肥大细胞组胺体外释放模型在食品过敏原分析中的应用
免疫层析技术在食物过敏原快速检测中的应用进展
免疫层析技术在食物过敏原快速检测中的应用进展
郭开通;胡骁飞;孙亚宁;邢云瑞;王成宾;吴佳蓓;王琳;宋乾召;杨海涛;王耀
【期刊名称】《食品与发酵工业》
【年(卷),期】2024(50)1
【摘要】食物过敏是重要的公共卫生问题之一,严重威胁着过敏人群的健康,为保障过敏人群食品安全,针对食物过敏原开展检测方法研究尤为必要。
近年来,针对食物
过敏原的快速检测技术发展迅速,其中,免疫层析技术因其具有检测效率高、成本低、特异性强等优点,在快速检测中得到广泛应用。
该文简述了主要食物过敏原及免疫
层析技术的检测原理,对食物中植物源性食物过敏原(花生、大豆、小麦和树生坚果过敏原)和动物源性食物过敏原(牛奶、鸡蛋、甲壳类和鱼类过敏原)的免疫层析检
测方法进行系统总结,并对其发展方向进行展望。
【总页数】7页(P311-317)
【作者】郭开通;胡骁飞;孙亚宁;邢云瑞;王成宾;吴佳蓓;王琳;宋乾召;杨海涛;王耀【作者单位】河南科技大学食品与生物工程学院;河南省农业科学院动物免疫学重
点实验室;河南宜测科技有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】R15
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肥大细胞流式细胞术标记
肥大细胞流式细胞术标记一、细胞表面标记肥大细胞表面标记主要用于鉴定和区分不同类型的肥大细胞。
常用的标记包括CD117（c-Kit）、CD25、CD63和CD23等。
这些标记可以单独使用，也可以组合使用，以便更准确地鉴定肥大细胞的亚型。
二、胞质颗粒标记胞质颗粒标记主要用于检测肥大细胞的活性状态。
肥大细胞在活化时会释放胞质颗粒，其中包括组胺、类胰蛋白酶、β-氨基己糖苷酶等。
这些组分的表达量与肥大细胞的活性相关，可以用于评估肥大细胞的活化程度。
三、胞核染色标记胞核染色标记主要用于区分肥大细胞和其他类型的白细胞。
常用的胞核染色标记包括DAPI和Hoechst等，这些染料可以与DNA结合，对胞核进行染色，以便在流式细胞仪中区分不同的细胞类型。
四、酶活性检测标记酶活性检测标记主要用于检测肥大细胞释放的活性物质。
例如，组胺酶活性检测可以用于检测组胺的释放，β-葡萄糖苷酸酶活性检测可以用于检测嗜酸性粒细胞酶的释放。
这些标记有助于评估肥大细胞的活化程度和功能状态。
五、抗原抗体反应标记抗原抗体反应标记是流式细胞术中最常用的标记方法之一。
通过将特异性抗体与肥大细胞表面抗原结合，可以用于鉴定肥大细胞的亚型和功能状态。
常用的抗体包括抗-IgE、抗-FcεRI、抗-CD117等。
六、荧光染色标记荧光染色标记主要用于检测肥大细胞内的特定分子或离子。
例如，钙离子荧光染色可以用于检测肥大细胞内的钙离子浓度，pH荧光染色可以用于检测肥大细胞内的pH值。
这些标记有助于了解肥大细胞的生理功能和活化机制。
七、细胞凋亡检测标记细胞凋亡检测标记主要用于评估肥大细胞的存活状态。
常用的标记包括Annexin V和PI等，这些染料可以与凋亡细胞结合，通过流式细胞仪检测凋亡细胞的百分比。
了解肥大细胞的存活状态有助于评估其在疾病中的作用和治疗效果。
1型过敏反应
因此，短时间内小剂量多次注射过敏原，可使 体内致敏细胞分期、分批脱敏，以至最终全部 解除致敏状态。此时再注射大量抗血清时就不 会引起超敏反应。但这种脱敏作用是暂时的， 经过一定时间后机体可重新恢复致敏状态。
2 减敏治疗 对一些已查明过敏原（如花粉、尘螨），却难 以避免接触的呼吸道、皮肤过敏反应等，可采 用小剂量、长间隔（一周左右）、逐渐增量、 多次皮下注射过敏原的方法，达到减敏的目的。 作用机制可能与改变过敏原进入机体的途径、 诱导机体产生能与IgE竞争过敏原的特异性IgG 有关。这种特异性IgG抗体又称为封闭性抗体。
（四）过敏性休克 是最严重的一种过敏反应， 常发生于药物或血清注射之后数分钟之内发生， 抢救不及时可迅速死亡。主要症状有： （1）呼吸道阻塞症状：由喉头水肿、气管和 支气管痉挛及肺水肿引起。表现为胸闷、心悸、 喉头有堵塞感、呼吸困难及脸色涨红等，伴有 濒危感、口干、头昏、面部及四肢麻木
（2）微循环障碍症状：由微血管广泛扩张所 致。表现为面色苍白、烦躁不安、畏寒、冷汗、 手脚发凉、脉搏细数微弱及血压下降等。 （3）中枢神经系统症状：由脑部缺氧所致。 表现为意识丧失、昏迷、抽搐及大小便失禁等。 青霉素、链霉素、头孢菌素、普鲁卡因、有机 典、多种抗毒血清等为常见过敏原。
过敏原
过敏原是引起过敏反应的物质亦称变应原、致 敏原。 医学文献记载接近2万种。与人类密切接触的 过敏原也有2000~3000种左右。它们通过吸入、 食入、注射或接触等方式使机体产生过敏现象。 常见的过敏原如下：
1、吸入式过敏原： 如花粉、柳絮、粉尘、真菌孢子、螨虫、动物 皮屑、羽毛、油烟、油漆、汽车尾气等。
（二）特异性脱敏和减敏治疗
果胶与双歧杆菌对Balbc小鼠机体敏感性的影响
第5卷第4期食品安全质量检测学报Vol. 5No. 4 2014年4月Journal of Food Safety and Quality Apr. , 2014果胶与双歧杆菌对Balb/c小鼠机体敏感性的影响孙璐, 王翠燕, 苗静, 周催, 毕源, 宫雪, 车会莲*(中国农业大学食品科学与营养工程学院, 北京 100083)摘要: 目的研究果胶是否能够降低Balb/c小鼠对OVA(鸡卵清白蛋白)的过敏反应水平, 以及同时经口给予双歧杆菌是否能够调整小鼠肠道菌群, 从而影响过敏反应的发生和反应强度。
方法连续40 d经口给予小鼠20 μg/只(低剂量)和200 μg/只(高剂量)的果胶溶液或溶有双歧杆菌(2×106 CFU/只)的果胶溶液, 每10 d腹腔注射OVA和铝佐剂致敏小鼠, 10 d后进行大刺激, 采血测定组胺、肥大细胞蛋白酶-1、免疫球蛋白E水平, 并对脾脏T细胞进行体外刺激, 检测IFN-γ和IL-4的水平, 同时取小鼠粪便筛选双歧杆菌培养。
结果果胶处理组小鼠血浆中组胺、肥大细胞蛋白酶-1水平与OVA致敏组相比无显著差异(P>0.05); 高剂量处理组小鼠血清总IgE水平显著低于OVA致敏组(P<0.05), 特异性IgE及细胞因子水平无显著差异(P>0.05); 双歧杆菌筛选培养可以看出, 果胶有增加双歧杆菌数量的作用, 但经口给予双歧杆菌活菌无显著作用。
结论补充果胶不能降低Balb/c小鼠的肥大细胞脱颗粒情况、抗体水平以及细胞因子产生水平; 果胶有增加肠道内双歧杆菌的作用, 但经口给予活菌不能增加肠道内双歧杆菌水平。
关键词: 果胶; 双歧杆菌; 小鼠; 过敏反应; 肠道菌群Research on the effect of pectin and Bifidobacterium on organismsensibility in Balb/c miceSUN Lu, WANG Cui-Yan, MIAO Jing, ZHOU Cui, BI Yuan, GONG Xue, CHE Hui-Lian* (College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agriculture University, Beijing 100083, China)ABSTRACT: Objective To study whether pectin can decrease the level of allergic reactions to ovalbumin ( OVA ) in Balb/c mice, and whether oral administration of bifidobacterium at the same time can adjust the in-testinal flora in mice to affect the level of an allergic reaction. Methods 20 μg/mouse (low dose) and 200 μg/mouse (high dose) soluble pectin solution with/without Bifidobacterium (2×106 CFU/mouse) was given for40 d, and OVA added alum adjuvant was intraperitoneally injected every 10 days to sensitize mice, then micewere stimulated with OVA 10 d later. The levels of plasma histamine, mast cells protease-1 and immunoglobu-lin E were determined by ELISA. Spleen T cells were prepared and stimulated in vitro to produce cytokines, and the levels of IFN-gamma and IL–4 were then measured. Fecal samples were collected to culture Bifidobac-terium, and compare the differences between groups. Results The levels of histamine, mast cells protease-1 level of mice administrated with pectin and mice sensitized by OVA showed no significant difference. Levels of serum total IgE in mice of high dose treatment were significantly lower than mice sensitized by OVA, while基金项目: 中央高校基本科研业务专项Fund: Supported by Chinese Universities Scientific Program*通讯作者: 车会莲, 副教授, 主要研究方向为食品过敏、食品毒理学。
发酵对食品中致敏物质的降解与去除
发酵对食品中致敏物质的降解与去除发酵是一种广泛应用于食品制备过程中的生物转化过程。
通过发酵，食品中的致敏物质可以被降解和去除，从而使其成为适合过敏患者消费的产品。
本文将从酵素的角度探讨发酵对食品中致敏物质的降解和去除的机制与方法。
首先，我们需要了解一些关于致敏物质的基本知识。
食品中的致敏物质主要包括过敏原和亚过敏原。
过敏原是指可以引起过敏反应的物质，如花粉、蛋白质等。
而亚过敏原是指可以诱导过敏反应的物质，但本身并不具备过敏原性。
常见的食品致敏物质有乳糖、麸质、虾蟹类、花生等。
发酵是利用微生物（如酵母菌、细菌）或其产生的酶对食材中的营养成分进行催化转化的过程。
通过发酵，可以产生一系列有益的代谢产物，如乳酸、醋酸、酵素、氨基酸等。
这些代谢产物可能具有致敏物质的破坏和去除作用。
一种常见的发酵方法是乳酸发酵。
乳酸发酵是由某些乳酸细菌进行的一种产乳酸的代谢过程。
在乳酸发酵中，乳酸菌通过对糖类的分解产生乳酸，使食品的酸度增加。
这种酸性环境会对某些致敏物质产生影响。
例如，在酸性环境中，部分蛋白质可能会发生变性和降解，从而降低其过敏原性。
此外，酸性环境还可以抑制某些细菌和真菌的生长，从而减少食品中的亚过敏原。
另外，发酵过程中产生的酵素也可以对食品中的致敏物质进行降解和去除。
例如，面团发酵过程中产生的面粉酵素可以分解一部分麸质，从而减少其致敏性。
此外，通过取得或培育特定的酶制剂，可以在发酵制备过程中加入，以促进致敏物质的降解和去除。
例如，向面包中添加葡醛酸酯酶可以有效降解面包中的麸质，使其成为适合麸质过敏者食用的制品。
除了传统的发酵方法，现代科技也为食品中致敏物质的降解和去除提供了新的手段。
例如，通过基因工程手段将产生有降解致敏物质酶的基因导入到发酵菌中，使其具备降解致敏物质的能力。
这种方法可以精确控制酶的产生和活性，提高致敏物质的去除效果。
总的来说，发酵是一种有效的降解和去除食品中致敏物质的方法。
通过发酵过程中产生的酸性环境、酵素活性等，使致敏物质发生降解和去除。
QTRAP串联质谱系统用于食品中过敏原的检测
多通道的MRM探测扫描（上）；鸡蛋中多肽的数据相关MS/MS（左下）；牛奶中多肽的数据相关MS/MS（右下） 图3a. 用MIDAS™工作流程检测通心粉中的过敏原。分析添加了100 ppm的鸡蛋和牛奶过敏原的通心粉提取物。顶部窗格 中显示的是MRM通道的总离子流图。左下方是自动采集得到的鸡蛋中多肽的QTRAP® MS/MS谱，右下方是由牛奶中多肽 产生的QTRAP® MS/MS谱。
MS/MS 所有的分析都是在配备ESI源的AB SCIEX 4000 QTRAP® LC-MS/MS系统上完成。 最初的方法开发采用NanoSpray®源，流速为300 nL/min。使用MRM Pilot™软件和MIDAS™工作流程， 用于摸索和确认MRM通道。（MIDAS为MRM-Initiated Detection And Sequencing，即MRM触发的检测和 测序）。 使用MIDAS™工作流程，从已知的蛋白序列中预测一组MRM通道，之后扫描这组MRM通道，并触发采 集三重四极杆线性离子阱（QTRAP®）MS/MS全扫描谱图（图1）。这些数据被提交到蛋白序列数据库搜索引 擎，来验证是否是待测的多肽，并确认这些MRM通道是否适用于过敏原检测。使用了这一工作流程，就无需 使用合成的多肽；而过去，在无法获得商品化的过敏原蛋白时，往往就需要使用合成的多肽。 最终开发出的食品样品中的过敏原检测方法采用了AB SCIEX 4000 QTRAP®质谱系统，配备了Turbo V™ 离子源和ESI探针，流速为300 µL/min。 结果和讨论 在方法开发的过程中，特别需要确定备选的肽段是检测过敏原的独特标志肽段。为此，对潜在的标志性肽 段进一步确证，以去除那些在食品加工过程中容易发生变化的肽段，例如翻译后修饰或麦拉德反应（Maillard reaction）。通过进一步确证精简得到的肽段用于在检测过程中触发并生成肽指纹谱。每一个过敏原都需用到 多个标志肽段来触发检测以保证结果的可靠性。 图2显示的是用于检测花生、牛奶、鸡蛋、小麦蛋白的MRM通道总离子流图。这里共有55个对MRM通 道，对应于19种用于SCIEX QTRAP®串联质谱系统用于食品中过敏原的检测 最后得到的MRM通道列表用于完成MRM探测扫描，并触发采集QTRAP® MS/MS全扫描谱图。这些谱图 可被提交到蛋白质序列数据库搜索引擎，对鉴定的多肽进行确认。 图3a和3b展示了通心粉和面包样本的例子，两组样本都添加了100ppm牛奶和鸡蛋的过敏原，经提取后 进行分析。 提取通心粉和面包的加标样本，由于两者均含有来自鸡蛋和牛奶中的相同多肽，所以得到了一致的MS/ MS谱图。这些附加的MS/MS信息连同MRM离子比率数据，为食品中过敏源的鉴定提供了多点证据，因为这 些肽是独一无二的，从而大大降低了过敏原检测的假阳性率。
龙虎人丹改善高脂饮食诱导的脂肪细胞肥大的作用研究
通信作者： 金桂芳（１９８２—） ，女，博士，实验师，主要从事药理学与毒理学研究，Ｅｍａｉｌ：ｊｇｆ．ｎａｎｃｙ＠ １６３．ｃｏｍ。
８０４
广东药科大学学报
第 ３６ 卷
ｇｒｏｕｐ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｏｆ ｂｏｄｙ ｆａｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｎｄ ｔｈｅ ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｉｃ ｉｎ
龙虎人丹是一种中草药复方，主要由薄荷、冰
片、丁香、砂仁、八角茴香、肉桂、胡椒、木香、干姜、儿
茶和甘草等 １１ 种成分组成，在临床上广泛应用于治
疗中暑、晕动病、腹泻等病症，具有疗效可靠、副作用
少、复发率低等优点 ［８⁃９］ 。 之前的研究表明，龙虎人
丹可通过调节血脂代谢进而改善高脂饮食诱导的小
鼠动脉粥样硬化中的血脂紊乱即能显著降低血清三
７Ｑ 化学发光仪（ 上海勤翔科学仪器有限公司） ；ＢＸ⁃
５３ 荧光显微镜（ 日本 Ｏｌｙｍｐｕｓ） ；ＢＮ⁃５１８８ 冰冻切片
机（ 孝感市亚光医用电子技术有限公司） 。
１．４ 方法
１．４．１ 分组及给药 将 ２４ 只小鼠随机分为 ４ 组，每
组 ６ 只，分别为：正常对照组、模型组、龙虎人丹低剂
量组（２０ ｍｇ ／ ｋｇ，相当于成人临床最低剂量的 ９ 倍）
率 ［１］ 。 由于高热量饮食的大量摄入以及久坐不动
的生活方式，目前，全球范围内约有 １．０７７ 亿儿童和
１．２ 药品与试剂
为 ５％和 １２％ ［２⁃４］ 。 如何减肥也日益成为我国卫生健
康领域的一大难题。 然而，除了控制饮食和加强锻
型过敏反应
白三烯的释放及发挥作用缓慢（4~6小时）， 但维持时间长（1~2天）。引起支气管平滑肌 持续痉挛，效力比组胺大100~1000倍。是支 气管哮喘的主要介质。
嗜酸性粒细胞则通过吞噬完整颗粒及分泌多种 酶灭活生物活性介质，发挥重要的负反馈调节 作用。
肥大细胞分布于皮下小血管周围的结缔组织中 和呼吸道或消化道黏膜下层，而嗜碱性粒细胞 主要分布于外周血中
生物活性介质：具有特定的生理性或病理性作 用的物质。主要有：
组胺、肝素、白三烯、前列腺素、血小板活化 因子、嗜酸性粒细胞趋化因子、细胞因子等。
三 临床常见病
Ⅰ型超敏反应性疾病种类很多，症状不一，除 与释放的介质种类与数量有关外，还与过敏原 的种类、数量、侵入途径以及个体机能状态的 差异等因素密切相关。
（一）皮肤过敏反应 主要表现为瘙痒、荨麻 疹、特应性湿疹和血管性水肿等。可由药物、 食物、花粉、肠道寄生虫或冷、热刺激等引起。
（二）消化道过敏反应 少数人进食鱼、虾、 蟹蛋等食物后，可出现恶心、呕吐、腹痛、腹 泻等症状，称为过敏性胃肠炎。
2 拮抗生物活性介质作用：苯海拉明、扑尔敏、 异丙嗪等，通过与组胺竞争结合效应器官细胞 膜上组胺受体而发挥抗组胺作用。
3 改善效应器官反应性：如糖皮质激素可解 除支气管痉挛、血管收缩血压升高。钙剂和维 生素C可解除痉挛、降低毛细血管通透性。
（五）过敏反应预防
过敏反应预防重于治疗。
应该从注意生活起居、饮食调理得当和适当的 体育锻炼三个方面做起。
（1）呼吸道阻塞症状：由喉头水肿、气管和 支气管痉挛及肺水肿引起。表现为胸闷、心悸、 喉头有堵塞感、呼吸困难及脸色涨红等，伴有 濒危感、口干、头昏、面部及四肢麻木
吸入及食物过敏原
吸入性及食物性过敏原特异性IgE 抗体检测试剂盒的标准操作规程1 目的：保证特异性IgE(sIgE)试验的正确操作，保证检验结果的准确可靠。
2 适用范围：临床免疫实验室3 项目名称：吸入性及食物性过敏原特异性IgE 抗体检测试剂盒4 项目方法：欧蒙印迹法5．原理：采用免疫印迹法原理。
5．1 经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行温育。
如果样本阳性，IgE 类特异性抗体与相应的过敏原结合。
5．2 在洗涤之后，加入酶标单克隆的抗人IgE 抗体（酶结合物）进行第二步温育，以形成复合物。
5．3 在孵育之后，冲洗掉未结合的酶-抗-IgE，然后加入底物液，发生颜色反应。
5．4 终止反应之后，风干判读结果。
6．标本种类及收集、运送要求：6．1 病人准备：要求患者在安静状态下；晨起的精神、体力、情绪等因素的影响较小，是标本采集的最佳时间；抽取肘部静脉血或毛细血管血。
6．2 标本种类：人血清或者EDTA、肝素或柠檬酸抗凝血浆。
6．3 标本稳定性：待测样本于2-8°C 条件下通常可保存14 天。
稀释后的样本应在同一个工作日内检测。
6．4 标本稀释：患者样本不需稀释，直接检测。
6．5 标本容器：一般用真空采血管中的血清促凝管（红色头盖）或抗凝管（紫色或绿色头盖）。
6．6 标本最小用量：血清最小用量 1ml。
6．7 标本运送：标本采集于真空采血管后应尽快送实验室分析，物流系统可加快标本传递速度。
若标本不能及时转运到实验室，应将真空采血管内的标本置冰瓶或冷藏箱内，运送过程中应避免剧烈震荡。
当天无法运送的标本应分离血清后冷藏。
7．试剂：7．1 来源：欧蒙公司.7．2 规格： 16*1人份/盒7. 3 试剂盒组成和代号：主要组分：16 人份的试剂盒7．4 储存和稳定性：2-8°C 保存，不要冰冻。
未开封前，试剂盒可稳定至所标示的有效期。
已稀释的缓冲液必须在一个工作日内用完。
7．5 试剂的准备和稳定性：7．5．1 试剂在使用前均应在室温（18-25℃）平衡30分钟左右。
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578 2008, Vol. 29, No. 08
食品科学
※营养卫生
58.34%
44.79%
20.04% 47.02%
组胺释放率(%)
90
80
70
24.2Байду номын сангаас%
27.37%
60
50
20.47%
40
30
*
20
10
0
对照 1.50% 牛奶 0.73% 虫螨 6.20%
21+80
36+80
21kD 36+21
组胺释放率的测定：100μl 的样品(即实验所得上清)加 到含150μl 三蒸水的 96 孔酶标板中，加入 50μl 0.4mol/L NaOH 和 10μl OPT，避光反应 10min，加入 50μl 0.1mol/L HCl 终止反应，然后用荧光酶标仪于吸收光 349nm 和发 射光 448nm 测定荧光(IU )值。组胺的释放用组胺净释放 率表示：
收稿日期：2008-05-23 基金项目：国家自然科学基金项目(30640026) 作者简介：刘婉莹( 1 9 8 3 - ) ，女，硕士研究生，主要从事食品过敏研究。E - m a i l ：7 6 8 4 4 3 6 9 @ Q Q . c o m * 通讯作者：向军俭(1952-)，男，教授，主要从事分子免疫学与抗体工程研究。E-mail：txjj@。
mast cells (PMC) were collected and then were induced to release histamine with various kinds of allergens. Histamine was
detected using fluorescence. Results: The primary allergens in milk can induce histamine release from sensitized-mast cells, while casein has the strongest sensitization effect andα-La the weakest. Casein plays a pivotal role in milk. The 80 kD protein has
by milk
如图 1 所示，脱脂乳、乳清、酪蛋白、β-Lg 组 与空白对照组有显著差异(p ＜ 0.01，n ＞ 5)，α-La 组 没有差异(p ＞ 0.05，n ＞ 5)。酪蛋白诱导牛奶致敏 PMC 释放组胺最多，脱脂乳和乳清诱导的次之，α-La 则最 少，可见酪蛋白在牛奶致敏蛋白中起主要作用[7]。
100 73.28%
80
组胺释放率(%)
60
27.62%
40
21.69%
20 4.04%
** 8.75% 2.01%
0 对照 脱脂乳 乳清 酪蛋白 β-lg α-La
与空白对照组组胺释放相比，p ＞ 0.05，n=6。
图 1 不同致敏原组分对牛奶致敏 PMC 定向释放组胺的影响 Fig.1 Histamine release ratio of peritoneal mast cell sensitized
Abstract：Objective: In this study, a cell model of releasing histamine by sensitized mast cells in vitro was established to analysis
the irritability of different allergens in food. Methods : The mice were sensitized by milk and shrimp, respectively. Peritoneal
※营养卫生
食品科学
2008, Vol. 29, No. 08 577
1 材料与方法
1.1 材料 山羊抗小鼠 IgE 抗体 Sigma 公司；淋巴细胞分离
液(天津 TBD) 博理生物科技公司；C57/BL6 小鼠 南 方医科大学实验动物中心；荧光酶标板 华粤行生物有 限公司；Safire 荧光酶标仪 瑞士 Tecan 公司；牛奶与 虾中主要过敏原组分 本室分离纯化。 1.2 方法
因食品中过敏原标示、检测等问题常常限制我国食 品的外贸出口。要打破贸易壁垒，明确过敏原的种类、
成分、主次过敏原和致敏剂量[4]是关键所在。但目前国 内尚缺乏研究此领域的细胞模型及其评价体系。本实验 拟用肥大细胞体外组胺释放模型分析过敏原组分间的致 敏强弱差异，过敏原浓度与组胺释放率之间的量效关 系，从而为建立体外过敏原评价体系奠定基础，为我 国食品过敏原的标准化及解决食品中过敏原标示等问题 提供技术支持。
图 2 表明，牛奶、尘螨诱导组与虾诱导组不存在 交叉反应；与空白对照组相比，虾蛋白的粗提液(即 H) 及其纯化后各蛋白诱导组有显著差异(p ＜ 0.01，n ＞ 5)； 其他蛋白诱导组之间未见差异。虾蛋白混合液明显比虾 的粗提物诱导组胺释放率高，说明纯化后，排除了非 过敏性蛋白的干扰，过敏原组分含量明显提高。致敏 蛋白混合诱导明显比单独诱导释放组胺多，证明各致敏 蛋白间存在协同效应。致敏蛋白中，又以 80kD 蛋白诱 导组胺最多，36kD 蛋白次之，21kD 蛋白最弱，可见 80kD 蛋白在虾致敏蛋白中起主要作用。
different allergens. The 80 kD protein plays a pivotal role in shrimp-induced sensitization. Conclusion: The quantity of histamine
release from ensitized-mast cells is assosiation with kinds and quantity of allergens.
36kD
80kD
虾蛋白混合液
虾
与空白对照组组胺释放相比，p ＞ 0.05，n=6。 图 2 不同致敏原组分对虾致敏 PMC 定向释放组胺的影响 Fig.2 Histamine release ratio of peritoneal mast cell sensitized
by shrimp
3 讨论
不同地域、不同种族的过敏易感性不同；同一食 品具有多种过敏原；同一过敏原对不同个体反应不同等 多方面原因造成我国食品过敏原评价标准制定困难。以 动物模型和细胞模型为主的特异性体外定性、定量检测 技术是过敏症预防、脱敏治疗及食品过敏原评价的关 键，对分析食品中过敏原种类、组分、含量及制定我 国食品过敏原的标准化极其重要。应大力发展免疫血清 学检测、建立动物 / 细胞致敏模型，还要结合生物信息 学分析，以便构建多级评价结构模式。
小鼠 PMC 分离纯化：小鼠加强免疫后一周，摘眼 球采血处死，收集血清，－ 2 0 ℃储存备用。向小鼠腹 腔注射 5ml HBSS 液，按摩小鼠腹部 5min，抽取腹腔液。 将其缓慢注入装有淋巴细胞分离液的离心管中。室温下 1500r/min 离心 10min，吸出中间层的细胞，即为肥大细 胞。用 HBSS 液调至 10ml/ 管，充分混匀后，1500r/min 离心 10min，重复两次。冲洗后的细胞重新悬浮于 3ml HBSS 液中，置于 4 ℃，备用 。
the strongest sensitization effect, followed by 36 kD and 21 kD. The mixture of shrimp allergens can induce stronger histamine
release from the mast cells than shrimp allergen alone, implying that there may be some synergistically effects among those
2 结果与分析
2.1 致敏小鼠过敏症状分析 第二次免疫后，致敏 C57/BL6 小鼠出现明显过敏症
状，前爪频繁捎挠口鼻处，体毛直立，身体颤抖，呼 吸频率加快，精神萎靡，活动减少[6]；对照组无过敏症 状，说明小鼠过敏症模型建立成功。 2.2 小鼠 PMC 计数及活性鉴定
经染色后电镜下计数观察：细胞数为 106 个 /ml，活 细胞占总细胞的 95%，纯度为 90%。 2.3 牛奶和虾中主要致敏组分诱导组胺释放效率
1.2.1 致敏小鼠腹腔肥大细胞(PMC)制备 小鼠免疫：小鼠随机分成 3 组，牛奶致敏组、
虾致敏组和 PBS 对照组。小鼠饲养一周后开始免疫， 0.5mg/ml 各过敏原蛋白与 2.5mg/ml Al(OH)3 佐剂等体积混 匀后，按分组皮下注射 0.2ml/ 只，对照组注射等体积 0.01mol/L pH7.4 PBS，每隔一周激发 1 次，观察激发后 过敏症状。激发第三次后一周加强免疫。期间观察小 鼠症状。
组胺释放量－自发组胺释放量 组胺的净释放率(%)= ——————————————× 100
总组胺释放量
统计学分析：全部结果均采用 SPSS (13.0 版)软件分 析。数据以 X ± SD 表示。组间数据的比较采用 t 检验， p ＜ 0.01 者即具有显著性差异，p ＜ 0.05 者即具有差异， p ＞ 0.05 者即没有差异。
Key words：mast cell；cell model；histamine；allergens
中图分类号：TS207.3
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2008)08-0576-03
目前诊断、检测食品过敏原的方法多是皮肤试验和 免疫血清检测，体内实验给患者带来痛苦，且存在一 定的危险性，体外实验需要大量的病人血清，而血清 中特异性的 IgG[1]和 IgE 也不完全与过敏反应相关[2-3]，这 些因素限制了食品过敏原的诊断和检测。