基因融合检测的金标准
BCR-ABL概述
继续使用相同的TKI药物 更换可替代的TKI药物 继续使用相同的TKI药物 继续使用相同的TKI药物或更换可替代的TKI药物
加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时） 更换可替代的TKI药物 更换可替代的TKI药物
加大伊马替尼的使用量，最大可至800mg。（在没有可替代的TKI药物时） 继续使用相同的TKI药物 更换可替代的TKI药物 更换可替代的TKI药物
ABL激酶区突变种类
伊马替尼耐药机制中，主要是BCR-ABL点突变，超过 90%，可分为4 类 ：
在 ATP 结合位点形成突变( P-loop) 、 发生于激活环，阻止形成伊马替尼结合所需的构象激酶 发生于催化区 直接损害伊马替尼结合
NCCN推荐BCR-ABL激酶突变分析的检测规范
2%-5%的儿童 ALL 患者中。
BCR-ABL
• 根据BCR基因的断裂点不同，可分为 m-BCR（p190），M-BCR(p210)，uBCR(p230)三种。
在30-50%的成人ph+的ALL，20-30% 儿童ph+的ALL病例中BCR/ABL融合基 因是p210型的。 60%的ph+的ALL患者的BCR-ABL融合 基因是p190型的 。 其中P230融合基因非常罕见。 p190刺激细胞增殖的能力比p210要 强，病情发展快、恶性程度更高，
e1a3
测序结果：
采用VCP化疗方案联合伊马替尼治 疗1个月后，BCR-ABL融合基因转阴， 进一步证实e1a3对TKI敏感。
e14a3和e19a2
伴不典型 BCR-ABL 融合基因 的CML发病率极低，酪氨酸 及酶抑制剂或 HSCT 都 可 以 取得疗效。
实例分析：e13a3
融合pcr的原理
融合pcr的原理融合PCR，即融合聚合酶链反应，是一种用于检测和分析DNA序列的重要技术。
它结合了传统PCR技术和融合技术的优势，能够在更短的时间内高效地扩增目标DNA序列，并能够对扩增产物进行直接测序与分析。
PCR技术是一种通过反复进行DNA的扩增来快速复制目标DNA序列的方法。
它利用了DNA的特性，即在一定条件下，DNA链可以被DNA聚合酶逆向合成为两条新的互补链。
PCR反应体系中包含目标DNA的引物、DNA聚合酶、dNTPs（脱氧核苷酸三磷酸盐）和缓冲液等组分。
通过一系列的温度变化，PCR反应可分为三个步骤：变性、退火和延伸。
变性步骤将DNA双链解开，退火步骤使引物与目标DNA序列特异性结合，延伸步骤利用DNA聚合酶合成新的DNA链。
通过多次循环这三个步骤，可以迅速扩增目标DNA序列。
融合PCR在传统PCR技术的基础上进行了改进和优化，引入了融合技术。
融合技术是一种通过引入短的寡核苷酸片段来增强PCR扩增的效率和特异性的方法。
在融合PCR中，引物的两端分别添加了融合片段，这些融合片段与目标DNA序列的两端相互衔接，形成了一个闭环结构。
这种闭环结构可以通过DNA聚合酶的延伸活性很好地保持，并且可以在PCR反应中快速而特异地扩增目标DNA序列。
融合PCR的优势在于它能够在较短的时间内高效地扩增目标DNA 序列。
传统PCR技术需要多次循环才能达到足够的扩增效果，而融合PCR只需要进行几个循环即可得到满意的扩增产物。
此外，由于融合片段的引入，融合PCR具有更高的特异性，可以减少非特异性扩增产物的产生。
这对于一些需要高特异性的应用来说非常重要。
融合PCR不仅可以用于DNA的扩增，还可以用于其他应用，如测序和基因分型等。
在测序中，融合PCR可以直接扩增目标DNA序列，并将其用于测序反应，从而减少了测序样品的处理步骤和时间。
在基因分型中，融合PCR可以选择性地扩增目标基因的特定片段，从而实现基因型的快速检测和分析。
正常核型急性髓系白血病患者融合基因的检测
2009年4月第47卷第11期·论著·急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia，AM L）是一种以造血干/祖细胞获得性突变为特征的恶性克隆性疾病，大约55%的成人病例在诊断时出现非随机的克隆性染色体异常，儿童病例的检出率更高，但正常核型检出率在AM L中达到40%～47%[1]。
染色体畸变能在转录水平干扰造血调控、影响髓系细胞分化，因此快速、简便地获得患者染色体遗传缺陷的信息是临床亟待解决的问题。
本研究采用多重RT-PCR方法一次可同时检测29种基因重排，提高了隐匿性染色体易位的检出率，用于初诊时的筛选，对临床分型、预后判断及指导个体化治疗具有重要价值。
1材料与方法１．１对象选取2006年1月～2008年11月山西医科大学第二医院及山西省儿童医院血液科门诊或住院AM L初治患者60例，男30例，女30例，年龄1～70岁，中位年龄35岁。
所有病例均经临床、形态学、免疫学和组化染色确诊，分别为M1、M2、M3、M4各12例，M5、M6各6例。
所有病例均进行了染色体核型分析。
１．２方法1.2.1试剂和仪器TRIzol试剂盒购自美国Gibco/BRL公司；AM V逆转录酶、RNAsin、TaqDNA聚合酶购自美国Promega公司。
PCR扩增仪为美国Perkin-Elmer公司产品。
1.2.2细胞总RNA的提取和逆转录反应全部病例于初诊化疗开始前采取骨髓标本2～3mL，用淋巴细胞分离液提取单个核细胞，按Trizol一步法提取细胞总RNA，分光光度计测定A260值、A280值，以AM V逆转录酶系合成cDNA。
引物序列参照文献[1]方法设计。
逆转录广泛表达的转录因子（E2A）mRNA为内对照。
1.2.3多重巢式RT-PCR两轮均平行设置8组含有混合引物的多重PCR，同时检测29种染色体易位和畸变所形成的86种剪接形式。
每组检测的融合基因包括：第Ⅰ组inv（16）的CBF/M YH11；t（X；11）的M LL/AFX；t（6；11）的M LL/AF6；t（11；19）正常核型急性髓系白血病患者融合基因的检测赵瑾1*周永安1△苏丽萍1武坚锐2王恺1解菊芬1马莉1石磊3（1.山西医科大学第二医院血液科；2.山西省儿童医院检验科；3.山西医科大学第二医院风湿科，太原030001）[摘要]目的探讨急性髓系白血病（AM L）患者染色体畸变所形成的易位相关融合基因的临床和实验的关系。
ret融合基因
RET融合基因1. 简介RET融合基因是一种在人类癌症中常见的突变形式。
它是由于cancer cells中的RET基因与其他基因（通常是一个partner gene）发生重排而产生的。
这种重排会导致RET基因产生不正常的融合蛋白，进而促进肿瘤的发展和进展。
2. RET基因和其功能RET（rearranged during transfection）基因是人类基因组中一个重要的酪氨酸激酶受体编码基因。
它位于第10号染色体上，包含21个外显子。
RET受体在胚胎发育过程中起着关键作用，参与多个信号转导通路，如细胞增殖、分化和存活等。
3. RET融合基因的形成机制RET融合基因的形成主要通过染色体重排事件来实现。
这种重排通常涉及到一个伴侣（partner）基因，将其与RET基因连接在一起，形成一个新的复合蛋白。
具体来说，RET与伴侣基因之间发生染色体断裂，并且两个断裂点之间发生互换。
这种互换可能是由于DNA损伤修复机制的错误引起的。
当RET和伴侣基因发生重排后，产生的融合基因会编码一个异常的融合蛋白，具有激活酪氨酸激酶活性的特点。
4. RET融合基因与癌症RET融合基因在多种肿瘤中都被发现。
最早发现的是在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma）中，大约有10-20%的病例中存在RET/PTC （Papillary Thyroid Carcinoma）融合基因。
此外，RET融合基因也与肺癌、结直肠癌、儿童神经母细胞瘤等多种癌症相关。
这些融合基因能够通过激活RET信号通路来促进肿瘤细胞的增殖、存活和侵袭能力。
此外，它们还可能改变细胞分化状态和抑制细胞凋亡等。
5. RET融合基因检测对于患者而言，检测其体内是否存在RET融合基因具有重要意义。
这可以帮助医生确定治疗策略，并预测疾病的预后。
目前，常用的RET融合基因检测方法主要有荧光原位杂交（FISH）和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）。
alk基因突变融合断裂重排fish检测原理
alk基因突变融合断裂重排fish检测原理
ALK（Anaplastic Lymphoma Kinase）基因突变融合断裂重排FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）检测原理是一种用
于检测ALK基因突变融合及其断裂重排的分子生物学方法。
ALK基因突变融合断裂重排是一种常见的癌症基因变异形式，尤其在肺癌中较为常见。
这种突变融合导致ALK基因的活性
增强，从而促进癌细胞生长和增殖。
FISH检测原理利用荧光标记的DNA探针与靶序列进行杂交反应，通过观察荧光信号的存在与否来确定当前位置的目标序列。
对于ALK基因突变融合断裂重排的检测，常用的方法是使用
两个不同颜色的探针，一种用于检测ALK基因的正常状态，
另一种用于检测突变融合断裂重排。
具体操作步骤包括：
1.制备氟化物处理细胞标本，以使细胞核的DNA解离；
2.将荧光标记的DNA探针与解离后的DNA进行杂交反应，以便与目标序列特异性结合；
3.通过荧光显微镜观察探针结合的荧光信号，分析目标序列的
存在情况。
如果ALK基因突变融合断裂重排存在，FISH检测将会观察到针对突变融合断裂重排的荧光信号。
根据荧光信号的颜色和位置，可以确定是否存在ALK基因的突变融合断裂重排。
FISH检测原理通过荧光信号直接观察目标序列的存在与否，
具有高灵敏度和特异性，对于ALK基因的突变融合断裂重排的检测非常有效。
这种方法在肺癌等ALK突变相关癌症的诊断和治疗中起着重要的作用。
药物不良反应基因检测方法
药物不良反应基因检测方法
一、基因多态性检测
基因多态性检测是一种研究人类基因多态性与疾病易感性的关系的方法。
在药物不良反应方面，基因多态性可以影响个体对药物的代谢和反应能力，从而导致不同的药物不良反应。
因此，基因多态性检测对于预测和预防药物不良反应具有重要意义。
二、基因突变检测
基因突变是指基因DNA序列的碱基对发生改变，从而导致基因编码的蛋白质发生变化。
基因突变检测可以揭示与药物不良反应相关的突变基因及其变异等位基因，从而预测个体对特定药物的反应。
三、基因表达检测
基因表达是指基因转录和翻译的过程，即DNA序列转化为蛋白质的过程。
基因表达检测可以研究与药物不良反应相关的基因在特定组织或细胞中的表达情况，从而了解药物不良反应的分子机制。
四、基因融合检测
基因融合是指两个或多个基因合并成一个基因的现象。
基因融合检测可以研究与药物不良反应相关的基因融合现象，从而揭示新的药物不良反应机制。
五、基因测序检测
基因测序是指测定DNA序列的过程，可以用于检测与药物不良反应相关的基因变异和突变。
基因测序检测可以揭示个体基因组的变异和突变情况，从而预测个体对药物的反应和不良反应风险。
总之，以上五种方法都可以用于药物不良反应的基因检测，帮助医生和患者更好地了解个体对特定药物的反应和不良反应风险，从而制定更加个性化的治疗方案。
慢粒患者如何读懂BCRABL融合基因定量检测报告单？
慢粒患者如何读懂BCRABL融合基因定量检测报告单？如何看懂BCR/ABL融合基因定量检测结果？BCR/ABL基因定量结果是诊断慢粒、疗效监测甚⾄是停药试验的重要指标之⼀。
那么我们如何看这张报告呢？下图是⼀张BCR/ABL基因定量PCR报告：我们要关注的是其中结果的⼀栏，如图所⽰的检测结果表格：⾸先，该病⼈的BCR-ABL融合基因的类型是P210型（慢粒患者绝⼤部分都是P210型，极少数为P190型或其他罕见类型），检测结果是阳性的，表明存在P210型BCR-ABL融合基因。
其次：A.其中的BCR-ABL拷贝数（19866）就是慢粒癌基因在这份标本中的数量（因为只有慢粒细胞才有BCR-ABL融合基因表达），可以理解为⽩⾎病细胞在这份标本中的数量；B.ABL拷贝数（81851）就是这份标本中ABL基因的数量（所有细胞，包括⽩⾎病和正常细胞中都有ABL基因表达），所以ABL拷贝数可以理解为这份标本中所有细胞的数量；C.那么BCR-ABL/ABL（24.3%）就很好理解了：就是在这份标本中慢粒细胞所占的⽐例：19866/81851 = 24.3%；D. IS BCR-ABL/ABL：BCR-ABL/ABL国际标准值（IS），有这个国际标准值就说明这家实验室是经过国际认证的，发的报告可以和全世界其他认证实验室进⾏对⽐；如果没有，那么该实验室的报告就只能和⾃⼰的结果对⽐，甚⾄按照国际标准评估疗效都有⼀定偏差。
经过认证的实验室会获得⼀个转换因⼦（CF ），⽤本实验室测得的数值乘以这个转换因⼦得到的结果就是可以得到全世界承认的通⽤结果。
如武汉协和医院获得的转换因⼦是1.3，那么病⼈的IS BCR-ABL/ABL：24.3%×1.3=31.6%。
最终，我们是拿31.6%来进⾏疗效评估的。
（如何评估疗效，请参照《慢粒该如何监测疗效？》相关内容）。
当然，如果这是患者尚未⽤药前的检测结果，那么就表明患者的BCR/ABL基因是阳性的，可以确诊慢粒。
非小细胞肺癌融合基因检测临床实践中国专家共识(2023版)解读ppt课件
指南旨在规范融合基因检测技术在NSCLC临床实践中的应用 ，提高检测水平，为临床医生提供可靠的参考依据，从而更 好地指导患者治疗和改善预后。
指南的主要内容和结构
指南主要包括以下内容
融合基因检测的适应症、检测方法、检测流程、检测质量保证、检测结果解读、 治疗指导以及未来展望等。
指南结构分为以下几个部分
评估提供依据。
指导靶向治疗
针对融合基因设计的靶向药物可 为患者提供更精准的治疗方案。
监测耐药性
在耐药出现时检测融合基因的变化 ，有助于评估耐药性和调整治疗方 案。
融合基因检测与治疗决策的关系
确定靶向治疗策略
针对融合基因设计的靶向药物 可显著提高治疗效果和患者生
存期。
耐药性监测
在耐药出现时检测融合基因的 变化，有助于评估耐药性和调
共识的内容和结构
本共识主要包括以下内容
NSCLC融合基因的分类、检测方法、临床实践建议、未来研 究方向等。
结构上分为以下几个部分
引言、概述、诊断建议、治疗建议、预后预测、结论等。
02
融合基因检测技术在非小细胞肺癌中的 应用
融合基因检测技术的种类和原理
常规技术
RT-PCR、FISH和NGS等。
RT-PCR
NSCLC中存在多个融合基因，这些融合基因的发 现对NSCLC的诊断、治疗和预后预测具有重要意 义。
融合基因是指两个或多个基因在染色体水平上发 生断裂后重新连接，形成异常基因序列。
本共识旨在系统梳理和总结NSCLC融合基因的检 测现状、临床实践建议及未来研究方向，以便更 好地指导临床实践，提高NSCLC患者的生存率和 生活质量。
提高医疗水平
加强医疗人员的技术培训和规范操作，提高检测 准确性和规范性。
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基因融合检测的金标准
基因融合是指在染色体水平上两个或更多基因的合并，结果是一
个新的融合基因的形成。
基因融合通常发生在细胞发育和分化过程中，它可以导致癌症等疾病的发生。
对基因融合进行准确的检测是非常重
要的。
金标准是某个领域中被广泛接受和认可的方法或标准，用于评估
其他方法的准确性和可靠性。
在基因融合检测中，由于其复杂性和多
样性，目前还没有一个统一的金标准，但有一些常用的方法和标准可
以作为参考。
第一个常见的金标准是基于RT-PCR (逆转录聚合酶链式反应) 的融合基因检测。
RT-PCR 是一种可以在基因水平上检测特定序列的方法，通过将RNA反转录成cDNA，然后使用引物扩增特定的基因片段来检测
融合基因的存在。
然而，这一方法的准确性和可靠性依赖于引物的设
计和实验操作的规范性。
第二个常见的金标准是基于基因组测序的融合基因检测。
通过对
染色体上的DNA序列进行测序，可以精确地检测融合基因的存在。
这
种方法准确性高，可以提供更多细节，如融合位点和融合伴侣基因的
信息。
然而，基因组测序的成本较高，需要更复杂的分析流程和较长
的实验时间。
还有一些其他的金标准用于融合基因检测的验证，如免疫组化和
原位杂交等方法。
免疫组化可以通过特定的抗体来检测融合基因的蛋
白表达，而原位杂交可以通过与融合基因相关的RNA探针来检测融合
基因的存在。
这些方法可以提供补充信息来支持基因融合的存在，并
对其在细胞和组织水平上的表达进行评估。
综上所述，基因融合检测的金标准是一个复杂而多样化的领域。
目前，没有一个统一的金标准被广泛接受和认可。
不同的方法和标准
可以结合使用，以提高融合基因检测的准确性和可靠性。
随着科技的
不断进步和新的方法和标准的引入，基因融合检测的金标准将逐步完善和统一。