激光共聚焦显微镜实验室开放管理的探讨

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简述激光共聚焦显微镜的工作原理

简述激光共聚焦显微镜的工作原理

简述激光共聚焦显微镜的工作原理
激光共聚焦显微镜是一种高分辨率显微镜,它利用激光束的聚焦作用和荧光探针的发光特性,可以在细胞和组织水平上观察生物分子的动态过程。

下面我们来详细了解一下激光共聚焦显微镜的工作原理。

激光共聚焦显微镜的工作原理基于激光束的聚焦作用。

激光束通过透镜系统聚焦到样品表面上,形成一个非常小的光点。

这个光点的大小和形状可以通过调整透镜系统的参数来控制。

当激光束聚焦到样品表面上时,样品中的荧光探针会被激发发出荧光信号。

这个荧光信号会被激光束收集并聚焦到探测器上,形成一幅荧光图像。

激光共聚焦显微镜的另一个重要特点是它的光学切片能力。

由于激光束的聚焦作用,激光共聚焦显微镜可以在样品内部形成一个非常小的光点,这个光点可以在样品内部移动,形成一系列的荧光图像。

通过这些荧光图像,我们可以重建出样品内部的三维结构,实现光学切片的效果。

激光共聚焦显微镜的工作原理还包括荧光探针的选择和激发波长的选择。

不同的荧光探针有不同的发光特性,可以用来标记不同的生物分子。

激发波长的选择也非常重要,不同的荧光探针有不同的激发波长,选择合适的激发波长可以提高荧光信号的强度和分辨率。

激光共聚焦显微镜是一种高分辨率显微镜,它利用激光束的聚焦作
用和荧光探针的发光特性,可以在细胞和组织水平上观察生物分子的动态过程。

它的工作原理包括激光束的聚焦作用、荧光探针的选择和激发波长的选择等。

通过激光共聚焦显微镜,我们可以更加深入地了解生物分子的结构和功能,为生命科学研究提供有力的工具。

高校实验设备的开放与管理的思考

高校实验设备的开放与管理的思考

高校实验设备的开放与管理的思考1. 引言1.1 背景介绍引言随着高校教育和科研水平的不断提升,实验设备作为支撑实验教学和科研的重要工具在高校中发挥着越来越重要的作用。

实验设备的开放与管理问题成为当前高校面临的重要挑战之一。

高校实验室通常配备着各种各样的实验设备,如显微镜、实验台、化学药品等,这些设备都是高校科研和教学工作的基础设施。

由于实验设备种类繁多、设备价值高昂,管理难度较大,往往容易出现设备被损坏、丢失或者资源浪费等问题,严重影响了高校实验教学和科研工作的正常开展。

随着高校科研和教学工作的不断深入,实验设备的开放管理问题也日益突出。

实验设备的共享和合理利用,能够提高设备利用率,节约资源,并促进科研成果的共享和交流,有利于高校科研和教学水平的提升。

如何开展有效的实验设备开放管理,成为当前高校亟需解决的问题之一。

1.2 问题意识高校实验设备的开放与管理中存在一些问题需要引起我们的关注和思考:1. 设备管理混乱:由于各学院、实验室之间缺乏有效的沟通和协调,导致实验设备的管理混乱,设备易遭损坏或遗失。

2. 设备利用率低:一些高校实验设备处于闲置状态,没有得到充分利用,而另一些设备则被过度使用,导致资源浪费。

3. 设备维护不及时:由于缺乏专门的设备维护人员或维护不到位,实验设备的维护工作经常被忽视,影响设备的正常运转。

4. 设备安全隐患:一些高校实验室存在设备操作不规范、安全措施不完善等问题,存在一定安全隐患,容易造成人身伤害或设备损坏。

1.3 研究意义高校实验设备的开放与管理是当前高校科研和教学中面临的重要问题。

随着科技的发展和高校科研教学的不断深入,实验设备在科研和教学中起到越来越重要的作用。

目前高校实验设备管理存在着许多问题,如设备资源浪费、管理不规范等。

对高校实验设备的开放与管理进行深入研究,不仅可以提升高校科研和教学水平,更能够促进高校科研和教学的持续发展。

2. 正文2.1 实验设备开放管理的重要性实验设备开放管理的重要性在高校实验室中是至关重要的。

激光共聚焦显微镜的原理与应用范围讲解

激光共聚焦显微镜的原理与应用范围讲解

激光共聚焦显微镜的原理与应用范围讲解激光共聚焦显微镜的原理与应用范围激光扫描共焦显微镜是在传统光学显微镜的基础上,利用激光作为光源,采用共轭聚焦原理和装置,通过计算机对被观察物体进行数字图像处理的一套观察、分析和输出系统。

光学成像的分辨率提高了30%~40%。

荧光探针被紫外线或可见光激发,以获得细胞或组织内部微观结构的荧光图像。

在亚细胞水平上观察生理信号和细胞形态的变化。

它已成为形态学、分子生物学、神经科学、药理学、遗传学等领域的新一代研究工具。

1激光扫描共聚焦显微镜(lscm)的原理就基本原理而言,共焦显微镜是一种现代光学显微镜。

对普通光学显微镜进行了以下技术改进:1.1用激光做光源因为激光的单色性非常好,光源波束的波长相同,从根本上消除了色差。

1.2利用共焦技术,在物镜的焦平面上放置一个带小孔的挡板,以阻挡焦平面外的杂散光,消除球差;并进一步消除色差1.3采用点扫描技术将样品分解成二维或三维空间上的无数点,用十分细小的激光束(点光源逐点逐行扫描成像,再通过微机组合成一个整体平面的或立体的像。

而传统的光镜是在场光源下一次成像的,标本上每一点的图像都会受到相邻点的衍射光和散射光的干扰。

这两种图像的清晰度和精密度是无法相比的。

1.4用计算机采集和处理光信号,用光电倍增管放大信号图在共聚焦显微镜中,计算机代替了人眼或照相机进行观察、摄像,得到的图像是数字化的,可以在电脑中进行处理,再一次提高图像的清晰度。

而且利用了光电倍增管,可以将很微弱的信号放大,灵敏度大大提高。

由于综合利用了以上技术。

可以说lscm是显微镜制作技术、光电技术、计算机技术的完美结合,是现代技术发展的必然产物。

2lscm在生物医学研究中的应用目前,一台配置完备的lscm在功能上已经完全能够取代以往的任何一种光学显微镜,它相当于多种制作精良的常用光学显微镜的有机组合,如倒置光学显微镜、紫外线显微镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜(ph、微分干涉差显微镜(dic等,因此被称为万能显微镜,通过它所得到的精细图像可使其他的显微镜图像无比逊色。

激光扫描共聚焦显微镜技术

激光扫描共聚焦显微镜技术

多通道同时检测,可实时检测细胞的 生理活动和形态变化:
• 生理学研究:如细胞内各种离子浓度随时 间的变化情况.
• 活细胞多种标记物同时进行成像,动态观 察不同形态学事件的发生。如分泌颗粒的 分泌过程。Leabharlann 三、激光扫描共聚焦显微镜的应用
vestigial apterous CiD (cyanine 5).
透明质酸
• The role of hyaluronan in renal stone disease
• Hyaluronan is expressed by proliferating renal tubular cells in subconfluent cultures (2 days post-seeding). At cell-cell contact (4 days post-seeding) this staining starts to fade away to completely disappear when the tight junctions are assembled (5-6 days post-seeding). The hyaluronan receptor CD44 is also expressed at the luminal surface in subconfluent cultures (2 days post-seeding), at cell-cell contact CD44 is targeted to lateral spaces, whereas at confluence (6 days post-seeding), CD44 is exclusively expressed at basal domains of the plasma membrane.

激光共聚焦显微镜的使用和应用

激光共聚焦显微镜的使用和应用

Confocal
扫描模式:xy:观察样品不同层面的荧光强度变化 xz:观察样品沿Z轴的荧光强度变化
性能特点
二. 具有连续光学切片功能和Z向观察能力
Confocal
扫描模式决定了图像的扫描层次。基本上是扫描水平的xy切片或垂直的xz-切片。为建立样品的三维图像,需要在第三维方 向上进行连续的光学切片以产生图像垛。还可以以时间或波长为 第三维坐标进行图像扫描。
Cultured hippocampal neurons of ratFluo-3(AM)
性能特点
五. 细胞内各种离子的动态测量和分析
Confocal
Ca2+-imaging: UV-uncaging Ca-Indicator: Fluo 4, 488 nm Pancreatic acinar cells
Confocal
DM IRE2 倒直显微镜
Magnification 5x 10x 20x 40x 63x 100x Numeral aperture 0.15 0.4 0.7 1.25 1.4 1.4 Technique
IMM * OIL OIL OIL
780-900nm (DAPI、Hoechst、BFP、CFP)
性能特点
六. 多通道扫描同时获得几种颜色的重叠图像
Confocal
四色荧光标记
C. Elegans nervous system, separation of 4 fluorescent proteins: CFP, YFP, GFP, DS RED. Courtesy. Dr. Harald Hutter, MPI for Medical Research, Heidelberg
DM RBC 直立显微镜

激光共聚焦技术讲解

激光共聚焦技术讲解

模块九激光共聚焦技术1. 实验目的让学生了解激光共聚焦显微镜硬件组成,掌握激光共聚焦显微镜常用的基本操作及注意事项,能够熟练、准确地设计光路,重点掌握激光共聚焦显微镜测定细胞荧光信号动态变化的方法以及钙指示剂(fluo-3/AM )标记Ca2+的基本原理与方法,了解激光共聚焦显微镜在生物学上的应用。

2. 实验原理激光扫描共聚焦显微镜是采用激光为光源,在传统荧光显微镜成像的基础上,附加了激光扫描装置和共轭聚焦装置,通过计算机控制来进行数字化图像采集和处理的系统。

激光扫描共聚焦显微镜系统主要包括扫描模块、激光光源、荧光显微镜、数字信号处理器、计算机以及图像输出设备等。

激光扫描共聚焦显微镜基本结构(1)扫描模块扫描模块主要由针孔光栏(控制光学切片的厚度)、分光镜(按波长改变光线传播方向)、发射荧光分色器(选择一定波长范围的光进行检测)、检测器(光电倍增管)组成。

荧光样品中的混合荧光进入扫描器,经过检测针孔光栏、分光镜和分色器选择后,被分成各单色荧光,分别在不同的荧光通道进行检测并形成相应的共焦图象,同时在计算机屏幕上可以显示几个并列的单色荧光图象及其合成图象。

(2)荧光显微镜系统激光扫描共聚焦显微镜所用的荧光显微镜大体与常规荧光显微镜相同,但又有其特点:需与扫描器连接,使激光能进入显微镜物镜照射样品,并使样品发射的荧光到达检测器;需有光路转换装置,即汞灯与激光转换,同时汞灯光线强度可调。

(3)常用激光器激光扫描共聚焦显微镜使用的激光光源有单激光和多激光系统,常用的激光器包括以下三种类型:多谱线Ar 离子激光器(氩离子激光器):发射波长为458 nm、477 nm、488 nm、514 nm 的蓝绿光;He-Ne 激光器(氦氖激光器):发射波长为543 nm的绿光和633 nm的红光;UV激光器(紫外激光器):发射波长为351 nm、364 nm 的紫外光。

(4 )辅助设备风冷、水冷冷却系统及稳压电源。

激光共聚焦

一、细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的测定按经典方法,以钙离子敏感的荧光探针Fura-2/AM或Fluo-3/AM来检测细胞内[Ca2+]i。

Fura-2的结构类似于四羧酸的Ca2+螯合剂EGTA,能以1:1的比例特异性地与Ca2+结合,与EGTA不同的是Fura-2可发出荧光,并且结合Ca2+后荧光特性有改变,Fura-2及其与Ca2+结合后的复合物的最大激发波长分别为380 nm和340 nm,这种变化可指示Ca2+的存在及其浓度。

Fura-2为一极性很大的酸性化合物,不能进入细胞内,但在其负性基团部位结合上乙酰氧甲酯基后则成为Fura-2/AM。

后者脂溶性很强,又消除了负电荷,容易通过细胞膜,随后被细胞内的非特异性酯酶水解掉分子中的酯基后又变为Fura-2,与胞浆中的游离Ca2+结合后即可被特定波长的紫外光(340 nm)激发产生荧光。

并且,Fura-2与Ca2+解离容易,随着游离Ca2+的增加或减少,其荧光强度便随之变化。

因此,Fura-2的荧光强度与[Ca2+]i呈比例关系,据此可以测定[Ca2+]i及其变化(Malgaroli, A., et al., 1987)。

Fluo-3/AM是继Fura-2/AM等之后研制的新一代Ca2+ 荧光指示剂,与Fura-2/AM类似,Fluo-3/AM进入细胞后,酯基被水解掉,Fluo-3与细胞内游离Ca2+ 结合,因而其荧光强度可以反映细胞内游离Ca2+ 的浓度。

但优于Fura-2/AM的是,Fluo-3与Ca2+ 结合时的荧光强度较未结合Ca2+ 的游离形式高40 ~ 100倍,避免了自发荧光的干扰,因而直接在单波长激发光下检测其荧光强度即可反映[Ca2+]i的变化。

此外,Fluo-3与Ca2+ 亲和力低,易解离,适合测定细胞内Ca2+ 的快速、微量变化。

Fluo-3 在可见光光谱激发,激发波长为488 nm,可避免紫外光对细胞的损伤(Greimers, R., et al., 1996)。

激光共聚焦扫描显微镜成像的基本原理

激光共聚焦扫描显微镜成像的基本原理激光共聚焦显微镜(LCM)是近年来发展起来的一种高分辨率荧光显微成像技术。

它通过将样品置于激光束的焦点处,利用高灵敏度的探测器记录样品发出荧光信号,从而实现对样品内部结构的高分辨率成像。

本文将详细介绍LCM的基本原理、成像途径、成像原理及优缺点等方面的内容。

一、激光共聚焦显微镜的基本原理激光共聚焦显微镜基于利用激光束在三维空间内聚焦成极小的点状光斑,对样品进行扫描成像的技术原理。

在聚焦点位置,通过聚焦光斑的极高光密度,激活样品中的荧光染料,荧光染料则针对特定的结构在荧光信号波长处发出荧光信号,被高灵敏度荧光探测器探测并记录下来,然后通过计算机处理、分析和重建,生成高质量的高分辨率图像。

与普通显微镜最大的区别在于,普通显微镜由于透过整个样品并以相位差效应成像,而激光共聚焦显微镜由于仅仅聚焦于样品表面的非常窄的一点,信号只能从聚焦点的附近探测到,而且该点在扫描过程中会不断变换位置。

换言之,成像并不是透过整个样品实现,而是在样品上面扫描得到,并聚焦于单个点上。

对于毫米量级的样品,其层面精度可以达到25nm。

二、激光共聚焦显微镜成像途径激光共聚焦显微镜的成像途径目前有两种,分别为单光子激发型和双光子激发型。

1、单光子激发型单光子成像模式是利用激光束在荧光染料上发生的单光子激发效应进行成像的一种方式。

在单光子激发光下,荧光染料的各自精细结构会发生辐射跃迁产生能量并发射荧光,同时发射时间对荧光能量的传递产生影响,可以通过荧光转移速率反映。

荧光束在被激活后,将以光子流的形式反射回来,被共聚焦显微镜探测并捕捉。

2、双光子激发型双光子成像模式使用了两次光子激发效应,产生高到对比度的图像,并最小化了样品在激发时所受的损伤输出功率。

双光子成像所需条件包括至少两个光子激发、空间和时间上的集中在样品特定区域。

在这种情况下,激光光束相互作用,将样品中转运载分子激发成放射的谐振态发生荧光发射。

激光共聚焦显微镜的原理与应用范围

激光共聚焦显微镜的原理与应用范围激光共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscopy,简称LSCM),是一种先进的光学显微镜技术。

它利用激光光源,通过聚焦光束经过物镜透镜并聚焦到样品表面,然后通过探测光学系统和探测器来收集样品的荧光或反射信号。

该系统能够获得高对比、高分辨率的三维空间图像。

以下将从原理和应用范围两个方面详细介绍。

原理:其工作原理包含以下几个步骤:1.使用激光器产生激光光源。

2.激光光源通过透镜系统,以点状聚焦到样品表面。

3.将该激光光斑与物镜的孔径大小匹配,通过荧光或反射信号的收集,获得图像。

4.图像信号通过探测器转化为电信号,进而被放大、采集以及分析。

5.使用扫描式镜片的控制系统进行扫描,以获取多个平面上的图像,从而构建三维样品结构。

应用范围:1.生命科学研究:激光共聚焦显微镜广泛应用于生命科学领域,例如生物医学、细胞学和神经科学研究。

它可以观察和分析细胞结构、细胞器、蛋白质分布、细胞信号通路等生物过程。

2.材料科学研究:激光共聚焦显微镜可以用于材料表面和内部结构的分析。

例如,可以观察材料的纳米结构、微孔等特征,也可以用于观察材料的表面反应、拓扑结构等。

3.环境科学研究:激光共聚焦显微镜可以用于环境污染物的检测与分析。

例如,可以观察和分析水体、土壤等环境样品中微小颗粒、微生物的分布和数量。

4.医学诊断和临床应用:激光共聚焦显微镜可用于医学诊断和临床应用。

例如,用于检测肿瘤标志物、血液细胞计数、皮肤病变的分析等。

5.药物研发:激光共聚焦显微镜可以用于药物研发过程中的药效评估、药物代谢机制研究等。

6.光学器件和半导体工艺:激光共聚焦显微镜可以用于光学器件的检测和调试,例如芯片封装、薄膜材料的测试等。

总之,激光共聚焦显微镜在生命科学、材料科学、环境科学、医学、药物研发等领域具有广泛的应用价值。

随着科学技术的不断进步,激光共聚焦显微镜将会在更多的领域中发挥重要作用,推动科学研究和技术发展。

激光共聚焦使用技巧和注意事项

激光共聚焦使用技巧和注意事项激光共聚焦(Laser Scanning Confocal Microscopy,简称LSCM)是一种高分辨率、高对比度的显微镜技术。

它通过使用高功率激光束和扫描探测器来获得样品的三维影像。

在使用激光共聚焦之前,我们需要了解一些使用技巧和注意事项。

首先,为了获得高质量的图像,我们需要认真选择合适的探测器和滤光片。

常见的探测器包括光电倍增管(PMT)和雪崩光电二极管(APD),它们具有不同的检测范围和灵敏度。

滤光片的选择决定了激光的发射和接收,所以我们要根据样品的荧光颜色选择合适的滤光片。

其次,样品的处理和固定也非常重要。

在进行激光共聚焦之前,我们需要对样品进行固定,以防止运动。

有许多不同的固定方案,如化学固定、交联固定和冷冻固定等。

不同的固定方法适用于不同类型的样品。

此外,处理样品时要尽量避免引入氧气,以防止荧光物质的氧化。

第三,我们要注意激光的功率和曝光时间。

激光功率过高会导致样品的灼伤和荧光物质的衰减。

因此,在使用激光之前,我们应该先经过一定的实验确定适当的功率范围。

同样地,曝光时间也需要适当调整,以避免图像的过曝。

此外,选择适当的对焦方式对于获得清晰图像非常重要。

在使用激光共聚焦时,我们可以选择自动对焦或手动对焦等方式。

自动对焦通常需要校准焦距和步长,以获得最佳成像结果。

手动对焦需要操作人员不断地通过调节焦距来保持图像的清晰。

最后,数据的处理和分析也是使用激光共聚焦的重要部分。

在获得图像后,我们可以使用图像处理软件对图像进行修饰和增强。

在对图像进行分析时,我们可以使用各种图像分析工具和算法,如3D重建、荧光定量和荧光共振能量转移等。

综上所述,激光共聚焦是一种强大的显微镜技术,但在使用时需要注意一些技巧和注意事项。

选择合适的探测器和滤光片,适当处理和固定样品,控制激光功率和曝光时间,选择适当的对焦方式,以及有效处理和分析数据,将有助于获得高质量的图像并提供准确的结果。

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西北 医学教  ̄ - ( h t t p : / / x b  ̄c b p t . c n k k n e t ) 2 0 1 3 年1 0 月 第2 1 卷 第5 期 N O R T  ̄
 ̄ Ⅱ Ⅱ 0 c t . 2 o 1 3 V o k 2 1 N o , 5
激光共 聚焦显微镜实验 室开放管理的探讨
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o u r u n i v e r s i t y, t h i s p a p e r a n a l y s i s t h e p r o b l e m o f ma n a g e me n t me c h a n i s m ,e x p e r i me n t t e c h n i q u e t r a i n i n g a n d e q u i p me n t ma i n t e n a n c e ,f u r t h e r mo r e b r i n g u p t h e r e s o l u t i o n .Th e a i m i s t o p r o v i d e r e f — e r e n c e f o r o p e n l a b o r a t o r y i n c o l l e g e s a n d u n i v e r s i t i e s .
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具 有 创新 实践 能 力 的高 素 质 人 才 , 建设 开 放 的 实验 室 体 系 已成 为各 高校 关 注 的热 点[ 2 ] 。
激光 共 聚焦 实验 室隶 属 于笔 者所 在高 校 医学 实验 与 测试 中心 的形 态 学 平 台 , 目前 实 验 室 拥 有 : L e i c a双 光 子激 光共 聚 焦显 微镜 1台 、 L e i c a 单光 子 激光 共 聚焦 显微 镜 2台 、 高速激 光 共 聚焦 实时 成像 分析 系统 、 体 视
关键 词 : 实验 室开放 ; 管理 ; 实验 流 程
中图分 类号 : G6 4 2 . 4 2 3
文献 标识 码 : A
文章编 号 : 1 0 0 6 — 2 7 6 9 ( 2 0 1 3 ) 0 5 — 0 9 5 7 — 0 3
Di s c u s s i o n o n t he Op e ni n g a nd Ma na g e me nt o f La s e r S c a nn i ng Co n f o c a l Mi c r o s c o p e La b o r a t o r y DENG J u n。J I N Ya n — y a n,W ANG J i n - s o n g ,XI AO Z h o n g — x i n
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