谷胱甘肽 S-转移酶(glutathione S-transferase ,GST)活性测定试剂盒使用说明
谷胱甘肽s转移酶分类
谷胱甘肽s转移酶分类
谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类广泛存在于生物体内的酶，它在细胞内起着重要的生物学作用。
GST根据氨基酸序列的相似性和功能特点，可被分为多个类别，主要包括以下几类：
1. α-类GST，包括GSTA1、GSTA2、GSTA3和GSTA4等亚型，主要在肝脏、肾脏和肠道中表达，参与对抗毒素和药物代谢。
2. μ-类GST，包括GSTM1、GSTM2、GSTM3和GSTM4等亚型，主要在肝脏中表达，参与对抗癌症药物和致癌物质的代谢。
3. π-类GST，包括GSTP1和GSTP2等亚型，广泛分布在多种组织中，参与对抗毒素和药物的代谢，对抗氧化应激和细胞凋亡等生物学过程。
4. θ-类GST，包括GSTT1和GSTT2等亚型，主要在肝脏和肾脏中表达，参与对抗毒素和药物的代谢。
5. ω-类GST，包括GSTO1和GSTO2等亚型，主要在肝脏、肠
道和肾脏中表达，参与对抗氧化应激和神经退行性疾病的发生。
除了上述主要的GST类别外，还有一些其他类别的GST，它们在细胞内扮演着重要的角色，如参与对抗氧化应激、解毒和药物代谢等生物学过程。
总的来说，GST的分类是根据其氨基酸序列的相似性和功能特点进行的，不同类别的GST在细胞内具有不同的生物学功能和代谢途径。
谷胱甘肽转移酶作用机制
谷胱甘肽转移酶（Glutathione S-transferase, GST）是一类重要的酶，在细胞代谢和解毒过程中发挥着重要的作用。
本文将从GST的定义、结构、分类、作用机制和应用等方面进行介绍。
一、GST的定义和结构GST是一种广泛存在于生物体内的酶，它可以将谷胱甘肽（Glutathione,GSH）与各种亲电性物质进行结合，从而发挥解毒作用。
GST的分子量约为25-30kDa，通常由两个不同的亚基组成。
其中一个亚基是催化亚基（catalyticsubunit），主要负责催化底物与GSH的结合反应；另一个亚基是结构亚基（structural subunit），主要负责保持酶的稳定性和催化亚基的活性。
GST的结构与功能密切相关。
它包含一个N端的信号肽序列、一个N端的结构域、一个C端的催化域和一个C端的结构域。
其中，催化域是GST最为重要的结构域，它包含了一个催化三肽（catalytic triad），包括谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和天冬氨酸（Asp），这些氨基酸残基在催化反应中发挥着关键的作用。
二、GST的分类GST是一类广泛存在于生物体内的酶，它在不同的物种和组织中具有不同的表达模式和功能。
根据氨基酸序列和催化机制的不同，GST可以分为多个家族和亚家族，如下表所示：家族 亚家族 物种Alpha GSTA1-GSTA5 人、鼠、猪、牛等Mu GSTM1-GSTM5 人、鼠、猪、牛等Pi GSTP1-GSTP4 人、鼠、猪、牛等Theta GSTT1-GSTT3 人、鼠、猪、牛等Sigma GSTS1-GSTS4 人、鼠、猪、牛等Omega GSTO1-GSTO2 人、鼠、猪、牛等Zeta GSTZ1-GSTZ3 人、鼠、猪、牛等Kappa GSTK1-GSTK3 人、鼠、猪、牛等三、GST的作用机制GST的主要作用是将亲电性物质与GSH结合，从而形成无毒的代谢产物，以保护细胞免受有害物质的损害。
gst蛋白纯化
GST蛋白纯化简介谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一种常用的亲和标签，用于在分子生物学研究中用于蛋白质纯化和蛋白质亲和结合实验。
GST蛋白被广泛应用于蛋白质结构和功能研究、酶学研究、蛋白质互作研究等领域。
本文将介绍一种常见的方法来纯化GST蛋白，该方法主要包括以下步骤：细胞裂解、亲和层析、洗脱和纯化。
方法细胞裂解首先需要将GST蛋白表达在适当的宿主中，例如大肠杆菌。
在细胞达到适当的生长阶段后，使用合适的方法将细胞裂解，使得目标蛋白释放到溶液中。
一种常用的裂解方法是超声波裂解，通过超声波震荡将细胞破碎。
亲和层析经过细胞裂解后，将得到的细胞裂解液通过亲和层析柱。
亲和层析柱通常使用含有还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）结合物质的树脂，例如glutathione agarose beads。
这种树脂与GST标签结合，使得GST标签的融合蛋白能够特异性地结合于柱子上。
通过洗脱液去除非特异结合蛋白，将目标蛋白纯化。
洗脱洗脱过程是将结合于柱子上的目标蛋白从固定相洗净。
一般采用含有高浓度还原型谷胱甘肽的洗脱液，例如50 mM GSH。
洗脱液中的还原型谷胱甘肽与柱子上的结合物质竞争与GST标签结合，以此达到将GST蛋白洗脱下来。
纯化经过洗脱后，蛋白溶液中的GST蛋白含量较高。
为了进一步提高纯度，可以通过对溶液进行浓缩、去除低分子量杂质、调整溶液pH值等方法进行纯化。
常用的纯化方法包括丙酮沉淀法、离子交换柱层析法等。
注意事项•在实验过程中应严格操作，避免任何可能导致目标蛋白污染的情况发生。
•选择合适的表达宿主，不同的宿主可能会对GST蛋白的表达量和可溶性产生影响。
•在细胞裂解过程中，避免样品受到温度、剧烈振荡等因素的影响。
•注意亲和层析柱的操作方法，避免破损或污染。
•洗脱过程中注意还原型谷胱甘肽浓度和洗脱液的pH 值。
结论GST蛋白纯化是一种常见的蛋白质纯化方法，通过亲和层析技术可以实现对GST蛋白的高效纯化。
gst蛋白纯化原理
gst蛋白纯化原理GST蛋白纯化是一种常用的蛋白质纯化技术，其原理是利用谷胱甘肽-S-转移酶（Glutathione-S-transferase，GST）标签与谷胱甘肽的特异性结合来进行纯化。
GST标签可与谷胱甘肽通过二硫键共价亲和，然后通过GSH交换洗脱的原理进行蛋白纯化。
具体步骤如下：1.构建GST标签融合表达载体：将GST基因的编码序列与目标蛋白的编码序列融合，构建GST-目标蛋白融合表达载体。
这样，在细胞中表达该融合蛋白时，GST标签会紧密结合在目标蛋白的C端或N 端。
2.转染和蛋白表达：将构建好的GST-目标蛋白融合表达载体转染到合适的宿主细胞（如大肠杆菌），使其产生大量的融合蛋白。
3.细胞裂解和融合蛋白的亲和层析：收获融合蛋白的细胞，通过细胞裂解等方法破坏细胞膜，释放融合蛋白。
然后，将溶解的细胞提取物加载到含有谷胱甘肽固定在琼脂糖（或其他载体）上的亲和层析柱中。
GST标签可以特异性地与琼脂糖上的谷胱甘肽结合。
4.洗脱：通过洗脱缓冲液来去除非特异性结合的蛋白质，保留GST-目标蛋白复合物。
洗脱通常使用还原剂（如谷胱甘肽）、低pH 或其他方式进行。
5.目标蛋白的解离：将GST标签从目标蛋白上解离，得到纯化的目标蛋白。
这可以通过特定的酶切位点（如蛋白酶TEV切割位点）和相应的酶进行酶切，使GST和目标蛋白分别释放。
6.纯化分析：对纯化的目标蛋白进行分析，如SDS-PAGE凝胶电泳、Western blot等方法，确认目标蛋白的纯度和完整性。
在进行GST蛋白纯化时，对于融合表达载体的设计和构建、宿主细胞的选择、裂解条件和亲和层析条件的优化等方面都需要合理考虑，以获得高质量的纯化目标蛋白。
mgst3基因
mgst3基因MGST3基因是一种编码谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase）的基因。
谷胱甘肽S-转移酶是一类重要的酶，参与细胞内氧化还原过程，具有清除细胞内自由基和有害物质的功能。
本文将从MGST3基因的结构与功能、表达调控以及与疾病的关联等方面进行讨论。
MGST3基因位于人类基因组的染色体1p13.3区域，由4个外显子和3个内含子组成。
该基因编码的谷胱甘肽S-转移酶主要存在于细胞的内质网和线粒体膜上。
该酶通过转移谷胱甘肽（glutathione）等底物上的亲电性化合物的电荷，起到解毒和抗氧化的作用。
谷胱甘肽S-转移酶家族中的成员具有不同的底物特异性，MGST3基因编码的酶主要参与对环境毒物的解毒，如有机磷农药、致癌物和氧化应激物等。
MGST3基因的表达受到多种因素的调控。
研究发现，MGST3基因的表达受到细胞外信号分子的调控，例如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）等可显著上调MGST3的表达水平。
此外，转录因子也参与对MGST3基因的调控，如核转录因子NF-E2相关因子2（Nrf2）能够结合MGST3基因的启动子区域，促进其转录活性。
此外，DNA甲基化修饰也可能影响MGST3基因的表达水平。
这些调控因素的变化可能与MGST3基因在疾病中的作用有关。
MGST3基因与一些疾病的关联也得到了研究的关注。
研究发现，MGST3基因的多态性与肺癌、结直肠癌和乳腺癌等多种肿瘤的发生风险相关。
例如，某些MGST3基因多态性突变型与肺癌的易感性相关，可能与其对环境致癌物的解毒能力下降有关。
此外，MGST3基因的表达水平在某些疾病中也发生改变，如哮喘、阿尔茨海默病和帕金森病等。
这些研究结果表明MGST3基因可能在疾病的发生和发展中发挥重要作用。
MGST3基因编码的谷胱甘肽S-转移酶在细胞内起到重要的解毒和抗氧化作用，参与细胞内氧化还原过程。
该基因的结构与功能、表达调控以及与疾病的关联等方面的研究为我们深入了解该基因的生物学功能和潜在的临床应用奠定了基础。
gst标签蛋白诱导温度
gst标签蛋白诱导温度GST标签蛋白诱导温度引言：GST标签蛋白是一种常用的蛋白质标签，用于在分子生物学研究中标记和纯化目标蛋白。
在GST标签蛋白的表达和纯化过程中，温度是一个重要的因素。
本文将探讨GST标签蛋白诱导温度的选择和影响。
一、GST标签蛋白的基本原理GST标签蛋白是由谷胱甘肽S转移酶（glutathione S-transferase, GST）与目标蛋白之间的多肽序列连接而成。
GST标签蛋白具有一定的亲和力，可以与谷胱甘肽结合，并通过谷胱甘肽琥珀酸盐琼脂糖（glutathione agarose）亲和层析柱进行纯化。
二、GST标签蛋白的诱导温度选择GST标签蛋白的表达和纯化通常在大肠杆菌中进行。
在选择GST标签蛋白的诱导温度时，需要考虑到多个因素，包括目标蛋白的稳定性、溶解度、转化效率和纯化效果等。
1. 目标蛋白的稳定性：目标蛋白的稳定性是选择GST标签蛋白诱导温度的重要参考因素之一。
如果目标蛋白在高温下易于变性失活，那么应选择较低的温度进行诱导，以保持目标蛋白的活性。
2. 目标蛋白的溶解度：目标蛋白的溶解度也是选择GST标签蛋白诱导温度的考虑因素之一。
一些目标蛋白在高温下溶解度较低，可能会出现不溶性聚集体的形成。
因此，应根据目标蛋白的溶解度特性选择适当的诱导温度。
3. 转化效率和纯化效果：GST标签蛋白的转化效率和纯化效果也受到诱导温度的影响。
一般来说，较高的温度可以促进蛋白的表达，但也可能导致蛋白的部分变性和聚集。
因此，需要在转化效率和纯化效果之间进行权衡，选择适当的诱导温度。
三、GST标签蛋白诱导温度的影响GST标签蛋白诱导温度的选择直接影响到蛋白的表达水平和纯化效果。
适当的诱导温度可以提高目标蛋白的表达量，但过高的温度可能导致蛋白失活或变性。
此外，在高温下，GST标签蛋白容易发生聚集，从而影响纯化效果。
1. 表达水平：适当的诱导温度可以提高GST标签蛋白的表达水平。
一般来说，较高的温度可以促进蛋白的合成和折叠，从而增加表达水平。
gst谷胱甘肽转移酶蛋白质结构
gst谷胱甘肽转移酶蛋白质结构下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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谷胱甘肽转移酶在植物抵抗非生物胁迫方面的角色
谷胱甘肽转移酶在植物抵抗非生物胁迫方面的角色谷胱甘肽转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一类广泛存在于植物、动物和微生物中的酶，其具有催化谷胱甘肽（glutathione，GSH）与各种亲电性物质结合的能力。
因此，GST可参与植物的许多生理和代谢过程，例如调节氧化还原状态、解毒代谢产物、维持免疫稳态等。
在植物抵御非生物胁迫方面，GST显现出重要的作用。
一方面，GST参与了植物对多种化学物质的解毒作用。
许多农药、重金属等环境污染物对植物的生长和发育具有严重的危害，而GST可以通过将这些有害物质与谷胱甘肽还原成无毒物质进行解毒。
例如，在植物受到除草剂禾草灵（2,4-dichlorophenoxyacetic acid，2,4-D）的胁迫时，GST的活性会显著增强，进而降低禾草灵的毒性，保护植物免受其伤害。
另一方面，GST也介导了植物的抗氧化应答。
氧化胁迫是影响植物生长和发育的一个重要因素，它会导致许多有害氧自由基的释放和累积，对细胞膜、蛋白质和核酸等生物大分子造成损伤。
然而，GST可以与氧自由基结合，形成稳定的产物，并且能通过调节各种氧化还原酶的活性，减轻氧化胁迫带来的不良影响。
例如，在盐胁迫的情况下，GST可以与过氧化氢进行结合，减轻ROS的毒性，维持细胞内氧化还原平衡。
除此之外，GST也参与了植物的信号转导和细胞壁合成等过程，总体上显现出了对植物逆境适应的重要作用。
值得注意的是，不同的植物在不同的环境中所表现出的GST特异性和功能也存在差异，这对植物抵御非生物胁迫的策略选择和调整具有一定的指导意义。
总之，谷胱甘肽转移酶在植物抵御非生物胁迫方面发挥了重要的调节作用，它可以通过解毒作用和抗氧化应答等机制，降低环境污染物和氧化自由基对植物的损伤，保护植物的生长和发育。
在今后的研究中，我们可以进一步探究GST在植物逆境生存中的作用机制和生物学意义。
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谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）活性测定试剂盒使用说明货号：SN101
规格：50管/48样
产品简介：
谷胱甘肽S-转硫酶（GST）是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细胞质内。
GST是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与谷胱甘肽巯基的共价结合，使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外的目的。
因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。
此外，因为GST具有GSH-Px活性，亦称为non-SeGSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。
GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm，通过测定340nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml石英比色皿、双蒸水
产品内容：
试剂一：试剂一×1支，用前充分溶解于100ml双蒸水中，4℃保存3个月
试剂二：粉剂二×1支；稀释液二×1管，用前将稀释液二加入粉剂二中充分溶解后加双蒸水至 5.0ml，4℃保存3个月
试剂三：粉剂三×1支，4℃保存3个月，临用前加试剂一 5.0ml充分溶解，临用前配制。
操作步骤：
一、样品测定的准备：
称约0.1g组织，加入1ml试剂一，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清(如上清不清澈，再离心3min)。
二、GST测定操作
1、混合试剂配制：将试剂二与试剂一按1：8混合
2、试剂三放在25℃预温
3、分光光度计调到340nm处，设定时间为5min，用双蒸水调零
4、取0.1ml样品与0.9ml混合液混合，于25℃预温5min，再加入试剂三0.1ml，迅速混匀，于340nm处测定5min内吸光值的变化,第0s的吸光值记为A1，第300s的吸光值记为A2
5、空白管测定为操作4中以0.1ml试剂一代替0.1ml样品液
酶活计算：
一、血液GST活性计算
1、GST活力单位定义：在25℃下，每ml血液每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合的GST酶量为U。
2、计算公式：
GST（U/ml）=ΔA340/min×〔106/(ε·d)〕×（V总/V样）=ΔA/min×106/(9.6×103×1)〕×1.1/0.1=ΔA340/min×1145.83
△A340=△A测定管-△A空白管，△A测定管与△A空白管均等于（A2-A1）/5，即每分钟吸光值变化3mol/L•cm
ε：产物在340nm处摩尔吸光系数为9.6×103mol/L•cm
106：摩尔分子换算成微摩尔分子
d：比色杯光径（cm）
V总：反应总体积（ml）
V样：所用样品体积（ml）
二、组织GST活性计算
1、GST活力单位定义：在25℃下，每毫克蛋白每分钟催化1μmol/L CDNB与GSH结合的GST酶量为1U。
2、计算公式：
GST（U/mg）=△A340/min×[106/(ε•d)]×(V总/V样)÷Cpr=△A340/min×106/(9.6×103×1)×1.1/0.1÷Cpr=△A340/min×1145.83÷Cpr
△A340=△A测定管-△A空白管，△A测定管与△A空白管均等于（A2-A1）/5，即每分钟吸光值变化
ε：产物在340nm处摩尔吸光系数为9.6×103mol/L•cm
106：摩尔分子换算成微摩尔分子
d：比色杯光径（cm）
V总：反应总体积（ml）
V样：所用样品体积（ml）
Cpr：蛋白浓度（mg/ml）
注意事项：
a)样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力
b)本法测定GST活性的线性范围可达76U/L，测定前先用1～2个样做预实验，如5min 内反应不成线性，须对样品做相应稀释，稀释时用样品提取液稀释，计算结果乘以稀释倍数。
c)测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃
不同测定材料中GST酶液提取的注意事项
哺乳动物溶血液的配制：
①取肝素抗凝全血(人)20μL，以蒸馏水稀释至1mL，配成1：49的溶血液；取肝素抗凝全血(鼠)10μL加蒸馏水至1mL，配成1：99的溶血液。
②充分混匀，放置5分钟直至使玻璃管中的溶血液对光呈完全透明状，方可进行检测。
③已配好的溶血液中酶活力只能保持45-60分钟，天冷时可延迟至120分钟。
如果当天来不及测定则以抗凝全血冰箱（4-8℃）保存，2-3天内酶活力变化不大。
哺乳动物组织中GST的提取：由于哺乳动物组织中酶活力较大，为保证灵敏度，要注意用试剂一将酶提取液进行稀释，肝脏稀释50倍左右，肾脏稀释20倍左右。
计算酶活力时乘以相应稀释倍数。
细胞处理：收集约2×104个细胞，冷冻干燥后，加入1mL试剂一。
超声破壁细胞(950 W，30%，15min，工作1s间隔2s)，再经1,0000r4℃高速离心10min，上清待测。
其它步骤按照试剂盒说明书操作即可。