK G4000 PWXL
检测系统
多糖的检测，最常用的检测器为示差折光检测器（通用型检测器）。通过连续地测定淋出液折光指数的变化来测定样品的浓度，只要溶剂的折光指数与被测样品的折光指数有区别均能检测。
色谱柱
各种色谱柱的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，色谱柱有一定的使用范围。
右旋糖酐分子量D1 M 2500 ；右旋糖酐分子量D2 M 4600 ；右旋糖酐分子量D3 M 7100；右旋糖酐分子量D4 M 10000；右旋糖酐分子量D5 M 21400；右旋糖酐分子量D6 M 41100 ；右旋糖酐分子量D7 M 84400；右旋糖酐分子量D8 M 133800；右旋糖酐分子量D0 M 180；右旋糖酐分子量D2000 M 2000000
测定方法

直接法：在测定淋出液浓度的同时，测定其粘度或光散射，从而求出其分子量。间接法：用一组分子量不等的、单分散的试样为标准样品，分别测定它们的淋出体积（保留时间），建立保留时间与分子量二者之间的关系，从而求出其分子量。

间接法
右旋糖酐分子量对照品（供右旋糖酐分子量测定用中检所）

高效液相色谱蒸发光散射法同时测定蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖

Ａｍｉｄｅ色谱柱
光检测器（ＲＩＤ）进行测定。但示差折光检测器依据
折射率的变化对样品进行检测，极易受温度、流动相
（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，３．５肚ｍ），柱温３５℃，进样量
２０肚Ｌ；流动相为含０．１％（体积分数，下同）氨水的
乙腈溶液，流量１ｍＬ・ｍｉｎ～。梯度洗脱：０～
４．０
梯度等条件的影响，导致谱图基线漂移，灵敏度偏
ＧＢ／Ｔ１８９３２．２２—２００３［９］中采用液相色谱配示差折
ｇ，用水溶解并定容至１００
ｍＩ。。
使用时用乙腈一水（７０＋３０）溶液稀释至所需质量
浓度。
乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，流
动相过０．４５ｆｆｍ滤膜后使用。试验用水为超纯水。１．２仪器工作条件
１）色谱条件Ｗａｔｅｒｓ
Ｘｂｒｉｄｇｅ
试液５．００ｍＬ，用乙腈（７０＋３０）溶液稀释至
１００
ｍＬ，经０．４５ｆｆｍ针式滤头过滤后，在仪器工作
收稿日期：２０１４一１１一０７
・１３３０・
条件下进行测定。
万方数据
蔗糖
２结果与讨论
２．１色谱条件的选择
２．１．１
６
『Ｉ麦芽糖
色谱柱
由于果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖等４种糖具有较强的极性，在Ｃ。ｓ等反相色谱柱上几乎无保留，因此，试验使用Ｗａｔｅｒｓ
ａｎｄ
ｒｅｃｏｖｅｒｙ
［７］余娜，周光明，朱娟．离子色谱法检测蜂蜜和葡萄酒中
的蔗糖、葡萄糖和果糖［Ｊ］．食品科学，２０１０，３１（１６）：
１８８—１９１．
［８］张磊，周光明，张丽君，等．离子色谱法测定鲜果和干果中的三种糖［Ｊ］．四川大学学报：自然科学版，２０１４，５１
（４）：７９１—７９６．

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法分析生物样品中硒的化学形态.pdf

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱法分析生物样品中硒的化学形态喻宏伟陈春英# 高愈希李柏柴之芳（中国科学院高能物理研究所和中国科学院核分析技术重点实验室，北京100049）摘要建立了用于生物样品中含硒化合物在线分离分析的联用方法。

用反相离子对高效液相色谱（RP-IP-HPLC ）分离含硒化合物，用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS ）在线分析硒含量。

与标准化合物的色谱图和工作曲线对照进行定性和定量分析，实现了对硒酸钠、亚硒酸钠、硒代胱氨酸、硒代胱胺、硒代蛋氨酸、硒代尿素和三甲基硒离子等7种生物体常见的含硒小分子的分析，检出限为0.1～1.5µg /L ；线性范围为1～100µg /L ，应用于人血清、尿、肝组织细胞质溶胶等样品中含硒小分子的形态分析，所需进样量仅50µL ，各含硒化合物加标回收率在93%～117%。

本方法操作简便，灵敏度高，重现性好，适合于各种生物样品中含硒小分子的形态分析。

关键词反相离子对高效液相色谱，电感耦合等离子体质谱，联用技术，生物样品，形态分析，硒 2005-09-28收稿；2006-01-07接受本文系国家自然科学重大项目（No.10490181）和国际原子能机构CRP 项目（No.13246/RO ）资助1 引言硒是一种重要的人体必需微量元素，它参与组成体内许多重要抗氧化酶的活性中心，近年来研究表明，其具有抗癌功能［1～4］。

硒的生物功能与其化学形态和含量密切相关［5］，因此要全面研究硒的生物学意义，形态分析（确定样品中元素的一种或多种化学形态的定性和定量分析）十分必要。

硒在生物和环境样品中含量极低，所以对分析的灵敏度和精确度的要求很高［6］。

国外已有数篇文章综述了硒形态分析的相关方法［7，8］，联用技术被认为是进行化学形态分析（chemical speciation ）的有效手段，其中高效液相色谱（HPLC ）与电感耦合等离子质谱（ICP-MS ）联用作为一种高灵敏的元素形态分析方法得到广泛的应用［9～12］。

HPLC-ELSD测定当归中蔗糖的含量

HPLC-ELSD测定当归中蔗糖的含量陈江弢;李海舟;王东;杨崇仁;刘云【摘要】目的:建立一种高效快速的高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定中药当归中蔗糖含量的方法.方法:采用Shodex NH2P-50 4E(4.6×250mm, 5μm)色谱柱,以乙腈-水(78:22)为流动相,流速:1.2mL·min-1,柱温:60℃,漂移管温度:90℃,气体流量:2.1SLPM.结果:蔗糖在40.32～403.2μg线性关系良好.结论:该法可以用于传统中药当归药材中蔗糖含量的检测.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2008(010)003【总页数】2页(P19-20)【关键词】当归;HPLC-ELSD;蔗糖【作者】陈江弢;李海舟;王东;杨崇仁;刘云【作者单位】中国药科大学天然药物化学教研室,江苏,南京,210039;中国科学院昆明植物研究所,云南,昆明,650204;中国科学院昆明植物研究所,云南,昆明,650204;中国科学院昆明植物研究所,云南,昆明,650204;北京万赛生物医药技术发展有限公司,北京,100097【正文语种】中文【中图分类】R2当归Radix angelica sinensis是我国著名的传统中药材，使用历史悠久。

当归自古以来为妇科要药，是常用的中药材。

当归的化学成分很复杂，主要含有脂溶性成分，如挥发油，另含有水溶性成分，包括酸类、糖类、氨基酸和阿魏酸等。

当归含有多种糖类，其中蔗糖含量很高［1］。

本文通过HPLC-ELSD法，检测了当归药材中的蔗糖含量，为当归药材的开发和利用提供了依据。

WATERSAlliance色谱仪器，2695型四元梯度泵，自动进样，Alltech 500型蒸发光散射（ELSD）检测器。

甲醇、乙腈均为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

蔗糖购自Sigma公司（美国），纯度＞98%；药材采集自产地，并经中国科学院昆明植物研究所杨崇仁教授鉴定为当归Angelica sinensis（Oliv.）Diels的干燥根。