血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳[原理]蛋白质由氨基酸组成，是一种两性电解质，在一定pH条件下可带电荷，带电荷的蛋白质在电场中可发生泳动，这种现象叫电泳。
各种蛋白质都有一定的等电点，在等电点时它呈电中性，在电场中既不向阳极也不向阴极移动。
血清蛋白质的等电点一般低于7.3，在pH高于它们等电点的缓冲液中带负电荷，在电场中向阳极移动。
由于各种蛋白质分子大小和所带的电荷量不同，在电场中泳动的速度也不相同，蛋白质分子小，带电荷多者泳动速度较快，反之较慢。
因此，利用醋酸纤维素薄膜为支持物可将血清蛋白质分为清蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白。
经染色后，则成有色区带，各区带的宽窄及色带深浅表示各种蛋白质含量的多少（图12），可用比色法分别测出各种蛋白质的百分含量（表13）。
醋酸纤维素薄膜电泳由于具有对样品没有吸附现象、电泳时各区带分界清楚、拖尾现象不明显、样品用量少和电泳时间短等优点，已被广泛应用于临床诊断。
临床上常用此法测定血清蛋白质各组分的百分含量，以协助诊断肝脏、肾脏等疾病。
表13 正常人血清蛋白质各组分理化性质血清蛋白组分 pI 分子量迁移率(⨯10-5) 百分含量(万) cm/s/伏 (%)清蛋白 4.6～4.7 6.9 5.9 57～72 α1-球蛋白 5.06 20 5.1 2～5α2-球蛋白 5.06 30 4.1 4～9 β-球蛋白 5.12 9～15 2.8 6.2～12γ-球蛋白 6.85～7.3 15.6～30 1.0 12～20[试剂]1．巴比妥缓冲液(pH8.6, 离子强度0.06) 巴比妥钠12.76g，巴比妥1.66g,置于盛有200ml蒸馏水的烧杯中稍加热溶解后, 移至1000ml容量瓶中, 加蒸馏水稀释至刻度。
2．染色液氨基黑10B 0.5g, 加甲醇50ml, 冰醋酸10ml, 蒸馏水40ml, 溶后备用。
3．漂洗液甲醇或乙醇45ml，加冰醋酸5ml, 蒸馏水50ml，混匀备用。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳加样方式
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳加样方式血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳加样方式，听起来好像很高大上的样子，其实就是一种实验室里用来检测蛋白质含量的方法。
今天，我就来给大家讲讲这个神奇的过程，希望能够让大家对它有更深入的了解。
我们要准备一些东西。
比如说，我们需要一些血清样品，还有一些醋酸纤维素薄膜。
这些材料看起来可能很普通，但是它们在实验中扮演着非常重要的角色。
血清样品就是我们要检测的血液中的成分，而醋酸纤维素薄膜则是一种非常薄的、透明的膜片，可以帮助我们观察到血清样品中的蛋白质分布情况。
接下来，我们就要开始实验了。
我们需要把血清样品加入到一个容器里面，然后用超声波震荡器把它搅拌均匀。
这样做的目的是让血清样品中的蛋白质充分溶解在水中，这样我们才能更好地观察到它们的分布情况。
接着，我们要把搅拌好的血清样品涂到醋酸纤维素薄膜上面。
这时候，我们要用一种叫做“转印”的方法把血清样品转移到薄膜上面。
具体来说，就是用一个旋转的平台把血清样品涂到薄膜上，然后让它自然干燥。
等到血清样品完全干燥之后，我们就可以开始观察它的分布情况了。
在这个过程中，我们需要注意一些细节问题。
比如说，我们要确保血清样品和醋酸纤维素薄膜的比例是正确的，否则就可能会影响到实验结果。
我们还要注意实验环境的温度和湿度，因为这些因素也可能会对实验结果产生影响。
我们需要把观察到的结果记录下来。
这些结果可以帮助我们了解血清样品中各种蛋白质的含量和分布情况，从而为后续的研究提供重要的参考依据。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳加样方式虽然看起来有点复杂，但是只要我们掌握了正确的方法和技巧，就可以轻松地完成实验并得到准确的结果。
希望大家通过今天的介绍能够对这个过程有更深入的了解！。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳实验报告一、实验目的1.1.学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法；1.2.了解电泳技术的一般原理；1.3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。
二、实验原理2.1.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。
它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。
由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。
因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。
2.2.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白质的百分数。
三、材料与方法：3.1.实验材料：3.1.1.实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥-巴比妥钠缓冲液（pH8.6，离子强度0.06mol/L）；③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：0.4mol/NaOH溶液。
3.1.2.实验器材：①V-1100分光光度计（×1）；②恒温水浴箱（×1）；③试管（×6）、试管架（×1）；④1000μL 加样枪（×1）、加样枪架（×1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）；⑥培养皿（×5）；⑦点样器或载玻片（×1）；⑧平头镊子（×2）；⑨剪刀（×1）；⑩电泳槽（×1）；⑪直流稳压电泳仪（×1）四、结果与讨论条 4.1.结果分析本次实验得到的图谱只能够清晰的看出清蛋白和γ－球蛋白的区带，其余无法区别。
原因可能如下：①醋酸纤维薄膜质量不足。
②薄膜过湿，样品扩散迅速，导致样品分离不成区带。
③点样太少，区带显色不明显。
④电泳时间不足。
⑤薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足。
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清醋酸纤维素薄膜电泳一、目的要求1.掌握醋酸纤维素薄膜电泳的基本原理及操作过程。
2.了解猪血清蛋白质的各种成分。
3.熟悉猪血清中各种蛋白质相对含量的测定原理和方法。
4.熟悉分光光度计的工作原理及使用方法。
二、实验原理1.电泳的基本原理电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。
许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移动。
电泳技术就是利用在电场的作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、形状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯的技术。
电泳过程必须在一种支持介质中进行。
自由界面电泳没有固定支持介质，所以扩散和对流都比较强，影响分离效果。
于是出现了固定支持介质的电泳，样品在固定的介质中进行电泳过程，减少了扩散和对流等干扰作用。
最初的支持介质是滤纸和醋酸纤维素膜。
由于pH值的改变会引起带电分子电荷的改变，进而影响其电泳迁移的速度，所以电泳过程应在适当的缓冲液中进行，缓冲液可以保持待分离物的带电性质的稳定。
2.醋酸纤维素薄膜醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜,待溶剂蒸发后则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小。
本实验采用醋酸纤维素薄膜作为介质。
3.蛋白质蛋白质是由氨基酸组成的，其分子中除两端的游离氨基和羧基外，侧链中尚有一些解离基，作为带电颗粒它可以在电场中移动，移动方向取决于蛋白质分子所带的电荷。
蛋白质颗粒在溶液中所带的电荷，既取决于其分子组成中碱性和酸性氨基酸的含量，又受所处溶液的pH影响。
当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质游离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验报告结果
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验报告结果1. 实验背景说起血清蛋白，大家可能觉得这听起来像是医生的专业术语，其实它和我们的日常生活有着密切的关系。
血清蛋白就像是我们身体里的“搬运工”，负责运输各种营养物质、激素和废物。
想象一下，它们就像是一个个小快递员，在血液这条大街上忙忙碌碌，辛勤工作，保持我们的身体正常运转。
哎，真是个不容易的职业！为了更好地了解血清蛋白，我们常常用到醋酸纤维薄膜电泳这项技术。
虽然听起来复杂，但其实就是把血清蛋白“分门别类”，让它们各自展现自己的风采。
2. 实验过程2.1 准备工作实验开始前，咱们得先准备好材料。
这可不是随便拉拉家里的东西就能搞定的。
我们需要高质量的血清样本，还有醋酸纤维膜、缓冲液等等，听起来就像是在准备一场盛大的宴会。
每一个小细节都不能马虎，毕竟“千里之行，始于足下”。
做好准备，咱们就可以开始了。
2.2 实验步骤先把血清样本滴在醋酸纤维膜上，嘿，就像给它们来个小小的“泡泡浴”。
然后，我们把膜放进电泳槽，电流一打开，哇！就像给这场聚会打上了光速，血清蛋白们开始“分开舞动”，每种蛋白根据大小和电荷的不同，表现出不同的迁移速度，简直是一场精彩的“舞蹈比赛”。
最后，咱们用染料将它们染色，瞬间，整个膜上就像开满了五彩缤纷的花朵，各种颜色交织在一起，真是美丽得让人心醉！3. 实验结果3.1 观察到的现象看着膜上那些不同颜色的条带，心里不禁感慨万千。
这些条带就像是一幅复杂的画卷，每一条都代表着一种不同的血清蛋白，真是让人忍不住想一探究竟。
我们能够清楚地看到每种蛋白的相对浓度，甚至还可以发现一些隐藏的“明星蛋白”。
这些小家伙可是咱们健康的重要守护者，它们的数量和状态直接影响着我们的身体。
3.2 数据分析接下来就是分析数据了。
通过定量分析，我们可以得出不同蛋白的浓度比。
这就像是在选拔赛中，评委们仔细打分，谁是冠军，谁又是陪跑的，都一目了然。
根据不同的情况，比如炎症、营养不良等，咱们也能从这些数据中找到线索。
血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
如果在电泳结果中发现异常的蛋 白质条带，可能表明存在某些疾 病或生理异常。
结果与讨论
醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的 血清蛋白分离方法，具有操作简
便、分离效果好等优点。
通过电泳实验，可以了解血清蛋 白的组成和相对含量，为临床诊 断和生理研究提供有价值的信息。
在实验过程中，需要注意控制实 验条件，如电泳缓冲液的成分、 电场强度、温度等，以确保实验
整理实验器材，归类存放，保 持实验室整洁。
记录实验数据和结果，及时分 析并得出结论。
对实验废弃物进行妥善处理， 遵守实验室安全规定。
谢谢
THANKS
该方法对于低浓度血清蛋白的检测灵敏度较低， 可能会影响结果的准确性。
主观性较强
电泳结果的判定和解释需要一定的专业知识和经 验，主观性较强。
对样品要求较高
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳要求样品具有较高的 纯度和稳定性，对于复杂样品可能存在干扰。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的应用
临床诊断
醋酸纤维薄膜电泳在临床诊断中常用 于检测血清蛋白的异常表达，对于肝 、肾等器官疾病的诊断具有一定的参 考价值。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的优点
01
02
03
高分辨率
醋酸纤维薄膜电泳能够将 血清蛋白分离成清晰、易 于辨认的条带，具有较高 的分辨率。
快速简便
该方法操作简便，分离速 度快，适合于大量样品的 快速检测。
成本低廉
醋酸纤维薄膜价格低廉， 可重复使用，降低了实验 成本。
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的局限性
灵敏度较低
生物研究
在生物研究领域，血清蛋白醋酸纤维 薄膜电泳可用于蛋白质组学和生物标 志物的研究，有助于深入了解生物体 的生理和病理过程。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常用的蛋白质分析技术，用于分离和鉴定血清中的蛋白质。
该技术基于蛋白质在醋酸纤维素薄膜中的电泳迁移率不同，通过电泳移动距离的差异来区分不同的蛋白质。
在实验中，首先将血清样品加入醋酸纤维素薄膜上，然后通过电泳使蛋白质在薄膜上迁移。
在电泳过程中，蛋白质会根据电荷性质和分子大小而发生迁移。
随着电泳时间的增加，蛋白质会在薄膜上形成不同的带状图案。
最后，对薄膜进行染色或银染等处理，可以观察到蛋白质带的数量和位置，从而识别和定量不同的蛋白质。
讨论血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果时，需要注意样品的质量和纯度对实验结果的影响。
同时，对蛋白质带的数量和位置进行定量分析时，需要使用专业的图像分析软件。
此外，该技术也可以与其他蛋白质分析技术如质谱联用，提高分析的准确性和灵敏度。
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法
醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法一、原理醋酸纤维薄膜电泳是用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法。
带电颗粒在电场力作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。
由于各种蛋白质都有特定的等电点，如将蛋白质置于pH值低于其等电点的溶液中，则蛋白质将带正电荷而向负极移动。
反之，则向正极移动。
因为蛋白质分子在电场中移动的速度与其带电量、分子的形状及大小有关，所以，可用电泳法将不同的蛋白质分离开来。
血清中含有多种蛋白质，它们的等电点都在pH 7.5以下。
将血清放于pH 8.6的缓冲液电泳时，所有的血清蛋白都带有负电荷，在电场中将向正极移动。
由于各种血清蛋白在相同pH时所带电荷数量不等，分子颗粒大小不一，因而泳动速度不同，经电泳被分离开来。
血清蛋白质的等电点和分子量见下表。
本实验以醋酸纤维素薄膜（简称CAM）为支持物分离血清中的不同蛋白质。
它是一种良好的呈均一泡沫状疏松薄膜，厚约120μm具有一定的吸水性。
二、实验材料、仪器及试剂1．材料：健康人血清或鸡血清2．仪器：电泳仪电泳槽3．试剂：（1）醋酸纤维素薄膜；（2）pH8.6 巴比妥缓冲液（离子强度0.06～0.07）：取巴比妥0.83克，巴比妥钠6.38克，加蒸馏水加热溶解后，定容至500ml。
（3）染色液：取氨基黑10 B 0.5克，溶于50ml甲醇中，再加冰醋酸10ml，蒸馏水40ml混匀。
（4）漂洗液：95%乙醇4.5ml，冰醋酸 5ml，蒸馏水50ml混合。
（5）透明液：95%乙醇80ml，冰醋酸20ml混合。
三、实验方法1．准备薄膜：将切割整齐的2.5×6cm的薄膜条，浸入巴比妥缓冲液中浸透后，取出，用吸水纸吸去多余缓冲液。
2．点样：仔细辩认薄膜的粗糙面与光滑面，在粗糙面距离薄膜一端1.5cm处，用铅笔轻轻划一条直线。
用玻棒蘸上血清样品，涂于盖玻片边缘处（边缘长度应比膜条宽度窄），将此边缘按压在直线上。
注意：样品应点在薄膜的粗糙面一侧。
实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(共享)
实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(共享)一、实验目的本实验旨在掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作的技能，通过血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳分析，了解蛋白质电泳分析中常用的方法和技术，并且能够初步理解血清蛋白质电泳图谱的含义和影响因素。
二、实验原理1. 蛋白质分离原理蛋白质分离是利用蛋白质之间在电场中的运动迁移率的不同分离的。
蛋白质在电场中的运动迁移率取决于蛋白质分子的大小、形状、电荷性质等的不同。
2. 醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种以醋酸纤维素膜为电泳区间的蛋白质电泳方法。
其原理为，蛋白质在正常向电场中发生运动，随着蛋白质运动迁移，逐渐进入膜孔中，受到膜孔的限制，蛋白质停止迁移。
大分子的蛋白质分子无法进入膜孔，小分子的蛋白质可以进入膜孔，分子大小的差异导致了蛋白质的分离。
醋酸纤维素膜孔的大小通常小于3纳米，蛋白质要进入膜孔需要满足一定的条件，如形状、电荷、大小等，因此通过醋酸纤维素膜孔的筛选效果，可以将蛋白质分离出不同性质和大小的蛋白质组分。
三、实验步骤1. 操作前准备：① 气泡清除：取适量蒸馏水，通入空气，将水搅动形成气泡，并将其排出，重复多次，以去除气泡。
② 涂膜：取新的醋酸纤维素膜，利用毛刷刷上适量真空脱泡机中的真空润湿液，边刷边使薄膜平铺，直至全部涂膜结束。
2. 样品制备① 取0.5 mL 的实验样品，放入1.5 mL 的离心管中，室温下放置5 min，使蛋白质沉淀和分散。
② 在超净工作台或洁净室内操作，将样品香磨匀，取样板，向上转移液体吸头轻轻吸取一下，将液体加入样品槽中。
3. 电泳操作① 将准备好的醋酸纤维素膜，贴在电泳仪的隔板上，并将隔板安装在电泳槽内。
② 将电泳槽中的电泳缓冲液（TGE）加热并耗尽气泡之后，轻轻将样品槽放入电泳槽中，注意不能与电泳膜接触，最后慢慢加入样品针头的样品。
③ 大致运行5-10min 后，可观察到样品在膜上积累。
④ 电泳完成后，将电泳槽内的醋酸纤维素膜取出，将其在甲醇以及蒸馏水中洗涤3次，最后在蒸馏水中洗涤一次。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳（serum protein acetic acid
fiber membrane electrophoresis, SPAFME）是一种常用的分离和定
量检测血清中蛋白质的方法。
该技术的原理是将血清样品在pH8.6的缓冲液中加热变性，然后
在电泳板上涂覆一层纤维薄膜，将变性的蛋白质在电场作用下在薄膜
上进行分离，再用染料染色进行检测。
不同的蛋白质在电场作用下具
有不同的迁移速率和电荷，因此可以在薄膜上清晰地分离出多种蛋白
质成分，如白蛋白、球蛋白、β-球蛋白等。
血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳是一种较为简单、快速、灵敏的检
测方法，可以用于检测肝病、血液病、肾病等疾病。
在临床医学中有
着广泛的应用价值，特别是对于肝脏疾病的筛查和诊断具有重要意义。
不过，在进行血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳的过程中需要严格控
制各个环节，如加热时间、电泳时间、染色时间等，否则可能会产生
偏差或错误的结果。
因此，操作时需要具有一定的技术水平和操作经验。
总的来说，血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳是一种在临床医学中经
常使用的检测方法，可以较为准确地定量分析血清样品中的蛋白质成分，对许多疾病检测和诊断有着重要的意义。
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血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
一、实验目的
1．掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2．定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、原理
采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素，是
纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状
的结构，有强渗透性，厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、
结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前，醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
三、操作方法
一、仪器和薄膜的准备
1．醋酸纤维素薄膜的润湿的选择：将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内，使它漂浮在液面。
若迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则表明薄膜质地均匀；若润湿时，薄膜上出
现深浅不一的条纹或斑点等，则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为，纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如，膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各
区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
将选用的薄膜用镊子轻压，使它全部浸入缓冲液内，待膜完全浸透（约半小时）后取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时分辨出光泽面和无光泽面。
2．制作“滤纸桥”：剪裁尽寸合适的滤纸条。
取双层附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。
然后，用缓冲液将滤纸全部润湿并
驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为“滤纸桥”。
按照同样的方法，在另一个电泳槽的
支架上制作相同的“滤纸桥”。
二、点样
在薄膜无光泽的一面点样。
点样区距负极端1.5㎝处。
点样时，先用血色素吸管将
2～3微升的血清均匀地涂在点样器表面，再用点样器“印”在薄膜的点样区内（见图4－1）。
注意。
应使血清均匀分布在点样区，形成具有一定宽度、精细匀称的直线，切不可用力过大把薄膜弄破。
事先可在滤纸上练习点样，掌握点样技术，这是获得具有清晰区带的
电泳图谱的重要环节之
三、电泳
将已点样的
薄膜使无光
泽面向下贴在电泳槽支架的“滤纸桥”上，参照图4－2。
平衡10min，仔细检查电泳装置的线路是否正确，然后,通电。
打开电源开头，调节电压和电流强度，先旋动仪器粗调旋钮，再旋动细调旋钮。
调节到薄膜每厘米宽的电流强度为0.3mA，通电10～15min后，再将电压和电流强度提高到薄膜每厘米长度电压为10V左右，薄膜每厘米宽的电流强度为0.4～0.6mA。
在电泳过程中，应注意控制电压和电流强度，防止过高或偏低。
待电泳区带展开约3.5㎝时，则并闭电源，一般通电时间为60min左右①。
电泳时间的长短，应以获得血清各组分的最佳分离效果为标准。
因为，使用不同型号电泳仪进行实验，有时所需电泳时间差异较大。
另外，电泳时产生大量的热，为了获得重复性强、区带清晰的电泳图谱，应使用冷却装置降温。
在炎热的夏季，更为必要。
四、染色
电泳完毕立即取出薄膜，直接浸入染色液中，染色5min。
然后，用漂洗液浸洗，每隔10min左右换一次漂洗液，连续更换三次，可使背景颜色脱去。
将膜夹在干净的滤纸中，吸去多余的溶液。
操作中，要注意控制染色和漂洗的时间，防止背景过深或某些区带太浅。
五、结果判断
一般的染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。
从正极端起，依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。
六、透明
将染色后漂洗干净的薄膜用吹风机吹干，再浸入透明液的甲液中，浸泡2min 后立即浸入透明液的乙液中，浸泡1min（要准确），然后迅速取出薄膜，将它紧贴在玻璃板上，不要存留气泡。
大约2～3min内的薄膜完全透明，放置10～
15min后，用吹风机将膜吹干。
在水笼头下将玻璃板上透明的薄膜润湿后，用单
面刀片从膜的一角撬起，并划开一端，再用手捏住撬起的膜轻轻撕下，可以容易地从玻璃板上取下透明的薄膜。
用滤纸吸干，浸入液体石腊中，约３min后取出。
再用干净的滤纸吸干，压平，则成为色泽鲜艳而又透明的血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳图谱，可长期保存不褪色。
未经透明处理的血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱可直接用于定量测定。
一般采用洗脱法或光密度计法，测定各蛋白质组分的相对百分含量。
１．洗脱法：将电泳图谱的各区带剪下，分别浸入盛有0.4mol 氢氧化钠溶液的试管中，
清蛋白管加入4ml ，其余每管各加２ml ，摇匀，放入37℃恒温水浴上浸提30min ，每隔10min ，充分摇动一次，以便将色泽完全洗脱下来。
该溶液颜色较稳定，在室温下24小时内颜色强度无显著变化。
然后在620nm 波长处比色，测定各管的光密度值为O.D A 、O.D α1、O.D α２、O.D β、O.D γ。
按下列方法计算血清各部分蛋白质所占百分率。
（１）先计算光密度值总和（简写为Ｔ）： Ｔ＝２×O.D A ＋O.D α1＋O.D α２＋O.D β＋O.D γ
（２）再计算血清各部分蛋白质所占百分率（即相对百分含量）：
α1球蛋白％=
O.D α1
×100
γ球蛋白％
=
O.D γ ×100
T T
α2球蛋白％=
O.D α2
×100
T
正常值：清蛋白54.0～73.0；α１球蛋白2.8～5.1% ；α2球蛋白6.3～0.6%；β球蛋白5.2～1.0%；γ球蛋白12.5～0.0%。
２．光密度计法：将干燥的血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱放入自动扫描光密度仪（或色谱扫描仪）内，通过反射（使用未透明的薄膜时）或透射（用已透明的薄膜时）方式，在记录器上自动绘出血清蛋白质各组分曲线图，横坐标为膜的长度，纵坐标为光密度（或光强度），每一个峰代表一种蛋白质组分。
然后，用求积仪测量出各峰的面积，计算每个峰的面积与它们总面积的百分比就代表血清中各种蛋白质组分的百分含量。
或将曲线图上各峰沿曲线剪下，称量各峰的重量，计算每个峰的重量与它们总重量的查分比也可以代表血清中各种蛋白质组分的百分含量。
在使用具有电子计算机附件的自动扫描光密度仪时，可以由显示部分或打字带上获得血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱上每条区带所代表的蛋白质组分的含量
清蛋白％=
２×O.D A
×100
β球蛋白％=
O.D β
×100
Ｔ T
（一）试剂
（1）新鲜血清——无溶血现象。
（2）巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06)：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1 000ml。
（3）染色液①：称取氨基黑10B 0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
（4）漂洗液①：取95％乙醇45ml，冰乙酸５ml和蒸馏水50ml。
混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
[易挥发、密封]
（5）透明液①[易挥发、密封]
甲液—取冰乙酸15ml和无水乙醇85ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
乙液—取冰乙酸25ml和无水乙醇75ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
（6）液体石腊。
（7）0.4mol氢氧化钠溶液：称取16g氢氧化钠（分析纯）用少量蒸馏水溶解后定容到1000ml。
（二）器材
（1）醋酸纤维素薄膜—2㎝×8㎝（浙江黄岩曙光化工厂等处生产）
（2）培养皿（直径9～10㎝）（3）血色素吸管或点样器
（4）直尺和铅笔（5）镊子
（6）电泳仪和电泳槽（7）万用电表
（8）玻璃板（8㎝×12㎝）（9）普通滤纸
（10）试管和试管架（11）吹风机
（12）单面刀片（13）擦镜纸
（14）吸量管（2ml、5ml）和吸量管架（15）722型分光光度计
思考题
指出醋酸纤维素薄膜用作电泳的支持物有何优缺点。