谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)试剂盒说明书
谷胱甘肽s转移酶分类
谷胱甘肽s转移酶分类
谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类广泛存在于生物体内的酶，它在细胞内起着重要的生物学作用。
GST根据氨基酸序列的相似性和功能特点，可被分为多个类别，主要包括以下几类：
1. α-类GST，包括GSTA1、GSTA2、GSTA3和GSTA4等亚型，主要在肝脏、肾脏和肠道中表达，参与对抗毒素和药物代谢。
2. μ-类GST，包括GSTM1、GSTM2、GSTM3和GSTM4等亚型，主要在肝脏中表达，参与对抗癌症药物和致癌物质的代谢。
3. π-类GST，包括GSTP1和GSTP2等亚型，广泛分布在多种组织中，参与对抗毒素和药物的代谢，对抗氧化应激和细胞凋亡等生物学过程。
4. θ-类GST，包括GSTT1和GSTT2等亚型，主要在肝脏和肾脏中表达，参与对抗毒素和药物的代谢。
5. ω-类GST，包括GSTO1和GSTO2等亚型，主要在肝脏、肠
道和肾脏中表达，参与对抗氧化应激和神经退行性疾病的发生。
除了上述主要的GST类别外，还有一些其他类别的GST，它们在细胞内扮演着重要的角色，如参与对抗氧化应激、解毒和药物代谢等生物学过程。
总的来说，GST的分类是根据其氨基酸序列的相似性和功能特点进行的，不同类别的GST在细胞内具有不同的生物学功能和代谢途径。
谷胱甘肽转移酶作用机制
谷胱甘肽转移酶（Glutathione S-transferase, GST）是一类重要的酶，在细胞代谢和解毒过程中发挥着重要的作用。
本文将从GST的定义、结构、分类、作用机制和应用等方面进行介绍。
一、GST的定义和结构GST是一种广泛存在于生物体内的酶，它可以将谷胱甘肽（Glutathione,GSH）与各种亲电性物质进行结合，从而发挥解毒作用。
GST的分子量约为25-30kDa，通常由两个不同的亚基组成。
其中一个亚基是催化亚基（catalyticsubunit），主要负责催化底物与GSH的结合反应；另一个亚基是结构亚基（structural subunit），主要负责保持酶的稳定性和催化亚基的活性。
GST的结构与功能密切相关。
它包含一个N端的信号肽序列、一个N端的结构域、一个C端的催化域和一个C端的结构域。
其中，催化域是GST最为重要的结构域，它包含了一个催化三肽（catalytic triad），包括谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和天冬氨酸（Asp），这些氨基酸残基在催化反应中发挥着关键的作用。
二、GST的分类GST是一类广泛存在于生物体内的酶，它在不同的物种和组织中具有不同的表达模式和功能。
根据氨基酸序列和催化机制的不同，GST可以分为多个家族和亚家族，如下表所示：家族 亚家族 物种Alpha GSTA1-GSTA5 人、鼠、猪、牛等Mu GSTM1-GSTM5 人、鼠、猪、牛等Pi GSTP1-GSTP4 人、鼠、猪、牛等Theta GSTT1-GSTT3 人、鼠、猪、牛等Sigma GSTS1-GSTS4 人、鼠、猪、牛等Omega GSTO1-GSTO2 人、鼠、猪、牛等Zeta GSTZ1-GSTZ3 人、鼠、猪、牛等Kappa GSTK1-GSTK3 人、鼠、猪、牛等三、GST的作用机制GST的主要作用是将亲电性物质与GSH结合，从而形成无毒的代谢产物，以保护细胞免受有害物质的损害。
寄生虫谷胱甘肽转移酶的研究进展
中国兽医科学 2021,51(01): 113-118Chinese Veterinary Science网络首发时间：2020-12-04 D O I：10.16656/j.issn. 1673-4696.2021.0015 中图分类号：S852.7 文献标志码：A文章编号：1673-4696(2021 )01-0113-06寄生虫谷胱甘肽转移酶的研究进展李爽，刘群*(中国农业大学动物医学院国家动物寄生原虫实验室，北京100193)摘要：谷胱甘肽转移酶（glutathione S-transferase,GST)是由多基因编码、具有多种功能的超基因家族 酶，是细胞内转运的“通用”栽体蛋白。
哺乳动物的GST可调控细胞增殖和死亡信号通路，具有参与运输、新陈 代谢和生理反应等的能力。
已有研究表明，多种寄生虫的GST参与虫体的生命活动。
综述了有关寄生虫GST 的研究进展，为后续相关研究提供思路。
关键词：寄生虫；谷胱甘肽转移酶（GST);功能；药物靶点Advances in the research of glutathione S-transferase in parasitesLI Shuang,LIU Qun*(National A nimal Protozoa Laboratory, College of Veterinary Medicine ,Chirm Agricultural University, Beijing 100193, C/iiraa)Abstract：Glutathione S-transferase (GST) is a supergene fami ly enzyme encoded by a supergene family which has multiple functions. They were thought to be 'all-purpose' carrier proteins involved in intracellular transport. Mammalian GST regulates cell proliferation and death signaling pathways and is involved in transportation,metabolism,and physiological responses. Previous studies have demonstrated that GST of various parasites plays an important role in diversified life activities of parasites. This review mainly describes the progress of research about GST on parasites and provides in- sights for the related research.Key words：parasite；glutathione S-transferase (GST) ；function；drug target* Corresponding author：LIU Qun,E-mail ：**************.cn谷胱甘肽转移酶(glutathioneS-transferase,GST)主要分为3个家族：胞质GST、线粒体G S T和微粒 体GST，其中胞质型G ST是其最大的家族。
gst蛋白纯化
GST蛋白纯化简介谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一种常用的亲和标签，用于在分子生物学研究中用于蛋白质纯化和蛋白质亲和结合实验。
GST蛋白被广泛应用于蛋白质结构和功能研究、酶学研究、蛋白质互作研究等领域。
本文将介绍一种常见的方法来纯化GST蛋白，该方法主要包括以下步骤：细胞裂解、亲和层析、洗脱和纯化。
方法细胞裂解首先需要将GST蛋白表达在适当的宿主中，例如大肠杆菌。
在细胞达到适当的生长阶段后，使用合适的方法将细胞裂解，使得目标蛋白释放到溶液中。
一种常用的裂解方法是超声波裂解，通过超声波震荡将细胞破碎。
亲和层析经过细胞裂解后，将得到的细胞裂解液通过亲和层析柱。
亲和层析柱通常使用含有还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）结合物质的树脂，例如glutathione agarose beads。
这种树脂与GST标签结合，使得GST标签的融合蛋白能够特异性地结合于柱子上。
通过洗脱液去除非特异结合蛋白，将目标蛋白纯化。
洗脱洗脱过程是将结合于柱子上的目标蛋白从固定相洗净。
一般采用含有高浓度还原型谷胱甘肽的洗脱液，例如50 mM GSH。
洗脱液中的还原型谷胱甘肽与柱子上的结合物质竞争与GST标签结合，以此达到将GST蛋白洗脱下来。
纯化经过洗脱后，蛋白溶液中的GST蛋白含量较高。
为了进一步提高纯度，可以通过对溶液进行浓缩、去除低分子量杂质、调整溶液pH值等方法进行纯化。
常用的纯化方法包括丙酮沉淀法、离子交换柱层析法等。
注意事项•在实验过程中应严格操作，避免任何可能导致目标蛋白污染的情况发生。
•选择合适的表达宿主，不同的宿主可能会对GST蛋白的表达量和可溶性产生影响。
•在细胞裂解过程中，避免样品受到温度、剧烈振荡等因素的影响。
•注意亲和层析柱的操作方法，避免破损或污染。
•洗脱过程中注意还原型谷胱甘肽浓度和洗脱液的pH 值。
结论GST蛋白纯化是一种常见的蛋白质纯化方法，通过亲和层析技术可以实现对GST蛋白的高效纯化。
gst蛋白纯化原理
gst蛋白纯化原理GST蛋白纯化是一种常用的蛋白质纯化技术，其原理是利用谷胱甘肽-S-转移酶（Glutathione-S-transferase，GST）标签与谷胱甘肽的特异性结合来进行纯化。
GST标签可与谷胱甘肽通过二硫键共价亲和，然后通过GSH交换洗脱的原理进行蛋白纯化。
具体步骤如下：1.构建GST标签融合表达载体：将GST基因的编码序列与目标蛋白的编码序列融合，构建GST-目标蛋白融合表达载体。
这样，在细胞中表达该融合蛋白时，GST标签会紧密结合在目标蛋白的C端或N 端。
2.转染和蛋白表达：将构建好的GST-目标蛋白融合表达载体转染到合适的宿主细胞（如大肠杆菌），使其产生大量的融合蛋白。
3.细胞裂解和融合蛋白的亲和层析：收获融合蛋白的细胞，通过细胞裂解等方法破坏细胞膜，释放融合蛋白。
然后，将溶解的细胞提取物加载到含有谷胱甘肽固定在琼脂糖（或其他载体）上的亲和层析柱中。
GST标签可以特异性地与琼脂糖上的谷胱甘肽结合。
4.洗脱：通过洗脱缓冲液来去除非特异性结合的蛋白质，保留GST-目标蛋白复合物。
洗脱通常使用还原剂（如谷胱甘肽）、低pH 或其他方式进行。
5.目标蛋白的解离：将GST标签从目标蛋白上解离，得到纯化的目标蛋白。
这可以通过特定的酶切位点（如蛋白酶TEV切割位点）和相应的酶进行酶切，使GST和目标蛋白分别释放。
6.纯化分析：对纯化的目标蛋白进行分析，如SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等方法，确认目标蛋白的纯度和完整性。
在进行GST蛋白纯化时，对于融合表达载体的设计和构建、宿主细胞的选择、裂解条件和亲和层析条件的优化等方面都需要合理考虑，以获得高质量的纯化目标蛋白。
mgst3基因
mgst3基因MGST3基因是一种编码谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase）的基因。
谷胱甘肽S-转移酶是一类重要的酶，参与细胞内氧化还原过程，具有清除细胞内自由基和有害物质的功能。
本文将从MGST3基因的结构与功能、表达调控以及与疾病的关联等方面进行讨论。
MGST3基因位于人类基因组的染色体1p13.3区域，由4个外显子和3个内含子组成。
该基因编码的谷胱甘肽S-转移酶主要存在于细胞的内质网和线粒体膜上。
该酶通过转移谷胱甘肽（glutathione）等底物上的亲电性化合物的电荷，起到解毒和抗氧化的作用。
谷胱甘肽S-转移酶家族中的成员具有不同的底物特异性，MGST3基因编码的酶主要参与对环境毒物的解毒，如有机磷农药、致癌物和氧化应激物等。
MGST3基因的表达受到多种因素的调控。
研究发现，MGST3基因的表达受到细胞外信号分子的调控，例如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）等可显著上调MGST3的表达水平。
此外，转录因子也参与对MGST3基因的调控，如核转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）能够结合MGST3基因的启动子区域，促进其转录活性。
此外，DNA甲基化修饰也可能影响MGST3基因的表达水平。
这些调控因素的变化可能与MGST3基因在疾病中的作用有关。
MGST3基因与一些疾病的关联也得到了研究的关注。
研究发现，MGST3基因的多态性与肺癌、结直肠癌和乳腺癌等多种肿瘤的发生风险相关。
例如，某些MGST3基因多态性突变型与肺癌的易感性相关，可能与其对环境致癌物的解毒能力下降有关。
此外，MGST3基因的表达水平在某些疾病中也发生改变，如哮喘、阿尔茨海默病和帕金森病等。
这些研究结果表明MGST3基因可能在疾病的发生和发展中发挥重要作用。
MGST3基因编码的谷胱甘肽S-转移酶在细胞内起到重要的解毒和抗氧化作用，参与细胞内氧化还原过程。
该基因的结构与功能、表达调控以及与疾病的关联等方面的研究为我们深入了解该基因的生物学功能和潜在的临床应用奠定了基础。
谷胱甘肽S转移酶的研究进展及其与肿瘤的相关性
谷胱甘肽S转移酶的研究进展及其与肿瘤的相关性常彬霞;貌盼勇【摘要】Drug metabolism is one of the most important components in cell detoxification, and two enzymes, i.e. phase I drug metabolism enzyme and phase Ⅱ drug metabolism enzyme, are involved in the process- Glutathione-S-transferase (GST) is an important phase Ⅱ drug metabolic enzyme, which, together with phase I drug metabolic enzyme, may catalyze drugs to form high water-soluble products. Therefore, GST may counteract the lesions caused by endogenous and exogenous electrophilic substances, and play an important role in antitumorigenisis. The genes coding proteins that have GST activity constitute a super family, and distribute in at least 7 chromosomes. GST possesses many functions, and it is traditionally held that GST may counteract the lesions caused by endogenous and exogenous toxic compounds. Moreover, the over-expression of GST in tumor cells may mediate glutathione to bind on the substrates of anticancer drugs, accordingly leads to drug resistance of tumor.%药物代谢是细胞解毒机制的重要组成部分之一,其中主要涉及两种酶:Ⅰ和Ⅱ相药物代谢酶.谷胱甘肽S转移酶(GST)是一种重要的Ⅱ相药物代谢酶,可与Ⅰ相药物代谢酶一起催化药物形成高水溶性终产物.所以,GST能够抵御内源性和外源性亲电子物质的损害,并在抗肿瘤过程中发挥重要作用.编码GST的基因至少分布在7条染色体上,构成了一个超基因家族,编码具有GST活性的蛋白.GST有许多功能,传统观点认为,细胞中的GST可发挥防御内、外源性毒性化合物损害的作用.另外,GST在肿瘤细胞中高表达,可介导谷胱甘肽结合至大量抗癌药物底物上,导致肿瘤耐药的发生.【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2012(037)008【总页数】5页(P838-842)【关键词】谷胱甘肽转移酶;抗药性,肿瘤【作者】常彬霞;貌盼勇【作者单位】100039 北京解放军302医院非感染肝病诊疗中心;100039 北京解放军302医院试验技术研究保障中心【正文语种】中文【中图分类】R730.1细胞解毒机制可对抗环境中多种有毒物质的侵害，亦能对抗一些内源性物质(如在正常代谢过程中产生的活性氧化产物)的侵害，对维护机体健康至关重要。
gst标签蛋白诱导温度
gst标签蛋白诱导温度GST标签蛋白诱导温度引言：GST标签蛋白是一种常用的蛋白质标签，用于在分子生物学研究中标记和纯化目标蛋白。
在GST标签蛋白的表达和纯化过程中，温度是一个重要的因素。
本文将探讨GST标签蛋白诱导温度的选择和影响。
一、GST标签蛋白的基本原理GST标签蛋白是由谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase, GST）与目标蛋白之间的多肽序列连接而成。
GST标签蛋白具有一定的亲和力，可以与谷胱甘肽结合，并通过谷胱甘肽琥珀酸盐琼脂糖（glutathione agarose）亲和层析柱进行纯化。
二、GST标签蛋白的诱导温度选择GST标签蛋白的表达和纯化通常在大肠杆菌中进行。
在选择GST标签蛋白的诱导温度时，需要考虑到多个因素，包括目标蛋白的稳定性、溶解度、转化效率和纯化效果等。
1. 目标蛋白的稳定性：目标蛋白的稳定性是选择GST标签蛋白诱导温度的重要参考因素之一。
如果目标蛋白在高温下易于变性失活，那么应选择较低的温度进行诱导，以保持目标蛋白的活性。
2. 目标蛋白的溶解度：目标蛋白的溶解度也是选择GST标签蛋白诱导温度的考虑因素之一。
一些目标蛋白在高温下溶解度较低，可能会出现不溶性聚集体的形成。
因此，应根据目标蛋白的溶解度特性选择适当的诱导温度。
3. 转化效率和纯化效果：GST标签蛋白的转化效率和纯化效果也受到诱导温度的影响。
一般来说，较高的温度可以促进蛋白的表达，但也可能导致蛋白的部分变性和聚集。
因此，需要在转化效率和纯化效果之间进行权衡，选择适当的诱导温度。
三、GST标签蛋白诱导温度的影响GST标签蛋白诱导温度的选择直接影响到蛋白的表达水平和纯化效果。
适当的诱导温度可以提高目标蛋白的表达量，但过高的温度可能导致蛋白失活或变性。
此外，在高温下，GST标签蛋白容易发生聚集，从而影响纯化效果。
1. 表达水平：适当的诱导温度可以提高GST标签蛋白的表达水平。
一般来说，较高的温度可以促进蛋白的合成和折叠，从而增加表达水平。
烟草甲谷胱甘肽s-转移酶基因lsgste 1的表达及其与甲酸乙酯耐受性的关系
管）中的表达水平，以及在甲酸乙酯熏蒸胁迫后的5龄幼虫中的表达变化。进一步采用RNAi技术
沉默烟草甲5龄幼虫LsGSTei基因,通过生物测定分析烟草甲对熏蒸剂甲酸乙酯的敏感性变化&
【结果】获得LsGSTer基因的全长cDNA序列# GenBank登录号：MN480468），开放阅读框长684 bp,
编码227个氨基酸,N端和C端均存在催化保守位点。系统发育分析表明该基因属于 GSTe的
1 月 January 2020, 63(1) : 1 -10
昆虫学报
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
http: ! www. insect, ory. cn doi： 10.163E0/j. HcI.2020.01.001
烟草甲谷胱甘肽！转移酶基因LsGSTei的表达 及其与甲酸乙酯耐受性的关系
摘要：【目的】探究烟草甲Lasioderma serricorne谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase, GST） 基因LsGSTer的分子特性和生物学功能。【方法】在烟草甲转录组数据的基础上，利用RT-PCR技 术扩增LsGSTei基因，并进行生物信息学分析；采用qPCR技术检测LsGSTer在烟草甲不同发育阶 段（低龄幼虫、高龄幼虫、蛹、低龄成虫、高龄成虫）及高龄幼虫不同组织（表皮、中肠、脂肪体、马氏
中图分类号：Q966 文献标识码：A
文章编号：0454-6296（2020）01-0001-10
Expression of glutathione S-transferase gene LsGSTe& and its relationship
with ethyl formats toUrance it ths cigarettr beetle, Lasioderma serricorne
谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)试剂盒说明书
货号: MS1204 规格：100管/96样谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。
GST 是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外，因为 GST 具有 GSH-Px 活性，亦称为 non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
注意，GST 催化的反应减少 GSH 含量，但是不增加GSSG 含量。
测定原理：GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm 波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加2 mL蒸馏水溶解。
粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
货号: MS1204 规格：100管/96样
谷胱甘肽S-转移酶
（glutathione S-transferase，GST）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
GST 是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。
GST 是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与 GSH 的巯基共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此，GST 在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外，因为 GST 具有 GSH-Px 活性，亦称为 non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
注意，GST 催化的反应减少 GSH 含量，但是不增加GSSG 含量。
测定原理：
GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm 波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
自备仪器和用品：
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配置：
试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体×1 瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存。
临用前加2 mL蒸馏水溶解。
粗酶液提取：
1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，
加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
8000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体：直接测定。
测定：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340nm，用蒸馏水调零。
2. 试剂三放在 25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）保温。
3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL试剂一，180μL试剂二和20μL试剂三，
迅速混匀后于340nm 测定吸光度变化，记录10s和310s吸光度为 A1 和 A2。
4. 测定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入20μL上清液，180μL试剂二和20μL试剂三，
迅速混匀后于340nm 测定吸光度变化，记录10s和310s吸光度为A3和 A4。
注意：空白管只需测定一次。
第1页，共3页
GST 活性计算公式：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个酶活单位。
GST（nmol/min/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样品每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个酶活单位。
GST（nmol/min/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个酶活单位。
GST（nmol/min/104cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(细胞数量×V样÷V 样总)÷T=230×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个酶活单位。
GST（nmol/min/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷V 样÷T
= 230×[(A4－A3)－(A2-A1)]
ε：产物摩尔消光系数，9.6×103L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；106：1mol=1×106μmol；V 反总：反应体系总体积，220μL=2.2×10-4 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），5min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
(1). 按蛋白浓度计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个酶活单位。
GST（nmol/min/mg prot）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(Cpr×V 样)÷T=460×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷Cpr
(2). 按样本质量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样品每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH 结合为 1个酶活单位。
GST（nmol/min/g）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T=460×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每104个细胞每分钟催化1nmol/L CDNB与GSH结合为1个酶活单位。
第2页，共3页
GST（nmol/min/104cell）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷(细胞数量×V样÷V 样总)÷T=460×[(A4－A3)－(A2-A1)] ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1nmol/L CDNB GSH结合为1个酶活单位。
GST（nmol/min/mL）=[(A4－A3)－(A2-A1)]÷ε÷d×109×V 反总÷V 样÷T
=460×[(A4－A3)－(A2-A1)]
ε：产物摩尔消光系数，9.6×103L/mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；106：1mol=1×106μmol；V 反总：反应体系总体积，220μL=2.2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定，建议选用本公司生产的 BCA 蛋白质浓度测定试剂盒；W ：样品质量；V 样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V 样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），5min。
注意事项：
1. 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力；
2. 细胞中GST活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中GST的提取时可加试剂一
后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞；
3. 本法测定 GST 活性的线性范围可达76μmol/min /L，测定前先用1～2个样做预实验，如
5min 内反应不成线性，须对样品用蒸馏水稀释，计算结果乘以稀释倍数；
4. 测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃或者37℃（哺乳动物）。
第3页，共3页。