香蕉DNA的粗提取实验
DNA的粗提取与鉴定实验报告
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果， 导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等
（三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
2.提取鸡血细胞细胞核物质 20 m1 蒸馏水
3.溶解细胞核内的DNA
2 mo1／L 的 NaCl 溶液 40 mL
4.析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
5.滤取含DNA 的黏稠物
6.将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol／L 的 NaCl 溶液 20 mL
7.过滤含DNA 的 NaCl 溶液
8.提取含有杂质较少的DNA 9.DNA 的鉴定
冷却的 95％的酒精50 mL
A:(1)向试管中加入 2mol (2)加入 DNA (3)4 mL 二苯胺试剂
／L 的 NaCl 溶液 5mL
B:(1)向试管中加入 2mol ／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)4 mL 二苯胺试剂
目的 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧
⑨
①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三 利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离
（四） DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95 ％） ，静置2－ 3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起 丝状物，并用滤纸吸取上面的水
DNA的粗提取与鉴定51672
鉴定：将DNA丝状物溶于盛有5ml的2mol/LNaCl溶液中， 向试管中加4ml的二苯胺试剂，水浴加热。
结果：溶液变蓝。
被染成蓝色。
此外，蛋白酶能水解蛋白质而不影响DNA，洗涤剂能够
瓦解细胞膜，但对DNA没有影响，80℃以下温度不会使
DNA变性，都是DNA提取与鉴定时可利用的。
二、实验材料：DNA含量相对较高的生物组织，如鸡血、猪 肝、香蕉、菜花、洋葱等 三、实验过程 （一）破碎细胞，获取含DNA的滤液
动物细胞破碎较容易，如在鸡血细胞中加一定量的蒸馏 水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。
如植物材料则加洗涤剂和食盐进行研磨。 （二）去除滤液中的杂质
在滤液中加NaCl，使NaCl溶液物质的量浓度为2mol/L， 滤除不溶杂质，再调NaCl溶液到0.14mol/L，析出DNA，再 滤去溶液中的杂质，再用2mol/LNaCl溶液溶解DNA。
也可在滤液中加蛋白质酶分解蛋白质。
（三）DNA的析出与鉴定 析出：在含DNA的NaCl溶液中加冷却的酒精溶液，溶
溶解度
DNA的粗提取与鉴定
一、实验原理
0 0.14mol/L NaCl 浓度
1、DNA提取的原理：利用DNA在不同浓度的NaCl溶液
中溶解度不同，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而
使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。利用D与蛋白质进一步分离。
2、DNA的鉴定：在沸水浴的条件下，DNA遇二苯胺会
211265899_常见水果中DNA粗提取的对比研究
114 I FOOD INDUSTRY I常见水果中DNA粗提取的对比研究文 叶超 张宣2 刘萤2 蒋雨娴2 张旭梅2* 1.乐山师范学院生命科学学院；2.乐山师范学院教育科学学院萝、苹果、雪梨等，需要在称取后使用小型榨汁机将其榨成果泥。
②配制提取液：取4个100mL 的烧杯，每个烧杯中均加入8g 洗涤精、80mL 纯净水、3.2g 加碘食盐，并用玻璃棒缓慢搅拌均匀。
③配制混合溶液：将4份提取液分别倒入装有水果泥的密封袋中，并按压1分钟左右，使之混合均匀。
④过滤：取4个玻璃杯，并编号标记为1、2、3、4号；取4个漏斗，在漏斗中分别垫上一层纱布，将混合溶液分别过滤到1号、2号、3号、4号烧杯中，静置2分钟。
⑤加入酒精：沿着玻璃杯壁，分别向1号-4号烧杯中缓慢地加入与滤液等体积的75%的常温酒精、75%的冷藏酒精、常温的无水乙醇、冷藏的无水乙醇。
⑥观察实验现象：静置几分钟，观察实验现象。
4.实验注意事项步骤①中水果要尽可能压成泥状。
通过外界压力物理破坏细胞壁，使细胞尽可能彼此分离，以便在过滤时得到更多的果汁。
制作不同水果的果泥制取均可使用榨汁机，为后期提取更多的DNA 提供可能。
步骤②中提取液中加盐是为了促进DNA 的溶解，使DNA 溶解聚集。
当加入的盐溶液浓度过低时，只有部分DNA 形成DNA 钠盐而聚合，会造成DNA 沉淀不完全；当加入的盐溶液浓度过高时，其效果同样不佳，故而需要控制盐的浓度，适当的盐浓度能使DNA 充分溶解，使杂质沉淀。
步骤③中芒果、香蕉等水果组织本文以常见水果为实验材料，对比了不同酒精温度、不同酒精浓度对常见水果中DNA 粗提取的影响，结果显示，常温状态下75%的酒精处理最佳，选择柠檬作为材料，提取出的DNA 沉淀状态好，丝状结构清晰、颜色浅且透明，故柠檬是最佳的实验材料，其次是沃柑、夏橙、芒果、草莓等材料。
1.引言“DNA 的粗提取与鉴定”是高中生物学选择性必修3《生物技术与工程》第3章第1节“重组DNA 技术的基本工具”中的探究实践实验，该实验的开展可帮助学生在必修2“DNA 的结构和功能”的学习基础上，进一步认识DNA 的物理和化学性质，建构《普通高中生物学课程标准（2017年版2020年修订）》中强调的“基因工程赋予生物新的遗传特性”与“遗传信息控制生物性状，并代代相传”等概念，亦是开展分子生物学研究的基础。
DNA的粗提取和鉴定课件高二下学期生物人教版选择性必修3
DNA耐高温
对照组
实验组
水浴 加热
例1 若从植物细胞中提取DNA，发现实验效果不好，如看不到丝状沉
淀物、用二苯胺鉴定时不显示颜色反应等，其可能的原因是
①植物细胞中DNA含量低 ②研磨不充分 ③过滤不充分 ④95%冷酒
精的量过大
A.①② B.③④
C.①④
√D.②③
选项 A
B
√C
D
试剂 研磨液 2 mol·L－1 NaCl溶液 冷却的酒精
2.试剂： ①研磨液 ——含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl ②体积分数为95%的酒精 ——析出DNA
③2mol/L 的NaCl溶液 ——溶解DNA ④二苯胺试剂 ——鉴定DNA，要现配现用
⑤蒸馏水
三、方法步骤 （视频）
三、方法步骤
1．称取约30 g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入 10 mL研磨液，充分研磨。 研磨的目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中
√D.乙组实验不成功仅因为在鉴定时加入了双缩脲试剂
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5.(2021·山东潍坊高二期中)多种实验材料都可以用于DNA的粗提取与鉴 定，用香蕉也可以取得较好的实验效果，下列操作正确的是 A.向剪碎的香蕉果肉组织中加入蒸馏水，以释放核DNA B.经研磨后，将研磨液离心5 min，取沉淀物进行下一步操作
二苯胺试剂
操作 与生物材料混合
与提取出的DNA混合
加入到离心后的上清液中 加入到溶解有DNA的 NaCl溶液中
作用 提取溶解DNA
溶解DNA 溶解DNA 鉴定DNA
跟踪训练
粗提取与鉴定实验中所依据的原理是
①DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同
②DNA易被甲紫溶液染成紫色
DNA的粗提取与鉴定改进实验
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实验方法步骤
1、破碎细胞，释放DNA
2、物——提取含杂质 较少的DNA 5、DNA的鉴定
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人教版高中生物第二册《试验修 订本·必修》和人教版高中生物选修1 《生物技术实践》都开设《DNA的粗提 取和鉴定》的实验教学。这是一个较 为复杂的生化实验，教材中的实验过 程存在着：操作步骤繁琐，操作要求 高；实验所需时间长，所用药品多、 量大；提取到的DNA的量少，观察效果 不佳等不足之处。为了更方便地开展 实验课，我们对原实验进行了改进。
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实验结果与结论
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实验自评：
① 本实验虽然得到的DNA纯度不够，但快速而且 也遵循实验原理。 ②实验材料、药品、仪器、设备用量减少，降低 了对环境的污染且降低成本。 ③实验材料具有广谱性，广东各地均易于取材， 价格便宜。一般的普通中学均能开设，从而有利 于该实验的普及推广。 ④步骤简单，操作易行，学生很容易掌握操作过 程，节省时间。 ⑤实验效果清晰，易于判断，达到了实验目的。
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香蕉DNA的粗提取实验
广州市第一一三中学马敏贤
一、实验目的
1、学习DNA的粗提取方法
2、学习DNA的化学鉴定方法
二、实验原理
1、研磨能够破坏细胞结构，释放其中含有的DNA，清洁剂中含有的SDS(十二烷基磺酸钠)具有使蛋白质变性，与DNA分离的作用。
2、DNA可以溶解在一定浓度的NaCl溶液中，
3、DNA在酒精中不溶解，所以加酒精后DNA可以析出
4、甲基绿为碱性染料，它易与聚合程度高的DNA结合呈现绿色。
三、材料器具
器具：研钵、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒（10ml 一支）、滴管、试管（20ml两支）
材料：香蕉、洗洁精、95%酒精、蒸馏水、0.015mol/L的NaCl溶液、2mol/l的NaCl溶液、甲基绿试剂
四、方法步骤
1、制备材料
切取一段2厘米长的香蕉，切碎，置于研钵内
加入2毫升洗洁精，充分研磨
加入10毫升2mol/l的氯化钠溶液，继续研磨
2、过滤
将研钵内的香蕉糊用漏斗和纱布过滤到烧杯中。
3、提取DNA
往上述液体中加入到约两倍体积的95%的酒精，轻轻摇动或用玻璃棒轻轻搅拌，很快就会看到白色纤维状粘稠物质从滤液中析出来，这就DNA粗提取物。
4、鉴定
方法一：取两支试管，分别编为1号、2号，各加入0.015mol/L的NaCl溶液2ml，将所得的白色絮状物质取出一部分放入1号试管，搅拌使其溶解，然后向两支试管中分别加入两滴甲基绿试剂，1号试管呈现绿色，则说明白色絮状物是DNA。
方法二：用玻璃棒卷起白色絮状物，并在白色絮状物中直接滴加甲基绿染液，用蒸馏水洗去浮色，絮状物呈现绿色，说明该白色絮状沉淀为DNA。
五、实验结构与结论
研磨能够破坏细胞结构，释放其中含有的DNA，清洁剂中含有的SDS(十二烷基磺酸钠)具有使蛋白质变性，与DNA分离的作用。
DNA在氯化钠溶液中的溶解度在2mol/L时最大，
因而在香蕉碎的研磨过程中加入洗洁精和2mol/L的氯化钠溶液，主要目的是让香蕉的DNA 与蛋白质分离并溶解。
由于DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。
利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。
在此过程中若用冷的酒精效果会更好，因为用冷的酒精可以降低DNA的溶解性，同时又可以增加DNA的韧性。
甲基绿对DNA具有亲和力，能使DNA呈现绿色。
利用此原理，若析出的白色絮状物能够与甲基绿反应呈现绿色，则该白色絮状物为DNA。
鉴定方法一中使用到0.015mol/LNaCl溶液，其作用是将所提取的DNA再次溶解，在此溶液中加入甲基绿，若溶液呈现绿色，则证明析出的白色絮状物为DNA.
六、创意自评
本实验是高中旧课本中利用鸡血细胞粗提取DNA的改良实验，由于实验步骤不是特别复杂，因而我认为可以作为课外活动的实验安排在七年级上册第二单元第二章第二节细胞核是遗传信息库后面。
让学生通过自己动手操作对DNA进行粗提取，化微观的、抽象的内容为直观地、实在的物质，让学生对DNA有一个直观的认识，亲身感受到DNA的真实存在。
由于DNA在酸性环境下遇二苯胺经沸水浴后会染成蓝色，在传统实验中往往都将二苯胺作为鉴定DNA的试剂。
但是芳香胺很毒而且容易渗入皮肤，无论吸入它的蒸汽，或皮肤与之接触都能引起中毒。
二苯胺属于芳香胺，也有上述性质，同时在使用过程中会挥发出刺激性的有毒蒸汽，实验后的废液对环境的污染很大，并且持续时间也很长。
出于对学生身体健康和环境保护角度的考虑，本实验采用了甲基绿对粗提取的DNA进行鉴定。
同时由于二苯胺法鉴定DNA需要对试管进行沸水浴，甲基绿鉴定法则不需要加热，简化了实验操作步骤。