结核病实验室诊断技术综合应用
上海市结核病实验诊断操作规程完整
结核治疗疗程。 ✓ 定义二： • 痰涂片检查阴性但痰培养阳性（涂阴培阳） • 医师临床诊断为结核病并决定实施一个完整的抗
结核治疗疗程。
相关术语
结核病实验诊断操作规程
➢ 耐药结核病（drug-resistant tuberculosis, DR-TB）： 体外试验证实结核患者感染的结核分枝杆菌对一种或多 种抗结核药物耐药。
结核病是一种严重危害人民健康的慢性 传染病，目前全球有约20亿人被感染， 每年新出现结核病患者约800-1000万， 每年因结核病死亡人数约为200-300万。 我国结核病患病人数居世界第二位，仅次 于印度。我国结核病年发病人数约为130 万，因结核病死亡人数每年达13万，超 过其他传染病死亡人数的总和。结核病是 我国重点防控的重大传染性疾病之一。
室内质量控制-涂片镜检
结核病实验诊断操作规程
➢定期记录、审核涂片结果，出现下列情况 时需要注意：
• 指定病人人群的阳性及阴性涂片率升高；
• 不同病人标本出现连续涂阳；
• 涂阳标本无分枝杆菌生长
• 涂阴标本固体培养基上分枝杆菌生长， 2+或以上。
室内质量控制-培养
结核病实验诊断操作规程
➢实验室要有成文的质控程序，需记录所 有QC试验的结果。失控时，应有恰当 的纠正措施，并记录结果。
结核病实验诊断操作规程
第一节 编写目的和应用范围
结核病实验诊断操作规程
➢根据我国的结核病防控体系，结核病的诊治工 作主要在定点医院内进行。
➢初次感染病人的症状往往不典型，存在轻症甚 至无症状的结核病，老年人的结核病症状容易 被其他疾病掩盖。这些病人的首诊医院往往不 是定点医院。
γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的应用及进展
结核病（tuberculosis， TB）是结核分枝杆菌（mycoba-cterium tuberculosis，MTB）感染引起的呼吸道传染病，目前该病疫情依然严峻。
据世界卫生组织（World Health Organization，WHO）估计，2017年全球结核病新发病例数为1 000万例，中国有88.9万例；全球有157万人死于结核病；全球23%的人口（约17亿）存在潜伏结核感染[1]。
结核分枝杆菌属胞内寄生菌，其免疫主要是以T细胞为主的细胞免疫，这也是结核病诊断的困难所在。
控制结核病的关键在于控制传染源，高特异度和高灵敏度的早期诊断技术及试剂对结核病的早期诊断，及时有效治疗，有效切断传染源，控制疾病流行至关重要。
当前结核病的众多诊断方法或多或少存在缺陷。
传统的痰涂片镜检灵敏度低，而分离培养法鉴定菌种及药敏结果所需时间较长（4~6周）[2]。
病理学检查取材不易、灵敏度低且鉴别诊断困难。
结核菌素皮肤试验（tuberculin skin test，TST）虽简便廉价，但其使用的抗原——结核菌素纯蛋白衍生物（PPD）与卡介苗（bacille Calmette-Guérin，BCG）和非结核分枝杆菌（nontuberculosis mycobacteria，NTM）之间存在交叉反应，特异度较低；TST依赖人体的免疫反应，对免疫受损人群灵敏度不足[3]；且TST耗时较长（48~72 h），易受操作者主观因素影响。
γ-干扰素释放试验(interferon gamma release assay，IGRA)作为一种新兴免疫学诊断方法，在控制结核感染及发病等方面得到迅速推广，且随着新的生物学标志物的寻找和IGRA方法学的改进，其在临床上具有广阔的发展前景。
1 IGRA原理和方法结核分枝杆菌中存在独有的“RD1”区域，医学界利用该基因区编码的抗原多肽作为特异性抗原，主要有早期分泌抗原靶分子6（early secreted antigenic target 6，ESAT-6）和培养滤液蛋白10（culture filtrate protein 10，CFP-10），有些产品在此基础上增加了TB7.7抗原多肽，体外刺激机体特异性效应T淋巴细胞，通过酶联免疫吸附试验或酶联免疫斑点试验（ELISA或ELISPOT）定量检测所释放的γ-干扰素水平，进而判定是否存在MTB，这便是IGRA的原理。
结核病实验室诊断技术进展
摘要:早期确诊和提高治愈率是控制结核病的现实目标。
结核病患者的发现率基本反映结核病发病趋势，而诊断技术决定了结核病患者的发现率水平。
当前对结核病的诊断主要依赖于患者的临床表现、影像学、病原学、血清抗体检测等技术。
近年来，结核病实验室诊断技术发展突飞猛进，然而，目前很多实验室对于结核病的诊断仍停留在痰涂片镜检、痰结核菌培养及PPD皮试等传统方法。
本文现将具有代表性的几项结核病实验室诊断新技术的进展进行综述。
关键词:结核分枝杆菌；实验室；诊断中图分类号R378.91+1，R52文献标识码A文章编号1674-1129(2012)06-0570-03doi:10.3969/j.issn.1674-1129.2012.06.017·综述·结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)引起的结核病是常见的人类传染病之一。
约三分之一的世界人口曾经感染MTB，亚洲地区感染者占全世界的三分之二。
据WHO估计，2007年全球约有927万新发结核患者，175万人死于结核病，中国是全球22个结核病高发国之一，发病人数130万，居世界第2位，仅次于印度[1，2]。
结核病的实验室诊断是发现传染源的主要途径和手段，是确定结核病诊断和化疗方案的重要依据，长期以来，结核病的实验室诊断主要依赖细菌学涂片和培养检查。
由于方法所限，严重影响了结核病的及时诊断，因此建立检测快速、灵敏度高、特异性强的诊断方法，对于结核病防治工作具有重要意义[3]。
现将近年来结核病实验室检测技术的进展综述如下。
１结核病病原菌检测技术1.1抗酸杆菌涂片镜检1.1.1萋-尼氏抗酸染色涂片萋-尼抗酸染色涂片镜检是经典的结核分枝杆菌检测方法，目前很多实验室仍然依靠此方法进行结核检测，但其灵敏度较低，仅20%~30%，而且此方法繁琐，假阳性和假阴性较高。
张立群对比了4种不同结核分枝杆菌检测方法，显示萋-尼抗酸染色涂片的阳性率为11.6%，灵敏度仅为26.3%[4]。
结核病分子诊断
3、耐药基因检测
多重耐药结核杆菌、广泛耐药结核杆菌的流行， 是结核病防治中的重大问题
耐药的主要原因是药物主要靶点的基因发生了 突变
检测这些耐药基因相关突变，可为临床治疗提 供依据：例如异烟肼耐药菌存在KatG基因突变 或缺失，突变模式为S315T。利福平耐药菌发生 发生了点突变、插入或缺失，突变形式为S531L、 H526Y等。
尿液 清晨第一次全部尿量或24小时尿沉渣
胸腹腔积液 尽快送检、离心
谢谢聆听！
结果判读
试验分四组：空白对照组、抗原组(ESAT-6和CFP10)、阳性对照组(植物血凝素PHA)。
通常正常结果：空白对照孔没有或有很少的斑点而 PHA对照孔斑点数超过20个。 空白对照孔斑点数超 过10个时结果被认为是“不确定”。当PHA对照孔 斑点数少于20个时，检测结果被认为是“不确定”。
如果抗原A和/或抗原B有应答，检测结果为“有反 应性”，参照以下标准：
空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔 的斑点数）-（空白对照孔斑点数）≥6；
空白对照孔斑点数为6-10个时且（抗原A或抗原B 孔的斑点数）≥2×（空白对照孔斑点数）；
检测结果为“无反应性”：不符合上述标准且 PHA对照孔正常。
还是死菌，也不能对疗效进行评价。
临床意义：
TB-DNA阳性主要见于：传统培养或涂 片阳性的患者，菌量多，有活力；涂片或培 养阴性的患者，患者菌量少，涂片或培养阳 性率低；经治疗后带有死菌或低活力菌的患 者；体内结核杆菌已死亡，但DNA尚未分 解。
TB-DNA阴性主要见于：非结核分枝 杆菌感染。非结核病患者；不排菌患者。
凡临床怀疑肺结核的患者，在送检痰涂片 和痰培养的同时，送检痰TB-DNA检查。
结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析
结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析快速准确地诊断出结核分枝杆菌感染是控制和治疗结核病的前提和关键。
多年来，结核杆菌的诊断技术在不断地发展和创新，近年来，一些针对结核杆菌检测的新方法陆续被报道，一些新型的诊断技术产品也陆续上市。
本资料综述了结核杆菌的主要诊断方法，并对目前国际市场上广泛应用的商业化诊断技术产品进行了简要分析。
标签：结核分枝杆菌；诊断技术；分析Advance in diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis and analysis of new diagnostic technologies and products in clinical applicationFENG?Meimei1??SU?Wenqin21.Haikou VTI Biological Institute,Haikou 570311,China;2.Department of Pharmacy,Hainan Medical College,Haikou 571199,China[Abstract] Fast and accurate diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection is the key and prerequisite to control and treatment tuberculosis.For many years,the diagnostic techniques of Mycobacterium tuberculosis have been developing and innovating.In recent years,some new techniques for Mycobacterium tuberculosis detection were reported and some new diagnostic products have been listed.This paper reviewed the main diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis,and analysed briefly the commercialized diagnostic products which are used widely in the international market now.[Key words] Mycobacterium tuberculosis;Diagnosis;Analysis结核分枝杆菌（mycobacterium tuberculosis，MTB）是引起结核病的病原菌，可侵犯全身各器官，以肺结核最多见。
IFN-γ释放试验（T-SPOT.TB）在结核病诊断中的应用
IFN-γ释放试验（T-SPOT.TB）在结核病诊断中的应用孔令和;柯云霞;高素香;杨剑;雷桂萍;史国香;黄洁【摘要】目的：探讨T淋巴细胞感染结核后IFN-γ释放斑点试验(T-SPOT.TB)在结核病诊断中的应用及价值。
方法采用T-SPOT.TB方法对疑诊或待排结核患者外周血液中释放IFN-γ的结核杆菌特异性淋巴细胞的测定。
结果 T-SPOT.TB方法的阳性率是83.1%(89/107)，结核菌素试验(tuberculin skin test,TST)的阳性率40.2%(43/107)，涂片找抗酸杆菌阳性率是25.6%(21/82)， TB-DNA的阳性率是9.4%(5/53)，分枝杆菌分离培养阳性率是21.4%(9/42)。
结论 T-SPOT.TB方法检测诊断结核性疾病敏感性为83.1%、特异性为95.2%；其阳性率明显高于TST、涂片找抗酸杆菌、TB-DNA、分枝杆菌分离培养，采用该方法检测T淋巴细胞感染结核IFN-γ释放快速敏感，特异性高，在结核性疾病诊断中具有重要价值。
%Objective To explore the application and value of T-SPOT.TB method in the diagnosis of tuberculosis. Methods T-SPOT.TB method was used in the detection of mycobacterium tuberculosis specific lymphocytes which released IFN-γin the TB patients' peripheral blood. Results The positive rates of T-SPOT.TB, TST, acid-fast bacilli finding in sputum smears, TB-DNA detection and mycobacterium cultivation were 83.1%(89/107),40.2%(43/107), 25.6 (21/82), 9.4%(5/53) and 21.4%(9/42), respec-tively. Conclusion The sensitivity of T-SPOT.TB for the diagnosis of tuberculosis is 83.1%, and the specificity is 95.2%, and the positive rate is higher than that of the other methods. Thus, T-SPOT.TB has important value in tuberculous disease diagnosis.【期刊名称】《实验与检验医学》【年(卷),期】2013(000)006【总页数】3页(P535-537)【关键词】结核病;T-SPOT.TB检测;IFN-γ;特异性;敏感性【作者】孔令和;柯云霞;高素香;杨剑;雷桂萍;史国香;黄洁【作者单位】九江市第三医院，江西九江332000;九江市第三医院，江西九江332000;九江市第三医院，江西九江332000;九江市第三医院，江西九江332000;九江市第三医院，江西九江332000;九江市第三医院，江西九江332000;九江市第三医院，江西九江332000【正文语种】中文【中图分类】R52;R378.91+1结核病是一种严重危害人民健康的慢性传染病，据WHO统计，全球有约20亿人感染结核分枝杆菌，每年约为200万死于结核病[1]。
痰涂片与固体罗氏(L-J)培养法在诊断肺结核中的应用效果
参考文献 ［员］ 陈磊援 分析尿常规检验中常用 4 项指标对老年高血压患者的
诊断价值［允］援 中国保健营养，圆园圆园，猿园（员员）：猿猿源援 ［2］ 郭绪平，崔小平援 尿常规检验中常用四项指标对老年高血压
中国药物与临床 2021 年 6 月第 21 卷第 12 期 Chinese Remedies & Clinics，June 2021，Vol.21，No.12
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相关疾病和糖尿病，所以开展尿常规检查的参考价值比较显 著。
基于正常机体的生理状态，尿液当中的白蛋白可以排出 体外的数量是很少的。当患者正常的机体状态受到不良情况 影响时，排出体外的白蛋白数量便会不断增加［8］。但是还没有 超出常规方法检查的规定水平，所以开展常规的手段可能很 难诊断出来。针对早期高血压患者，开展尿蛋白定量（24 h） 检测的敏感性比较高，在临床上可以将其当做是尿蛋白定量 的重要标准。患者在由于发生高血压疾病而出现肾脏功能受 损之后，肾脏摄取蛋白功能也会被影响。同时机体当中分解 溶酶体蛋白的速度不断减缓，代谢水平处于持续降低的水 平，这一改变会直接影响到患者 茁圆鄄酝郧 指标的变化结果。因 此，患者的机体发生肾脏病变之后，就需要开展这一指标的 检测了。晕粤郧 本质上是酸性水解酶，在机体当中肾近曲小管 以及前列腺位置是 晕粤郧 含量最高的位置，正常情况下这一 物质是无法通过肾小球的。当患者的肾脏功能发生异常之 后，就会导致 晕粤郧 活性比其他脲酶更高，所以检测 晕粤郧 水 平可以观察到患者出现的异样，了解到患者自身脲酶水平的 不同之处，提高检测的有效率。皂粤蕴月 指标则是对心血管疾病 衡量的重要危险因子之一，可以作为预测老年高血压疾病病 死率的衡量指标。正常情况下肾小球滤过的 琢员鄄酝郧 指标从 肾近曲小管重吸收或者代谢，当肾小管受到损伤时患者的这 一指标会增高。
结核菌素实验的原理和应用
结核菌素实验的原理和应用一、结核菌素实验的原理结核菌素实验，也称结核素试验或结核原液试验，是一种检测人体对结核菌的免疫反应的方法。
其原理主要基于以下两个方面：1.结核菌素：结核菌素是一种由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）提取的成分，主要成分为纯蛋白质。
结核菌素注射到人体后，如果人体对结核菌有免疫反应，就会产生特异性的结核菌素结核反应。
结核菌素实验主要是通过检测人体对结核菌素的免疫反应来判断人体是否感染结核菌。
2.皮肤过敏反应：结核菌素实验是通过观察人体皮肤对结核菌素的过敏反应来判断感染结核菌。
如果一个人感染了结核菌，那么在接种结核菌素后，他的皮肤就会出现局部的红肿和硬结，这种现象被称为结核菌素阳性。
二、结核菌素实验的应用结核菌素实验在医学上有着广泛的应用，主要包括以下几个方面：1.结核性脓肿的诊断：结核菌素实验可以帮助医生判断病人是否患有结核性脓肿。
结核性脓肿是一种结核病的并发症，通过结核菌素实验可以快速确定病人是否感染结核菌。
2.结核病的诊断和筛查：结核菌素实验是诊断结核病的常用方法之一。
通过结核菌素实验可以判断人体是否感染结核菌，并对结核病进行筛查和初步判断。
3.结核病的隔离和治疗：结核菌素实验不仅能够帮助医生诊断结核病，还可以用来判断感染结核菌的患者是否需要进行隔离治疗。
结核菌素实验可以帮助医生了解病人的感染情况，从而制定合理的治疗方案。
4.结核菌感染的评估和防控：结核菌素实验可以用来评估某一地区结核病流行的程度，帮助政府和卫生部门制定合理的防控策略。
通过结核菌素实验，可以更早地发现结核菌感染者，采取措施进行隔离治疗，减少疾病传播。
三、结核菌素实验的操作步骤结核菌素实验的操作步骤如下：1.准备工作：准备好结核菌素注射液、注射器、皮肤消毒液、酒精棉球等实验器材和消毒物品。
2.皮肤消毒：用皮肤消毒液清洁实验部位，通常选择前臂的外侧。
3.注射结核菌素：将结核菌素注射液从注射器中抽取一定剂量，将针头插入皮肤下约5mm，并缓慢注射结核菌素。