正交试验法优选5_羟基色氨酸的提取工艺
正交试验法优选黄芪提取工艺
正交试验法优选黄芪提取工艺
刘勇
【期刊名称】《中兽医医药杂志》
【年(卷),期】2003(22)3
【摘要】以黄芪甲甙为定量指标 ,研究黄芪的提取工艺。
通过正交试验 ,用高效液相色谱法测黄芪甲甙含量进行优选。
结果 :乙醇浓度、用量及提取时间对黄芪甲甙的提取均有影响。
最佳提取工艺为 70 %乙醇常压回流提取 2次 ,第一次为药材量1 0倍 ,回流 90 m in,第二次 8倍量 ,回流 6 0 m in;黄芪甲甙含量为 0 .0 95 %。
【总页数】2页(P10-11)
【关键词】正交试验法;优选;黄芪;提取工艺;高效液相色谱法;含量测定;黄芪甲甙【作者】刘勇
【作者单位】甘肃定西扶正制药有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R284.2
【相关文献】
1.正交试验法优选芪黄片中黄芪的提取工艺 [J], 蒋鸣;刘汉清;韩晓珂;谢涛
2.正交试验法优选黄芪西洋参口服液提取工艺的研究 [J], 张明晶;迟云峰
3.正交试验法优选黄芪中总黄酮提取工艺 [J], 赵琦;张军武
4.正交试验法优选复方黄芪当归片提取工艺研究 [J], 彭陈明;廖华卫;叶楚宁
5.正交试验法优选补肺片中黄芪甲苷的提取工艺 [J], 韦文俊; 刘艳平
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
正交试验法优化喜树叶中喜树碱的提取工艺
统上喜树碱提取多采用代技术提取喜树碱，与常规溶剂提取法相比，其提取效率高，操作简便，但一次性投入成本高。
本研究以甲醇为提取溶剂，利用正交实验法优化了喜树碱回流法提取工艺。
高效液相色谱系统喜树碱含量的喜树叶回流法提取工正交实验。
在单因素实验基础上，选择甲醇浓度、提取时间、提取温度、料液比为考察因素，以喜树碱的提取率为考察指标，利用SPSS 统计软件建立L 因素甲醇浓度（%）A 料液比（℃）D 空白E 155501265602375703485804正交结果与方差分析B C D 1112223334441232143414321342433124211422313244130.3210.3470.3450.3760.3510.3700.3690.3630.3930.3620.3670.3200.0540.0190.0740.017比R A 提取温度为70℃。
离差平方和自由度均方F 值P A 0.0309030.0103034.35780< 0.01B 0.0071230.002377.91799<0.1C 0.0010430.00035 1.15791>0.1D 0.0121630.0040513.52544<0.05E 0.00030从提取温度为70℃。
在该工艺条件下平行提取5次，喜树碱提取率为0.490±0.004‰，结果表明优化条件下工艺稳定性较好。
该研究利用正交实验法进行多因素分析，优化了喜树碱的甲醇回流法提取工艺，明确了最佳工艺条件甲醇浓度为65%，提取时间1h，料液比为1:10，提取温度为70℃，该工艺条件下，喜树碱的提取方法简便、提取率稳定，为喜树碱的进一步研究提供依据。
正交试验法优化喜树叶马云超70~90%乙醇渗漉，耗时长，操作繁琐。
另有文献报道超声波和超临界流体等现仪器与材料：LC-6A，日本岛津公司；电子分析天平：AUY220型，日本岛津公司；恒温水浴锅：DK-S14型，上海森信实验仪器有限公司；电热恒温干燥箱：DGG-9240B 型，上海森信实验仪器有限公司；旋转蒸发仪：RE-52AA 型，上海亚荣生化仪器厂。
正交实验法优选血三七药材提取工艺
陕西 等省 民间广泛 药 用 ， 亦 为 土家族 、 苗族、 傈 僳 族
常用 的 民族药 ］ ． 秋季采挖， 洗净 ， 去粗皮 ， 鲜 用 或 晒 干． 其 味 涩微 苦 、 性平小毒， 有 活血 舒 筋 ， 行 气 止 痛， 抗 菌 消炎 ， 止血生肌 ， 收 敛 止泻 之 功 效 ． 用 于 跌 打损 伤 ， 外伤 出血 ， 劳伤菌痢 ， 胃肠 炎 等 病 ＿ ３ ］ ． 民 间 常 以其水 煎 服或 泡酒 服 ， 用 于 胃肠炎 、 痢疾、 跌 打 损
９ ． ０ ４ ｇ （ ｒ 一０ ． ９ ９ ９ ８ ） 范 围 内 呈 良好 的 线 性 关 系 ， 优 选 提取 工 艺为 血 三七 根 茎 粉碎 成 最粗 粉 ， 加 ９ Ｏ 的 乙 醇 加 热 回流 提 取 ２ 次： 第 一 次 加 ６倍 量 ９ Ｏ 乙醇 ， 加热 回流提 取 １ ． ５ ｈ ； 第 二 次 加 ４倍 量 ９ Ｏ 乙醇 ， 加 热 回流 提 取 １ ｈ ． 关键 词 ： 血 三 七 ；正 交 实 验 ；ＨＰ Ｌ Ｃ ；槲 皮 素
中图分类号 ： Ｒ ２ ８ ２ ． ７ １ 文 献 标 识 码 ：Ａ
血 三七 为蓼科 植 物 中华抱 茎蓼 的根茎 ＿ １ ． 中华 抱 茎蓼 为多 年生 草 本 ． 生长于 １ ０ ０ ０ ～２ ５ ０ ０ ｍ 的沟 边 或林下 潮 湿处 草丛 中 ， 其 根 茎粗 壮 ， 外 皮 紫褐 色 ， 断 面紫 红 色 ． 茎 直 立 或倾 斜 ， 上 部 有 分 枝． 在湖北、
万定荣 教授鉴 定 为蓼属 植物 中华抱 茎蓼 （ Ｐ ｏ ｌ ｙ ｇ ｏ ｎ ｕ ｍ
ａ ｍｐ ｌ ｅ ｘ ｉ ｃ ａ ｕ ｌ ｅ Ｄ．Ｄｏ ｎ Ｖ ａ ｒ ．ｓ ｉ ｎ ｅ ｎ ｓ ｅ Ｆ标 ， 采 用 （ ３ ） 正交 表进 行 筛 选 ， 考 察 了 乙醇 的 浓 度 、 乙醇的用量 、 提取的 时间 、 提 取 的次 数 、
正交试验法优选感冒药茶颗粒的提取工艺
正交试验法优选感冒药茶颗粒的提取工艺黄权芳;林兴;韦振源;刘倩;言开武【摘要】目的：优选感冒药茶颗粒的提取工艺，以便制备质量稳定的制剂。
方法以加水量，提取时间，提取次数为考察因素，以总黄酮及熊果酸和浸膏量为指标，采用L9（3）4正交试验法对感冒药茶颗粒的最佳提取工艺进行优选。
结果该制剂最佳提取工艺为加水量10倍，提取3次，每次提取时间60min。
结论该提取工艺合理可行，稳定可控，适用于大生产，是最佳制备工艺。
%Objective To optimize techniques for Ganmao Yaocha granule, Preparation and stability so as to the quality of preparation. Methods The amount of water, extraction time and frequency as variables, By taking the rate of extract and the total of lfavonoids, ursolic as the indexes components, the extraction techniques were optimized for Compound rhubarb enema through L9(3)4orthogonal test. Results The best condition is 3 times to boil with water, each 10 times,1 hours. Conclusion The preparation technology is feasible and reliable for the manufacturing process of Compound rhubarb enema.【期刊名称】《中国医药指南》【年(卷),期】2013(000)027【总页数】3页(P4-6)【关键词】正交试验;提取工艺;感冒药茶颗粒【作者】黄权芳;林兴;韦振源;刘倩;言开武【作者单位】广西中医药大学第一附属医院，广西南宁530023;广西医科大学，广西南宁530021;广西中医药大学第一附属医院，广西南宁530023;广西中医药大学第一附属医院，广西南宁530023;桂林医学院，广西桂林541004【正文语种】中文【中图分类】R285.1感冒药茶颗粒是由广西中医药大学第一附属医院院内制剂感冒药茶的基础上进行的剂型改革。
正交试验优选藤三七提取工艺
正交试验优选藤三七提取工艺阎思彤;李胜;于浩淼;徐雯娟;朱翠玲;林子豪;徐先祥【摘要】目的:优选藤三七的提取工艺.方法:采用正交实验法,以提取得率及总皂苷含量为评价指标,考察乙醇浓度、提取时间、温度和提取次数四种因素对提取工艺的影响.结果:温度和提取次数对藤三七得率有显著影响,最佳提取工艺条件为80℃水浴,以60％乙醇浓度提取藤三七3次,每次1.5h.结论:优选的工艺简单可行.【期刊名称】《中国野生植物资源》【年(卷),期】2017(036)001【总页数】3页(P35-36,71)【关键词】藤三七;提取工艺;正交试验;总皂苷【作者】阎思彤;李胜;于浩淼;徐雯娟;朱翠玲;林子豪;徐先祥【作者单位】华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021;华侨大学生物医学学院,福建泉州362021【正文语种】中文【中图分类】R284.2藤三七又名洋落葵、土三七等，因其珠芽、地下块茎的外观与名贵中药三七相似而得名，来源为落葵科多年生蔓生植物藤三七[Anredera cordifolia (Ten.) Sreenis][1]，生长容易，福建省内可常见其野生分布，福建民间有采食藤三七嫩叶和茎尖的习惯。
藤三七珠芽可入药，具有补肝肾、壮腰膝、抗疲劳、消肿散痰等功效，主治腰膝痹痛，病后体弱，跌打损伤等作用[2]，且安全无毒[3]。
为进一步研究开发研究藤三七，本文以正交试验优选了藤三七的醇提取工艺。
干燥藤三七药材，由泉州市中医院洪佳妮中药师鉴定为藤三七[Anredera cordifolia (Ten.) Sreenis]珠芽，粉碎为粗粉备用。
齐墩果酸对照品(含量测定用)，批号201206，中国食品药品检定研究院；香草醛、冰醋酸、高氯酸、95%乙醇、甲醇等试剂均为分析纯。
正交试验法优选软脉通瘀颗粒的水提工艺
精密 吸取 淫羊藿 苷对 照品溶 液 （ ０ ． １ ｍ ｇ ／ ｍＬ ）６ 、８ 、１ ０ 、１ ２ 、
１ ４ 、１ ６¨ Ｌ 分别注入 液相色谱仪 ，以峰面积为纵坐标 ，进 样量 为横坐 标绘制标 准曲线 ，回归方程为 ：Ｙ＝ １ ６ ９ １ ２ ｘ． ２ ６ ７ ５ ９ ，ｒ ＝ Ｏ ． ９ ９ ９ 。见 图
２ ． ４ 实验结 果
２ ． ３淫羊藿苷 的含量 测定 ２ ． ３ ． １色谱条件
色谱柱 ：Ｄ ｉ ｋ ｍ ａ Ｄ ｉ ａ ｍｏ ｎ ｓ ｉ ｌ（ Ｒ ）Ｃ １ ８（ ２ ０ ０ × ４ ． ６ ｍ ｍ，５“ ｍ）；
流动 相乙腈一 水 （ ３ ０： ７ ０ ）；流速 ：１ ． ０ ｍＬ ／ ｍｉ ｎ ；柱 温 ：３ ５℃ ；检测 波 长 ：２ ７ ０ ｎ ｍ；压力 ：１ ２ ． ０ ＭＰ ａ ；理 论板数 不低于 １ ５ ０ ０ ；进样量 １ ０
合 理 ，稳 定可行 ，适 合工 业生产 。
【 关键词 】 软脉通 瘀颗 粒 ；正 交试验 ；淫 羊 藿苷 ；水提工 艺
中图分 类号 ：Ｒ ２ ８ ２ ． ７ １ ０ ． ２
文献标 识码 ：Ｂ
文章 编号 ：１ ６ ７ １ — ８ １ ９ ４（ ２ ０ １ ３ ）１ ２ － ０ ４ ６ ６ — ０ ２
２。
２ ． ３ ． ４样 品测定
取按各 试验制备药 液定容 至一 定体积 ，分别精密移 取４ ０ ｍ Ｌ 于蒸 发皿 中，水 浴蒸干 ， 残 渣用甲醇 定容 至２ ５ ｍＬ ，以０ ． ４ ５ ｕ ｒ ｎ 微孔滤膜过 滤 ，得供 试品溶 液。吸取２ ０ Ｌ 注入液相色谱仪 ，每个样品进样２ 次， 测定并计 算淫羊藿昔含量。结果见表２ 。
正交试验优选通窍活血胶囊水提工艺
１ ． Ｌ ｉ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ｔ ｒ ａ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｌ ａ Ｈｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ｌ ，Ｇ ａ ｕ ｎｇ ａ ｘ ｉ Ｌｉ ｕ ｚ ｈ ｏ ｕ ５ ４ ５ ０ ０１， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ； ２ ． Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ Ｃｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ，Ｇｕ ａ ｎ ｇ ｘ ｉ Ｎａ ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ ５ ３ ０ ０ ０１， Ｃ ｈｉ ｎ ａ
正 交试 验优 选 通 窍 活 血 胶 囊 水 提 工 艺
雷晓翠。 安红伟
１ ．广西壮族 自治区柳州市 中医院，广西顿玲露 赵 Nhomakorabea 亮 徐
柳州
榛 王少洲
南宁 ５ ３ ０ ０ ０ １
５ ４ ５ ０ ０ １ ；２ ．广西中医药大学 ，广西
【 摘
要】 目的 ：优选 通窍活血胶囊 的最佳提取工艺 。方法 ：以芍药苷含量 和干膏率为评 价指标 ，利用 正交试验考 察加水量 、提 取
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ：０ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｏ ｐ ｔ ｉ ｍ ｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｆ ｏ ｒ Ｔ ｏ ｎ ｇ ｑ ｉ ａ ｏ ｈ ｕ ｏ ｘ ｕ ｅ Ｃ ａ ｐ ｓ ｕ ｌ ｅ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ Ｔ ｈ ｅ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ
正交法优选厚朴提取工艺
临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical2019 年 第 6 卷第 15 期2019 Vol.6 No.15170·实验研究·正交法优选厚朴提取工艺覃正斌，蔡 燕，彭 强（马应龙药业集团股份有限公司，湖北 武汉 430064）【摘要】目的 研究厚朴提取工艺的影响因素，选出最佳提取工艺。
方法 采用单因素试验设计法，考察各因素对厚朴提取率的影响。
结果 最佳提取工艺：提取时间＞提取次数＞乙醇浓度＞加醇量。
加4倍量50%乙醇，提取2次，每次1.5小时。
结论：采用最佳工艺条件提取厚朴，工艺简单、转移率高，提取条件易于实现工业化。
【关键词】厚朴；乙醇提；正交实验【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2019.15.170.02厚朴是中药方剂中运用最为广泛的一味药材[1]，有健胃消食、下气宽中、燥湿消痰的功效，在茯苓参甘厚朴汤、厚朴煎丸等经典中药方剂中有着广泛运用[2]，现代也将厚朴开发成多种剂型如排气合剂等。
厚朴水提工艺厚朴酚及和厚朴酚转移率一般在5%～10%的水平。
本文根据厚朴中主要成分厚朴酚及和厚朴酚的化学特性，以现代可工业提取工艺为基础探讨厚朴的醇提工艺条件，提取条件易于实现工业化，并且有效提高了厚朴的提取效率。
1 材料与仪器1.1 实验材料厚朴酚及和厚朴酚对照品（中国药品生物制品检定所）；厚朴药材（按药典含量测定含厚朴酚及和厚朴酚百分比为2.35%）；试验使用的试药与试剂都是分析纯。
1.2 实验仪器1260II 型高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；SYP-D 型智能玻璃恒温水浴（巩义市予华仪器有限责任公司）；十万分之一电子天平（德国赛多利斯）。
2 实验方法2.1 正交实验设计由于厚朴在古方中均采用汤剂，故也对厚朴的水煎液进行了测定[3]，测定结果提示其含量很低。
对醇提取工艺条件进行正交筛选试验，筛选条件包括醇浓度、加醇量、提取时间、提取次数，以厚朴酚及和厚朴酚总量、收膏率为测定指标采用HUR （T ）正交试验表。
微生物发酵法生产L-色氨酸的研究进展
微生物发酵法生产L-色氨酸的研究进展闻亚红;刘杰;黄建民【摘要】Referring to the research reports on microbial fermentation production of tryptophan, this article reviews the biosynthetic pathway and metabolicregulationmechanismoftheL-tryptophan,focusesonthecurrentsituationofacidproducingbacteriaselection andfermentationoptimiza-tionofL- tryptophanusingrecombinantDNAtechnology,itmaygivesomehelptothestud yonL- tryptophan.%依据国内外利用微生物发酵法生产L-色氨酸的研究报道，本文系统归纳了L-色氨酸的理化性质、应用及其主要生产方法的研究进展，重点介绍了L-色氨酸高产菌株的选育与发酵优化的研究现状，为工业化生产提供一定依据。
【期刊名称】《科技风》【年(卷),期】2014(000)002【总页数】2页(P10-11)【关键词】L- 色氨酸;微生物发酵法;工业化;最新进展【作者】闻亚红;刘杰;黄建民【作者单位】江苏江山制药有限公司，江苏靖江214500;江苏江山制药有限公司，江苏靖江 214500;江苏江山制药有限公司，江苏靖江 214500【正文语种】中文1 色氨酸的理化性质色氨酸又名氨基吲哚丙酸，分子式：C11H12N2O2，分子量：204.23，为白色或微黄色的叶片状结晶或粉末，无臭或微臭。
有L-型（左旋）、D-型（右旋）和DL-型（消旋）三种旋光异构体，其中L-型稍有苦味、DL-型和D-型味稍甜，能被人类和动物吸收利用的只有L-型。
在水中微溶，溶解度为1.14g（25℃），可溶于热吡啶、稀酸或稀碱，微溶于乙醇；若长时间光照则着色，迅速加热至210℃时发黄，289℃分解；与水共热时可产生少量吲哚，如与氢氧化钠、硫酸铜共存时加热，可产生大量吲哚；与酸在暗处加热较稳定，与其他氨基酸、糖类、醛类共存时极易分解。
正交试验法优选槐花米中芸香苷的水提取工艺条件(原稿)
正交试验法优选槐花米中芸香苷的水提取工艺条件楚雄医药高等专科学校张勇675005摘要采用0.4%硼砂水溶液及石灰水溶液为溶剂，槐花米为原料，以水为提取溶剂，煎煮法为提取工艺，采用L18（37）正交试验法方案，以芸香苷的提取收得率为评价指标，考察药材的粉碎度、提取溶液的pH值、水溶液的用量、提取次数、提取时间、酸沉淀（时）的pH值、结晶的时间等因素，对芸香苷提取（收得率的影响）进行优选，筛选出最佳的提取条件，为优化槐花米中芸香苷的提取工艺提供参考依据。
关键词槐花米芸香苷碱溶酸沉淀法正交试验法槐花米为临床常用中药，属豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾。
其主要有效成分为芸香苷，又名芦丁（Rutin），其化学结构为5,7,3´,4´, -4OH-3-芸香糖黄酮。
药理研究表明芸香苷有维生素P样作用，能降低血管通透性，可使因脆性增加而出血的毛细血管恢复弹性，对心血管系统疾病有很好的预防和治疗作用[1]，临床上用作毛细血管性止血药，并用于高血压的辅助治疗。
芸香苷有清肝泻火的功效[2]，用于治疗肝热目赤、头痛眩晕、痔疮、子宫出血、鼻出血等疾病。
此外还有抗炎、解痉的作用[3]。
芸香苷广泛存在于植物中，在槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中，以槐花米中的的含量较高，可达12～20%[4]。
OHOO glu OHOHO rha芦丁以槐米为原料提取芸香苷的工艺有多种，如水提取法、碱溶酸沉淀法、乙醇提取法等，其中碱溶酸沉淀法以操作简单、经济、安全等特点而较为常用。
但在提取时芸香苷的收得率受药材的粉碎度、溶液的pH值、提取溶剂用量、提取次数、提取时间、酸沉淀时的pH值、结晶的时间等因素的影响而有差异。
《中药化学》[5]采用三种方法进行提取，第一种是以沸水煎煮5～10分钟提取2次，直接放冷结晶；第二种是以pH8.5的左右的石灰水煎煮10分钟提取，在pH2～3的HCl 水溶液中结晶；第三种是以10倍量0.4%硼砂水溶液加入药材后用石灰乳调pH8～9后煎煮30分钟提取2次，在pH2～3的HCl水溶液中结晶的方法进行提取。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
③波长选择 取黄芩苷对照品适量,用流动相配制成合适浓度的溶液,在200～400nm紫外光区内扫描。黄芩苷有3个最大吸收峰:214,277,314nm。其中214nm处吸收最大,灵敏度最高,但内标物对硝基苯甲酸在该波长下吸收较小且214nm处杂质干扰多,为保证待测物质与内标物具有足够灵敏度并减少干扰,选取274nm作为测定波长。参考文献:〔1〕 曹于平,皋聪,孙继红,等.黄连解毒汤提取物的药理作用研究[J].中国药科大学学报,1996,27(10):605.〔2〕 于留荣,李吉来.黄芩炮制饮片质量标准的研究[J].中药材,1989,12(4):25.(收稿日期:2005-06-26)正交试验法优选5-羟基色氨酸的提取工艺许 慧,李多伟,任 静,孙诗清(西北大学生命科学学院,陕西西安710068)摘要:目的 研究5-羟基色氨酸的最佳生产工艺。方法 以5-羟基色氨酸含量为指标,采用正交试验方法考察提取时间,提取次数,料液比,提取温度诸因素对5-羟基色氨酸提取量的影响。结果 5-羟基色氨酸的最佳提取工艺为A2B3C2D2。结论 在80℃下,恒温提取2次,每次3h,按1ν15的料液比,确定为5-羟基色氨酸的最佳生产工艺条件。关键词:5-羟基色氨酸;提取方法;正交试验;高效液相色谱法中图分类号:R284.2 文献标识码:A文章编号:100422407(2006)0220061203 5-羟基色氨酸是由人体必需氨基酸色氨酸在体内被色氨酸羟化酶催化而成的,是一类重要的神经类药物。目前市场上的褪黑素、脑黄金等都是由5-羟基色氨酸转化而来的〔1〕。5-羟基色氨酸作为一种药物与卡比多巴和盐酸氟西汀在临床上治疗缺氧型肌阵挛取得较好的疗效〔2〕。它也有一定的抗抑郁作用,可以刺激继地塞米松之后的β-内啡肽的水平〔3〕。5-羟基色氨酸含量的变化与PCT患者的神经症状的缺失有很大关系〔4〕。最近,在动物药理实验中发现,5-羟基色氨酸可以引起雄兔射精潜伏期的延长,提高性兴奋水平〔5〕。对口服给药的小鼠脑中单胺能区的免疫产生影响〔6〕。同时,5-羟基色氨酸对剥夺快动眼睡眠时相或是5-羟基色氨酸减少引起的回避反应的增强有一定的抑制作用〔7〕。它也可以增加血浆中促肾上腺皮质激素和可的松的水平〔8〕。在食物吸收方面,对处于禁食和高压状态条件下的小鼠有一定的抑制作用〔9〕。近年来,5-羟基色氨酸的生产得到了迅速的发展,在国外医药行业的应用中日益广泛,为此,我们对非洲东部产的加纳籽粉采用正交试验,优化5-羟基色氨酸的生产工艺,以提高其生产率,为工业化生产提供重要依据。1 仪器与试药1.1 仪器 高效液相分析系统(Waters1525BinaryHPLCPump,Waters2487DualλAbsorbanceDetector,DellCompu);旋转蒸发器(R201);恒温水浴锅(W201B);真空泵(SHZ-95);超声波清洗机
(AS3120);真空干燥箱(101A-2);粉碎机;热回流
装置;电子天平(FA1004);高速离心机(LD5-10)。1.2 试药 5-羟基色氨酸标准品(sigma公司);加纳籽粉来源于豆科植物Griffoniasimplicifolia的干燥成熟种子提取5-羟基色氨酸后的浸膏粉(陕西嘉禾药业公司提供);甲醇为色谱纯。2 方法与结果2.1 提取方法比较试验的选择 水热回流提取法:取加纳籽粉末5.00g用50mL蒸馏水80
o
C热回流
提取2h,过滤,收集滤液并用水定容至50mL。醇热回流提取法:取加纳籽粉末5.00g用50mL
50%乙醇溶液80oC热回流提取2h,过滤,收集滤液,并用50%乙醇溶液定容至50mL。超声波水提取法:取加纳籽粉末5.00g,用50
mL蒸馏水超声波提取30min,过滤,收集滤液,并用水定容至50mL。2.2 色谱条件 SymmetryC18(5μm,4.6mm×150mm)色谱柱,流动相甲醇∶水(5∶95),流速1.0mL・min-1,检测波长276nm,进样量10μL,灵敏度0.01AUFS,柱温室温。2.3 标准曲线的制备 精密称取5-羟基色氨酸对照品10.0mg,置10mL量瓶中,加50%乙醇溶解并用50%
乙醇定容至刻度,摇匀,制成1.0g・L-1对照品溶液。稀释,使5-羟基色氨酸对照品浓度分别为0.8,0.6,0.4
和0.2g・L
-1
,按色谱条件进行测定,结果5-羟基色氨
酸峰面积(Y)与其量(X,μg)在2.0～10.0μg范围内有良好的线性关系。回归方程为:
Y=235116.78035+9.72275E6×X,r=0.999152.4 提取温度的影响 在料液比为1∶10,提取时间为2h,提取次数为3次的条件下研究了温度(50,
70,80,90oC)对5-羟基色氨酸得率(8.26%,9.89%,10.14%,10.20%)的影响。结果表明,随着提取温度的增加,5-羟基色氨酸的量在增加,但在
16西北药学杂志 2006年4月 第21卷 第2期© 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net80℃以后,提取率增加的幅度减小。2.5 提取时间的影响 在料液比为1∶10,提取温度为80℃,提取次数为3次的条件下研究了提取时间(1,2,3,4h)对5-羟基色氨酸得率(9.15%,
10.28%,10.57%,10.82%)的影响。结果表明,随着提取时间的延长,5-羟基色氨酸的量在增加,但在2
h以后,提取率增加的幅度减小。2.6 提取次数的影响 在料液比为1∶10,提取时间为2h,提取温度为80℃的条件下研究了提取次数(1,2,3,4次)对5-羟基色氨酸得率(8.94%,
10.46%,10.87%,10.94%)的影响。结果表明,随着提取次数的增加,5-羟基色氨酸的量在增加,但在2
次以后,提取率增加的幅度减小。2.7 料液比的影响 在提取温度为80℃,提取时间为2h,提取次数为3次的条件下研究了料液比(1∶10,1∶15,1∶20,1∶25)对5-羟基色氨酸得率(9.11%,10.56%,10.63%,10.80%)的影响。结果
表明,随着料液比的增加,5-羟基色氨酸的量在增加,但在料液比为1∶15以后,增加的幅度减小。2.8 正交试验结果 在讨论了各单因素影响的基础上,为探讨各工艺参数相互交叉影响,试验设计了四因素三水平正交试验,结果分别见表1,表2,表3。精确称取加纳籽粉末5.0g,按下列因素及不同水平进行正交提取实验。表1 因素水平表
因素水平123A提取温度/℃708090B提取时间/h123C提取次数/次123D料液比1∶101∶151∶20
表2 正交实验结果序号提取温度提取时间提取次数料液比5-羟基色氨酸含量(%)111118.05212229.52313339.644212310.07522319.766231210.357313210.29832139.629332110.93Ⅰj0.27210.28410.28020.2874
IIj0.30180.2890.30520.3016IIIj0.30840.30920.29690.2933G=0.8823Ij/30.09070.09470.09340.0958CT=0.086495IIj/30.10060.0963330.1017330.100533IIIj/30.10280.1030670.0989670.097767R0.2602320.2598380.2598090.259586R/30.0867440.0866130.0866030.086529Sj0.0002490.0001180.0001083.39E-05
R=Ij
2+Ⅱj2+IIIj2
将在不同水平下提取出的样品液抽滤后定容于250mL量瓶中,通过HPLC分析检测系统分别检测出不同水平下的5-羟基色氨酸含量,结果见表2。表3 方差分析方差来源偏差平方和自由度均差F比显著性A0.00024920.0001257.34702299133
B0.00011825.9E-053.47828653C0.00010825.4E-053.1858911383D3.39E-0521.7E-051e3.39E-0521.7E-051
33P<0.01,3P<0.05
通过正交试验可知各因素对提取效果的影响程度依次为A>B>C>D,因素A对实验的效果很显著(P<0.01),因素B和C对实验结果影响显著(P<
0.05),而实验D对实验结果影响不显著,可任意选取一个水平。因此,最优提取工艺条件可选取方案A2B3C2D2
3 小结
①水热回流提取法、醇热回流提取法、超声波水提取法都可以用于5-羟基色氨酸的提取,水热回流提取法略高于其他两种方法。②通过正交试验确定5-羟基色氨酸最佳提取工艺为:用水80
o
C热回流提取2次,每次提取3h,料
液比为1∶15。参考文献:
〔1〕 薛启冥.神经系统的生理和药理化学[M].第2版.北京:科学出版社,1992.210～211.
〔2〕 郭秀海,丁生元,刘军,等.5-羟色氨酸治疗缺氧后肌阵挛1例报告[J].临床神经病学杂志,2002,15(5):
313.〔3〕 Michaelmaes,AnnVanGastel,RakeshRanjanetal.
StimulatoryEffectsof1-5-HydroxytryphophanonPost2dexamethasoneβ-EndorphinlevelsinMajorDepression[J].Neuropsychopharmacology,1996,15(4):340～348.〔4〕 ElenaB.C.Liambias,CarmenAldonatti,LeonorC.San
Martindeviale.Tryptophanmetabolismviaserotonininratswithhexachlorobenzeneexperimentalporphyria[J].Biochemicalpharmacology,2003,66(1):35～42.〔5〕 SvenAhlenius.KnutLarsson.Evidenceforaninvolvement
of5-HT11Breceptorsintheinhibitionofmaleratejacula2torybehaviorproducedby5-HTP[J].Psychopharmacolo
2
gy,1998,137:374～382.〔6〕 ChristinaP.Lynn-Bullock,KristyWelshhans,SarahL.