核因子KB受体活化因子配体、护骨素在不同月龄雄性大鼠股骨的表达
不同年龄组大鼠的骨密度和P物质的测定
不同年龄组大鼠的骨密度和P物质的测定张继东;徐燕;吴玲;赵定麟【期刊名称】《海军医学杂志》【年(卷),期】1996(000)002【摘要】目的:研究不同年龄组大鼠骨组织中P物质和骨密度的变化,为研究特种作业环境中骨组织的变化提供依据。
方法:通过DEXA和ABC免疫组化分别测定9、18和27个月龄组大鼠的骨密度和胫骨干骺端的P物质。
结果:9、18和27个月组的大鼠骨密度分别为0.2878±0.0188、0.3303±0.0288和0.2619±0.0322,P 物质是++、+++和++++。
结论:大鼠在27个月龄时已处于老年化,骨密度减少,而P物质随增龄而增加,骨密度与P物质之间无明显相关性。
认为骨衰老早期骨密度无明显变化,此期骨组织中的P物质已有量的改变,对早期预测骨衰老有一定启示作用。
【总页数】3页(P107-109)【作者】张继东;徐燕;吴玲;赵定麟【作者单位】[1]上海长征医院骨科;[2]上海解放军第四一一医院检验科;[3]上海长征医院骨科硕士研究生200081上海解放军第四一一医院骨科;[4]200081上海【正文语种】中文【中图分类】R580【相关文献】1.聚焦超声对SD外阴慢性单纯性苔藓模型大鼠外阴皮肤P物质及P物质受体表达的影响 [J], 杨欢;唐华均;李成志2.不同年龄组正畸患者腭骨不同部位皮质骨密度的测量 [J], 朱鲲;张倩倩;王娟3.孕期及非孕期不同年龄组生育年龄女性骨密度比较分析 [J], 张丹;陶新城;王韦韦;胥小琴;张宏秀4.沈阳地区不同年龄组、体质量指数女性人群髋关节骨密度的流行病学分析 [J], 郭然;王云柯;刘诗盈;付勤5.2100例不同年龄组患者骨密度Z值检查结果分析 [J], 高登发; 朱燕明; 官剑武; 周世擎; 徐正扬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响
阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响沈霖;武嘉林;李蕾;夏远军;高兰;谢晶;周丕琪;杨艳萍【期刊名称】《中国骨质疏松杂志》【年(卷),期】2005(11)2【摘要】目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制.方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清.将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液.培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养.采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达.结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P＜0.05).成骨细胞OPG 基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml/L时最强,与雌激素组比较无显著性差异(P＞O05),且明显高于对照组(P＜O.05).成骨细胞RANKL基因mRNA 表达在1000ml/L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P＜0 05),且明显低于对照组(P＜O.05).结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节OPG/RANKL表达而治疗骨质疏松.【总页数】4页(P251-254)【作者】沈霖;武嘉林;李蕾;夏远军;高兰;谢晶;周丕琪;杨艳萍【作者单位】430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院;830011,乌鲁木齐,新疆华世丹药业股份有限公司;430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院;430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院;430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院;430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院;430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院;430022,武汉,华中科技大学同济医学院附属协和医院【正文语种】中文【中图分类】R-33【相关文献】1.骨宝含药血清对成骨细胞碱性磷酸酶活性及护骨素mRNA表达的影响 [J], 陈小忆;罗承锋;李华锋2.阿仑磷酸钠对人成骨细胞增殖和护骨素/核因子κB受体活化因子配体mRNA表达的影响 [J], 朱芸;陈世荣;曾俊;彭李华3.唑来膦酸对大鼠成骨细胞增殖、分化和护骨素/核因子kB受体激动剂配体mRNA表达的影响 [J], 彭晨;王志强;李琪佳;原林4.胎鼠成骨细胞骨保护素及其配体mRNA表达与阿胶强骨口服液含药血清的影响[J], 沈霖;武嘉林;夏远军;李蕾;高兰;谢晶;周丕琪;杨艳萍5.阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响 [J], 戴燚;沈霖;武嘉林;夏远军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
通络生骨胶囊对激素性股骨头坏死模型大鼠Toll样受体4信号通路的影响
4150 ｜中国组织工程研究｜第25卷｜第26期｜2021年9月通络生骨胶囊对激素性股骨头坏死模型大鼠Toll 样受体4信号通路的影响刘金富1，曾 平2，农 焦2，范思奇2，钱晓芬1，冯程钦1，雷志强1，罗 钧1，黄佳兴1文题释义：Toll 样受体4(TLR4)信号通路：TLR4信号通路的激活有助于宿主消除入侵病原体，但其过度激活也可以干扰免疫平衡而导致一些疾病的发生，如自身免疫性疾病、慢性炎症性疾病或癌症等。
骨稳态：是指在骨骼系统内，骨组织能够通过自我调节，维持骨重建中成骨细胞及其主导的骨形成和破骨细胞及其主导的骨吸收平衡，进而维持骨的各项生理指标及其功能活动在正常范围，保持骨骼系统整体功能的稳定和有序。
摘要背景：前期药理学研究发现通络生骨胶囊修复激素性股骨头坏死的机制多样，但对Toll 样受体4(Toll-link receptors 4，TLR4)信号通路的影响未见报道。
目的：基于TLR4信号通路探讨通络生骨胶囊治疗激素性股骨头坏死的分子机制。
方法：将60 只雌性SD 大鼠随机分为正常组20 只和造模组40只，采用内毒素联合甲强龙建立大鼠激素性股骨头坏死(SONFH)模型，正常组注射等体积生理盐水；造模完成后随机抽取正常组5只、造模组10只在光镜下观察造模效果。
将造模成功的30只大鼠随机平均分为2组，分别为造模组和干预组，每组15只。
干预组予通络生骨胶囊水溶液0.4 g/kg 每天灌胃1次，连续4周；激素组、正常组予等剂量生理盐水每天1 次灌胃4周。
干预结束后取各组大鼠两侧股骨头，观察股骨头外形，进行病理学组织检测，采用Western Blot 检测各组大鼠股骨头TLR4、MyD88、肿瘤坏死因子α和核因子κB 蛋白表达。
实验方案经广西中医药大学动物实验伦理委员会批准。
结果与结论：①正常组大鼠股骨头可见外观润滑有光泽，无变形塌陷；激素组大鼠股骨头无光泽，呈紫色，面积较大；干预组大鼠股骨头趋于正常；②苏木精-伊红染色结果发现，激素组股骨头骨小梁稀疏甚至断裂骨细胞核固缩溶解、消失，空骨陷窝数量最多，与正常组和干预组相比空骨陷窝率差异有显著性意义(P < 0.05)；干预组可见骨小梁粗大、规则，细胞形态大多正常，较激素组有改善；③Western Blot 检测结果显示，与激素组相比，正常组、干预组核因子κB 、肿瘤坏死因子α、MyD88、TLR4蛋白表达量均明显降低(P < 0.05)；干预组与正常组TLR4和MyD88的表达量差异无显著性意义(P > 0.05)；④结果说明，通络生骨胶囊治疗激素性股骨头坏死的机制可能与抑制TLR4信号通路MyD88依赖型传递途径有关。
大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨组织骨保护素及其配体mRNA表达的影响
大豆异黄酮对去卵巢大鼠骨组织骨保护素及其配体mRNA表达的影响王强;王坤正;汪光晔【期刊名称】《中西医结合学报》【年(卷),期】2006(4)3【摘要】目的：观察大豆异黄酮（soybean isoflavones,SI）对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素（osteoprotegerin,OPG）和骨保护素配体（osteoprotegerin ligand,OPGL）mRNA表达的影响,探讨SI防治绝经后骨质疏松（postmenopausal osteoporosis,PMO）的作用机制.方法：健康雌性SD大鼠30只,随机分为假手术组、模型组和SI治疗组.假手术组仅牵动卵巢,其余两组均行双侧卵巢切除术.SI治疗组造模后予以SI50 mg·kg^-1·d^-1灌胃,假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃,1次/d,每周用药6 d,共12周.12周后取大鼠L3～L6脊椎行骨密度检测.取大鼠左侧股骨提取总RNA,采用实时定量聚合酶链反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RTQ-PCR）技术检测OPG和OPGL mRNA的表达水平.结果：SI可以增加去卵巢大鼠的腰椎骨密度,上调去卵巢大鼠骨组织中OPG mRNA的表达水平,使OPGL mRNA/OPG mRNA比值下降,但对OPGL mRNA的表达则无明显影响.结论：SI防治PMO的效应可能与其调控OPG mRNA的表达及OPGL mRNA/OPG mRNA比值相关.【总页数】4页(P303-306)【关键词】大豆异黄酮类;骨质疏松,绝经后;细胞因子;骨密度【作者】王强;王坤正;汪光晔【作者单位】西安交通大学第二医院骨科;第二军医大学长海医院骨科【正文语种】中文【中图分类】R681.4【相关文献】1.巴戟天多糖对去卵巢大鼠核因子－κB受体激活因子配体和骨保护素表达的影响[J], 刘亦恒;张寿;朱振标;沈慧;吴多庆;丁晓莉2.雌激素对去卵巢大鼠骨组织中骨保护素、破骨细胞分化因子和巨噬细胞集落刺激因子mRNA表达的影响 [J], 王强;王坤正;党晓谦;时志斌;裴宪武;柏传毅;贾学武3.去卵巢后大鼠骨组织中核因子κB受体活化因子配体和骨保护素表达的变化 [J], 高延征;高坤;沈彬;张晖;裴福兴4.白藜芦醇对去卵巢大鼠股骨骨保护素及核因子κB受体活化子配体表达的影响[J], 王艳;汤旭磊5.雌激素对去卵巢大鼠松质骨中骨保护素mRNA表达的影响 [J], 杨召;杨华;姚振强;李宏钧因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
梅花入骨丹通过Toll样受体4核转录因子-κB信号通路调节大鼠退变软骨
梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB信号通路调节大鼠退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制作者：林家钟黄艳峰林翔刘蔚楠付长龙刘献祥王荣茂来源：《风湿病与关节炎》2020年第09期【摘要】目的：探讨梅花入骨丹通过Toll样受体4/核转录因子-κB（TLR4/NK-κB）信号通路调节退变软骨细胞外基质代谢紊乱的作用机制。
方法：体外培养大鼠软骨细胞并鉴定，采用CCK-8法检测梅花入骨丹水提物（BCAE）对体外软骨细胞的增殖-毒性，筛选药物作用的最佳浓度和时间。
采用10 ng·mL-1白细胞介素-1β（IL-1β）建立软骨细胞炎症退变模型，将软骨细胞分为空白对照组、模型对照组、BCAE组、抑制剂TAK-242组和抑制剂PDTC组，分别进行相应干预后，qRT-PCR及Western blot法检测各组基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、IκBα、p-p65、ColⅡ的mRNA、蛋白表达情况。
结果：与空白对照组比较，模型对照组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显升高（P < 0.01），而IκBα、ColⅡ表达下降（P < 0.01）;与模型对照组比较，TAK-242组、PDTC组、BCAE组MMP-1、MMP-3、MMP-9、MMP-13、TLR4、IKKβ、p-p65的mRNA及蛋白的表达明显减少（P < 0.01），而IκBα、ColⅡ表达升高（P < 0.01）。
结论：梅花入骨丹通过TLR4/NK-κB信号通路抑制MMPs的关键调控因子表达，从而抑制IL-1β介导的退变软骨细胞外基质代谢紊乱，发挥抗炎和保护软骨细胞的作用。
【关键词】骨关节炎;梅花入骨丹;基质金属蛋白酶;软骨细胞;Toll样受体4;核转录因子-κB;信号通路【ABSTRACT】Objective：To investigate the mechanism of Meihua Rugu Dan（梅花入骨丹）regulating extracellular matrix metabolism disorder of degenerative cartilage through TLR4/NK-κB signaling pathway.Methods：Rat chondrocytes were cultured in vitro and K-8 method was used to detect the proliferation toxicity of BCAE on chondrocytes in vitro，and the optimal concentration and administration time of medicine were screened.Inflammatory degeneration model of chondrocytes were established with 10 ng·mL-1 of IL-1β.Chondrocytes were divided into a normal group，a model group，a BCAE group，a TAK-242 group and a PDTC group.After intervention，qRT PCR and Western blot methods were performed to detect the mRNA and protein expressions of MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13，TLR4，IKKβ，IκBα，p-p65 andColⅡ.Results：Compared with the normal group，the mRNA and protein expressions of MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13，TLR4，IKKβ，p-p65 in the modelgroup significantly increased（P < 0.01），while the expressions of IκBα and ColⅡ decr-eased（P < 0.01）.Compared with the model group，the mRNA and protein expressions of MMP-1，MMP-3，MMP-9，MMP-13，TLR4，IKKβ，p-p65 in the TAK-242 group，PDTCgroup and BCAE group significantly decreased （P < 0.01），while the expression of IκBα and ColⅡ increased（P < 0.01）.Conclusion：Meihua Rugu Dan can inhibit the expression of key regulatory factors of MMPs through TLR4/NK-κB signaling pathway，thus inhibiting the metabolic disorder of extracellular matrix of degenerative cartilage mediated by IL-1β，playing an anti-inflammatory role and protecting chondrocytes.【Keywords】 osteoarthritis;Meihua Rugu Dan（梅花入骨丹）;matrix metalloproteinase;chondrocytes;TLR4;NK-κB;signaling pathway骨关节炎（osteoarthritis，OA）是一种常见的中老年关节退行性疾病。
骨源性细胞因子在激素性股骨头坏死发生发展中的研究进展
-综述•骨源性细胞因子在激素性股骨头坏死发生发展中的研究进展蒋捷,黄林科，胡峰△(广西医科大学第二附属医院，广西南宁530007)［摘要］股骨头坏死是骨外科常见的难治性疾病,其机制仍有待研究。
目前为止,医源性糖皮质激素是非创伤性股骨头坏死的主要原因。
激素的长期使用可导致股骨头骨细胞凋亡、血液循环障碍所致缺血缺氧，最终导致股骨头塌陷。
激素性股骨头坏死的发生发展与骨组织中细胞直接接触和其间接分泌的细胞因子调控相关。
本文综述了骨组织中成骨细胞分泌的核因子k B受体结合配体，骨保护素,骨碱性磷酸酶，骨细胞表达硬化素，破骨细胞分泌骨形态发生蛋白2等因子在SONFH的研究进展，骨源性细胞因子在SONFH中扮演重要作用。
［关键词］骨源性细胞因子;激素性股骨头坏死;临床分型;病理表现;综述［中图分类号］R681［文献标识码］A［文章编号］961-5639(2621)61-482-04doi:16.3969/E R w x961-5639.402000025Resevrch prggress of bone derived cytokines in developmenS of steaid induced osteynecrgsis of the femorai hecdJIANG Jia,HUANG Lia-Ue,HU Feng'(Department of OrtUopebic trauma,the Second Affiliated Hospital of Guanypi Medical University?Nanning Citp,Guangpi Zhuang Autonomous Repiox530007,China)J Abstrach]Avascular necrosis of the femoral heah is a common refracton disease in ortUopebic shraeru/whose mechanism remains to be studied.So far,iatngenic glucocorncoids are the main cause of nox-EaumaWe necrosis of the femoral heah.Long term treatment of glucocorncoids leafs to osteocyte apoptosis of femoral heah,ischemia and hypoxia caused bp blood cinulaWon OisorUer,and eventuaLy leafs to coXapse of femoral heah.The occurrence and Oevelopment of steroid induced osteonecrosis of the femoral heah are related to the direct contact of cells in bone tissue and the repulaLox of cypdines secreted indirectly.We reviewed the research progress of Nuclear factor kaypa B receptor binding ligand,RANKL,OsPoproPpeEn；OPG and Bone aldaLne phosphamse；BAP secreted bp osteoblasts, eceeeohnt(SOST)peoducedbsoeheocsheeatdBotemoepeogetehncpeohent-2BMP-2eeceehedbsoeheoceaehenteheeondntducedoeheote-eeoeneoeheeeemoeaeeead0Botedeeneedeshoenteepeasatnmpoehatheoeenteheeondntdueedoeheoteeeoeneoeheeeemoeaeeead0J Key woras]Bone PeEved cytodines;2proid induced necrosis of the femoral heah；Clinical classification;PatUologicai manifestation；Reenew股骨头坏死(OWewecrwis of femoral heah,ONFH)是骨外科常见的难治性疾病,严重影响患者的生活质量。
【国家自然科学基金】_核因子кb_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801
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骨吸收陷窝 额叶前皮质 静压力 青心酮 雷公藤内酯醇 雌激素受体β (erβ ) 阿尔茨海默病 阿仑膦酸钠 锌指蛋白a20 铁/药理学 金属离子 金属-金属假体 通心络 逆转录聚合酶链反应 迟发性神经元变性 过氧化物酶体增殖物激活受体α 过氧化物酶体增殖物活化受体α 迁移 载脂蛋白e 软骨细胞 转化生长因子β 1 趋化因子 质核穿梭 负反馈环 调节 诱导型一氧化氮合酶 西比灵 补阳还五汤 补肾抗衰片 衔接蛋白质类,信号转导 血管紧张素转换酶 血管紧张素ⅱ1型受体 血管痉挛 血管平滑肌细胞增殖 血管内皮细胞 血液凝固 蛋白激酶cα 蛋白激酶b 艾丁比特(adinbitor) 膜蛋白 脾胃湿热证 脱氧核糖核酸 脓毒症 脑肿瘤 脑缺血再灌注 脑出血/病理生理学 脑出血/病理学 脐静脉内皮细胞 脊髓损伤 脂细胞 脂多糖类 脂多糖(lps) 胸腺基质淋巴细胞生成素 胰岛素样生长因子结合蛋白
破骨样细胞中骨保护素和 NF－κB配体受体的表达及其意义
破骨样细胞中骨保护素和 NF－κB配体受体的表达及其意义聂斌;管思明;张韶英;方欣;周韶琼【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2015(000)019【摘要】目的：探讨破骨样细胞中骨保护素（ OPG）和 NF－κB配体受体（ RANKL）表达情况。
方法单独培养骨髓单核细胞前体，用巨噬细胞集落刺激因子（ M－CSF）和维生素D诱导其转化为破骨样细胞，在0、5、10、15 d用光镜观察和TRAP染色（抗酒石酸染色）评估破骨样细胞的转化程度，用RT－PCR 检测OPG和RANKL的表达情况；然后构建主动脉中膜平滑肌细胞（ SMC）与骨髓单核细胞前体共培养的模型，用维生素 C 和β－磷酸甘油诱导SMC转化为成骨样细胞，并在0、5、10、15 d用同样方法再次检测共培养中破骨样细胞转化的情况，以及两种细胞中OPG和 RANKL的表达情况。
结果不管是单独培养、还是共培养，破骨样细胞中始终没有OPG和RANKL的表达。
结论破骨样细胞的转化可能主要受成骨样细胞分泌的OPG和RANKL调控，本身并没有分泌OPG和RANKL进行自身调节的机制存在。
【总页数】4页(P5400-5402,5403)【作者】聂斌;管思明;张韶英;方欣;周韶琼【作者单位】华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院老年病科，湖北武汉430014;华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院老年病科，湖北武汉430014; 华中科技大学同济医学院附属武汉协和医院老年病科;华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院老年病科，湖北武汉 430014;华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院老年病科，湖北武汉 430014; 华中科技大学同济医学院附属武汉协和医院老年病科;华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院老年病科，湖北武汉 430014; 华中科技大学同济医学院附属武汉协和医院老年病科【正文语种】中文【中图分类】R68【相关文献】1.前列腺素E2对人成骨样细胞白介素-6,骨保护素配体/骨保护素mRNA表达的影响 [J], 乔礼芬;刘晓晴2.咀嚼力对青龄期大鼠牙槽骨胰岛素样生长因子-1、骨保护素、核因子kB受体活化因子配体蛋白表达的影响 [J], 李淑娴;马宗民;孙雨辰;王学金3.地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达的干预作用 [J], 蔡马;张宝;姜立4.骨碎补总黄酮对小鼠成骨细胞中骨保护素和核因子-κB受体活化因子配体mRNA体外表达的影响 [J], 王建舫;安亚兰;张大丙;张国中;曾兴梅;穆祥;韩博5.机械应力影响鼠骨髓基质细胞骨保护素/NF-κB受体活化剂配体mRNA表达变化 [J], 刘丽;张晓聪;郑茜聪;张烈焚因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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核因子KB受体活化因子配体、护骨素在不同月龄雄性大鼠股骨的表达周雄文;刘迎春;翦新春;雷勇华;吴英【摘要】目的研究核因子KB受体活化因子(receptor activator of NF-KB，RANK)及核因子KB受体活化因子配体(receptor activator ofNF-KB ligand，RANKL)和骨保护素(osteoprotegrin，OPG)，在不同月龄雄性大鼠股骨表达的变化，探讨αD3对老龄大鼠RANK、RANKL、OPG表达的影响。
方法将6周龄、6月龄、24月龄、24月龄+αD3组Wistar大鼠分为甲、乙、丙、丁4组，每组15只。
其中丁组为24月龄+αD3组，按0.05 μg/kg/d-1灌胃，隔天1次，每周3次。
连续10周。
取左侧股骨远中干骺端1/2，采用RT-PCR测RANKL 、RANK 及OPG的mRNA的表达。
取右侧股骨做免疫组化。
结果与6周组相比，6月和24月组RANKLmRNA分别增加6.2倍和7.3倍，(P＜0.05)，OPGmRNA值随月龄逐步增加(P＞o.05)。
24月龄+cαD3组较24月龄组RANK降低(P＜0.05)、RANKL/OPG比值亦降低(P＞0.05)。
免疫组化结果显示RANKL、OPG表达于软骨和成骨细胞胞浆和胞核。
24月龄+αD3干预组OPG表达较24月组增强。
结论股骨RANKL/OPG值随月龄增加，有利于骨的吸收和转换;αD3有促进骨形成降低骨吸收的作用，其机制可能与降低RANK、RANKL/OPG比值有关。
RANKL、OPG表达于同一类型的细胞，二者共同调节骨的代谢。
%Objective To investigate the expression of receptor activator of nuclear factor-KB (RANK), its ligand RANKL, and osteoprotegrin, and observe the effects of αD3 on their expressions in male rats at different ages. Methods Wistar rats at 6 weeks, 6 months, and 24 months (n=15) were examined for mRNA expressions of RANK/ RANKL and osteoprotegrin in the leftproximal femur using RT-PCR and for their protein expressions in the right femur using immunohistochemistry. RANK/RANKL and osteoprotegrin expressions were also detected in another 15 rats aged 24 months following intragastric administration of 0.05 ug/kg αD3 (3 times a week for 10 weeks). Results Compared with 6-week-old rats, 6-month- and 24-month-old rats showed a 6.2-fold and 7.3-fold increase of RANKL mRNA expression, respectively (P<0.05), and osteoprotegrin mRNA levels increased slightly with age. αD3 treatment resulted in significantly increased expression of RANK in 24-month-old rats with a lowered RANKL/osteoprotegrin ratio. RANKL and osteoprotegrin were co-localized in the osteoblasts and chondrocytes. αD3 treatment also caused an increased expression of osteoprotegrin mRNA in 24-month-old rats. Conclusion The age-related increase of the ratio of RANKL/osteoprotegrin mRNA prom otes osteoclast activity and bone turnover. αD3 has favorable effect on osteogenesis and suppress bone absorption in the femur possibly by reducing RANK expression and loweringRANKL/osteoprotegrin ratio.【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2011(000)009【总页数】4页(P1539-1542)【关键词】护骨素:核因子KB受体活化因子配体;核因子KB受体活化因子;αD3;雄性【作者】周雄文;刘迎春;翦新春;雷勇华;吴英【作者单位】中南大学湘雅医院口腔科，湖南长沙410008;中南大学湘雅医院口腔科，湖南长沙410008;中南大学湘雅医院口腔科，湖南长沙410008;中南大学湘雅医院口腔科，湖南长沙410008;中南大学湘雅医院口腔科，湖南长沙410008【正文语种】中文【中图分类】Q573核因子KB受体活化因子（RANK/RANKL/OPG）系统被认为是破骨细胞分化成熟最重要的信号通路［1-2］。
研究发现许多激素，细胞因子等均通过直接或间接调节核因子KB受体活化因子配体、骨保护素的表达来影响骨代谢。
成骨细胞及骨髓基质细胞上表达RANKL与破骨前体细胞或破骨细胞表面上的RANK结合后，促进破骨细胞的分化和激活，并抑制破骨细胞的凋亡。
成骨细胞及骨髓基质细胞则分别表达OPG，与RANKL竞争性结合，阻止RANKL与RANK的结合。
据文献报道活性VitD在体外大多促进RANKL抑制OPG的表达，但在体内的作用既有促进RANKLmRNA表达升高，又有抑制RANKLmRNA的报告［3］。
它对老龄大鼠股骨RANKLmRNA、OPGmRNA的影响，特别是对RANK mRNA的影响究竟如何少见文献报道。
本实验采用24月龄自然衰老的雄性大鼠模型，与6周、6月的大鼠模拟人少年、中年、老年骨组织的变化，观察RANK/ RANKL/OPG随月龄增长表达的变化，研究维生素D对老年大鼠股骨RANK/RANKL/OPG表达变化的影响。
选用60只雄性w istar大鼠，分为4组，每组15只。
甲组：6周；乙组：6月；丙组：24月；丁组：24月+αD3药物。
w istar大鼠按αD3 0.05μg/(kg·d)溶于谷物油灌胃，隔天1次，每周3次，连续10周。
24月龄对照组仅谷物油灌胃。
乙醚麻醉处死，取大鼠左侧股骨干骺端骨组织1/2，去除表面附着筋膜及软组织，从中线纵向劈开，PBS液冲洗髓腔，入液氮急冻，-70℃冰箱保存。
将骨组织移至研钵中研磨加1m l Trizol，将匀浆液转至1.5m l Eppendorf管中；加入氯仿200μl，振荡摇匀15 s；4℃，12000 r/m in，离心15m in；小心吸出水层加入Eppendorf管中，再加入二倍体积的异丙醇（约60μl），混匀，置于-20℃冰箱，30m in；4℃，10 000 r/m in，离心15min，弃上清留沉淀；用650μl 75%乙醇洗涤沉淀，4℃，8000 r/m in，离心5m in，弃上清留沉淀；干式恒温器65℃，5～10m in，烘干；200μl DEPC处理水，溶解RNA。
试剂盒从-80℃冰箱取出，将5×逆转录buffer，dNTPs，MMLV，oligo(dT)，复融；10000 r/m in；将制备好的cDNA进行PCR扩增，数据采用仪器自带软件分析：ABIPrism 7500 SDS软件对各组基因作相对定量。
并计算RANKLmRNA和OPGmRNA的比值。
免疫组化采用SP法。
切片脱蜡至水，3%的H2O2浸泡30min，滴加山羊血清封闭60m in；滴加NF-κB配体单克隆抗体(1∶200)，室温过夜；滴加生物素二抗(1∶400)37℃湿盒孵育60m in，滴加新鲜配制的DAB显色液；以PBS代替I抗进行免疫组化阴性对照。
蛋白染色阳性均为在细胞胞质或胞核内出现棕黄色颗粒为阳性。
每例切片随机选取5个高倍视野进行结果判定，按染色强度及阳性细胞数占细胞总数的百分比综合计分。
染色强度：无色计为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分他，棕褐色为3分；阳性细胞数：小于总数的5%时计为0分，5%～25%为1分，25%～50%为2分，大于50%为3分。
染色强度得分与阳性细胞数得分相乘，0分计为阴性“-”，1～3分计为弱阳性“+”，4～5分计为中度阳性“++”，大于或等于6分计为强阳性“+++”。
采用SPSS16.0统计软件，所有数据以xˉ±s来表示。
作总体方差分析，组间比较用LSD法。
P＜0.05为组间差异具有统计学意义。
RANKL随月龄增加增长明显，与6周比较，6月、24月组、24月+αD3组差异有统计学意义(P＜0.05)。
RANK随月龄增长增加，但24月+αD3较24月组减少，组间差异有统计学意义(P＜0.05)。
OPG随月龄增长逐步增加，但组间差异无统计学意义(P＞0.05)。
RANKL/OPG也随月龄增加，各组与6周组比较组间差异有统计学意义。
见表2。
OPG阳性信号主要见于成骨细胞的胞浆、胞核；6周股骨OPG主要表达于骨细胞、软骨细胞；24月+αD3组较24月组OPG的表达明显增加。
主要表达于骨皮质的骨内膜，少量位于骨松质（图1～4）。
RANKL的阳性信号主要表达于软骨细胞和成骨细胞的胞浆、胞核；24月+αD3组较24月组染色减弱；在破骨细胞上未见RANKL的表达（图5～8）。
研究结果表明，股骨RANKLmRNA随月龄增长明显。
与6周比较，6月和24月组分别增加6.2倍和7.3倍。
而OPGmRNA的表达随月龄逐渐升高，同时RANKL/OPG的比例也随着增加，表明骨吸收作用大于骨形成，故而老年组出现骨质疏松。
αD3干预组较对照组RANK明显降低，RANKL/OPG比值降低，作者认为主要有以下几个方面的原因。