人工雌育石斑鱼批量诱导、性腺发育及微卫星开发
鞍带石斑鱼精子诱导斜带石斑鱼雌核生殖
鞍带石斑鱼精子诱导斜带石斑鱼雌核生殖樊欣;张维炜;吴廷昌;文鑫;陈猛猛;吴光灿;骆剑【期刊名称】《水生生物学报》【年(卷),期】2022(46)11【摘要】石斑鱼性成熟时间长和雌雄同体的特性延长了其育种的周期,采用人工雌核生殖策略能够显著提高选育效率。
研究筛选了鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)精子人工诱导斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)雌核生殖的最佳条件,并通过形态学、流式细胞术和微卫星分子标记等方法进行鉴定。
结果显示,灭活的异源精子可成功诱导斜带石斑鱼人工雌核生殖,精子灭活的最佳紫外照射强度为518 mJ/cm^(2);卵子受精后6min在4—6℃的条件下进行冷休克处理,可获得最优的40%的表观受精率(卵子正常分裂比率)和29.7%的孵化率,而未冷休克的对照组具有83.5%的表观受精率和80%的单倍体率。
多重比较结果表明,在表观受精率方面人工诱导的时间差异(P=0.579)和水温差异(P=0.133)并不显著;而在孵化率上,处理时间组间差异极显著(P=0.002),而在水温组中差异不显著(P=0.396)。
胚胎发育结果显示,人工雌核生殖诱导会导致孵化率降低,单倍体胚胎出现明显的发育障碍。
微卫星分子标记鉴定结果显示,石斑鱼人工雌核生殖子代的遗传物质大部分来自于母本,同时也存在异精效应。
【总页数】9页(P1675-1683)【作者】樊欣;张维炜;吴廷昌;文鑫;陈猛猛;吴光灿;骆剑【作者单位】海南大学海洋学院【正文语种】中文【中图分类】S961.2【相关文献】1.鞍带石斑鱼(Epinephelus lanceolatus)♂×斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)♀杂交子一代青龙斑血液学及血液生理生化特性的比较研究2.斜带石斑鱼(♀)×鞍带石斑鱼(♂)受精细胞学的组织切片观察3.斜带石斑鱼（♀）×鞍带石斑鱼（♂）杂交子代幼鱼消化道粘液细胞和胃泌素细胞的研究4.斜带石斑鱼（♀）×鞍带石斑鱼（♂）杂交子代幼鱼消化道粘液细胞和胃泌素细胞的研究5.斜带石斑鱼（♀）×鞍带石斑鱼（♂）杂交子代仔、稚鱼的异速生长因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
石斑鱼快繁方法与设计方案
本技术提供一种石斑鱼快繁方法，包括以下步骤：选择雌性和雄性石斑鱼作为亲本；选择室内池塘，池塘连通水循环装置，每天投喂营养料，所述营养料包括以下重量份原料：鳝鱼、泥鳅、花螺肉、牡蛎、河蚌肉和颗粒饲料；所述颗粒饲料包括以下组分：玉米蛋白粉、螺旋藻粉、富硒地瓜粉、虾青素、复合维生素、抗菌肽、大蒜粉、磷虾粉、大豆卵磷脂、益母草粉、墨旱莲提取物、三乳酸甘油酯；每天依次采用绿光、白光和黄光进行照射，先采用绿光照射，再白光照射，最后黄光照射；待亲鱼性成熟，自然产卵受精，将受精卵捞出移入培育池中进行孵化，得到仔鱼。
采用本技术石斑鱼快繁方法，亲鱼性成熟时间快，亲鱼产卵量高，受精率以及孵化率都比较较高。
权利要求书1.一种石斑鱼快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)亲本选择：选择2～4龄雌性和雄性石斑鱼作为亲本；(2)培育强化：选择室内池塘，所述池塘连通水循环装置，用于保持水循环，每天投喂营养料，日投量为鱼体重量的15～20％，日投2～4次，所述营养料包括以下重量份原料：鳝鱼6～9份、泥鳅3～7份、花螺肉5～10份、牡蛎1～3份、河蚌肉4～8份和颗粒饲料12～15份；所述颗粒饲料包括以下重量份组分：玉米蛋白粉4～7份、螺旋藻粉6～9份、富硒地瓜粉5～8份、虾青素8～12份、复合维生素0.3～0.5份、抗菌肽1～2份、大蒜粉3～7份、磷虾粉2～4份、大豆卵磷脂3～5份、益母草粉8～13份、墨旱莲提取物4～6份、三乳酸甘油酯0.2～0.3份；每天依次采用绿光、白光和黄光进行照射，先采用绿光照射20～30min，绿光光照强度为900～1100lx，再白光照射30～40min，白光光照强度为1400～1600lx，最后黄光照射15～25min，黄光光照强度为1300～1500lx，三色光轮流照射重复2～4次；(3)受精孵化：待亲鱼性成熟，自然产卵受精，将受精卵捞出移入培育池中进行孵化，得到仔鱼。
2.根据权利要求1所述的一种石斑鱼快繁方法，其特征在于，步骤(2)中，投放密度为1～2尾/m2。
淡水石斑鱼人工养殖技木
育。 （） ３ 鱼种 培育
冬龄 ， 便可达到性成熟。在 自 然条件下 ， 达到性成 熟 的亲鱼与罗非鱼相同， 会在池塘底部挖穴产卵。 在人 工控制 条件 下 ， 选 用 ２０— ０ 可 ５ ４ ０ｇ亲本 １０ ５
２ ｌ
淡水 石斑 鱼在 投 喂 少量 饵 料 后 ， 很 快 向 投 饵 区 就
枝角类 ） 便可放入 鱼苗 。肥水时 间与鱼苗下塘 ，
一
集中， 可见明显 的抢食现象 ， 鱼吃饱 后慢慢散开。 投饵后 ， 若鱼食欲不高 、 反应迟钝 、 抢食不激 烈， 则 要注意是否水质不好 、 饵料霉变 、 鱼病或天气变化 较大等 ， 时分析原因， 应及 采取对策 。 及 时调 整投 喂 量 ： 水 石斑 鱼属 亚 热带 鱼种 ， 淡 喜高温 ， 在水温较高 的季节 ， 其摄食量大 ， 生长迅 速， 应适当增加投饵量。一般 日投喂量为鱼体重 的３ 一 ％， ％ ５ 每天投喂 ２— ３次。并视摄食 、 天气 等情况适当增减。每 １ — Ｏ天测量 鱼的生长情 ５ ２
般在２ ０℃ 以上 。产 卵后 ， 亲鱼 日夜守 护在 卵巢
附近 ， 防卫并 清理 卵巢 。受 精 卵呈 暗黄绿 色 ， 透 不 明， 黏性 ， 散排 列 在 巢 穴 内 ， 少 重 叠 。一 般 成 分 很 熟 亲鱼 在繁 殖 期 产 卵 ３批 后 进 入 夏 季 肥 育 期 ， １ 次产 卵在 ２００— ０ ０ ３００粒 。在人 工 饲 养 下 ， 养 营
平衡（ 如连 续 ５— ７天就 会 死亡 ） 。该 鱼 在人 工 养 殖 水泥池 中具 有集 群 占区行为 ， 比较 懒惰 ， 只对 眼
淡水石斑鱼受精卵人工孵化及鱼苗不同饵料投喂试验
们做好水产科研工作 ，包括我们今天研讨会就 是落 实 习近 平 总书记 和 韩长赋 部 长讲话 精神 的一 个 具体举 措 ，“ 搭建 交 流平 台 、共谋 行 业 发展 ”这个 主 题 很 好 ，希望通过这次研讨会 的举办 ，我们 能为 淡水水产 品加工技术 的研发 、交流 、供需对接提供一个有效的
平 台，推动淡水鱼加工业发展 ，推动渔业供给侧结构
源利用方式 、生产方式 、经营方式和管理方式 ，并强 调要优 化渔业要 素投入 结构 ，加强政 策规划和 引导 ，
统筹安排资金项 目，推动各类生产要素流 向深远海养
殖 、加工流通 、休闲渔业、资源保护等方面 ，提高渔 业的全要素生产率 。相信随着这些政策的落实 ，水产 品加 工业会 打开一个全新 的空间。 破解水产品加工业发展面临 的难题 ，归根到底还 是要靠创新 。习近平 总书记 在 Ｇ ２ ０ 杭 州峰会的新 闻发
一
ｒ ｎ ａ ｎ ａ ｇ ｕ ｅ ｎ ｓ ｅ ） ，又 称 花老 虎 、美 洲 虎鲷 等 ，属 鲈 形 目、隆头鱼亚 目、慈鲷科、丽体鱼属 ，原产于中美洲 的尼加拉瓜 、洪都拉斯 、哥斯达黎加等地的河流及湖 泊 中 。淡 水 石斑 鱼 １ ９ ７ ６年 率 先 由我 国 台湾 地 区 引 入 ，并逐渐成 为台湾南部地 区普遍 的淡水养殖 品种 ， ２ ０ 世纪 ９ ０ 年代 广东 、江 西 、福 建等地 一些科研 单位
曝气 方式 。水质要 求清新无污 染 ，水源 为地下井水 ，
细嫩 、味道鲜美 ，所 以在销售市场上认可度极高 ， 目 前淡水 石斑鱼市场批 发价格达到 ４ ０ ４６ ０ 元／ 千 克 ，每 亩养殖效益可达万元 ，养殖效益非常可观 ， 目前 国内 许 多地 区开始养殖生产 。当前 国内淡水石斑鱼养殖产 量最大 的地 区为福建漳州 ，每年可生产淡水石斑鱼商
人工诱导雌性花鳗鲡性腺发育成熟的研究的开题报告
人工诱导雌性花鳗鲡性腺发育成熟的研究的开题报告一、选题背景花鳗鲡（Anguilla japonica）是重要的经济鱼类，在亚洲地区有较高的养殖价值。
但是，花鳗鲡的繁殖具有很大的挑战性，难以进行人工控制。
解决繁殖问题是当前花鳗鲡养殖面临的重要问题之一。
花鳗鲡繁殖主要通过成熟度控制来实现，而性腺发育成熟是成熟度控制成功的关键。
通过人工诱导性腺发育成熟，可以控制花鳗鲡的繁殖行为，促进生殖成功，解决花鳗鲡人工繁殖的难题，具有重要的理论和实际意义。
二、研究目的本研究旨在探究对花鳗鲡雌性个体进行人工诱导，使性腺发育成熟的方法和途径，促进花鳗鲡人工繁殖行为的发生，提高人工繁殖的成功率，为花鳗鲡的人工繁殖提供有力支持。
三、研究内容及步骤1、了解花鳗鲡性腺发育成熟的生理机制及相关研究进展。
2、对花鳗鲡雌性个体进行体内和体外重组激素处理，观察处理后性腺的发育及成熟情况。
3、建立雌性花鳗鲡性激素水平的测定方法和技术体系。
4、分析处理方法对花鳗鲡雌性个体繁殖行为的影响。
5、对花鳗鲡性腺发育及繁殖行为的诱导机制进行深入研究。
四、预期成果1、建立针对花鳗鲡雌性个体的人工诱导性腺发育成熟的方法和途径。
2、对花鳗鲡性激素的测定方法和技术进行改进和完善。
3、探究人工诱导对花鳗鲡性腺发育及繁殖行为的影响及机理，并提供科学理论和技术方法为花鳗鲡的人工繁殖提供支持。
五、研究意义1、为花鳗鲡养殖工业提供新的技术手段和理论支持，提高养殖效益和质量。
2、丰富花鳗鲡繁殖领域的研究成果，为其他鱼类繁殖行为的控制提供借鉴和参考。
3、推动我国水产养殖科技的进步，提高我国水产养殖业的整体竞争力。
玛拉巴石斑鱼工厂化人工育苗技术（下）
玛拉巴石斑鱼工厂化人工育苗技术（下）（2）轮虫、蒙古裸腹蚤的培养：培养池为常用水泥池，24小时连续充气，充气量以轮虫、蒙古裸腹蚤不因缺氧而浮于水面为宜。
每天投喂适量酵母和小球藻液，轮虫培养每天投喂酵母量为0.005克/万个，分4～6次投喂;蒙古裸腹蚤投喂酵母量为1～2毫克/升，分3次投喂;每天换水20%，换水后添加小球藻液至原水位。
同时适量投喂用EM菌、动物血粉、鱼精、花生粕混合发酵的浓液，以增加轮虫营养。
在培养池壁和池底保持一定量的丝状藻类，对轮虫和蒙古裸腹蚤的生长十分有益，丝状藻可以吸附池中氨氮和污物，减少培养环境的污染，延长轮虫、蒙古裸腹蚤的培养生长期。
2.育苗池及用具消毒将育苗池和育苗使用器具用50毫克/升漂白粉或100毫克/升高锰酸钾喷洒消毒，并用消毒海水或淡水冲洗2遍。
五、幼苗培育1.鱼卵孵化一是将受精卵置于FRP三脚桶孵化，放卵密度为30万～40万粒/桶，充气、微流水，仔鱼出膜后带水移入育苗池;二是直接将受精卵放入育苗池中孵化，放卵密度为1.5万～2万粒/平方米。
石斑鱼工厂化育苗生产中常用原培育池直接孵化，以减少仔鱼因搬动受伤造成损失。
2.仔、稚鱼的放养密度初孵仔鱼的放养密度以1.5万～2万尾/平方米为宜。
培育35天后，鱼苗全长可达到2.5～3.0厘米，鱼苗收棘后，此时个体大小差异增大，且牙齿已长成，开始出现互相残杀现象，应及时筛分疏养，密度调整为0.2万～0.3万尾/平方米。
3.日常管理（1）'绿水'营造：仔鱼入池前或出膜后，在育苗池中接入小球藻液，使池水呈微绿色，此后每天添加，浓度保持在50万细胞/毫升，直到稚鱼期投喂冰冻的枝角类、桡足类、卤虫成体等死饵料时停止注入小球藻液。
（2）换水与吸污：仔鱼入池后，前7天为静水充气培育，每天添加藻液和新水5～10厘米至池满为止，7天后开始定时定量以微细对流水方式换水，每天换水量为10%～30%，换水量随鱼苗的增长逐渐加大。
蓝瓜子石斑鱼孵化养殖技术
蓝瓜子石斑鱼孵化养殖技术蓝瓜子石斑鱼（Epinephelus lanceolatus）是一种优质的海水养殖鱼类，因其肉质鲜美、价格高昂，备受市场青睐。
然而，由于蓝瓜子石斑鱼的繁殖生长周期长、繁育技术复杂，使得其养殖技术一直备受关注。
本文将介绍蓝瓜子石斑鱼的孵化养殖技术，并深入探讨孵化过程中的关键环节、养殖环境的管理以及疾病防控等方面的知识。
一、蓝瓜子石斑鱼孵化技术1.繁殖基础蓝瓜子石斑鱼属于雌雄同体鱼类，雌鱼可以产卵，雄鱼可以产精子，通过人工控制可实现蓝瓜子石斑鱼的人工繁育。
一般来说，适宜的繁殖温度为26-29℃，适宜的盐度为32-34‰，适宜的PH值为8.0-8.5。
2.产卵过程产卵期一般在春季，在产卵前1-2天，要将雌鱼和雄鱼分开饲养，并加大投喂量。
产卵时，雌鱼体型肥硕，腹部明显隆起，游动不慌张。
采用人工控制产卵的方法，在特定条件下，促使雌鱼向特定地点产卵，并借助人工手段收集卵子。
3.人工受精将收集的卵子放入特定的容器中，然后加入雄鱼产的精子，轻轻搅拌，促使受精。
受精卵在水中浮游，这时需及时将受精卵转移至孵化箱中进行孵化。
4.孵化过程孵化过程中，孵化箱内水温要保持在26-29℃，盐度在32-34‰，PH值在8.0-8.5。
孵化箱需保持通风换气，以保证水质清新。
孵化期一般为2-3天，待幼鱼脱壳后及时进行喂食。
二、蓝瓜子石斑鱼养殖技术1.养殖池环境管理蓝瓜子石斑鱼的养殖需要专门的人工育苗场。
育苗场需保持水质清新，光照充足，定期清理残余饲料和排泄物，保持养殖池内的环境清洁整洁。
2.喂食管理幼鱼开始喂食后，需定时、定量喂食，喂食时间一般为每天3-4次。
幼鱼的饲料主要以小型浮游动物为主，也可以适量添加鱼粉、鱼饵等。
逐渐过渡到粉状饲料和颗粒饲料。
3.疾病防控蓝瓜子石斑鱼的养殖过程中，常常会受到各种疾病的侵袭，因此需加强疾病防控。
定期进行水质监测，保持养殖池的水质清洁良好；定期检查鱼体健康状况，及时发现并治疗疾病。
七带石斑鱼
七带石斑鱼（吴雷明，2011，七带石斑鱼繁殖生物学及人工繁育技术研究进展）繁殖生物学性转化：石斑鱼是雌性先熟，雄性后熟并具有性逆转(Sexreversa1)特性，人工养殖需要花费大量的人力、物力、时间来培养雄性亲鱼，雄性亲鱼获得较难，这也是石斑鱼在生产过程中苗种数量受到限制的一个重要因素。
[雌鱼最小性成熟年龄为5～6龄，雄鱼性成熟最小体质量应大于6kg。
]快速获得雄性亲鱼：1、激素埋植法；2、药饵投喂法[连续口服甲基睾酮(Methyhestosterone，以下简称MT，剂量为每kg鱼体质量1mg)诱导低龄雌鱼(体质量2．1～3．3kg)，分别采用口服MT(用量每kg饵料10rag)和腹腔埋植MT缓释制剂(用量每kg鱼体质量1mg或4mg)的方法，对4龄雌鱼(全长45．7～54．1cm，体质量1．3～2．8kg)][繁殖季节为5月中旬前后，产卵水温为20℃左右](刘新福，2010，七带石斑鱼人工繁育技术研究进展)配子特点：七带石斑鱼为分批成熟，多次产卵的鱼类。
成熟的卵为浮性卵，圆形，无色透明。
有一个圆形的油球位于中央，呈淡黄色。
用13％海藻糖作为保护剂冷冻保存七带石斑鱼的精子。
[精子活力最强时的最适盐度为30，最适温度为22．8℃，激烈运动时间最长为33．99min；15以下的低盐度水和淡水对七带石斑鱼精子活力具有可逆的抑制作用。
精子在4℃下低温保存l周以上能保持较强活力。
超低温保存精子解冻后的存活率为10％以上，其最适激活盐度为25。
]（区又军，2011，七带石斑鱼精子活力及其与环境的关系）胚胎发育：七带石斑鱼受精卵分裂方式属于盘状卵裂。
在水温为20℃±1℃时，孵化时间为38h左右。
受精卵孵化的最适盐度为30～35。
（陈超，2011，七带石斑鱼胚胎及仔稚鱼形态观察）至4日龄，卵黄囊（包括油球）完全消失。
由于初孵仔鱼游泳能力低，大部分悬浮在水中。
仔鱼期的标志是卵黄囊已消失、身体透明、腹鳍棘和第二背鳍棘的长出及伸长（谢菁，2009，七带石斑鱼胚体和卵黄囊期仔鱼的发育）稚鱼期主要标志是腹鳍棘和第二背鳍棘收缩以及鳍棘上小刺数目急剧减少、鳞片生长、体色及斑纹形成。
《斑马鱼的性腺发育》课件
01
辅助生殖技术
深入了解性腺发育的机制，可以为辅助生殖技术提供理论基础和实践指
导。
02
性别决定与性别分化调控
研究性腺发育过程中的性别决定和性别分化调控，有助于解决性别比例
失调问题。
03
疾病模型与药物研发
斑马鱼作为一种常见的疾病模型，其性腺发育研究可以为人类相关疾病
的防治提供借鉴，同时为药物研发提供新的思路和靶点。
随着基因组学、转录组学和表观遗传学等技术的不断发展，未来将 有更多关于性腺发育的分子机制被揭示。
跨物种比较研究
比较不同物种的性腺发育过程，可以发现共性和差异，有助于更全 面地理解性腺发育的本质。
探索环境因素对性腺发育的影响
研究环境因素如何影响性腺发育，有助于预防和解决与性腺发育相 关的问题。
性腺发育研究的应用前景
02
斑马鱼的生殖系统
雄性生殖系统
睾丸结构
支持细胞与内分泌调节
详细描述斑马鱼雄性生殖系统中睾丸 的构造，包括精细组织和功能区域。
介绍支持细胞对精子生成的影响以及 内分泌系统如何调节性腺发育。
精子生成
阐述在睾丸中，生殖细胞如何经历减 数分裂并形成精子的过程。
雌性生殖系统
01
02
03
卵巢结构
详细描述斑马鱼雌性生殖 系统中卵巢的构造，包括 卵泡的数量和发育阶段。
05
性腺发育异常与疾病
性腺发育异常的表现
生殖细胞数量减少
性腺中生殖细胞的数目减少， 可能导致繁殖能力下降。
生殖细胞形态异常
生殖细胞的形态出现异常，如 大小不一、形状不规则等。
性腺结构异常
性腺的形态和结构发生改变， 可能表现为性腺萎缩或增生。
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人工雌育石斑鱼批量诱导、性腺发育及微卫星开发棕点石斑鱼(Epinephelusfuscogutatus)隶属于石斑鱼属,具有较高的营养价值,是我国南方沿海重要养殖品种之一。
由于长期采用“野种家养”的模式,棕点石斑鱼种质逐渐退化,养殖性能不稳定已成为产业的瓶颈因素。
由于石斑鱼属于先雌后雄的天然性逆转鱼类,传统的家系育种方式较慢,因此高效的育种技术才是棕点石斑鱼良种选育的可行方案。
本实验室前期已经完成棕点石斑鱼人工雌核发育的诱导条件的研究,然而石斑鱼育苗成活率低,常规方法制备的少量雌核发育卵子,很难培育出足够数量的苗种用于选育。
本论文在前期研究的基础上,开展了批量制备人工诱导雌核发育棕点石斑鱼的研究。
本研究通过采用高精度节能恒温槽控温替代冰浴控温;自制大尺寸紫外灯箱,通过增加紫外线照射剂量和精子处理量的方式增加精子批量处理效率;并采用C1(正常精卵受精对照组)和C2(正常卵子与处理精子受精未休克对照组)两组对照控制每批人工诱导雌核发育的生产质量。
实验结果表明,本批量制备方法通过高精度节能恒温槽控温,单次处理量可达600g卵子;通过优化紫外照射条件,使得在1h左右能够处理120ml稀释后的精子。
采用批量处理技术,人工诱导雌核发育处理组孵化率40.9±4.8%,未休克对照组孵化率C2<5%;对比实验规格单次处理100g卵子,63.2%孵化率的产量,批量制备单次制备所获得的出膜幼苗量提高了 4倍,完全可以满足常规育苗需要,为人工诱导雌核发育石斑鱼育种的应用奠定了基础。
本论文针对人工雌核发育子代性腺发育的问题进行了初步研究,采用组织学切片技术,研究了 74个2]月龄人工诱导雌核发育群体的性腺发育状况。
研究结果表明,26个雌核发育石斑鱼个体发育到I期-II期卵巢,48个个体未能分辨性
别。
这说明通过人工诱导雌核发育技术所培育的棕点石斑鱼的子代至少是部分可以形成卵巢,而且发育程度与正常石斑鱼相同。
为了鉴定雌核发育棕点石斑鱼,本论文采用高通量转录组技术开发棕点石斑鱼微卫星引物。
选取了心、肝、脾、肾、性腺、肌肉等组织进行转录组测序,获得了 20725个微卫星位点,其中,合成了其中61个位点的SSR引物,经过筛选采用18个位点对,并在普通人工养殖群体进行了初步的验证。
结果表明,18个SSR的平均等位基因数为11.8,平均观测杂合度为0.9552,平均期望杂合度为0.8292,平均多态信息含量为0.7892,其中有18个位点表现出高多态性(多态信息含量> 0.5)。
这些引物能够用于雌核发育棕点石斑鱼微卫星鉴定及普通群体棕点石斑鱼的遗传多样性研究。