洁净区沉降菌采样培训记录
洁净区沉降菌监测标准操作规程
洁净区沉降菌监测标准操作规程1目的：制定洁净区（室）沉降菌监测操作规程。
2范围：洁净区（室）沉降菌的监测。
3职责：QC员、QA员、QC主任、品质保证部经理、车间主任及相关人员对本SOP的实施负责4 程序：4.1 QA室根据洁净区（室）的验证结果，制定洁净区（室）的日常监测计划，依计划和生产需要填写洁净区（室）环境监测通知（以下简称通知），经品质保证部经理批准后，下发QC室和生产车间。
4.2 QC主任接通知后，与检验员、车间讨论确定具体监测时间，安排好监测工作，确保监测工作如期完成，如不能按期完成监测，应由QC室主任将情况以书面形式汇报至品质保证部，经品质保证部经理批准后，予以重新安排。
4.3 将培养皿在121℃湿热灭菌30分钟或者180℃干热灭菌2小时。
4.4 将灭菌培养基加热熔化，冷至45-60℃，在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml，待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
制备好的肉汤培养基平皿应保存在洁净的普通冰箱内，以2-8℃为宜，且应在2周内用完。
4.5 在监测前，应对被监测洁净区（室）消毒。
4.6 在空调净化系统正常运行30分钟后，在洁净区（室）内没有生产人员的情况下，监测人员穿戴好符合洁净级别要求的工作服，进入洁净区（不得多于二人）进行测试。
4.7 根据洁净区（室）面积大小确定最少采样点数目，在满足最少采样点数目的同时，还宜同时满足最少培养皿数。
采样点的布置应力求均匀，避免在某局部区域过于集中，培养皿应布置在有代表性的地方（如关键设备或易受污染的地方）和气流扰动最小的地方。
3.8将培养基表面暴露0.5小时后，收集培养皿，将培养皿倒置于恒温培养箱中，30-35℃培养48小时，每批培养基应有对照试验，每批可选定3只培养皿做对照培养，其中2只培养皿做阳性对照，1只培养皿做阴性对照。
4.9 达到规定的培养时间后，菌落数用肉眼直接计数、标记或在菌数计数器上点计，并用5-10倍放大镜检查有否遗漏。
洁净室(区)沉降菌检测操作规程
XXXXXXXX有限公司质量控制管理制度1 目的：规范质量检验人员对沉降菌检验的操作，特制定本规程。
2 范围：适用于沉降菌的监测。
3 责任：质量检验人员。
4 内容：4.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
4.2测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经3天培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
4.3所用的仪器和设备：4.3.1 高压消毒锅：使用时参照文件《JSZB01-015》《JSZB01-051》进行操作。
4.3.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱进行检定。
4.3.3 培养皿：一般采用Φ90m m×15 mm的硼硅酸玻璃培养皿；使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌15min。
4.3.4 培养基：将胰酪大豆胨琼脂培养基加热熔化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15-20ml。
4.3.5 制备好的培养基平皿宜在2℃~8℃的环境中存放。
4.4 测试步骤：4.4.1采样方法：将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露4小时，再将培养皿盖盖上后倒置。
洁净室（区）采样点布置4.4.2培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于30℃~35℃恒温培养箱中培养3天。
每批培养基要有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定2只培养皿作对照培养。
4.4.3菌落计数：用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点记。
然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.4.4 用计数方法得出各个培养皿的菌落数，平均菌落数的计算见下式：M1＋M2＋……M n平均菌落数M＝————————n式中M为平均菌落数；M1为1号培养皿菌落数；M2为2号培养皿菌落数；M n为n号培养皿菌落数；n为培养皿总数。
洁净室沉降菌的监测及测定法
2.1沉降菌检验用培养基。
3.相关文件：《沉降菌测定记录》RD-SOP-ZL-005。
4.内容：4.1采样点数目：采样点数目按房间大小和房间的洁净级别来设置，具体数目见下表：面积（m2）洁净级别100 10000 100000<10 10-20 20-40 >40 2-3481622242222在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数，见下表：洁净级别所需Φ90培养皿数（以沉降0.5h计）100 10000 100000 5-7 5 54.2取样点布置，如图示：文件名称洁净室沉降菌的测定法文件编号：HV-SOP-ZL-005/00 第 2 页共 2 页4.2.1采样点布置在离地0.8米高的水平面上均匀布置4.2.2 采样点多于5点时，可在离地面0.8-1.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5个点。
4.2.3布置采样点时，应避开回风口。
4.3测试时间：净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。
4.4测试方法：4.4.1将已准备好的培养皿置于采样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上。
4.4.2全部采样结束后，将培养皿倒置于30-35℃恒温培养箱中培养48小时。
4.4.3菌落计数。
4.4.4结果计算：4.4.5结果判定：用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。
4.4.5.1洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
见下表。
4.4.5.2若洁净室（区）内平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域进行消毒，然后重新采样2次，测试结果必须合格。
洁净级别 100级 10000级 100000 标准（平均） 0.5个/皿1.5个/皿3个/皿文件名称 洁净区尘埃粒子测定法文件编号：HV-SOP-ZL-006/00 起草人 日期 第 1 页 共 3 页 审核人 日期 颁发部门：行政部审定人 日期 批准人日期送达部门质量管理部目的：明确洁净区尘埃粒子检验的标准操作程序。
洁净区沉降菌测试操作规程
范围：洁净区
职责：质量部、生产车间对本规程的实施负责
正文：
1.试剂及仪器、器皿
1.1试剂
——营养琼脂培养基
1.2仪器及器皿
1.3生化培养箱，Φ90mm培养皿、锥形瓶、胶塞、灭菌锅、烧杯等。
2.测试前准备
2.1培养基的配制
——按SOP-QM-424《培养基配制标准操作规程》进行。
2.2培养基平皿的制备
2.2.1将Φ90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或180℃干热灭菌2小时。
2.2.2将培养基加热溶化，冷至45℃时，于无菌检查操作间将培养基注入平皿，每皿约15ml。
2.2.3待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃生化培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
3.采样
3.1采样点的数目及采样点的布置
3.1.2.1采样点的布置力求均匀,避免采样点在某局部区域过于集中或过于稀疏，关键区域可增加采样点。
3.1.2.2采样点位置离地0.8-1.5米左右（略高于工作台面）
3.2采样方法：按3.1的要求放置平皿数，打开培养皿盖，使培养皿暴露30分钟，再将培养皿盖盖上。
4.培养
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所有采样结束后，将平皿倒置在30ºC—35ºC的生化培养箱中培养48小时。
5.操作结果的评价
5.1用肉眼直接计数并记录。
5.2结果计算
式中 M—平均菌落数（CFU）
M i—1，2，3……号平皿菌落数
n—平皿总数
5.3结果评价标准见下表：
测试结果均须合格。
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洁净室(区)沉降菌的测规程
1 目的确定医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法和标准。
2 范围适用于不同洁净室（区）（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境验证。
3 责任QC微生物室负责洁净室（区）沉降菌的监测。
4 内容4.1 参考标准中华人民共和国国家标准GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》。
中华人民共和国卫生部发布的《药品生产质量管理规范（2010年修订）》。
4.2 监测程序4.2.1 设备高压消毒锅恒温培养箱培养皿：一般采用Φ90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
4.2.2 培养基及平皿制备4.2.2.1 一般采用普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基4.2.2.2 制备过程如下：◆将培养皿与用三角瓶装好的培养基在高压消毒锅内121℃湿热灭菌20 分钟或180℃干热灭菌2小时；◆将培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
◆待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30－35℃恒温培养箱中培养48 小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
◆制备好的培养基平皿倒置在2－8℃的环境中存放，注意避免污染。
4.2.3 采样点和监测频次4.2.3.1 采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，按照洁净区的面积大小，而制定最少采样点数目（附件），在满足最少采样点数的同时，还宜满足最少培养皿数和采样点布置（附件）。
4.2.3.2 工作区采样点的位置离地0.8米－1.5米左右（略高于工作面）。
并在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。
4.2.3.3 监测频次：每月一次，特殊情况及时监测。
4.2.4 测试规则4.2.4.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度必须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
4.2.4.2 测试前被测试洁净室（区）已经过消毒。
4.2.4.3 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.2.4.4 测试时间：◆对单向流（如A级净化房间及层流工作台），测试应在净化空调系统正常运行不少于10分钟后开始。
车间洁净区沉降菌测试办法
5.0测试规则：5.1测试状态：5.1.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在技术指标规定值内。
5.1.2沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。
5.1.3测试状态有动态和静态两种，应注明测试状态。
5.2测试时间：5.2.1对单向流，如百级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。
5.2.2对非单向流，如万级、十万级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
5.3采样点：5.3.1采样点数目：沉降法的最少采样点数可按表1确定。
表1 最少采样点数目面积m2洁净度级别100 10000 100000＜10≤≥≥10～＜20 ≥20～＜40 ≥40～＜100 ≥100～＜200 ≥200～＜400 ≥400～＜1000 ≥1000～＜20002000 2～3481640801604008002224102040100200222236133263注：表面的面积，对于单向流洁净室，是指送风面积。
对于非单向流洁净室是指房间的面积。
在满足最少采样点的同时，还宜满足最少培养皿数，见表2。
表2 最少培养皿数洁净度级别所需¢90mm培养皿数（以沉降0.5h计）100 10000 100000 14 2 25.3.2采样点位置：工作区采样点的位置离地0.8～1.5m。
6.0相关文件和记录：附表1：洁净室（区）技术指标监测项目技术指标监测频次10000级100000级300000级温度℃18~28 2次/班相对湿度% 45~65 2次/班换气次数，次/h ≥20 ≥15 ≥12 1次/月静压差Pa不同级别洁净室（区）之间＞5 2次/班洁净室（区）与非洁净室（区）之间＞5 1次/月洁净室（区）与室外大气＞10（最好不超过35）尘埃数个/m3≥0.5um ≤350000 ≤3500000 ≤10500000 1次/季≥5um ≤2000 ≤20000 ≤60000沉降菌数，个/皿≤3 ≤10 ≤15 1次/周。
沉降菌测试原始记录
微生物检验室沉降菌测试原始记录评定标准十万级w 10CFU 皿；万级w 3CFU 皿；百级w 1CFU 皿RSB60-00°C采样点图示 见附图：报告日期 _________结 论 _______________________ 检验者 ____________ 复核者 ___________________RSB64-00固体制剂车间沉降菌测试原始记录（2）编 号______________________ 测试依据SPG108-01环境温度________________ °C培养基批号__________________ 测试单位 ______________ 测试状态 ______________ 相对湿度% _____________培养温度 ______________采样点图示 见附图：评定标准：十万级w 10CFU皿；万级w 3CFU皿；百级w 1CFU皿结论___________________检验者_________________ 复核者______________RSB63-00 固体制剂车间沉降菌测试原始记录（1 ）评定标准： 十万级w 10CFU/皿； 万级w 3CFU/皿； 百级w 1CFU/皿 结 论 检验者 复核者 _____________________RSB61-00原料车间沉降菌测试原始记录编 号 ______________________ 测试单位 ________________ 测试依据SPG108-01 测试状态 _______________环境温度 _______________ ° C 相对湿度% ______________ 培养基批号 _________________ 培养温度 _________________ °C 静压差 ___________________ 检测日期 __________________ 报告采样点图示 见附图：日期评定标准：十万级w 10CFU/皿；万级w 3CFU/皿；百级w 1CFU/皿检验者复核者RSB62-00 原料车间沉降菌测试原始记录评定标准：十万级w 10CFU皿；万级w 3CFU皿；百级w 1CFU皿结论检验者复核者____________________RSB61-01 原料车间沉降菌测试原始记录编号测试单位测试依据SPG108-01 测试状态环境温度°C相对湿度% 培养基批号培养温度静压差检测日期采样点图示见附图：报告日期 _________评定标准：十万级w 10CFU/皿；万级w 3CFU/皿；百级w 1CFU/皿结论________________ 检验_______________ 复核者_______________。
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试方法
洁净室沉降菌测试是对洁净室环境中空气中悬浮微粒的数量和种类进行评估的方法之一。
沉降菌测试是通过将培养基暴露在空气中，使空气中的微生物落到培养基上生长，然后计数和鉴定这些微生物来评估洁净室的微生物污染。
以下是一般的洁净室沉降菌测试方法：
1. 准备培养基：选择适用于微生物生长的培养基，如营养琼脂培养基。
按照培养基说明制备培养基。
2. 制备沉降皿：将培养基倒入锅中，加热至液态，然后倒入含有适量培养基的沉降皿中。
3. 安置沉降皿：在洁净室中的代表性位置放置沉降皿，如工作台面、天花板等。
4. 收集样品：根据需要和测试目的，选择适当时间段收集样品。
可以采用定期采样或连续采样的方式。
5. 培养：将采集的样品放置在培养箱中，以合适的温度和湿度条件孵育。
通常情况下，温度为30-37摄氏度，孵育时间为24-48小时。
6. 计数和鉴定：在孵育结束后，观察培养皿中的菌落形成情况，并进行计数。
可以根据菌落的形态和特征，使用显微镜和生化试剂等进行鉴定。
7. 报告结果：根据实验结果，记录沉降菌的数量和种类，并参考相关标准，如ISO 14698等，评估洁净室的微生物污染级别。
需要注意的是，洁净室沉降菌测试方法可能因测试目的、要求和标准的不同而有所差异。
在进行实际测试之前，最好参考相关的测试标准和指南，并根据具体情况进行适当的调整和验证。
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洁净区沉降菌采样培训记录
编号：
培训时间 ____年____月_____日_____时 地点
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人 员
培训人 培训主题 《洁净区沉降菌采样操作规程》
培
训
内
容
标准
依据
GB/T 16294-2010 《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》
采样
流程
准备→标记培养皿→铺设培养皿→采样计时→培养皿收集
采样
准备
培养皿准备 检查、数量核对、高压灭菌
培养基准备 选择
采样
前要求 洁净室要求 清洁、消毒、温度、湿度 动态要求 记录主要操作区和人数
静态要求 室内测试人员
采样 级别及代码 注意级别及级别代码 采样点布局 关键生产区的采样点布局 铺设培养皿 铺设培养皿的注意事项
采样计时 准确计时及计时要求
培养皿收集 收集培养皿的注意事项
注意
事项
采样过程中的注意事项
受
训
人
考
核
□ 理论考试 □ 实际操作 □ 口头问询 □ 其他