谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)试剂盒说明书
谷胱甘肽s转移酶分类
谷胱甘肽s转移酶分类
谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类广泛存在于生物体内的酶，它在细胞内起着重要的生物学作用。
GST根据氨基酸序列的相似性和功能特点，可被分为多个类别，主要包括以下几类：
1. α-类GST，包括GSTA1、GSTA2、GSTA3和GSTA4等亚型，主要在肝脏、肾脏和肠道中表达，参与对抗毒素和药物代谢。
2. μ-类GST，包括GSTM1、GSTM2、GSTM3和GSTM4等亚型，主要在肝脏中表达，参与对抗癌症药物和致癌物质的代谢。
3. π-类GST，包括GSTP1和GSTP2等亚型，广泛分布在多种组织中，参与对抗毒素和药物的代谢，对抗氧化应激和细胞凋亡等生物学过程。
4. θ-类GST，包括GSTT1和GSTT2等亚型，主要在肝脏和肾脏中表达，参与对抗毒素和药物的代谢。
5. ω-类GST，包括GSTO1和GSTO2等亚型，主要在肝脏、肠
道和肾脏中表达，参与对抗氧化应激和神经退行性疾病的发生。
除了上述主要的GST类别外，还有一些其他类别的GST，它们在细胞内扮演着重要的角色，如参与对抗氧化应激、解毒和药物代谢等生物学过程。
总的来说，GST的分类是根据其氨基酸序列的相似性和功能特点进行的，不同类别的GST在细胞内具有不同的生物学功能和代谢途径。
小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)快速检测试剂盒.
小鼠还原型谷胱甘肽(GSH)快速检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E11897m检测范围：0.8 ng /ml -200ng /ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的GSH，且与其他相关蛋白基本无交叉反应。
有效期：6个月（2-8℃避光保存）预期应用：ELISA法定量测定小鼠血清，血浆及其它相关生物液体中GSH含量。
说明1.浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
2.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理采用竞争酶联免疫法法检测GSH含量。
首先用一株单抗体包被微孔板，制备成固相抗体，然后加入待测标本及辣根过氧化物酶标记的另一株单抗，使之形成包被抗体-GSH-酶标记抗体的复合物。
经显色后在酶标仪测定吸光值（OD 值），通过计算机或作图拟合浓度-吸光度曲线，反算出待测标本中GSH含量。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：5瓶（冻干品）。
标准品为冻干品，使用前分别用0.5ml蒸馏水溶解，溶解后浓度分别为：3.酶结合物（HRP-conjugated antibody）：1×6ml/瓶。
4.显色剂A（Substrate A）：1×7ml/瓶。
5.显色剂B（Substrate B）：1×7ml/瓶。
6.浓洗涤液（Wash Buffer）：1×15ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。
7.终止液（Stop Solution）：1×7ml/瓶需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6. 蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
谷胱甘肽s-转移酶的功能
谷胱甘肽s-转移酶的功能
谷胱甘肽s-转移酶（GSTs）是一类广泛存在于动植物体内的重要酶类，其主要功能是参与体内的解毒作用。
具体而言，GSTs能够结合和催化一系列外源性和内源性化合物（包括环境污染物、药物代谢产物和自由基等）与谷胱甘肽（GSH）之间的反应，将它们转化为更为稳定的代谢产物，从而促进有毒物质的代谢和清除。
此外，GSTs还可以通过调控细胞氧化应激、减少DNA损伤等多种途径，维护细胞内环境的稳态和生理功能的正常进行。
因此，GSTs在人类疾病的发展和药物治疗中都具有重要作用。
还原型谷胱甘肽（reducedglutathione,GSH）试剂盒说明书
还原型谷胱甘肽（reducedglutathione,GSH）试剂盒说明书货号：QS1200 规格：50管/48样还原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH）试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质，在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。
还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。
因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
测定原理：DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度与GSH含量成正比。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体×1瓶，4℃避光保存。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
GSH测定操作：1. 分光光度计预热30min，调节波长到412 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中保温30min。
3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100μL蒸馏水，700μL 试剂二，200μL试剂三，混匀静置2min后测定412 nm吸光度A1。
gst（格林威治恒星时）
gst（格林威治恒星时）Yeast two hybrid, pull-down, IP, COIP, EMSAYeast two hybrid is the most preliminary method to screen protein-protein interaction,;When positive results were achieved after rotational validation, the GST-PULL DOWN (under physiological conditions and validated only in vitro) was required;If you want to further determine the results, you can do CO-IP (validation under physiological conditions, the results are reliable);The relationship between IP and CO-IP: IP is to use antibodies to precipitate the protein you want, and then test it. For example, A protein in the cells was different, or have different post-translational modifications, which can be used A protein antibody +prorein A beads to IP, the A pull down from the cell, and specific antibody (such as phosphorylation, ubiquitination of antibody) to detect changes in A. The co-Ip principle is the same, since it is detected and the interaction of A protein, that is using the A antibody to pull A down, with the interaction between A and B protein antibody to detect, to prove that the interaction between A and B. That is to say, as long as the A antibody is used to pull B down, it can prove that there is interaction between A and BThis relationship can only be said to exist interaction, but this interaction cannot be determined directly or indirectly, which is perhaps the A and C, and B and C, so that A antibodycan pull C down, but at the same time, C and B also pull down. To determine the direct interaction between A and B, you can do an in vitro GST PULL DOWN experiment.Pull-down: is two people on an island, regardless of gender, which should happenCo-IP: put a group of people on a desert island, and if you can, the story is up to youGST pull-down experiment is an effective in vitro test technique to validate yeast two hybrid system. In recent years, more and more scholars have been attracted by it. The basic principle is that the target protein -GST fusion protein affinity in curing glutathione affinity resin, as a support to a protein affinity, as a "bait", the purpose of protein solution column, can capture the capture protein interacting with the "(target protein), SDS-PAGE elution electrophoresis analysis through the combination, thus confirming two protein-protein interactions or screening of corresponding target protein," bait "and" capture protein expression "can be purified by cell lysate, protein, system and method of in vitro transcription and translation system. This method is simple and easy to operate.GST: glutathione transferase (glutathione, S-transferase)GST, pull, down, and Coimmunoprecipitation relational issuesWhat do you call GST, pull, down, Coimmunoprecipitation? People living in biology know it. This is the two way to study proteininteractionsFor example, GST pull down is like putting a man and a woman on a lonely island. Unless bees, horses, cows and cows don't agree, what happens between men and women of the same kind usually happens. This relationship is direct, westernCoimmunoprecipitation (Co-IP) is, he found the degreeses, that person but in the lights dim. A group of free love between men and women. A protein can also love many other proteins in nature, but eventually will have the most love, while Co-ip can be found in his preferences. This relationship may be directly, or it may be indirect, is closer to the East.Two proteins may strangers in the organism, one at the head and one at the feet. Perhaps between the two may be in rhyme, born in GST pull down. But far apart in the environment, they may encounter, draw them together. But in real life, such a romantic relationship may not be realistic. The feet of the head and ran to the protein if Valentine's tryst, will be a big problem. In other cases, two proteins even alone together, may not attract each other, but to the biological system environment, in other protein factors, appropriate assistance,But it is possible to form a stable partnershipCo immunoprecipitation experiments in non denaturing experiments because this protein between the natural condition, the interaction is preserved to the maximum extent, so the interaction between the real reaction protein. But also based on this point, CO immunoprecipitation and can not show theinteraction between proteins is directly or indirectly, because through the co precipitated protein antibody is a protein complex, which is not only directly and target protein protein interaction. The GST-Pull down experiment can remove the influence of other proteins through the experimental conditions in vitro, so as to determine whether the target protein and the protein to be detected can interact directlyThe three classical methods of protein interaction can also be described as stepwise and rigorous methods.Gel mobility or electrophoretic mobility shift assay (EMSA)EMSA (EMSA-electrophoretic mobility shift assay) is a kind of DNA binding protein and its associated DNA binding sequence interaction technology, can be used for qualitative and quantitative analysis. The technique, originally used to study DNA binding proteins, has now been used to study the interaction of RNA binding proteins and specific RNA sequences. The purified protein and the crude cell extract are usually insulated with 32P isotopically labeled DNA or RNA probes, and the composite and unbound probes are separated on a non denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. DNA- complexes or RNA- complexes move more slowly than non bonded probes. Isotopically labeled probes differ in the binding proteins studied, but are double stranded or single stranded. When detecting DNA binding proteins such as transcription regulators, purified proteins, partially purified proteins, or nuclear cell extracts can be used. In detecting RNA binding proteins, the purified or partially purified proteins can also be extracted using either nuclear or cytosolic cell extractsdepending on the location of the target RNA binding protein. Competition experiments used protein binding sequences of DNA or RNA fragments and oligonucleotide fragments (specific) and other non related fragments (unspecific) to determine the specificity of DNA or RNA binding proteins. In the presence of competitive specific and non-specific fragments, specific binding is determined according to the characteristics and strength of the complex。
谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性检测试剂盒说明书 微量法
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1195规格:100T/48S 产品简介：谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px 或GPX）是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶。
GPX 能够催化还原型谷胱甘肽（GSH）生成氧化型谷胱甘肽（GSSG），使有毒的过氧化氢还原成无毒的羟基化合物。
GPX 催化H 2O 2氧化GSH，产生GSSG，GSH 能与DTNB 生成在412nm 处有特征吸收峰的化合物，412nm 下吸光度的下降即可反应GPX 的活性。
试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管。
产品内容：提取液：液体80mL×1瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5.5mL 蒸馏水溶解；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3.3mL 蒸馏水溶解备用；试剂三：液体10μL×1支，临用前按1μL 试剂三：499μL 蒸馏水的比例稀释试剂三，4℃保存。
现用现配；试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存；瓶底若有结晶可50℃水浴溶解，此溶液为饱和溶液，若底部最终还有结晶，吸取上清使用即可；试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL 蒸馏水溶解备用；标准品：粉剂×1支，10mg 还原型谷胱甘肽，4℃保存。
临用前加入1.62mL 蒸馏水溶解为20μmol/mL 的标准溶液备用。
操作步骤：一、粗酶液的提取：1、组织：按照组织质量（g）:提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取0.05g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆。
10000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测(如上清不清澈，再离心3min)。
gst亲和柱子原理
gst亲和柱子原理
gst亲和柱子原理是基于谷胱甘肽转移酶（glutathione S-transferase，GST）的亲和作用来分离纯化蛋白质。
gst 亲和柱子是一种预装柱，其表面有GST的特异性配体，可以与GST融合蛋白结合。
当含有GST融合蛋白的溶液流经该柱子时，融合蛋白会与柱子上的配体结合，形成稳定的复合物。
其他不与配体结合的杂质则随着流动相流出。
接下来可以使用含有谷胱甘肽的洗脱液将融合蛋白从柱子上洗脱下来，从而实现蛋白质的分离纯化。
gst亲和柱子具有高特异性和高亲和性，可以用于分离纯化各种与GST融合的蛋白质，如重组抗体片段、重组酶等。
这种纯化方法具有高分辨率、高回收率和简便操作等优点，因此在生物工程领域得到了广泛应用。
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书
谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GSH-Px是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的主要酶之一。
GSH-Px不仅能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的伤害和增加机体抗辐射等能力。
测定原理：GSH-Px催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，而NADP+没有；通过测定340 nm光吸收减少速率来计算GSH-Px活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、酶标仪、96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保存。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体10μL×1支，-20℃保存。
试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保存。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
GSH-Px测定操作：1. 酶标仪预热30 min，调节波长到340 nm。
2. 混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。
3. 混合试剂配制：临用前，在试剂二中加入试剂一20 mL，充分震荡溶解后加入全部试剂三，混匀。
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货号：QS1204 规格：50管/48样
谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
GST是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。GST是体内解毒酶系
统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合，使亲电化合
物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排
出体外的目的。因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外，因为GST具有GSH-Px活性，亦称为non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、
蛋白质等的功能。注意，GST催化的反应减少GSH含量，但是不增加GSSG含量。
测定原理：
GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm波长处
吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配置：
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体45mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5 mL蒸馏水溶解。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加
入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时
间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
测定操作：
1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂三放在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）保温。
3. 测定管：取1mL石英比色皿，加入100μL上清液，900μL试剂二和100μL试剂三，迅速
混匀后于340nm测定吸光度变化，记录10 s和310 s吸光度为A1和A2。
GST活性计算公式：
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个
酶活单位。
GST（nmol/min/mg prot）=(A2－A1))÷ε÷d×109×V反总÷(Cpr×V样)÷T
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=230×((A2-A1) ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样品每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个酶
活单位。
GST（nmol/min/g鲜重）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反总÷(W×V样÷V样总)÷T
=230×(A2-A1) ÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1
个酶活单位。
GST（nmol/min/104 cell）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=230×(A2-A1) ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个
酶活单位。
GST（nmol/min/mL）=(A2-A1)÷ε÷d×109×V反总÷V样÷T
= 230×(A2-A1)
ε：产物摩尔消光系数，9.6×103 L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；106：1mol=1×106μmol；
V反总：反应体系总体积，1100μL=0.0011 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外
测定，建议选用本公司生产的BCA蛋白质浓度测定试剂盒；V样：加入反应体系中上清液体积，
100μL=0.1 mL；V样总：加入提取液体积，1mL；W，样本质量，g；T：反应时间（min），5min。
注意事项：
1. 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；
2. 细胞中GST活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中GST的提取时可加试剂
一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞；
3. 本法测定GST活性的线性范围可达76 μmol/min /L，测定前先用1～2个样做预实验，如
5min内反应不成线性，须对样品用蒸馏水稀释，计算结果乘以稀释倍数；
4. 测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃或者37℃（哺乳动物）。