醋酸纤维素薄膜电泳
血清醋酸纤维素薄膜电泳
取出膜，用滤纸吸干即可。
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操作步骤
血浆蛋白醋酸纤维素薄膜电泳图谱
电泳方向
－
＋
γ
β
α2 α1
A
纤维蛋白原
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操作步骤
7、透明 薄膜完全干燥后，浸入透明液中20min后，
取出平贴在玻璃板上（不要留有气泡），完全 干燥后即成透明的薄膜图谱，要作扫描或照相 用。可长期保存。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成
的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如丙酮 、
氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀
的薄膜，干燥后就成为醋酸纤维素薄膜。该膜
具有均一的泡沫状结构，厚度约为120μm，通
透性好，对分子移动阻力少，是一种良好的电
泳支持物。
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醋酸纤维素薄膜电泳的优点及应用
具有微量、快速、简便、区带清晰、灵敏度高、 便于摄影和保存等优点。
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注意事项
1、最好选用同一批号、厚薄均匀、质量良好 的醋纤膜。
2、样品要新鲜。 3、点样要细窄、均匀、集中。 4、盐桥要平整。 5、电泳槽盖要密封。 6、室温不宜过高。
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注意事项
7、选择合适的缓冲液离子强度。 8、两电泳槽内缓冲液面应在同一水平面。 9、要控制好电压、电流和电泳时间。 10、电泳槽内两极溶液要交替使用，操作时应
6、镊子
7、试管、试管架、吸量管 8、分光光度计
（定量用）
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操作步骤
1、薄膜准备 ①将醋酸纤维素薄膜切成2×8cm的小条。 ②在薄膜粗面一端1.5cm处用铅笔轻轻画一横线。 ③在薄膜角上用铅笔作一标记。 ④将醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中20min。
醋酸纤维素薄膜电泳原理
醋酸纤维素薄膜电泳原理醋酸纤维素薄膜电泳是一种常见的电泳技术，它利用醋酸纤维素薄膜作为分离介质，将带电粒子在电场作用下进行分离。
其原理如下：1. 醋酸纤维素薄膜制备首先需要制备醋酸纤维素薄膜。
通常采用将醋酸纤维素溶解于有机溶剂中，然后涂布在玻璃板或硅片上，通过挥发有机溶剂使得溶液中的醋酸纤维素形成均匀的薄膜。
2. 薄膜上形成静电场接着，在制备好的醋酸纤维素薄膜上形成一个静电场。
通常使用高压直流电源将两个金属极板连接到两端，然后将极板放置在离玻璃板或硅片一定距离的位置上。
这样就可以在玻璃板或硅片表面形成一个强大的静电场。
3. 样品准备样品需要经过处理才能进行分离。
通常需要将样品溶解在缓冲液中，并加入适量的表面活性剂以保持样品的稳定性。
此外，还需要将样品进行染色以便于观察。
4. 样品注入将处理好的样品注入到醋酸纤维素薄膜上，让其在静电场作用下进行分离。
通常使用注射器或微量泵进行样品注入。
5. 分离过程在静电场作用下，带电粒子会受到电场力的作用，向着极板移动。
不同大小、不同电荷的粒子会受到不同的力，从而发生分离。
这个过程需要一定时间，通常需要几十分钟到几小时才能完成。
6. 结果分析通过观察醋酸纤维素薄膜上的色带可以得到分离结果。
不同大小、不同电荷的粒子会形成不同位置和形状的色带。
通过比对标准样品可以确定待测物质的种类和浓度。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于静电场作用下带电粒子分离原理的技术。
它具有高效、高灵敏度、高分辨率等优点，被广泛应用于生物学、化学、环境科学等领域。
醋酸纤维素薄膜电泳
各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点 及形状不同，在电场中的迁移速度不同。 以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在 pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条主 要区带。其中清蛋白的泳动速度最快，其余依 次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白。
三、实验材料
醋酸纤维薄膜（2×8 cm） 镊子
5. 放薄膜的时候毛面朝下，要注意放平，与 滤网充分接触，但不要接触点样端。 6. 电泳时应选择合适的电流强度，一般电流 强度为0.4～0.6mA/cm膜宽度。电流强度高， 则热效应高；电流过低，则样品泳动速度慢 且易扩散。
7. 操作过程为防止指纹污染，应戴手套。
采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为 醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素薄膜具有均一的泡沫状的结构，厚 度约为120 μm，有很强的通透性，对分子移动 阻力很小，该法具有微量、快速、简便、分辨 力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种 血清蛋白。
血清中各主要蛋白质的等电点均低于pH8.6， 在该缓冲液中均带负电荷，在电场中向正极移 动。血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、 γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
2. 点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸 吸去，以免引起样品扩散。但不宜太干，否则 样品不易进入膜内，造成点样起始点参差不起， 影响分离效果。
3. 点样时，点样不要过多，恰到好处，动作 要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或 印出凹陷影响电泳区带分离效果。 4. 醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥－ 巴比妥钠缓冲液,其浓度为0.05～0.09 mol/L。 (选择何种浓度与样品和薄膜的厚薄有关。缓 冲液浓度过低，则区带泳动速度快区带扩散 变宽；缓冲液浓度过高，则区带泳动速度慢， 区带分布过于集中，不易分辨。)
醋酸纤维素薄膜电泳
12～2９
缓冲液pH=8.6
pI＜pH
血清蛋白均带负电荷,在电场中向正极移动
在醋酸纤维素薄膜分为五条带。电泳迁移率最大的是白蛋 白，其后为α1球蛋白，α2球蛋白，β球蛋白和γ球蛋白
+
白蛋 α α β
γ
白(A) 1
2
实验器材
电泳仪，电泳槽，滤纸，醋酸纤维素薄膜 脱色摇床，染缸，点样器
血清中几种主要蛋白组分：
血清蛋白质 等电点
分子量
白蛋白 α1球蛋白 α2球蛋白 β球蛋白
4.８白 6.85～7. ５０
69,000
200,000
300,000
90,000～ 150,000 156,000～ 950,000
占总蛋白的 ％
57～72 2～5 4～9
步骤
４、平衡 将膜条无光泽向下置于电泳槽支架上
，点样端靠近负极。薄膜两端要紧贴滤纸，（点
样线不要压在滤纸上）中间平直悬空，加盖密封
，平衡５min。
５ 、电泳
将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上 （点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上(见下图)。 要求薄膜紧贴滤纸桥并绷直，中间不能下垂。连接好电泳 仪。在室温下电泳，打开电源开关，调节电流强度 0.5mA/cm膜宽度，通电50min后，调节旋钮使电流为零，关 闭电泳仪切断电源。
试剂
４x电极缓冲液：1.5mol/L Tris-HCl(pH 8.6)
（Tris三羟甲基氨基甲烷）
染色液：称取0.5g氨基黑，甲醇50ml，冰醋
酸10ml，蒸馏水加至100ml。
漂洗液：取甲醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水
50ml，混匀置塞试剂瓶内贮存。
实验操作
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳
醋酸纤维素薄膜电泳是一种高效、快速和准确的分离和鉴定分子的技术。
这种技术被广泛应用于生物化学、医学、环境科学等领域。
醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于毛细管电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离技术。
该技术将醋酸纤维素质地的薄膜作为分离介质，样品通过电泳移动分离在薄膜的表面。
这种技术具有高分辨率、高灵敏度、高通量和半制备规模的优点。
醋酸纤维素薄膜电泳技术的应用范围广泛，包括但不限于以下方面：
1、蛋白质分离和鉴定。
醋酸纤维素薄膜电泳技术可以对蛋白质进行高分辨率的分离和鉴定，对于寻找新的蛋白质、筛选生物标志物和新药物的作用非常重要。
2、核酸分离和鉴定。
醋酸纤维素薄膜电泳技术还可以高效地分离和纯化核酸，对于对基因筛选和遗传学研究非常重要。
3、药物分析和质量控制。
对于药物制剂的分析和质量控制，醋酸纤维素薄膜电泳技术可以快速准确地检测出药物中的有效成分和有害成分。
4、环境分析。
醋酸纤维素薄膜电泳技术也可以用于环境分析，例如分析水体中的有机物和无机物质。
在应用这种技术时，需要注意以下几点：
1、选择合适的样品前处理方法，以保证样品的纯度和完整性。
2、选择合适的运行条件，如电场强度、分离介质pH值、电泳时间等，以获得最佳的分离效果。
3、选择合适的检测方法，如荧光检测、吸收光谱检测等，以达到最优的检测灵敏度和选择性。
总之，醋酸纤维素薄膜电泳技术在生物化学、医学、环境科学等领域中具有广泛的应用前景。
我们需要不断地探索和创新，以推动这种技术的发展和应用。
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项
血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验结果讨论及注意事项血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳实验是一种常见的蛋白质分离和分析方法。
这种方法基于蛋白质在电场中的迁移速度差异，可以实现对蛋白质的定性和定量分析。
在进行这种实验时，需要注意一些实验操作步骤和技巧，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验步骤1.准备样品：从血清中提取要分析的蛋白质样品。
可使用丙酮、醋酸等溶液进行样品的处理和稀释。
2.制备凝胶：将醋酸纤维素膜在磁盘上进行切割，将膜放入电泳槽中，加入足够的电泳缓冲液。
3.电泳条件：确定好电泳槽内电泳缓冲液的pH值和离子浓度，根据蛋白质的性质确定最佳的电泳条件，如电场强度、电泳时间等。
4.上样：在预定位置上样，可使用微量注射器将样品滴于凝胶表面。
5.打开电源：连接电极，通电进行电泳。
电泳时间根据分析的需要进行调整。
6.固定凝胶：停止电泳后，将凝胶取出，固定和染色。
7.分析：在透明胶支架上对凝胶进行扫描，记录下蛋白质的电泳迁移图像。
实验结果讨论：1.蛋白质的分离：根据电泳上样区域蛋白质的迁移速率和位置，可以对样品中的蛋白质进行定性和定量分析。
根据蛋白质之间的迁移时间差异，可以推测出它们在电场中的相对电荷、分子大小和电泳迁移速率等信息。
2.蛋白质的鉴定：可以通过与已知蛋白质标准品的电泳迁移对照来鉴定样品中蛋白质的种类和含量。
也可以通过进一步的染色技术，如银染、荧光染色等，增强或显示蛋白质带的清晰度，从而更准确地分析样品中蛋白质的种类和富集。
3.实验重复性和稳定性：为了保证实验结果的可靠性，一般需要对实验进行多次重复操作，计算其平均值和标准差。
同时也需要控制实验条件的稳定性，包括电泳缓冲液的配制、电场强度的控制、电泳时间的准确计时等。
确保实验操作的一致性可以降低测定误差。
注意事项：1.实验操作：操作时需佩戴手套，避免样品受到外界污染，减少实验误差。
仔细熟悉实验步骤和操作要求，确保操作正确。
2.样品制备：样品提取和制备过程中需要严格控制温度、pH值和时间等因素，以保证样品质量的一致性。
醋酸纤维素薄膜电泳
清蛋白 前清蛋白
制备。
临床意义：
白蛋白：主要在肝脏合成，所以与肝脏疾患密切相关。
α球蛋白的增加与发热有关，与炎症有关。 β球蛋白增加常伴随血中脂质的增加。
γ球蛋白含有抗体成分，在许多慢性感染、免疫性疾病中有异常。
例如：多发性骨髓瘤病人在β球蛋白与γ球蛋白之间出现一个尖峰：M蛋白
肝硬化病人γ球蛋白增加，白蛋白降低。
红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎 蛋白、类固醇及同工酶等。它具有简单快
-球蛋白
-球蛋白
速、对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”
现象，染色后蛋白质区带更清晰等优点， 电渗作用虽然较高但很均一 ，不影响样
品的分离效果。不足之处是分辨率比聚丙
烯酰胺凝胶电泳低，由于薄膜厚度小（约 10～100μm），样品用量很少，不适于
思考题
P2：1、2、3
预习：实验五、六
• 凝胶层析分离蛋白质混合物的原理？何谓分子筛
效应？ DNS—氨基酸的双向聚酰胺薄膜层析中，各种氨 基酸是怎样得到分离？
•
血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳
——根据迁移率分离
操作步骤
标记 用铅笔在薄膜无光泽面(毛面)一端2cm处
轻画一细线 ，并在右上角做好标记。
浸泡 将醋酸纤维素薄膜毛面向下，在缓冲溶液中浸泡，使其充分浸透。 点样
用镊子将薄膜置于滤纸上，吸收多余的液体(不要太干），利用载玻片 一侧蘸取样品，45度角于毛面细线处点样。
(有效长度)
设：混合物中有A、B两物质：
• 物质A在电场中移动的距离为: dA= AVt/l
物质B的移动距离为：dB= BVt/l 则两物质移动距离之差为： Δd=(dA-dB)=(A-B)Vt/l 即：物质A、B能否分离取决于两者的迁移率
醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论
醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论醋酸纤维素薄膜电泳实验讨论引言：醋酸纤维素薄膜电泳是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于生物医学、环境监测和食品安全等领域。
本实验旨在探究醋酸纤维素薄膜电泳在分离和分析中的应用，并进一步研究其影响因素以及优化条件。
实验方法：1. 准备醋酸纤维素薄膜：将质量浓度为4%的醋酸纤维素溶液在玻璃片上匀开，然后在60℃恒温槽中干燥30分钟；2. 准备电泳缓冲液：将100mM的特定缓冲液配制好，保持pH稳定；3. 准备样品：将待测样品进行处理，如酶解、过滤等；4. 实施电泳实验：将醋酸纤维素薄膜与玻璃片固定在电泳板上，注入电泳缓冲液至电极孔上方，然后将样品涂抹在薄膜上，按照特定电压和时间进行电泳。
实验结果：经过实验，我们发现醋酸纤维素薄膜电泳可以有效地分离待测样品中的目标成分。
通过调节电压和时间，我们发现改变这两个参数可以影响分离效果。
在本实验中，我们进行了一系列实验，对不同电压和时间条件下的分离效果进行了分析。
首先，当电压在80V~120V范围内逐渐增加时，电泳分离的效果呈现出明显的改善。
这是因为较高的电压可以提高电泳速度，使目标成分在薄膜上移动的距离更短，从而加快分离过程。
然而，当电压过高时，可能会发生样品电泳坍塌和电解液温升，导致分离效果下降。
其次，我们发现时间对分离效果的影响也很明显。
在时间较短的情况下，目标成分无法完全分离，而在时间较长的情况下，目标成分已经移出薄膜，导致无法检测到。
因此，我们需要根据待测样品的特点和所需分离程度来选择合适的时间。
讨论：本实验结果表明醋酸纤维素薄膜电泳可以作为一种有效的分离和分析技术，同时也揭示了影响分离效果的关键因素。
在进行实际应用时，我们需要根据待测样品的特点和所需分离程度来选择合适的电压和时间条件。
此外，在实验过程中应注意控制电解液的pH值和温度，以保证实验结果的准确性和重复性。
总结：醋酸纤维素薄膜电泳是一种有效的分离和分析技术，可以应用于生物医学、环境监测和食品安全等领域。
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实验步骤
注意事项
1. 点样面为不光滑面，勿用手触摸； 2. 点样量适中，垂直居中点样； 3. 点样端靠近电泳仪负极； 4. 膜条背面朝上放置，需与滤纸贴紧，拉直。
思考题
• 分析影响电泳的各个因素。
• 分析自己的实验结果，针对本实验的各项操作提出改进意见。
阻力: F’ = 6πrηυ QE = 6πrην
当电泳达到平衡时，带电颗粒匀速运动: F = F’
ν Q = E 6πrη
• 迁移率: 即ν/E，表示单位电场强度时粒子运动的速度。 该值在
一定条件下决定于粒子本身的性质，即其所带电荷、大小和形状.
影响电泳速度的因素
• 样品本身：带电量、分子大小、形状
• 电场强度：电压
• 缓冲液：成分、pH、离子强度(0.02-0.2 M) • 支持介质：电渗作用、吸附作用 • 温度
正极
－ － － － － － － －－ － － － － － － － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
负极
表面带负电荷 带正电荷的水层携带粒子向负极移动
如果样品应移向负极，则泳动速度加快； 如果样品应移向正极，则泳动速度减慢。
分类
电泳
显微电泳 自由电泳 等电聚焦电泳 (无支持体) 等速电泳 密度梯度电泳 滤纸电泳(常压及高压) 区带电泳 薄层电泳(薄膜及薄板) (有支持体) 凝胶电泳(琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺)
垂直板电泳槽
圆盘电泳槽
水平电泳槽
双向电泳
醋酸纤维薄膜电泳
• 醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为支持物。 • 醋酸纤维素是纤维素的醋酸酯，将其溶于丙酮等有机
血清蛋白质的醋酸纤维素薄
膜电泳
实验目的
1．掌握电泳的基本过程与操作方法。
实验原理
电泳
优点: 快速、准确、重现性好。
应用: 1. 分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等； 2. 分析某种物质的纯度及分子量。
对生物大分子而言：
电场力: F = QE
5. 操作简单、快速、价廉.
染色方法
– 氨基黑10B
– 考马斯亮蓝R250
– 银染色法
考马斯亮蓝R250
考马斯亮蓝G250
人血浆蛋白质的等电点及迁移率
蛋白质名称 白蛋白 等电点 4.88 泳动度/(cm2· V-1· S-1) -5.9×10-5 分子量 69,000
α1-球蛋白
α2-球蛋白 β-球蛋白 γ-球蛋白
5.06
5.06 5.12 6.85-7.50
–5.1×10-5
–4.1×10-5 -2.8×10-5 -1.0×10-5
200,000
300,000 9,000-150,000 156,000-300,000
病名
肾病 弥温性肝损害 肝硬化 原发性肝癌 多发性骨髓瘤 慢性炎症 妊娠 无丙种球蛋白血症 双白蛋白血症
溶液中，可涂布成均一细密的微孔薄膜。待有机溶剂
挥发后，即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。该膜具有 均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通
透性，对分子移动阻力很小。
1. 样品吸附极少，无拖尾现象，条带清晰。
2. 快速省时。
3. 灵敏度高，样品用量少。 4. 制成透明干膜用于定量扫描分析与长期保存。
白蛋白 ↓↓ ↓↓ ↓↓ ↓↓ ↓ ↓ 双峰
α1球蛋白 ↑ ↑ ↓
AFP
α2球蛋白 ↑↑ ↓ ↓
β球蛋白 ↑ ↓
β-γ桥
γ球蛋白 ↓ ↑ ↑
↑ ↑ ↑ ↑
↑↑ ↑ ↓ ↓↓
实验器材和试剂
• 实验器材
电泳槽、电泳仪、染缸、滤纸、醋酸纤维素薄膜、点样器
• 试剂
1. 血清 2. 巴比妥-巴比妥钠缓冲液 (pH 8.6、I = 0.06) 3. 染色液: 氨基黑10B 0.25g，甲醇50 mL + 冰醋酸10 mL + 水40 mL溶解 (可重 复使用) 4. 漂洗液：甲醇45 mL + 冰醋酸5 mL + 蒸馏水50 mL