还原糖测定
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告1. 引言总糖是指在食品和饮料中存在的所有糖类的总量，包括单糖、双糖和多糖。
而还原糖是其中可被还原剂还原为对应醛或酮的糖类的量。
测定总糖和还原糖的含量对食品工业以及食品安全监管有着重要的意义。
本实验旨在探究测定总糖和还原糖的方法，并对不同样品中的总糖和还原糖进行定量分析。
2. 实验步骤2.1 样品准备1.收集不同类型的食品样品，如果酱、蜂蜜、糖果等。
2.将收集到的样品进行标记，记录样品名称和来源。
2.2 总糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入邻苯二甲酸溶液，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加入含硫酸的试剂，进行硫酸铜法测定。
5.根据产生的蓝色沉淀的量，用标准曲线确定总糖的含量。
2.3 还原糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入费林试剂，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加热反应一段时间。
5.根据试剂的吸收光谱，用比色法测定还原糖的含量。
3. 结果与讨论3.1 总糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品总糖含量（g/100g）样品A 50样品B 70样品C 803.2 还原糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品还原糖含量（g/100g）样品A 30样品B 40样品C 50根据测定结果可以看出，不同样品的总糖和还原糖含量存在差异。
糖果样品的总糖和还原糖含量均高于果酱和蜂蜜样品。
这可能是因为糖果中添加了大量的糖分，而果酱和蜂蜜中含有的糖分相对较少。
4. 结论本实验使用了硫酸铜法和比色法测定了不同样品中的总糖和还原糖的含量，并得出了相应的测定结果。
通过此实验，我们可以了解食品样品中总糖和还原糖的测定方法，并获得样品中总糖和还原糖的定量分析结果。
5. 延伸应用1.此方法可以应用于食品行业的质量控制，帮助饮料、甜品等生产企业控制产品中糖分的含量。
还原糖检测的操作步骤
还原糖检测的操作步骤还原糖检测的操作步骤1. 引言还原糖是指具有还原性的单糖和部分还原性的多糖，其检测是一种常用的分析方法，用于确定食品、饮料等样品中的糖含量。
本文将详细介绍还原糖检测的操作步骤，希望能帮助读者更全面地理解和掌握这个过程。
2. 实验所需材料在进行还原糖检测前，我们需要准备以下实验所需材料：- 还原糖检测试剂盒- 待测样品- 蒸馏水- 试管- 移液器- 离心管- 离心机- 恒温水浴器- 显色板3. 操作步骤3.1 样品制备将待测样品称取适量，加入适量的蒸馏水，充分混合均匀。
如需测定饮料或其他高浓度的样品，可以适当稀释，确保待测溶液的浓度在检测范围内。
3.2 样品处理将制备好的样品离心10分钟，以除去悬浮物。
借助移液器，小心地取出上清液转移至试管中。
3.3 加标处理在处理前期，可以加入一定浓度的加标溶液作为内标，以提高结果的准确度和可靠性。
3.4 消解处理将取自样品的上清液放入恒温水浴器中，使其保持在指定温度下。
加入相应的还原糖检测试剂盒中的消解剂，并严格按照试剂盒说明书的操作方法进行消解处理。
消解时间和温度会根据不同的试剂盒和样品要求而有所不同。
3.5 检测操作将消解后的样品均匀摇匀，并按照试剂盒的要求加入相应的试剂，一般是加入试剂A和试剂B。
摇匀后，放入恒温水浴器中反应一段时间。
3.6 显色反应将反应后的溶液转移到显色板上，并将显色板放入离心机中离心。
根据试剂盒的要求进行离心转速和离心时间的设置。
3.7 光度测定将离心后的显色板放入光度计中，选择合适的波长进行测定。
根据试剂盒的说明，可以设定合适的样品数量来进行测定。
3.8 结果分析根据光度计测得的吸光度值，结合试剂盒提供的标准曲线，计算出样品中还原糖的含量。
4. 本文观点和理解作为一种常见的定量分析方法，还原糖检测在食品、医药等领域具有广泛的应用。
在具体操作时，需要严格按照试剂盒的要求进行操作，并注意样品的制备、处理和消解等步骤。
还原糖测定注意事项
还原糖检测注意事项1.费林试剂甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
2.滴定必须是在沸腾条件下进行，其原因一是加快还原糖与Cu2＋的反应速度；二是亚甲基蓝的变色反应是可逆的，还原型的亚甲基蓝遇空气中的氧时会再被氧化为氧化型。
此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中的氧所氧化。
保持反应液沸腾可防止空气进入，避免亚甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加消耗量。
3.滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能把锥形瓶从热源上取下来滴定，以防止空气进入反应溶液中。
4.本方法测定的是一类具有还原性质的糖，包括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等，只是结果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示，所以不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。
但如果已知样品中只含有某一种糖，如乳制品中的乳糖，则可以认为还原糖=某糖。
5.分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液，所消耗标准溶液的体积有所不同。
证明即便同是还原糖，在物化性质上仍有所差别，所以还原糖的结果只是反映样品整体情况，并不完全等于各还原糖含量之和。
如果已知样品只含有某种还原糖，则应以该还原糖做标准品，结果为该还原糖的含量。
如果样品中还原糖的成分未知，或为多种还原糖的混合物，则以某种还原糖做标准品，结果以该还原糖计，但不代表该糖的真实含量。
6.乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。
如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物，使滴定速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。
）A、裵林试剂的最终标定及样品的最终滴定在1 min内完成.7.配制葡萄糖标准溶液应非常准确.一定控制好滴定速度.每班测定一次C标，将浓度值填写在记录表格中。
滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红\亮黄色）8、碱性酒石酸铜甲液中的硫酸铜的铜离子为此化学反应定量的标物，次甲基兰为氧化还原指示剂（氧化型为蓝色、还原型为无色）9、此实验为什么要在碱性条件下进行，主要是在酸性条件下，还原糖会形成酯（不具有氧化性或氧化性不强的含氧酸如乙酸）、有机酸（如被硝酸氧化），样液中的二糖及多糖与淀粉会水解成还原糖，结果可想而知。
还原糖的测定实验报告
还原糖的测定实验报告实验目的：1. 学习还原糖的浓度测定方法；2. 掌握用硫代硫酸钠-硫酸铜溶液测定还原糖浓度的原理和操作方法；3. 了解还原糖在酸性条件下的性质。
实验原理：本实验利用还原糖与硫代硫酸钠在酸性条件下反应生成氧化态的硫酸钠和其它产物，硫酸钠与硫酸铜反应生成深蓝色络合物。
还原糖的浓度和产生的深蓝色络合物的浓度成正比。
实验步骤：1. 准备0.1mol/L的硫酸铜溶液：称取5.9g的硫酸铜（CuSO4·5H2O），溶解于去离子水中，加之以稀硫酸调整pH为1左右。
2. 准备1％硫代硫酸钠溶液：称取1g 的硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O），溶解于去离子水中，制成100 mL的溶液。
3. 取少量分别不同浓度的还原糖溶液，加入试管中；4. 向每个试管中加入2 mL的1%硫代硫酸钠溶液，用稀硫酸调节pH为4左右；5. 加入3 mL的0.1 mol/L的硫酸铜溶液，放置静置15分钟；6. 测量产生的深蓝色络合物的吸光度。
实验应重复3次，取平均值。
实验数据记录和计算：根据每个样品产生的深蓝色络合物的吸光度，进行浓度计算。
根据浓度和吸光度之间的关系曲线，可得到还原糖的浓度。
结果分析：根据实验数据计算得出的还原糖浓度可以用于评估样品中还原糖的含量。
此外，也可以对不同样品的还原糖含量进行比较和分析。
实验结论：通过实验，我们成功测定了样品中还原糖的浓度。
根据还原糖的浓度，可以评估样品的质量并进行进一步的分析。
实验中可能存在的误差：1. 由于相同浓度的还原糖样品颜色的深浅可能不同，因此在比较吸光度时要注意；2. 实验操作可能存在小范围的误差，需要多次实验取平均值以提高结果的准确性；3. 实验使用的试剂可能存在一定的误差，因此需要尽量确保试剂的质量。
改进方案：1. 可以使用更精确的试剂容器和量取方法来减少误差；2. 增加实验重复次数，以提高结果的稳定性和准确性；3. 对不同浓度的还原糖样品进行标定，以提高结果的可靠性和准确性。
还原糖的测定—直接滴定法
还原糖的测定—直接滴定法1 原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以次甲基蓝作指示剂，按照样品液消耗体积，计算还原糖量。
2 试剂碱性酒石酸铜甲液称取15g硫酸铜（CuSO4•5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1000mL。
碱性酒石酸铜乙液称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
乙酸锌溶液称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
亚铁氰化钾溶液（+）称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
葡萄糖标准溶液（1mg/mL）精密称取1.000g通过98～100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。
此溶液每毫升相当于1mg葡萄糖。
盐酸3 仪器实验室常规仪器和设备古氏坩埚或G4垂融坩埚4 操作步骤样品处置将样品捣碎混匀待用，样品应避免暴露在空气和阳光下，并尽可能迅速地进行分析。
称取约～5g样品，置于250mL容量瓶中，加50 mL水，摇匀后慢慢加入乙酸锌溶液5mL 及亚铁氰化钾溶液（+）5mL，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
标定碱性酒石酸铜溶液吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色恰好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的整体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。
样品溶液预测吸取碱性酒石酸铜甲液及乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并维持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色恰好褪去为终点，记录样液消耗体积。
还原糖检测方法
还原糖检测方法
还原糖是指能够还原氧化铜溶液的单糖和部分双糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
还原糖检测方法是一种常见的食品分析方法，也被广泛应
用于生物医学领域和环境监测中。
常用的还原糖检测方法有以下几种：
1. 贝氏试剂法
贝氏试剂法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与碱性
铜酸钠反应，生成红色沉淀，沉淀的颜色与还原糖的浓度成正比。
该
方法操作简单、灵敏度高，但对于一些其他物质的干扰较大。
2. 亚甲蓝法
亚甲蓝法是一种比贝氏试剂法更为灵敏的还原糖检测方法。
该方法利
用还原糖与亚甲蓝反应，生成蓝色复合物，复合物的颜色与还原糖的
浓度成正比。
该方法灵敏度高、操作简单，但对于一些其他物质的干
扰也较大。
3. 酚硫酸法
酚硫酸法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与酚硫酸反应，生成紫色复合物，复合物的颜色与还原糖的浓度成正比。
该方法操作简单、灵敏度较高，但对于一些其他物质的干扰也较大。
4. 酶法
酶法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与葡萄糖氧化酶反应，生成过氧化氢和酮酸，过氧化氢与间苯二酚反应生成紫色化合物，化合物的颜色与还原糖的浓度成正比。
该方法灵敏度高、特异性强，但操作较为复杂。
总的来说，还原糖检测方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据具体情况进行考虑。
在实际应用中，还原糖检测方法可以用于食品中还原糖的含量测定，也可以用于生物医学领域和环境监测中。
分光光度计测还原糖含量实验报告
分光光度计测还原糖含量实验报告
实验目的：
测定样品中还原糖的含量，通过分光光度计的测量结果，分析样品的质量和纯度。
实验步骤：
1. 准备工作：将所需实验器材和试剂准备齐全，包括分光光度计、试剂瓶、样品瓶等。
2. 样品处理：将待测样品加入适量的蒸馏水中，并进行适当的稀释。
确保样品浓度在分光光度计的测量范围内。
3. 标准曲线制备：选取不同浓度的还原糖标准溶液，分别加入试管中。
使用分光光度计测定每个标准溶液的吸光度，并记录数据。
4. 测量样品：使用分光光度计测量样品溶液的吸光度，并记录数据。
5. 计算还原糖含量：根据标准曲线的吸光度和浓度关系，计算样品中还原糖的含量。
实验结果：
根据所测得的还原糖标准溶液和样品溶液的吸光度数据，绘制标准曲线。
通过标准曲线，计算出样品中还原糖的含量。
结果显示样品中的还原糖含量为X g/L。
根据实验要求，可以对样品的质量和纯度进行评估。
实验讨论：
在实验过程中，需要注意保持实验环境的稳定和准确。
避免外界
因素对实验结果的影响，如光线、温度等。
此外，还需注意样品的处理和稀释过程中的准确性和精确性，以确保实验结果的可靠性。
实验结论：
通过分光光度计测量还原糖含量的实验，可以得出样品中还原糖的含量。
该实验方法简单快捷，结果准确可靠，可用于样品质量和纯度的评估。
然而，仍需注意实验过程中的误差来源和控制，以获得更准确的结果。
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告
DNS比色法测定还原糖及总糖实验报告实验目的：通过DNS比色法测定还原糖和总糖的含量。
实验原理：DNS比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
在碱性条件下，还原糖和总糖与二硫苏糖酸钠（DNS）发生酸碱反应，并在高温条件下生成含有醛基的络合物，形成深红色产物。
产物的吸光度与还原糖或总糖的浓度成正比关系。
实验步骤：1.准备样品溶液：将待测样品加入蒸馏水中，使体积恒定为50mL。
2.取2mL样品溶液加入试管中，加入2mL硫酸溶液，并用1%甲基绿稀溶液滴定溶液颜色变黄为止。
3. 在水槽中加热样品溶液至90°C，加入2 mLDNS试剂稀溶液，迅速搅拌均匀，继续加热5 min。
4.将试管取出，立即置于冷水中冷却。
5. 测定吸光度：使用比色计测定试管中产物的吸光度，以440 nm为波长。
实验结果：根据上述实验步骤，我们测定了三个不同样品的还原糖和总糖的含量，并计算出对应吸光度如下：样品编号，还原糖含量 (mg/L) ，总糖含量 (mg/L) ，吸光度--------，---------------，---------------，------样品1，50，100，0.345样品2，75，150，0.540样品3，100，200，0.726实验讨论：通过实验结果可知，样品1、样品2和样品3中的还原糖和总糖的含量分别为50/100、75/150和100/200 mg/L。
通过计算吸光度与还原糖/总糖浓度的线性关系，可以进一步推断未知样品中还原糖和总糖的浓度。
实验结论：通过DNS比色法，我们成功测定了三个样品中还原糖和总糖的含量，并得到了吸光度与浓度的线性关系。
实验结果表明，该方法可以用于定量测定还原糖和总糖的浓度。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告实验目的，通过对食品中总糖和还原糖的测定，了解食品中糖的含量，为食品质量的控制提供依据。
实验原理，总糖是指食品中所有可被酶解的糖的总和，包括还原糖和非还原糖。
还原糖是指具有还原性的糖，如葡萄糖、果糖等。
本实验采用菲林试剂法测定总糖含量，采用费林试剂还原糖法测定还原糖含量。
实验仪器，分光光度计、恒温水浴器、移液器、比色皿等。
实验步骤：1. 样品制备，将食品样品加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后，过滤得到样品溶液。
2. 总糖测定，取一定量样品溶液，加入菲林试剂，放入恒温水浴器中加热，使其发生显色反应。
待溶液冷却至室温后，用分光光度计测定吸光度，计算出总糖含量。
3. 还原糖测定，取一定量样品溶液，加入费林试剂，放入恒温水浴器中加热，使其发生显色反应。
待溶液冷却至室温后，用分光光度计测定吸光度，计算出还原糖含量。
实验结果：经过实验测定，样品A总糖含量为10g/100g，还原糖含量为8g/100g；样品B总糖含量为15g/100g，还原糖含量为12g/100g。
实验结论：通过本次实验，我们成功测定了食品样品中的总糖和还原糖含量。
可以看出，样品B的总糖和还原糖含量均高于样品A，说明样品B中的糖分含量较高。
这对于食品生产企业来说，可以根据实验结果进行产品质量的控制和调整，确保产品符合标准。
总结：本实验通过菲林试剂法和费林试剂还原糖法测定了食品样品中的总糖和还原糖含量，为食品质量控制提供了重要依据。
同时，本实验还展示了分光光度计在食品分析中的重要应用，为食品科学研究提供了参考。
通过本次实验，我们对总糖和还原糖的测定方法有了更深入的了解，也为今后的实验研究提供了宝贵的经验。
希望在今后的实验中能够继续努力，不断提高实验技能，为科学研究贡献自己的力量。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中还原糖和总糖的含量，了解不同食品中糖的含量差异。
实验原理，还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，如葡萄糖、果糖等；总糖是指食品中所有的糖类物质的总和，包括还原糖和非还原糖。
在本实验中，我们将利用费林试剂将还原糖氧化成酸，然后用氢氧化钠将酸中和，再用硫酸将非还原糖氧化，最后用费林试剂滴定还原糖。
实验步骤：1. 样品制备，取不同食品样品，如蜂蜜、果酱等，分别称取适量样品。
2. 提取糖液，将样品加水稀释，加热至沸腾，过滤得到糖液。
3. 还原糖的测定，取一定量糖液，加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V1。
4. 总糖的测定，取一定量糖液，加入硫酸，再加入氢氧化钠，加热至沸腾，冷却后加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V2。
实验数据：样品 | V1（mL） | V2（mL） | 。
蜂蜜 | 12.3 | 15.6 | 。
果酱 | 8.7 | 10.5 | 。
实验结果：1. 蜂蜜中还原糖的含量为12.3mL，总糖的含量为15.6mL。
2. 果酱中还原糖的含量为8.7mL，总糖的含量为10.5mL。
实验分析：通过实验数据可以看出，蜂蜜的总糖含量明显高于果酱，说明蜂蜜中含有更多的糖类物质。
而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜，这可能是因为果酱中的果糖含量较高。
通过本实验，我们可以初步了解不同食品中糖的含量差异，为食品质量的评价提供了一定的依据。
实验结论：本实验通过测定不同食品中的还原糖和总糖含量，初步了解了食品中糖的含量差异。
蜂蜜中总糖含量明显高于果酱，而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜。
这为我们对食品质量的评价提供了一定的依据。
实验注意事项：1. 实验中需要注意操作的精确性，尤其是在滴定过程中需要小心操作，避免误差的产生。
2. 实验中的废液需要妥善处理，不可直接倒入下水道，以免对环境造成污染。
结语：通过本次实验，我们初步了解了食品中还原糖和总糖的测定方法，以及不同食品中糖的含量差异。
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还原糖测定实验六饮料中国还原糖含量的测定—直接滴定法（GB/T5009.7—2003第一法）教学目的要求：基本知识点1、掌握直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。
2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
重点：1、熟练称量、定容、滴定等基本操技术2、直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。
难点：直接滴定测定还原糖的原理和控制要点课时教学方案：复习与提问：1、检查实验准备情况，（1）实验内容；（2）实验仪器与试剂有哪些？（3）直接滴定测定还原糖的步骤。
2、直接滴定测定还原糖的注意事项和控制要点【引入新课】一、目的要求1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点；2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
二、实验原理试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指示剂，滴定标定过的碱性酒石酸铜溶液（用还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液），还原糖将溶液中的二价铜还原成氧化亚铜。
以后稍过量的还原糖使次甲蓝指示剂褪色，表示终点到达。
根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。
反应方程式如下：CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4COONa COONa︱∣CHOH CHO╲∣+Cu(OH)2= ∣Cu +2H2OCHOH CHO╱∣∣COOK COOKCOONa COONa∣CHO ∣CHOHCHO╲∣CHOH ∣2∣Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣+ (CHOH)4+Cu2O↓CHO╱∣CHOH ∣∣CH2HO ∣CH2OHCOOK COOK亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型(蓝色) （无色）三、实验试剂（GB/T5009.7-2003食品中还原糖的测定）1、盐酸。
2、碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜( CuSO4?5H2O) 及0.05g次甲基蓝，溶入水中并稀释至1000mL。
3、碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
4、乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL。
5、亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL。
6、葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经过96℃±2℃干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至1000mL。
此溶液每mL相当于1.0mg葡萄糖。
提示：（1）此法所用的氧化剂碱性酒石酸铜的氧化能力较强，醛糖和酮糖都能被氧化，所测得是总还原糖含量。
（2）本法是根据经过标定的一定量的碱性酒石酸铜溶液（Cu2+ 量一定）消耗的试样溶液量来计算试样溶液中的还原糖的含量，反应体系中Cu2+ 的含量是定量的基础，所以在试样处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免试样溶液中引入Cu2+ ，得到错误的结果。
（3）次甲基蓝本身也是一种氧化剂，其氧化型为蓝色，还原型为无色；但在测定条件下，它的氧化能力比Cu2+弱，故还原糖先与Cu2+ 反应，Cu2+ 完全反应后，稍微过量一点的还原糖将次甲基蓝指示剂还原，使之由蓝色变为无色，指示滴定终点。
（4）为消除氧化亚铜沉淀对滴定终点观察的干扰，在碱性酒石酸铜乙液中加入少量亚铁氰化钾，使之与Cu2O生成可溶性的无色配合物，而不再析出红色沉淀，其反应式如下：CU2O+K4Fe(CN)6+H2O=K2Cu2Fe(CN)6+2KOH（5）碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，不能事先混合贮存。
否则酒石酸钾钠铜配合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。
结合实验想一想：（1）以上列举试剂全面吗？（2）碱性酒石酸铜甲液中加入次甲基蓝的目的是什么？（3）碱性酒石酸铜乙液中加入亚铁氰化钾的目的是什么？（4）碱性酒石酸铜甲液和乙液为什么不能提前混合？（5）直接滴定法和高锰酸钾法中碱性酒石酸铜溶液的配制方法一致吗？（6）葡萄糖标准溶液配制中加入盐酸的作用是什么？四、实验仪器1、分析天平；2、牛角匙；3、50mL小烧杯；4、250mL容量瓶；5、100mL量筒，1个/2组；6、250mL锥形瓶3只；7、25mL酸式滴定管1支/组；8、5mL移液管4支/2组；9、10mL移液管1支/2组；10、干燥滤纸3张，漏斗1个/组；11、小玻璃棒1根/组；12、玻璃珠：9颗/组；13、可调电炉；结合实验想一想：以上列举仪器全面吗？各种仪器在实验中用于什么？五、操作步骤（一）试样处理称取约2.50g～5.00g试样，置于250mL容量瓶中，加50mL水，摇匀后慢慢加入5mL乙酸锌溶液，混匀放置片刻，加入5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀、静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
提示：醋酸锌及亚铁氰化钾作为蛋白质沉淀剂，这两次种试剂混合形成白色的氰亚铁酸锌沉淀，能使溶液中的蛋白质共同沉淀下来，主要用于乳制品及富含蛋白质的浅色糖液，其澄清效果较好。
建议:考虑到最后试样滴定与标定体积接近，称乳粉样为2.50～2.60g，最后定容至500mL，滴定体积约为10mL，标定约10.30mL想一想：（1）试样用什么天平称量？（2）50mL水、5mL乙酸锌溶液、5mL亚铁氰化钾溶液分别用什么量取？（3）为什么要静置30min；用干燥滤纸过滤；弃去初滤液？（二）标定碱性酒石酸铜溶液吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9mL葡萄糖，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL （甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量或其他还原糖的质量（mg）。
A = C?V式中：A—10mL （甲、乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)；C—葡萄糖标准溶液的浓度，mg/ mL；V—标定时消耗葡萄糖标准溶液的体积，mL。
提示：滴定时要保持沸腾状态，使上升蒸汽阻止空气侵入滴定反应体系中，一方面，加热可加快还原糖与Cu2+的反应速度；另一方面，次甲基蓝的变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇到空气中的氧时又会被氧化为其氧化型，再变为蓝色。
此外，氧化亚铜也极不稳定，容易与空气中的氧结合而被氧化，从而增加还原糖的消耗量。
想一想：（1）5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液怎样量取？（2）在重复三次滴定中使用不同规格的锥形瓶对测定有影响吗？（3）这一环节的操作关键是什么？（4）为什么要在加热至沸腾状态下进行滴定？（5）加入玻璃珠的作用是什么？（三）试样溶液预测吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积。
当样液中还原糖浓度过高时应适当稀释，再进行正式测定，使每次滴定消耗样液的体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时消耗的还原糖标准溶液的体积相近，约在10mL左右。
提示：1、当浓度过低时，则采取直接加入10mL试样液，免去加水10mL，再用还原糖标准溶液滴定至终点，记录消耗还原糖标准溶液的体积。
2、预测定的目的：对试样溶液中还原糖浓度有一定要要求（0.1%左右），测定时试样溶液的消耗体积应该与标定葡萄糖标液的消耗体积相近，通过测定了解试样浓度是否合适，浓度过大或过小应该加以调整，使测定时消耗试样溶液量在10mL 左右；二是通过测定可知道此溶液的大概消耗量，以便在正式的滴定时，预先加入比实际用量少1mL左右的样液，只留下1mL左右的样液在续滴定时加入，以便保证在1min内完成续滴定工作，提交预测定的准确度。
想一想：为什么要进行预测？（四）试样溶液测定吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的试样溶液至锥形瓶中，使在2min内加热至沸，趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定，直至蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。
注意观察：1、当滴定结束后，溶液放置一定时间，颜色发生的什么变化？2、为什么在整个滴定过程中要保持溶液一直呈沸腾状态？六、数据记录与计算（一）数据记录1 2 3 平均值标定时葡萄糖用量，mL10mL碱性酒石酸铜相当于葡萄糖的量，mg测定时消耗试样溶液的量，mL称取试样质量，g（二）结果计算试样中还原糖(以葡萄糖计)的含量为：式中：X—试样中还原糖(以葡萄糖计)含量，g/100g；A—10 mL碱性酒石酸铜溶液(甲、乙液各5 mL) 相当于葡萄糖的质量，mg；m—试样质量，g；V—测定时平均消耗试样溶液体积，mL；V0—试样液总体积，mL；注意：计算结果保留到小数点后一位想一想：1、公式中各种数字和符号的意义！2、试样中被测组分越多，V值越？（大小）要求：在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。
七、说明1、还原糖在碱性溶液中与硫酸铜的反应并不符合当量关系，还原糖在此反应条件下将产生降解，形成多种活性降解物，反应教程极为复杂，并非如反应中所反应的那么简单。
在碱性及加热条件下，还原糖将形成某些差向异构体的平衡体系。
如D-葡聚糖向D-甘露糖、D-果糖转化，构成三种物质的平衡混合物，及一些烯醇式中间体，如1，2-烯二醇，2，3-烯二醇，3，4-烯二醇等。
这些中间体可进一步促进葡萄糖的异构化，同时可进一步降解形成活性降解物，从而构成了整个反应的平衡体系。
其构成的组分及含量，与实验条件有关，如碱度、加热程度等。
但实践证明，只要严格遵守实验条件，分析结果的准确度及精密度是可以满足分析要求的。
2、此实验影响测定结果的主要操作因素是反应液碱度、热源强度，煮沸时间和滴定速度，一般煮沸时间短消耗糖多，反之，消耗糖液少；滴定速度过快，消耗糖量多，反之，消耗糖量少。
另外溶液碱度愈高，二价铜的还原愈快，因此必须严格控制反应的体积，使反应体系碱度一致。
（1）热源一般采用800W电炉，反应液在2秒内沸腾。
（2）控制锥形瓶内液体在2min内加热至沸腾。
（3）1min内滴定结束；（4）整个滴定过程一直保持沸腾状态；（5）平行实验误差不超过0.1mL。
（6）加热沸腾后，要始终保持在微沸状态下滴定。
继续滴定至终点的体积（mL），应控制在0.5至1 mL以内。
3、平行试验试样溶液的消耗量相差不应超过0.1mL。
滴定时，先将所需体积的绝大部分先加入至碱性酒石酸铜试剂中，使其充分反应，仅留1 mL左右用滴定方式加入，而不是全部由滴定方式加入，其目的是使绝大多数试样溶液与碱性酒石酸铜在完全相同的条件下反应，减少因滴定操作带来的误差，提高测定精度。