醋酸纤维素薄膜电泳原理
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1. 掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2. 定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
二、原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法, 叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素, 是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂（如: 丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后, 涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构, 有强渗透性, 厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前, 醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
三、操作方法一、仪器和薄膜的准备1. 醋酸纤维素薄膜的润湿的选择: 将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内, 使它漂浮在液面。
若迅速润湿, 整条薄膜色泽深浅一致, 则表明薄膜质地均匀；若润湿时, 薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等, 则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为, 纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如, 膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
将选用的薄膜用镊子轻压, 使它全部浸入缓冲液内, 待膜完全浸透（约半小时）后取出, 夹在清洁的滤纸中间, 轻轻吸去多余的缓冲液, 同时分辨出光泽面和无光泽面。
2．制作“滤纸桥”：剪裁尽寸合适的滤纸条。
取双层附着在电泳槽的支架上, 使它的一端与支架的前沿对齐, 而另一端浸入电泳槽的缓冲液内。
然后, 用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡, 使滤纸紧贴在支架上, 即为“滤纸桥”。
按照同样的方法, 在另一个电泳槽的支架上制作相同的“滤纸桥”。
二、点样在薄膜无光泽的一面点样。
点样区距负极端1.5㎝处。
点样时, 先用血色素吸管将2～3微升的血清均匀地涂在点样器表面, 再用点样器“印”在薄膜的点样区内（见图4－1）。
试验六血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
实验六 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳一、实验目的1、学习电泳技术的基本原理和醋酸纤维素薄膜电泳的操作技术。
2、掌握电泳分离血清蛋白及其定性分析方法。
二、实验原理电泳：指带电颗粒在电场作用下，向与其自身所带电荷电性相反的电极移动的现象。
例如，蛋白质具有两性解离性质，当蛋白质溶液的大于等电点时，该蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动；反之则带正电荷，在电场中向负极移动；只有蛋白质溶液pH 在蛋白质的等电点时静电荷为零，在电场中不向任何一极移动。
早在1890年就发现了电泳现象。
1937年瑞典科学家Tiselius 设计了世界上第一台自由电泳仪，建立了“移界电泳法”，成功地将血清蛋白分成清蛋白、α1球蛋白、 α2球蛋白、 β球蛋白和γ球蛋白五个主要成分，为人们了解血清奠定了基础。
为此获得1948年诺贝尔奖。
迁移率（泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度。
)(///112−−⋅⋅===s V cm Vtdl l V t d E v u u ：迁移率；v ：质点泳动速度（cm 2·s -1）；E ：电场强度（V ·cm -1）；d ：质点泳动距离（cm ）；l ：支持物有效长度（cm ）；V ：支持物两端实际电压（V ）；t ：通电时间（s ）影响质点泳动速度的因素：①颗粒表面电荷数↑；②质点的分子量↓；③颗粒大小及分子构象↓；④介质黏度↓；⑤电场强度↑；⑥介质溶液的pH （距pI 大小）；⑦溶液的离子强度↓；⑧电渗现象：液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动，是由于电泳支持物本身带有带点解离基团所致。
例如在纸电泳中，由于滤纸上吸附OH -离子带负电荷，而与纸相接触的水溶液由于静电感应而带正电荷，液体便向负极移动，并携带颗粒同时移动，所以电泳时，颗粒泳动的表面速度是颗粒本身的泳动速度与由于电渗携带颗粒的移动速度之矢量和。
电泳种类：按分离原理可分为区带电泳、移界电泳、等速电泳和聚焦电泳四种。
醋酸纤维薄膜电泳 原理 步骤 详细
蛋白组分 Alb 1 2
g/L 35～52 1.0～4.0 4.0～8.0 5.0～10.0 6.0～13.0
占蛋白百分数 （%） 57～68
1.0～5.7
4.9～11.2
7.0～13
9.8～18.2
Schematic representation of a protein electrophoresis
电泳40~~4cm时即可断电 （1）加样后，将薄膜条架于支架两端，无光泽面朝下（点样面），点样侧置于阴极端，膜两侧分别塔上纱布，纱布一端垂入缓冲液中。
Schematic representation of a protein electrophoresis
6r
3 影响电泳结果的因素 6 r
是纤维素醋酸酯(acetate ester of cellulose )，由纤维素的羟基进行乙酰化后制得，将它溶于有机溶剂涂抹成均匀的薄膜，待有机溶剂 挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜
2. 电泳图谱分离不清
①标本加量过多 ②电流过低 ③薄膜结构过分致密，透水性差 ④薄膜表面干燥
3. 电泳速度慢
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。 由于血清中各蛋白组分等电点不同而致表面净电荷量不等，加之分子大小和形状各异，因而电泳迁移率不同，彼此得以分离。
6r ①点样时血清点加不均匀 丽春红S染色扫描法结果 （1）加样后，将薄膜条架于支架两端，无光泽面朝下（点样面），点样侧置于阴极端，膜两侧分别塔上纱布，纱布一端垂入缓冲液中。 Amido black 10B
4. 白蛋白（Albumin)区带中间部分不着色，染色不足
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分一、实验目的1(掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2(定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
3(掌握分光光度计的原理及操作二、实验原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素，是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂(如:丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前，醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
四、试剂和器材(一)试剂(1)新鲜血清——无溶血现象。
(2)巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06):称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1 000ml。
?(3)染色液:称取氨基黑10B 0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
?(4)漂洗液:取95,乙醇45ml，冰乙酸,ml和蒸馏水50ml。
混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
[易挥发、密封]?(5)透明液[易挥发、密封]甲液—取冰乙酸15ml和无水乙醇85ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
乙液—取冰乙酸25ml和无水乙醇75ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
(6)液体石腊。
(7)0.4mol氢氧化钠溶液:称取16g氢氧化钠(分析纯)用少量蒸馏水溶解后定容到1000ml。
(二)器材(1)醋酸纤维素薄膜—2?×8?(浙江黄岩曙光化工厂等处生产)(2)培养皿(直径9,10?) (3)血色素吸管或点样器(4)直尺和铅笔 (5)镊子(6)电泳仪和电泳槽 (7)万用电表(8)玻璃板(8?×12?) (9)普通滤纸(10)试管和试管架 (11)吹风机(12)单面刀片 (13)擦镜纸(14)吸量管(2ml、5ml)和吸量管架 (15)722型分光光度计五、实验仪器介绍(1)722型分光光度计?测量原理分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律:当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳原理：醋酸纤维素薄膜电泳（cellulose acetate membrance electrophoresis）以醋酸纤维薄膜为支持物。
它是纤维素的醋酸酯，由纤维素的羟基经乙酰化而制成。
它溶于丙酮等有机溶液中，即可涂布成均一细密的微孔薄膜，厚度以0.1mm—0.15mm 为宜。
太厚吸水性差，分离效果不好；太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。
应用：醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。
已经广泛用于血清蛋白，血红蛋白，球蛋白，脂蛋白，糖蛋白，甲胎蛋白，类固醇及同工酶等的分离分析中，尽管它的分辨力比聚丙酰胺凝胶电泳低，但它具有简单，快速等优点。
特点：1.（1）醋酸纤维素薄膜对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了测定的精确性。
（2）快速省时。
由于醋酸纤维素薄膜亲水性较滤纸小，薄膜中所容纳的缓冲液也较少，电渗作用小，电泳时大部分电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳45—60min即可，加上染色，脱色，整个电泳完成仅需90min左右。
（3）灵敏度高，样品用量少。
血清蛋白仅需2μl血清，甚至加样体积少至0.1μl，仅含5μg 蛋白样品也可得到清晰的分离带。
临床医学检验利用这一点，检测在病理情况下微量异常蛋白的改变。
（4）应用面广。
某些蛋白在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白，溶菌酶，胰岛素，组蛋白等用醋酸纤维薄膜电泳能较好地分离。
（5）醋酸纤维素薄膜电泳染色后，经冰乙酸，乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于扫描定量及长期保存。
2、醋酸纤维素薄膜电泳与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，操作简单，但分离效果不太好。
如血清蛋白在醋酸纤维素薄膜电泳中，只能分离出5—6条区带，而聚丙烯酰胺凝胶电泳可分离出数10条区带。
补充：根据样品理化性质，从提高电泳速度和分辨力出发选择缓冲液的种类，pH和离子强度。
选择好的缓冲液最好是挥发性强，对显色或紫外光等观察区带没有影响，若样品含盐量较高时，宜采用含盐缓冲液。
实验四 醋酸纤维薄膜电泳2008
实验结果
醋酸纤维素薄膜电泳的实验结果 1.全血清电泳图谱 2.血清清蛋白电泳图谱 3.γ-球蛋白电泳图谱
注意事项
1、薄膜内不含杂质和膜条厚度要均匀。 2、点样时醋酸纤维薄膜以不干不湿为 宜；掌握好点样的力度；要控制好点样 的量；血清离膜条两侧要空1 - 2 m m ； 3、点样的膜条要马上搭在滤纸桥上， 而且，膜条要紧贴滤纸桥。 4、在染色固定前要谨防薄膜之间重叠， 杜绝血清蛋白彼此粘连的现象。
实验步骤
• 六、透明 透明 • 用滤纸吸干薄膜，浸入透明液的甲液中，2min 后立即取出，再浸入透明液的乙液中，1min后迅 速取出，紧贴在载物片上，赶出气泡。约2-3min 内薄膜完全透明，放置10-15min后，用吹风机将 膜吹干。在水笼头下将玻璃板上透明的薄膜润湿 后，用单面刀片从膜的一角撬起，并划开一端， 再用手捏住撬起的膜轻轻撕下，可以顺利地从玻 璃板上取下透明的薄膜。用滤纸吸干，浸入液体 石腊中，约3min后取出。再用干净的滤纸吸干， 压平，则成为色泽鲜艳而又透明的血清蛋白醋酸 纤维薄膜电泳图谱，可以长期保存不褪色。
实验原理
6.目前已广泛用于分析检测血浆蛋白、脂蛋白、 . 糖蛋白、核酸及其他生物大分子,为心血管疾病、 肝硬化及某些癌症鉴别诊断提供了可靠的依据, 因而已成为医学和临床检验的常规技术。 7.本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血 7. 清蛋白。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白 质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不 同，在电场中的迁移速度不同。以醋酸纤维素 薄膜为支持物，正常小牛血清在pH8.6的缓冲体 系中电泳，染色后可显示4条区带。其中清蛋白 的泳动速度最快，其余依次为α-、β-及γ-球 蛋白。
实验步骤
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分
醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分一、实验目的1．掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。
2．定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
3．掌握分光光度计的原理及操作二、实验原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素，是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。
将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120μm。
醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。
它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。
该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。
目前，醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。
四、试剂和器材（一）试剂（1）新鲜血清——无溶血现象。
（2）巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06)：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1 000ml。
（3）染色液①：称取氨基黑10B 0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
（4）漂洗液①：取95％乙醇45ml，冰乙酸５ml和蒸馏水50ml。
混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
[易挥发、密封]（5）透明液①[易挥发、密封]甲液—取冰乙酸15ml和无水乙醇85ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
乙液—取冰乙酸25ml和无水乙醇75ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。
（6）液体石腊。
（7）0.4mol氢氧化钠溶液：称取16g氢氧化钠（分析纯）用少量蒸馏水溶解后定容到1000ml。
（二）器材（1）醋酸纤维素薄膜—2㎝×8㎝（浙江黄岩曙光化工厂等处生产）（2）培养皿（直径9～10㎝）（3）血色素吸管或点样器（4）直尺和铅笔（5）镊子（6）电泳仪和电泳槽（7）万用电表（8）玻璃板（8㎝×12㎝）（9）普通滤纸（10）试管和试管架（11）吹风机（12）单面刀片（13）擦镜纸（14）吸量管（2ml、5ml）和吸量管架（15）722型分光光度计五、实验仪器介绍（1）722型分光光度计①测量原理分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。
醋酸纤维薄膜电泳
电泳技术 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
电泳技术
电泳技术主要用于物质性质的 研究、种类的鉴定、分离纯化、纯 度的分析等实验研究工作中，已成 为生物化学、分子生物学、医学、 药学、农业、食品、卫生、环保等 学科不可缺少的重要的分离分析手 段。
一、电泳技术的原理
电泳是指在外加电场的作用下， 带电的物质向其所带电荷相反的电极 方向移动的现象。各种物质由于所带 净电荷的种类和数目不同，因而在电 场中的迁移方向和速度不同，从而可 以对物质进行分离、分析和鉴定。
1．带电粒子在电场中移动时，受到两种力 的作用。第一种是电场产生的作用力F1， 它能使带电粒子移动。F1的大小与粒子所 带静电荷q及电场强度E成正比。第二种是 移动的带电粒子与溶液介质之间产生的摩 擦力F2，它可以阻止带电粒子的移动。F2 的大小与带电粒子的摩擦系数f及运动速度v 成正比。 F1 = q· E F2 = f· v
缓冲溶液应选用使分离的物质稳定，而且不 与其发生反应的体系。缓冲液的pH直接影响分子 的解离和带电性质、状态，因而会影响迁移率和 分离效果。缓冲液的离子强度应在0.05～ 0.10mol/L间为宜，过低，产热少，电泳快，区带 明显扩散；过高，区带尖锐，泳动距离短，产热 多。离子强度可用μ表示。（配动图）
4、定量 将吸干的膜条放入干燥箱中，烤干后， 放入盛有透明液的培养皿中让其充分浸透， 用镊子将其取出，迅速平整的将膜条贴敷 于载玻片上，让其自然透明，再将透明的 膜条连带载玻片一同放入光密度计或凝胶 成像系统中进行定量分析，
1、正常值：白蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白 57~72% 2~ 5% 4~ 9%
一、原理 以醋酸纤维薄膜为支持物，浸入 ph8.6的缓冲液后吸去多余液体。将微 量血清点于膜上，经电泳后，将薄膜 置染色液中使蛋白质固定并染色，洗 去多于染料。将膜条烘干，再将其用 透明液进行透明处理。用光密度计或 凝胶成像系统进行成分分析比较。
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醋酸纤维素薄膜电泳原理
醋酸纤维素薄膜电泳是一种常见的电泳技术，它利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，将带电粒子在电场作用下进行分离。
其原理如下：
1. 醋酸纤维素薄膜制备
首先需要制备醋酸纤维素薄膜。
通常采用将醋酸纤维素溶解于有机溶剂中，然后涂布在玻璃板或硅片上，通过挥发有机溶剂使得溶液中的醋酸纤维素形成均匀的薄膜。
2. 薄膜上形成静电场
接着，在制备好的醋酸纤维素薄膜上形成一个静电场。
通常使用高压直流电源将两个金属极板连接到两端，然后将极板放置在离玻璃板或硅片一定距离的位置上。
这样就可以在玻璃板或硅片表面形成一个强大的静电场。
3. 样品准备
样品需要经过处理才能进行分离。
通常需要将样品溶解在缓冲液中，并加入适量的表面活性剂以保持样品的稳定性。
此外，还需要将样品
进行染色以便于观察。
4. 样品注入
将处理好的样品注入到醋酸纤维素薄膜上，让其在静电场作用下进行分离。
通常使用注射器或微量泵进行样品注入。
5. 分离过程
在静电场作用下，带电粒子会受到电场力的作用，向着极板移动。
不同大小、不同电荷的粒子会受到不同的力，从而发生分离。
这个过程需要一定时间，通常需要几十分钟到几小时才能完成。
6. 结果分析
通过观察醋酸纤维素薄膜上的色带可以得到分离结果。
不同大小、不同电荷的粒子会形成不同位置和形状的色带。
通过比对标准样品可以确定待测物质的种类和浓度。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于静电场作用下带电粒子分离原理的技术。
它具有高效、高灵敏度、高分辨率等优点，被广泛应用于生物学、化学、环境科学等领域。