以及谷胱甘肽转移酶
谷胱甘肽-S-转移酶P1基因多态性与晚期胃癌患者对顺铂化疗疗效的相关性研究
ａｍ ｏ ｔｉ ｓ ｄ ａ ｓｅｓ ｈ ｔ ｒ ｅｅ ｃｐｌ ｒｈｓ ｓｏ ｔｅｇ ｔ ｈｏｅＳｔ ｎｆｒ ｅＰ Ｇ Ｔ １ ， ｉ ｆｈｓ ｔ ｙｗ ｓｔ ａｓｓ ｅ ｅ ｎｔ ｏ ｍｏ ｉ ｆｈ ｌ ａ ｉｎ － ａｓ ａ １（ Ｓ Ｐ ） ｕ ｏ ｗ ｈ ｇ ｉ ｙ ｐ ｍ ｕｔ ｒ ｅｓ
方法 收集经病理学确诊的晚期 胃癌患者 ５ ９例。所有病例化疔前抽取外周静脉血 ， 提取脱氧核糖核 酸（ Ｎ ， Ｄ Ａ） 用连接酶检测反应技术 （ Ｃ —Ｄ 检测 研究对象 的 Ｇ Ｔ １ 因型。所有患者经多 西他赛 Ｐ Ｒ Ｌ Ｒ） ＳＰ 基 （ Ｏ Ｅ Ａ Ｅ ） Ｄ Ｐ ５氟尿嘧 啶（ －Ｕ） Ｄ Ｃ Ｔ Ｘ Ｌ ／ Ｄ ／－ ５Ｆ 联合方案化 疗 ， 化疗结 束后 观察疗 效及 其与 】 胃 肿瘤 ； 谷胱甘肽转移酶 ； 药物疗法 ， 联合 ； 顺铂 ； 多态性 ， 单核苷酸
Ｒｅａ ｉ ｎ ｈ ｐ ｂ ｔ ｅ ｌ ｔ ｔ ｉ ｎ －ｒ ｎ ｆ ｒ ｓ ｏ ｙ ｏ ｐ ｉｍ ｎ ｌ ｉ ａ ｕ ｃ ｍｅ ｆ ａ ｖ ｎ ｅ ｌ ｔ ｓ ｉ ｅｗｅ ｎ ｇ ｕ ａ ｈ ｏ ｅ Ｓ ｔ ａ ｓｅ ａ ｅ Ｐ１ ｐ ｌｍ ｒ ｈ ｓ ａ ｄ ｃｉ ｃ ｌ ｏ ｔ ｏ ｓ ｏ ｄ ａ ｃ ｄ ｏ ｎ
季枚 吴 昌平 蒋敬庭 徐斌 吴骏 赵伟 庆 张红 宇 周文 杰
【 摘要 】 目的 基 因多态性通过影 响药物 的代谢 、 转运和作用靶点从而导致药物疗效和毒性 的
个体差异 ， 寻找 明确 的生物学标记来识别获益人群 已成为 最大 的挑 战。本研 究 旨在观察 谷胱甘肽．． Ｓ
转移酶 Ｐ （ Ｓ Ｐ ） 因多态 性 与 以顺铂 （ Ｄ ） １ＧＴ１基 Ｄ Ｐ 为基 础 的化 疗 方 案治疗 晚期 胃癌 疗 效 间 的关 系。
谷胱甘肽S转移酶的研究进展及其与肿瘤的相关性
谷胱甘肽S转移酶的研究进展及其与肿瘤的相关性常彬霞;貌盼勇【摘要】Drug metabolism is one of the most important components in cell detoxification, and two enzymes, i.e. phase I drug metabolism enzyme and phase Ⅱ drug metabolism enzyme, are involved in the process- Glutathione-S-transferase (GST) is an important phase Ⅱ drug metabolic enzyme, which, together with phase I drug metabolic enzyme, may catalyze drugs to form high water-soluble products. Therefore, GST may counteract the lesions caused by endogenous and exogenous electrophilic substances, and play an important role in antitumorigenisis. The genes coding proteins that have GST activity constitute a super family, and distribute in at least 7 chromosomes. GST possesses many functions, and it is traditionally held that GST may counteract the lesions caused by endogenous and exogenous toxic compounds. Moreover, the over-expression of GST in tumor cells may mediate glutathione to bind on the substrates of anticancer drugs, accordingly leads to drug resistance of tumor.%药物代谢是细胞解毒机制的重要组成部分之一,其中主要涉及两种酶:Ⅰ和Ⅱ相药物代谢酶.谷胱甘肽S转移酶(GST)是一种重要的Ⅱ相药物代谢酶,可与Ⅰ相药物代谢酶一起催化药物形成高水溶性终产物.所以,GST能够抵御内源性和外源性亲电子物质的损害,并在抗肿瘤过程中发挥重要作用.编码GST的基因至少分布在7条染色体上,构成了一个超基因家族,编码具有GST活性的蛋白.GST有许多功能,传统观点认为,细胞中的GST可发挥防御内、外源性毒性化合物损害的作用.另外,GST在肿瘤细胞中高表达,可介导谷胱甘肽结合至大量抗癌药物底物上,导致肿瘤耐药的发生.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2012(037)008【总页数】5页(P838-842)【关键词】谷胱甘肽转移酶;抗药性,肿瘤【作者】常彬霞;貌盼勇【作者单位】100039 北京解放军302医院非感染肝病诊疗中心;100039 北京解放军302医院试验技术研究保障中心【正文语种】中文【中图分类】R730.1细胞解毒机制可对抗环境中多种有毒物质的侵害，亦能对抗一些内源性物质(如在正常代谢过程中产生的活性氧化产物)的侵害，对维护机体健康至关重要。
gst亲和柱子原理
gst亲和柱子原理
gst亲和柱子原理是基于谷胱甘肽转移酶（glutathione S-transferase，GST）的亲和作用来分离纯化蛋白质。
gst 亲和柱子是一种预装柱，其表面有GST的特异性配体，可以与GST融合蛋白结合。
当含有GST融合蛋白的溶液流经该柱子时，融合蛋白会与柱子上的配体结合，形成稳定的复合物。
其他不与配体结合的杂质则随着流动相流出。
接下来可以使用含有谷胱甘肽的洗脱液将融合蛋白从柱子上洗脱下来，从而实现蛋白质的分离纯化。
gst亲和柱子具有高特异性和高亲和性，可以用于分离纯化各种与GST融合的蛋白质，如重组抗体片段、重组酶等。
这种纯化方法具有高分辨率、高回收率和简便操作等优点，因此在生物工程领域得到了广泛应用。
γ-谷氨酰转移酶
γ-谷氨酰转移酶介绍
---------------------------------------------------------------------- γ-谷氨酰转移酶（GGT）是将谷胱甘肽上γ-谷氨酰基转移至另一个肽或氨基酸上的酶。
GGT在肾脏中表达最高，其次是胰脏和肝脏。
正常人血清γ-谷氨酰转移酶主要来自于肝脏，当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中γ-谷氨酰转移酶升高。
因此，γ-谷氨酰转移酶可用于鉴别肝脏系统的疾病。
γ-谷氨酰转移酶（GGT），是一种含巯基的线粒体酶。
组织分布以肾含量最多，其次为胰、肺、肝等。
血清中的yGT则主要来自肝胆，红细胞中几乎无GGT，因此溶血对其测定影响不大。
多种肝胆系统疾病均可引起γ-谷氨酰转移酶的增高，所以γ-谷氨酰转移酶对各种肝胆疾病均有一定的临床应用价值。
但不同的肝胆疾病血清γ-谷氨酰转移酶可有不同程度的增加。
谷胱甘肽S-转移酶P1蛋白在肺癌中的表达及临床病理学意义
谷胱甘肽S-转移酶P1蛋白在肺癌中的表达及临床病理学意义陈传萍;何群;潘忠诚;吴广平;赵雨杰【摘要】目的探讨肺癌中谷胱甘肽S-转移酶P1(GSTP1)表达水平及临床病理学意义.方法应用免疫组织化学方法检测50例原发性肺腺癌、20例癌旁正常组织、11例肺转移性腺癌和14例肺鳞癌组织石蜡标本GSTP1蛋白表达水平,观察其与肺癌患者临床病理学参数的关系.采用Western blot检测8例新鲜肺腺癌、鳞癌及癌旁组织中GSTP1蛋白表达水平.结果 GSTP1在32例原发性肺腺癌及9例肺鳞癌组织中呈高表达,明显高于癌旁正常组织表达水平(x2=6.665,P=0.010;x2=3.927,P=0.048),但在原发性肺腺癌、肺鳞癌及肺转移性腺癌中表达无明显差异(P＞0.05).GSTP1表达与肺腺癌患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度及淋巴结转移无明显相关性(P＞0.05),但与肺腺癌患者预后呈负相关(x2=4.171,P=0.041).Western blot证实GSTP1在肺腺癌及鳞癌中表达明显高于癌旁组织(t =2.545,P=0.023；t =2.337,P=0.035).结论 GSTP1在肺癌中表达上调,并与肺腺癌患者预后相关.%Objective To study the clinicopathological significance of the expression of GSTP1 protein in lung cancer. Methods The expression of GSTP1 protein was detected by immunohistochemistry in 50 cases of primary lung adenocarcinoma specimens, 20 adjacent non-cancerous lung tissues, 11 metastatic pulmonary adenocarcinoma and 14 squamous cell carcinoma tissues. Western blot was used to examine the GSTP1 protein level in 8 cases of lung adenocarcinoma, squamous cell carcinoma and adjuvant non-cancerous tissues. The relationship between the protein expression and clinicopathological features was analyzed.Results Overexpression of GSTP1 protein was shown in 32 and 9 cases of lung adenocarcinoma and squamous cell carcinoma tissues, respectively, which were much higher than that in adjuvant non-cancerous lung tissues (χ2=6.655,P =0.010;χ2=3.927,P =0.048),but there was no statistically significant difference of GSTP1 expression between primary lung adenocarcinoma, metastatic pulmonary adenocarcinoma and squamous cell carcinoma tissues (P > 0.05). The expression of GSTP1 protein was not correlated with age, sex, tumor size, differentiation or lymph node metastasis (P > 0.05), but had a negative association with the prognosis of t he lung adenocarcinoma patients (χ2=4.171 ,P =0.041). The expression of GSTP1 protein was higher in lung adenocarcinoma and squamous cell carcinoma tissues than that in non-cancerous lung tissues detected by Western blot (t =2.545, P = 0.023 ;t =2.337 ,P =0.035). Conclusion GSTP1 is up-regulated in lung cancer and positively correlated with the prognosis of the lung adenocarcinoma patients.【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2013(042)001【总页数】5页(P69-72,76)【关键词】谷胱甘肽S-转移酶P1;肺腺癌;肺鳞癌;预后【作者】陈传萍;何群;潘忠诚;吴广平;赵雨杰【作者单位】中国医科大学生物芯片中心,卫生部细胞生物学重点实验室,沈阳110001【正文语种】中文【中图分类】R734.2肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，5年存活率约为10%～15%，已成为我国恶性肿瘤死亡原因的第一位［1］。
谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)试剂盒说明书
货号: MS1204 规格：100管/96样谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。
GST 是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外，因为 GST 具有 GSH-Px 活性，亦称为 non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
注意，GST 催化的反应减少 GSH 含量，但是不增加GSSG 含量。
测定原理：GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm 波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加2 mL蒸馏水溶解。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
人谷胱甘肽S转移酶GSTs酶联免疫分析
人谷胱甘肽S转移酶（GSTs）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T30 mІU/L -1200 mІU/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中谷胱甘肽S转移酶（GSTs）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷胱甘肽S转移酶（GSTs）水平。
用纯化的人谷胱甘肽S转移酶（GSTs）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷胱甘肽S转移酶（GSTs）)，再与HRP标记的谷胱甘肽S转移酶（GSTs）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的谷胱甘肽S 转移酶（GSTs）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人谷胱甘肽S转移酶（GSTs）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
谷胱甘肽s-转移酶的功能
谷胱甘肽s-转移酶的功能
谷胱甘肽s-转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类重要的酶，在生物体内起着多种重要的功能。
该酶主要作用在细胞内，参与细胞代谢过程中的许多关键反应，具有显著的生物学意义。
在生物体内发挥着重要的作用，包括抗氧化、解毒、细胞保护等多种作用。
首先，在抗氧化方面，谷胱甘肽s-转移酶可以通过转移底物中的谷胱甘肽，帮助清除自由基和有害代谢产物，从而减少氧化应激对细胞的伤害。
自由基是细胞内的危险分子，会导致细胞损伤和生物体老化，而谷胱甘肽
s-转移酶的存在能够有效地减少氧化损伤，维护细胞健康。
其次，在解毒方面，谷胱甘肽s-转移酶可以通过结合有毒底物，将其转化为水溶性代谢产物，从而使其更容易被排泄。
这种解毒作用对维持生物体内环境的稳定性至关重要，有助于预防毒素对生物体的损害。
此外，谷胱甘肽s-转移酶还参与了多种重要的生物化学反应，如脂质代谢、氨基酸代谢等。
在脂质代谢中，谷胱甘肽s-转移酶可以通过调节脂
质代谢途径，维持细胞内脂质平衡，有助于维持细胞健康。
在氨基酸代谢中，谷胱甘肽s-转移酶参与氨基酸的代谢和转运，有助于碱基的合成和蛋白质
的合成，是维持细胞正常功能的关键酶类。
让我们总结一下本文的重点，我们可以发现，谷胱甘肽s-转移酶在生物体内的功能多样且重要，与细胞代谢和生物体内环境的平衡密切相关。
通
过对其功能的深入研究，可以更好地了解细胞内代谢的调控机制，为预防和治疗多种疾病提供理论基础。
未来的研究还需深入探讨谷胱甘肽s-转移酶在细胞信号转导、疾病发生发展等方面的作用机制，以期揭示其更多的生物学功能及临床应用潜力。
谷胱甘肽S_转移酶综述
search of typing,structure of cytosolic glutathione S-transferease has been discussed in this paper.
【
】Glutathione S-transferease
1 GSTs 分型
GSTs(EC 2 .5 .1 .18)是广泛存在于各种生物体 内的由多个基因编码的、具有多种功能的一组同工 酶，分子量为 23 ～ 29 KDa。有膜结合和胞液两种 形式，以胞液 GSTs 为主。依据酶活性、序列、基序 和结构特征，膜结合 GSTs (如微粒体 GSTs) 现归于 类花生酸类物质和谷胱甘肽代谢的膜相关蛋白
由于 GST- 既能在组织中检测到又可在血清 中检测到，而其它许多肿瘤标志物只能在组织中检 测到。并且检测血清中的 GST- 对机体无侵袭性， 大大方便临床的应用［8］。随着 GST- 表达与肿瘤的 关系的研究的深入，它很有可能成为肿瘤而不只是 肝癌的标志物。
3.2 GSTs 的多态性与肿瘤的关系
GSTs 基因家族是一个巨大的超基因家族，就表 型而言，每一类同工酶中又包括很多亚型；就基因 型而言，每一类都有很多不同基因位点。到目前为 止，GSTs 的 4 种基因，即 GSTM1，GSTM3，GSTP1 和 GSTT1 已证实具有多态性，基因的多态性可引起酶 活性的改变，导致对潜在致癌物代谢能力的差异， 这种差异是构成个体肿瘤易感性的遗传基础之一［9-11］。
其余氨基酸以 5 或 6 股 螺旋构成 -末端氨基 酸结构域，是亲电子物质即底物结合位点(H 位点)。 在不同型 GSTs 间差别较大，如 、型 GSTs 包含 5 个 螺旋，型 GSTs 包含 6 个 螺旋。不同型 GSTs 在 -末端氨基酸结构域的差异可以解释 、、之 间的底物特异性的差异。
γ-谷氨酰转移酶 谷胱甘肽的代谢
γ-谷氨酰转移酶谷胱甘肽的代谢摘要：一、γ-谷氨酰转移酶简介二、谷胱甘肽的代谢过程三、γ-谷氨酰转移酶在生物体内的作用四、γ-谷氨酰转移酶异常与疾病关联五、提高γ-谷氨酰转移酶活性方法正文：γ-谷氨酰转移酶（γ-GT）是一种广泛存在于生物体内的酶，具有重要的生物学功能。
本文将探讨γ-谷氨酰转移酶的性质、作用及其在疾病中的关联。
一、γ-谷氨酰转移酶简介γ-谷氨酰转移酶是一种酶，它主要参与谷胱甘肽（GSH）的代谢。
谷胱甘肽是一种具有抗氧化作用的生物分子，广泛存在于细胞中。
γ-谷氨酰转移酶通过转移谷胱甘肽中的谷氨酰基，起到清除自由基、维持细胞内氧化还原平衡的作用。
二、谷胱甘肽的代谢过程谷胱甘肽的代谢过程主要包括两个步骤：第一步，谷胱甘肽在谷胱甘肽酶的作用下，谷氨酰基转移给另一个谷胱甘肽分子，生成γ-谷氨酰转移酶；第二步，γ-谷氨酰转移酶将谷氨酰基转移给另一个底物，生成谷胱甘肽。
三、γ-谷氨酰转移酶在生物体内的作用γ-谷氨酰转移酶在生物体内具有多种重要作用。
首先，它参与谷胱甘肽的代谢，维持细胞内氧化还原平衡。
其次，它参与氨基酸的代谢，包括蛋白质合成、降解等过程。
此外，γ-谷氨酰转移酶还参与药物、毒物的代谢，起到解毒作用。
四、γ-谷氨酰转移酶异常与疾病关联γ-谷氨酰转移酶异常可能导致一系列疾病。
例如，γ-谷氨酰转移酶活性降低，会导致谷胱甘肽代谢紊乱，细胞内氧化应激增加，进而引发炎症、肿瘤等疾病。
此外，γ-谷氨酰转移酶活性升高，也可能导致疾病，如肝脏疾病、胰腺炎等。
五、提高γ-谷氨酰转移酶活性方法提高γ-谷氨酰转移酶活性的方法有以下几点：1.合理膳食：摄入富含抗氧化物质的食物，如新鲜蔬菜、水果等，有助于提高γ-谷氨酰转移酶活性。
2.保持适量运动：运动可以提高机体抗氧化能力，增强γ-谷氨酰转移酶活性。
3.养成良好的生活习惯：戒烟限酒、保持充足睡眠，有助于提高γ-谷氨酰转移酶活性。
4.科学用药：在医生指导下，合理使用提高γ-谷氨酰转移酶活性的药物，如N-乙酰半胱氨酸、谷胱甘肽等。
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图6 外源性GSH对PYDDT激活Keap1-Nrf2通路及诱导二相代谢酶的影响
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研究结果
4. PYDDT所导致的细胞内GSH/GSSG比例的下降可引起 细胞内蛋白的广泛谷胱甘肽化，这其中也包括Keap1；
图7 “Thiol-disulfide exchange”理论
图8 PYDDT导致细胞内蛋白谷胱甘肽化修饰
二苯乙烯类 （stilbenes）
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2
研究背景
二 相 代 谢 酶 的 表 达 依 赖 于 ARE 基 因 的激活，这个过程是通过激活核转 录 因 子 Nrf2 实 现 的 。 在 基 本 的 生 理 状态下，转录因子Nrf2与Keap1结合 存在于细胞质中并通过Keap1-Cul3Rbx依赖的泛素化过程保持平衡。在 氧化应激条件下，Nrf2可与Keap1解 离从而使其泛素化减少，从而更多 的 进 入 细 胞 核 ， 激 活 ARE 基 因 并 诱 导二相代谢酶的表达。
强氢键干扰 图9 Keap1的Cys434残基被谷胱甘肽化修饰后对Keap1-Nrf2复合物的影响
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结论与讨论
1. PYDDY为一类结构新颖的迈克尔受体小分子，在低细胞毒 浓度下即具有很强的二相代谢酶诱导作用，说明PYDDT可作 为一种有效的肿瘤化学预防剂进行更加深入的研究；
图10 PYDDT激活Keap1-Nrf2通路的可能机制 -11-
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研究结果
5. 利用计算机分子对接，当Keap1的Cys434被谷胱甘肽化
修饰后，Keap1与Nrf2的相互作用显著减弱； Keap1和GSSG在体外孵
育反应，经过LC-MS分 析，有七个半胱氨酸残 基发生谷胱甘肽化修饰 Chem. Res. Toxicol. 2008, 21, 2051–2060.
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结论与讨论
经典推测模型 细胞内表现？
迈克尔受体小分子 （Michael addition acceptors）
1、激活Keap1-Nrf2通路； 2、抑制NF-κB; 3、诱导凋亡； 4、细胞周期阻滞。
为何各类迈克尔受体小分子又 体现出不同的分子靶向性？
1、改变细胞内GSH的能力 和速率不同？ 2、残留靶向性？
图11 PYDDT的其它潜在分子靶点
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结论与讨论
2. 传统上认为迈克尔受体小分子（包括异硫氰酸酯类、查尔酮 类、丹参酮类等）发挥活性作用的方式为直接与蛋白半胱氨酸 残基的巯基结合。虽然很多体外实验证明了该假设，但在细胞 内的情况目前尚无明确阐述。我们在一定的实验基础上提出一 种全新的假设：即该类化合物可能并非与蛋白质巯基结合而更 倾向于首先与细胞内GSH结合，这种GSH的迅速下调可导致蛋 白质的不同修饰（包括本研究中的谷胱甘肽化），从而发挥该 类化合物的生物活性；
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致谢
感谢浙江大学药学院药物信息学研 究所马忠俊老师及其课题组全体同学！
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二相代谢酶诱导剂属于一类癌症化 学预防剂，它通过升高具有清除自 由基和亲电试剂作用的二相代谢酶 保护细胞避免致癌作用。二相代谢 酶家族包括NAD(P)H: 醌氧化还原酶 （ NQO1 ） 、 单 加 氧 酶 （ OH-1 ） 以 及谷胱甘肽转移酶（GST）等。
卷心菜 红酒
异硫氰酸酯类 （isothiocyanates）
PYDDT为一种从传统中药禹州漏芦 中分离得到的炔醇取代噻吩类化合 物 。 中 国 药 典 （ 2005 年 版 ） ： 漏 芦 具有清热解毒、排脓止血、消脓止 血的功效。
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图1 Keap1-Nrf2通路示意图
图2 PYDDT的化学结构
3
材料与方法
结晶紫法确定IC50值 NQO1诱导测试法确定CD值 Western Blotting考察蛋白表达情况 LC-MS&NMR技术考察PYDDT与GSHap1谷胱甘肽化修饰情况 DTNB法测定细胞内GSH含量 流式细胞术测定细胞内ROS水平 分子对接模拟谷胱甘肽化修饰对蛋白相互作用的影响
图4 PYDDT在体外能够与GSH强烈结合
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研究结果
2. PYDDT在体外实验中能够与GSH强烈结合，在细胞内可 在4小时内迅速降低细胞内GSH含量，并上调ROS水平；
23%
图5 PYDDT在细胞内可迅速降低细胞内GSH含量，并上调ROS水平
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研究结果
3. PYDDT激活Nrf2及Nrf2介导的NQO1表达均可被外源性 GSH逆转；
二相代谢酶诱导剂PYDDT激活 Keap1-Nrf2通路的机制研究
浙江大学药学院 张潇雨, 马忠俊
报告人：张潇雨
Email: zhangxy_zju@
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研究背景
肿瘤的发展过程包括起始期、促进 期和发展期，这一过程大概经历 10~40年的时间。《中国癌症预防与 控制规划纲要》（2004-2010）的指 导原则中第一条就明确指出，“癌 症防治必须坚持‘预防为主’”。 肿瘤的预防措施包括一级预防和二 级预防。一级预防是指消除致癌因 素的影响、采取能降低致癌风险的 生活方式；二级预防即化学预防， 系采用无毒的天然或合成物质，通 过逆转、阻断或延迟癌症发生的各 个阶段降低恶性肿瘤发生的危险。
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研究结果
1. PYDDT具有很强的二相代谢酶诱导作用，且该作用是通 过激活Keap1-Nrf2通路实现的；
图3 PYDDT激活Keap1-Nrf2通路并诱导二相代谢酶的表达
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研究结果
2. PYDDT在体外实验中能够与GSH强烈结合，在细胞内可 在4小时内迅速降低细胞内GSH含量，并上调ROS水平；