土壤微生物测定方法
土壤微生物生物量的测定方法
土壤微生物生物量的测定方法1土壤微生物碳的测定方法（熏蒸提取----仪器分析法）基本原理新鲜土样经氯仿熏蒸后（24h），土壤微生物死亡细胞发生裂解，释放出微生物生物量碳，用一定体积的LK2SO4溶液提取土壤，借用有机碳自动分析仪测定微生物生物量碳含量。
根据熏蒸土壤与未熏蒸土壤测定有机碳的差值及转换系数（K EC），从而计算土壤微生物生物量碳。
实验仪器自动总有机碳（TOC）分析仪（Shimadzu Model TOC—500,JANPAN）、真空干燥器、烧杯、三角瓶、聚乙烯熟料管、离心管、滤纸、漏斗等。
实验试剂1）无乙醇氯仿（CHCL3）；2）L硫酸钾溶液：称取87g K2SO4溶于1L蒸馏水中3）工作曲线的配制：用L硫酸钾溶液配制10ugC/L、30ugC/L、50ugC/L、70ugC/L、100ugC/L系列标准碳溶液。
（其实一般情况下，仪器会自带的标曲，一般不用自己做的）操作步骤土壤的前处理（过筛和水分调节略）熏蒸称取新鲜（相当于干土，这个可以根据自己土样的情况而定）3份分别放入25ml小烧杯中。
将烧杯放入真空干燥器中，并放置盛有无乙醇氯仿（约2/3）的15ml烧杯2或3只，烧杯内放入少量防暴沸玻璃珠，同时放入一盛有NaOH溶液的小烧杯，以吸收熏蒸过程中释放出来的CO2，干燥器底部加入少量水以保持容器湿度。
盖上真空干燥器盖子，用真空泵抽真空，使氯仿沸腾5分钟。
关闭真空干燥器阀门，于25℃黑暗条件下培养24小时。
抽真空处理熏蒸结束后，打开真空干燥器阀门（应听到空气进入的声音，否则熏蒸不完全，重做），取出盛有氯仿（可重复利用）和稀NaOH溶液的小烧杯，清洁干燥器，反复抽真空（5或6次，每次3min，每次抽真空后最好完全打开干燥器盖子），直到土壤无氯仿味道为止。
同时，另称等量的3份土壤，置于另一干燥器中为不熏蒸对照处理。
（注意：熏蒸后不可久放，应该快速浸提）※浸提过滤从干燥器中取出熏蒸和未熏蒸土样，将土样完全转移到80ml聚乙烯离心管中，加入40ml L硫酸钾溶液（土水比为1:4，考虑到土样的原因，此部分熏蒸和不熏蒸土均为4g，即，4g土：16ml的硫酸钾溶液，当然这个加入量要根据TOC仪器的进入量决定）300r/min振荡30min，用中速定量滤纸过滤。
土壤微生物生物量碳测定方法
土壤微生物生物量碳测定方法一、呼吸法通过测定土壤中微生物呼吸释放的CO2量来间接估算土壤微生物生物量碳。
该方法的原理基于微生物在代谢过程中产生的CO2量与其生物量碳之间的正相关关系。
常用的测定方法包括静态方法和动态方法。
1.静态方法：在采样后立即封闭土壤样品容器，然后测定一定时间内容器内CO2的累积释放量，并利用其中一种模型计算微生物生物量碳。
例如，利用静态方法可以测定土壤有机碳浓度和总CO2浓度，通过两者的比值计算微生物生物量碳。
2.动态方法：将土壤样品装入氧气通气的大容器中，测定一定时间内容器中CO2的连续释放量，并通过外推法计算微生物生物量碳。
例如，可以通过监测土壤样品容器中CO2的连续释放曲线，然后利用微生物呼吸速率和微生物生物量碳之间的关系计算微生物生物量碳。
二、估算法利用土壤中微生物生物量碳与其中一种土壤性质之间的相关性来估算土壤微生物生物量碳。
常用的估算法包括土壤学习法、土壤酶学法和土壤微生物生态法。
1.土壤学习法：根据不同土壤类型的土壤微生物生物量碳数据进行学习建模，然后根据土壤性质数据进行预测。
常用的学习方法包括主成分分析、判别分析和回归分析等。
2.土壤酶学法：通过测定土壤中一些酶活性与微生物生物量碳之间的相关性来预测微生物生物量碳。
常用的酶活性指标包括脲酶、蔗糖酶和脱氢气酶等。
3.土壤微生物生态法：通过测定土壤微生物多样性和群落结构与微生物生物量碳之间的相关性来估算微生物生物量碳。
常用的方法包括16SrRNA和ITS基因测序、脂肪酸指纹技术和磷脂脂肪酸分析等。
三、标记法通过标记的同位素技术测定土壤微生物生物量碳。
其中，最常用的标记同位素是^13C和^14C。
通过给土壤样品添加同位素标记物并追踪其在土壤中的分布和转化，可以计算微生物生物量碳。
总结起来，土壤微生物生物量碳的测定方法主要包括呼吸法、估算法和标记法等。
不同的方法适用于不同的土壤类型和测定目的，综合运用多种方法可以更准确地评估土壤微生物生物量碳。
土壤微生物量碳测定方式
土壤微生物量碳测定方式及应用土壤微生物量碳（Soil microbial biomass）不仅对土壤有机质和养分的循环起着主要作用，同时是一个重要活性养分库，直接调控着土壤养分（如氮、磷和硫等）的维持和释放及其植物有效性。
近40年来，土壤微生物生物量的研究已成为土壤学研究热点之一。
由于土壤微生物的碳含量一般是恒定的，因此采用土壤微生物碳(Microbial biomass carbon, Bc)来表示土壤微生物生物量的大小。
测定土壤微生物碳的主要方式为熏蒸培育法（Fumigation-incubation, FI）和熏蒸提取法（Fumigation-extraction, FE）。
熏蒸提取法（FE法）由于熏蒸培育法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加入新鲜有机底物的土壤和水田土壤。
Voroney (1983)发现熏蒸土壤用0.5mol·L-1K2SO4提取液提取的碳量与生物微生物量有很好的相关性。
Vance等(1987)成立了熏蒸提取法测定土壤微生物碳的大体方式：该方式用0.5mol·L-1K2SO4提取剂（水土比1：4）直接提取熏蒸和不熏蒸土壤，提取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定；以熏蒸与不熏蒸土壤提取的有机碳增加量除以转换系数K EC(取值0.38)来计算土壤微生物碳。
Wu等（1990）通过采用熏蒸培育法和熏蒸提取法比较研究，成立了熏蒸提取——碳自动一路法测定土壤微生物碳。
该方式大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准确度。
林启美等（1999）对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比和氧化剂进行了改良，以提高该方式的测定结果的重复性和准确性。
对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数K EC的取值，有很多研究进行了大量的研究。
测定K EC值的实验方式有：直接法（加入培育微生物、用14C底物标记土壤微生物）和间接法（与熏蒸培育法、显微镜观测法、ATP法及底物诱导呼吸法比较）。
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近40年来，土壤微生物生物量的研究已成为土壤学研究热点之一。
由于土壤微生物的碳含量通常是恒定的，因此采用土壤微生物碳(Microbial biomass carbon, Bc)来表示土壤微生物生物量的大小。
测定土壤微生物碳的主要方法为熏蒸培养法（Fumigation-incubation, FI ）和熏蒸提取法（Fumigation-extraction, FE ）。
熏蒸提取法（FE 法）由于熏蒸培养法测定土壤微生物量碳不仅需要较长的时间而且不适合于强酸性土壤、加入新鲜有机底物的土壤以及水田土壤。
Voroney (1983)发现熏蒸土壤用0.5mol ·L -1K 2SO 4提取液提取的碳量与生物微生物量有很好的相关性。
Vance 等(1987)建立了熏蒸提取法测定土壤微生物碳的基本方法：该方法用0.5mol ·L -1K 2SO 4提取剂（水土比1：4）直接提取熏蒸和不熏蒸土壤，提取液中有机碳含量用重铬酸钾氧化法测定；以熏蒸与不熏蒸土壤提取的有机碳增加量除以转换系数K EC (取值0.38)来计算土壤微生物碳。
Wu 等（1990）通过采用熏蒸培养法和熏蒸提取法比较研究，建立了熏蒸提取——碳自动一起法测定土壤微生物碳。
该方法大幅度提高提取液中有机碳的测定速度和测定结果的准确度。
林启美等（1999）对熏蒸提取-重铬酸钾氧化法中提取液的水土比以及氧化剂进行了改进，以提高该方法的测定结果的重复性和准确性。
对于熏蒸提取法测定土壤微生物生物碳的转换系数K EC 的取值，有很多研究进行了大量的研究。
测定K EC 值的实验方法有：直接法（加入培养微生物、用14C 底物标记土壤微生物）和间接法（与熏蒸培养法、显微镜观测法、ATP 法及底物诱导呼吸法比较）。
土壤微生物数量测定方法整理
土壤微生物的别离鉴定及数量测定（一）培养基的制备Ⅰ测定微生物总量培养基：1. 细菌培养基〔牛肉膏蛋白胨琼脂培养基〕牛肉膏Beefextract5.0g蛋白胨Peptone10.0gNaCI5.0g蒸馏水H201000m1琼脂15～20gPH7.2~7.4制备步骤：⑴ 在100 mL小烧杯中称取牛肉膏5.0g，蛋白胨10.0g，加50 mL蒸馏水，置电炉搅拌加热至牛肉膏，蛋白胨完全溶解.⑵ 向小铝锅中参加500 mL蒸馏水，将溶解的牛肉膏，蛋白胨倒入铝锅中并用自来水洗2～3次.参加5.0gNaC1，在电炉上边加热边搅拌.⑶ 参加洗净的琼脂条，继续搅拌，加热至琼脂完全熔化，补足水量至1000 mL.⑷用NaOH或HC1调至pH7.0. 用酸度计或用玻棒沾少许液体用精细pH试纸测定其pH值，并用10％NaOH 调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。
一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。
⑸根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶。
注意分装时防止培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。
如液体培养基，应装试管高度的1/4左右；固体培养基装试管高度的1/5左右；装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。
，塞好棉塞，装入小铁丝筐，然后用旧报纸将棉塞局部包好. 标签说明培养基的名称、配制日期等。
⑹ 高压蒸汽灭菌，用0.1Mpa〔15lb/in2〕121℃灭菌〔15-20〕30min.2.放线菌培养基〔改进高氏1号琼脂培养基〕可溶性淀粉20gKNO3 1gK2HPO40.5gMgSO4• 7H2O 0.5gNaCl 0.5g原0.05gFeSO4• 7H2O 0.01gpH 7.2-7.4制备步骤：. .jz.（1）计算根据配方计算各种药品所需要的量，然后再分别称量。
（2）称量准确称量各种成分。
（3）溶化配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入少许沸水中，在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到1000ml，调PH〔可不调〕。
生物量碳氮测定方法(熏蒸提取法)
一、土壤微生物生物量碳测定方法（熏蒸提取－碳自动仪器法）1、试剂配制去乙醇氯仿制备：普通氯仿试剂一般含有少量乙醇作为稳定剂，使用前需除去。
将氯仿试剂按1 : 2（v : v）的比例与去离子水或蒸馏水一起放入分液漏斗中，充分摇动1min，慢慢放出底层氯仿于烧杯中，如此洗涤3次。
得到的无乙醇氯仿加入无水氯化钙，以除去氯仿中的水分。
纯化后的氯仿置于暗色试剂瓶中，在低温（4℃）、黑暗状态下保存（Williamss等，1995）。
注意氯仿具有致癌作用，必须在通风橱中进行操作。
硫酸钾提取剂[c（K2SO4）= 0.5mol L-1]：87.12分析纯硫酸钾，溶于1L去离子水。
六偏磷酸钠溶液[ρ( NaPO3)6 = 5g 100ml-1，pH2.0]：50.0g分析纯六偏磷酸钠缓慢加入盛有800ml 去离子水的烧杯中（注意：六偏磷酸钠溶解速度很慢，且易粘于烧杯底部结块，加热易使烧杯破裂），缓慢加热（或置于超声波水浴器中）至完全溶化，用分析纯浓磷酸调节至pH2.0，冷却后定容至1L。
过硫酸钾溶液[ρ（K2S2O8）= 2g 100ml-1]：20.0g分析纯过硫酸钾溶于去离子水，定容至1L，避光存放，使用期最多为7d。
磷酸溶液[ρ（H3PO4）= 21 g 100ml-1]：37ml 85%分析纯浓磷酸（H3PO4，ρ= 1.70g ml-1）与188ml 去离子水混合。
邻苯二甲酸氢钾标准溶液[ρ（C6H4CO2HCO2K）= 1000mg C L-1]：2.1254g分析纯邻苯二甲酸氢钾（称量前105℃烘2～3h），溶于去离子水，定容至1L。
2、仪器设备土壤筛（孔经2mm）、真空干燥器（直径22cm）、水泵抽真空装置（图6–1）或无油真空泵、pH–自动滴定仪、塑料桶（带螺旋盖可密封，体积50L）、可密封螺纹广口塑料瓶（容积1.1L）、高温真空绝缘酯（MIST–3）、烧杯（25、50、80ml）。
碳–自动分析仪（Phoenix 8000）、容量瓶（100ml）、样品瓶（40ml）。
土壤微生物磷测定方法
土壤微生物磷测定方法
嘿，你知道土壤微生物磷咋测定不？那可老重要啦！先说说步骤哈。
得采集土壤样本，这就像寻宝一样，得找对地方。
然后把样本处理一下，就跟给它打扮打扮似的。
接着用特定的试剂和方法来检测，这可不能马虎，要是弄错了，那可就抓瞎啦！注意事项也不少呢，操作的时候得小心，别把试剂弄洒了，那不得心疼死。
而且得严格按照步骤来，不然结果不准，那可咋办？
安全性方面呢，只要按照规范操作，一般没啥问题。
就像开车遵守交通规则就不会出事一样。
稳定性也很重要啊，要是结果一会儿一个样，那还咋判断呢？
应用场景可多啦！农业上可以看看土壤肥力咋样，要是微生物磷少了，赶紧想办法补充啊！就像人饿了要吃饭一样。
优势也不少呢，能准确了解土壤状况，对症下药。
我就知道一个地方，通过测定土壤微生物磷，调整了施肥方案，那效果，杠杠的！庄稼长得可好了。
所以啊，土壤微生物磷测定很有用，赶紧试试吧！。
土壤微生物量碳氮测定方法
1.23.1 土壤微生物碳的测定——TOC-V CPH有机碳分析仪一、方法原理土壤有机碳的测量方法主要有两种，即氯仿熏蒸培养法和氯仿熏蒸—直接浸提法。
1．氯仿熏蒸培养法[1]：土壤经氯仿熏蒸后再进行培养，测定培养时间内熏蒸与未熏蒸处理所释放CO2之差来计算土壤生物量碳。
2．氯仿熏蒸直接浸提法[2]：土壤经氯仿熏蒸后直接浸提进行，测定浸提液中的碳含量，以熏蒸和不熏蒸土壤中总碳的差值为基础计算土壤微生物含碳量。
直接提取法与氯仿熏蒸培养法相比，直接提取法具有简单、快速、测定结果的重复性较好等优点。
直接提取法测定土壤微生物量的碳的方法日趋成熟。
现在氯仿熏蒸—K2SO4提取法已成为国内外最常用的测定土壤微生物碳的方法。
本实验以氯仿熏蒸直接浸提法为例介绍土壤微生物量碳氮的浸提与测定。
二、主要仪器振荡机、真空干燥器、真空泵、TOC-V CPH有机碳分析仪。
二、试剂1．氯仿（去乙醇）：普通氯仿一般含有乙醇作为稳定剂，使用前要去除乙醇。
将氯仿按照1︰2（v/v）的比例与蒸馏水一起放入分液漏斗中，充分振动，慢慢放出底部氯仿，重复3次。
得到的无乙醇氯仿加入无水CaCl2，以除去氯仿中的水分。
2．0.5 mol·L-1 K2SO4浸提液：43.57 g分析纯K2SO4 定溶至1 L。
四、操作步骤称取过2 mm筛的新鲜土样12.5 g六份，置于小烧杯中。
将其中三份小烧杯放入真空干燥器中，干燥器底部放3个烧杯，其中一个放氯仿，烧杯内放少许玻璃珠（防爆），另一个放水（保持湿度），再放一杯稀NaOH。
抽真空时，使氯仿剧烈沸腾3-5 min，关掉真空干燥器阀门，在暗室放置24 h。
熏蒸结束后，打开干燥器阀门，取出氯仿，在通风厨中使氯仿全部散尽。
另三份土壤放入另一干燥器中，但不放氯仿。
将熏蒸的土样全部转移至150 mL三角瓶中，加入50 mL 0.5 mol·L-1 K2SO4 (土水比为1:4)，振荡30 min，过滤。
凯氏定氮法：土壤微生物量氮测定
土壤微生物量氮的测定方法1.试剂配制：(1)混合催化剂：按照硫酸钾：五水硫酸铜：硒粉=100：10：1，称取硫酸钾100g、五水硫酸铜10g、硒粉1g。
均匀混合后研细,贮于瓶中。
(2)密度为1.84浓硫酸。
(3)40%氢氧化钠：称400g氢氧化钠于烧杯中，加蒸馏水600ml，搅拌使之全部溶解定容至1L。
(4)2%硼酸溶液：称20g硼酸溶于1000ml水中，再加入20ml混合指示剂。
（按体积比100:2加入混合指示剂）(5)混合指示剂：称取溴甲酚绿0.5g和甲基红0.1克,溶解在100ml95%的乙醇中,用稀氢氧化钠或盐酸调节使之呈淡紫色，此溶液pH应为4.5。
(6)0.01mol的盐酸标准溶液：取比重1.19的浓盐酸0.84ml，用蒸馏水稀释至1000ml，用基准物质标定之。
(7)0.5M K2SO4溶液：称取K2SO4 87.165g溶解于蒸馏水中，搅拌溶解，（可加热）定容至1L。
(8)去乙醇氯仿的配制：在通风柜中，量取100毫升氯仿至500毫升的分液漏斗中，加入200毫升的蒸馏水，加塞，上下振荡10下，打开塞子放气，而后加塞再振荡10下，反复3次，将分液漏斗置于铁架台上，静止溶液分层，打开分液漏斗下端的阀，将下层溶液（氯仿）放入200毫升的烧杯中，将剩余的溶液倒入水槽，用自来水冲洗。
再将烧杯中的氯仿倒入分液漏斗中，反复3次。
将精制后的氯仿倒入棕色瓶中，加入无水分析纯的CaCl2 10g，置于暗处保存。
2.试验步骤：。
（1）制样：称取新鲜土壤（30.0g）于放置烧杯中，加约等于田间持水量60%水在25℃下培养7~15d。
取15.0g土于烧杯，置于真空干燥器中，同时内放一装有用100ml精制氯仿的小烧杯，密封真空干燥器，密封好的真空干燥器连到真空泵上，抽真空至氯仿沸腾5分钟，静置5分钟，再抽滤5分钟，同样操作三次。
干燥器放入25℃培养箱中24小时后，抽真空15-30分钟以除尽土壤吸附的氯仿。
按照土：0.5M K2SO4=1:4(烘干土算，一般就是湿土：0.5M K2SO4=1：2)，加入0.5M K2SO4溶液（空白直接称取15.0g土，加同样比例0.5M K2SO4溶液）震荡30分钟，过滤。
土壤微生物量碳氮测定方法
土壤微生物量碳氮测定方法土壤微生物量碳氮测定是评估土壤有机质含量和土壤微生物活性的重要方法之一、它可以帮助我们了解土壤中有机质的分解和氮素的转化过程，对土壤健康和养分循环有重要意义。
下面将从土壤微生物量碳氮的测定原理、方法以及应用等方面进行详细的阐述。
一、原理与意义：土壤微生物量碳（Microbial Biomass Carbon, MBC）是土壤中微生物所含有的碳量，包括微生物本体的碳和微生物产生的胞外有机物的碳。
土壤微生物量氮（Microbial Biomass Nitrogen, MBN）则是土壤微生物所含有的氮量。
土壤微生物量碳氮的测定主要利用的是微生物生物量对有机碳氮的吸收和蓄积能力，在土壤中有机质降解与微生物活动之间存在着紧密的关系。
测定土壤微生物量碳氮的主要意义在于：1.评估土壤质量：土壤微生物是土壤中的重要组成部分，对土壤生态系统的功能发挥起着重要作用。
通过测定土壤微生物量碳氮，可以判断土壤中的微生物含量和活性，进而评估土壤的质量和健康状况。
2.预测土壤肥力：土壤微生物参与了有机质的降解和养分的转化过程，因此它们的代谢活动直接影响土壤肥力。
测定土壤微生物量碳氮可以预测土壤中有机质的分解速率和养分的供应状况，为合理施肥提供依据。
3.监测土壤生态系统的健康：土壤微生物对环境变化非常敏感，其数量和活性的变化可以反映土壤生态系统的稳定性和健康状况。
通过定期测定土壤微生物量碳氮，可以监测土壤生态系统的变化，帮助我们了解土壤的自净能力和恢复能力。
二、测定方法：目前，常用的土壤微生物量碳氮测定方法主要有不同源于Chen et al. (1998) 和Jenkinson及仪器方法（如戴弗尔仪器、百威仪器等）。
1.直接抑制剂法：该方法基于土壤微生物量碳氮含量对微生物生长的抑制作用。
通过向土壤样品中加入抑制剂（如消费抑制剂氟愈刀或氯化丙夫），抑制土壤中微生物的生长，然后测定加入抑制剂后土壤中微生物量碳氮的变化。
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土壤微生物测定 土壤微生物活性表示土壤中整个微生物群落或其中的一些特殊种群状态，可以反映自然或农田生态系统的微小变化。
土壤微生物活性的表征量有:微生物量、C/N 、土壤呼吸强度和纤维呼吸强度、微生物区系、磷酸酶活性、酶活性等。
测定指标：
1、土壤微生物量(MierobialBiomass ，MB)
能代表参与调控土壤能量和养分循环以及有机物质转化相对应微生物的数量，一般指土壤中体积小于5Χ103um 3的生物总量。
它与土壤有机质含量密切相关。
目前，熏蒸法是使用最广泛的一种测定土壤微生物量的方法阎，它是将待测土壤经药剂熏蒸后，土壤中微生物被杀死，被杀死的微生物体被新加人原土样的微生物分解(矿化)而放出CO 2，根据释放出的CO 2:的量和微生物体矿化率常数Kc 可计算出该土样微生物中的碳量。
因此碳量的大小就反映了微生物量的大小。
此外，还有平板计(通过显微镜直接计数)、成份分析法、底物诱导呼吸法、熏蒸培养法(测定油污染土壤中的微生物量—碳。
受土壤水分状况影响较大，不适用强酸性土壤及刚施用过大量有机肥的土壤等)、熏蒸提取法等，均可用来测定土壤微生物量。
熏蒸提取-容量分析法
操作步骤：
（1）土壤前处理和熏蒸
（2）提取
将熏蒸土壤无损地转移到200mL 聚乙烯塑料瓶中，加入100mL0.5mol ·L -1K 2SO 4（图水比为1:4；w ：v ），振荡30min （300rev ·min -1），用中速定量滤纸过滤于125mL 塑料瓶中。
熏蒸开始的同时，另称取等量的3份土壤于200mL 聚乙烯塑料瓶中，直接加入100mlL0.5mol ·L -1K 2SO 4提取；另作3个无土壤空白。
提取液应立即分析。
（3）测定
吸取10mL 上述土壤提取液于150mL 消化管（24mm х295mm ）中，准确加入10mL0.018mol ·L -1K 2Cr 2O 7—12mol ·L -1H 2SO 4溶液，加入2~3玻璃珠或瓷片，混匀后置于175±1℃磷酸浴中煮沸10min （放入消化管前，磷酸浴温度应调至179℃，放入后温度恰好为175℃）。
冷却后无损地转移至150mL 三角瓶中，用去离子水洗涤消化管3~5次使溶液体积约为80mL ，加入一滴邻菲罗啉指示剂，用0.05mol ·L -1硫酸亚铁标准溶液滴定，溶液颜色由橙黄色变为蓝色，再变为红棕色，即为滴定终点。
（4）结果计算
有机碳量（mg ·C ·kg -1）W
f V -V M 10412
03）（⨯=
式中M为FeSO4溶液浓度；V0、V分别为空白和样品消耗的FeSO4溶液的体积（mL），f为稀释倍数；W为烘干土质量（g）；
土壤微生物生物量碳：Bc=Ec/k EC
式中Ec为熏蒸与未熏蒸土壤的差值；k EC为转换系数，取值0.38
2、菌种测定
土壤微生物种类丰富，主要有细菌、真菌及放线菌等。
各菌种在细胞代谢中起着特殊的重要作用。
细菌用牛肉汁蛋白陈琼脂培养基平板混菌法培养测定；真菌用马丁氏琼脂培养基平板混菌法培养测定；放线菌用高氏1号琼脂培养基平板混菌法或淀粉按培养基稀释平板法培养测定。
3、土壤呼吸强度和纤维分解强度
土壤呼吸强度和纤维分解强度是土壤微生物活性的重要标志，反映了土壤中微生物活性及对有机质残体分解的速度和强度。
纤维素分解强度采用埋片法；呼吸强度采用碱吸收滴定法。
土壤微生物活性用土壤呼吸CO2测定法（5g鲜土于310mL试剂瓶中，22℃24h测CO2释放量(用exH23os红外CO:分析仪测定)）。
直接测定土壤呼吸的方法基本可分为静态气室法、动态气室法和微气象法三种。
密闭静置培养法
原理：
CO2+KOHK2CO3+H2
K2CO3+KOHKHCO3+KCl+H2O
KHCO3+HClKCl+H2CO3
操作步骤：
称取20g新鲜土（为了增强呼吸作用，土壤中可加入葡萄糖，6mg·g-1）于500mL的广口瓶中，将土壤加水润湿到最大持水量的70%，用50mL小烧杯，注入20mL0.1M的KOH溶液，然后密闭广口瓶，于28℃恒温培养24h。
然后取出，以酚酞为指示剂，用0.1M的HCl溶液滴定。
领取同样容积的广口瓶，同上处理，不加土壤作为对照。
根据两者之差，求出消耗用于吸收CO2的KOH量。
4、酶活性测定
土壤酶大多数来自土壤微生物，在土壤中已发现50—60种酶，它们参与并催化土壤中发生的一系列复杂的生物化学反应。
如水解酶和转化酶对土壤有机质的形成和养分循环具有重要的作用。
已有研究表明，土壤酶活性和土壤结构参数有很好的相关性。
土壤微生物酶主要有脱氢酶、磷酸酶、精氨酸酶及芳基硫酸酯酶等。
4.1脱氢酶活性的测定
通过测定呼吸链脱氢酶活性可表征微生物代谢活力大小。
郑志永等通过对氯化碘硝基四氮哇(INT)比色法反应条件的研究，确定了呼吸链脱氢酶活性的测定方法。
4.2过氧化氢酶活性的测定（本部做，需要冰箱）
土壤过氧化氢酶采用高锰酸钾容量法，以20min后1g土壤消耗KMnO4(0.11~lmol·L-1)的量
表示，或运用注入土壤中的过氧化氢在反应后剩余量的方法测定。
操作步骤：
称取5g新鲜土壤样品于100mL三角瓶中。
加入甲苯0.5mL，摇匀，与0~4℃冰箱中放置半小时。
取出，立刻加入25mL冰箱贮存的含3%H2O2的水溶液。
充分摇匀后，再放冰箱中半小时。
取出，迅速加入2NH2SO44mL，用0.1NKMnO4溶液滴定。
根据对照和试样消耗高锰酸钾的差，求出相当于分解的H2O2的量，酶活性以1g土壤、1h内消耗KMnO4的量计算。
4．3尿酶活性的测定
尿酶采用钠氏比色法，常用1g土，在37℃培养24h后释放出的氨态氮的含量(mg)表示；
操作步骤：
（1）标准曲线的绘制：
分别取0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5mL50ug/mL的氮标准溶液于25mL容量瓶中。
用水稀释至10mL，摇匀，加入1mL酒石酸钾钠，0.8mL钠氏剂，摇匀。
慢慢加入4mL1MNaOH溶液，稀释至刻度，显色10min后，测定吸光度值。
（2）称取5g土壤，置于100mL三角瓶中。
加入10mLpH6.7磷酸缓冲溶液及0.5mL甲苯，混合处理15min后，加入10mL10%尿素溶液（对照以水代替），置于37℃恒温箱中，培养48h。
（3）培养结束后，取出，加入20mL1MKCl溶液，充分摇匀10min。
将悬浊液用滤纸过滤，吸取经过稀释的滤液1mL，按绘制标准曲线的操作，加入酒石酸钾钠，钠氏剂等进行显色，根据标准曲线查出氨氮含量。
计算土壤尿酶的活性。
4.4蛋白酶活性的测定
蛋白酶活性用明胶在磷酸盐缓冲液(pH=7.4)中水解生成甘氨酸的方法测定；
铜盐比色法
方法原理：
本法以精胶为基质，酶解后所释放出的氨基酸使其与铜盐反应形成蓝色复合物。
用比色法测定颜色深度。
操作步骤：
（1）标准曲线的绘制
取0~20mL50ug/mL甘氨酸标准溶液，用蒸馏水加之20mL，然后加入20mL新配制的铜—磷酸盐溶液，显色后于650nm处，测定吸光度。
（2）测定操作
称取5g土壤置于100mL三角瓶中。
加入甲苯2mL，放置15min。
计入20mL1%精胶溶液。
于37℃恒温箱中，培养24h。
与此同时，以水代替基质作为对照。
培养结束后，将悬液过滤，取10mL滤液，加水10mL，铜-磷酸盐溶液20mL，显色后，测定吸光度，根据标准曲线法计算NH2-N（甘氨酸？）的含量。
5、微生物功能多样性
用biolog碳素分析法测定。