叶绿素实验报告
提取叶绿素的实验报告
提取叶绿素的实验报告探究叶绿素在光合作用中的重要性和功能。
实验材料：1. 叶绿体提取液：通过离心植物组织获得的液体。
2. 植物叶片：新鲜且健康的绿色植物叶片。
3. 75% 乙醇：用于提取叶绿素的有机溶剂。
4. 富含二氧化碳的水：提供光合作用所需的二氧化碳。
5. 无色试剂：用于检测叶绿素的存在。
实验步骤：1. 准备：将乙醇和富含二氧化碳的水分别倒入两个玻璃瓶中，并为每个瓶子准备一片植物叶片。
2. 反应前处理：将一片植物叶片放入乙醇玻璃瓶中，摇晃约1分钟，待叶绿素溶解入乙醇，使叶绿素变成绿色提取液。
3. 提取叶绿素：将叶绿体提取液缓慢倒入富含二氧化碳的水中，同时观察溶液颜色变化。
4. 观察结果：根据溶液颜色变化，可以得出叶绿素在光合作用中的功能。
实验结果：通过实验观察，溶液从橙黄色逐渐变成绿色，说明叶绿体提取液中的叶绿素受到光的作用后发生了变化。
这表明叶绿素在光合作用中起到了重要的作用。
实验讨论：叶绿素是一种存在于植物和某些浮游生物中的绿色色素，它是光合作用中的关键物质。
通过吸收光能，叶绿素能够将阳光转化为植物可用的化学能。
在光合作用中，叶绿素通过光合色素复合体吸收光能，并将其转化为电子能和激发态能。
这些能量在光合色素复合体中传递，最终用于合成葡萄糖等有机物质并释放出氧气。
实验中，通过将叶绿体提取液与富含二氧化碳的水混合，我们可以观察到溶液颜色的变化。
这一变化表明叶绿素受到光的激发后发生了变化。
光能激发了叶绿素分子中的电子，使其从基态跃迁到激发态。
随后，叶绿素分子中的电子通过光合色素复合体传递，最终用于光合作用的化学反应。
叶绿素的存在使植物能够进行光合作用，从而合成有机物质并释放出氧气。
光合作用是地球上生物圈中最重要的能量转换过程之一，它不仅为植物提供了能量，也为其他生物提供了能量来源。
叶绿素的作用不仅体现在能量转换上，还参与了光合作用的调节和保护等多个方面。
综上所述，叶绿素在光合作用中起到了重要的作用。
叶绿素含量的测定实验报告
一、实验目的1. 学习叶绿素提取和分离的方法。
2. 掌握利用分光光度法测定叶绿素含量的原理和操作步骤。
3. 了解不同植物叶绿素含量的差异。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其含量直接影响植物的生长和发育。
本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，基于叶绿素在不同波长下对光的吸收特性，通过测定其最大吸收峰处的吸光度值，计算出叶绿素的含量。
三、实验材料与仪器实验材料：1. 新鲜菠菜、小麦、水稻等植物叶片。
2. 95%乙醇、无水乙醇、碳酸钙、石英砂等试剂。
实验仪器：1. 分光光度计2. 研钵3. 移液管4. 量筒5. 滤纸6. 比色皿7. 电子天平四、实验步骤1. 样品制备：- 称取新鲜植物叶片0.1g（准确至0.0001g），放入研钵中。
- 加入少量石英砂和碳酸钙，用研杵研磨成匀浆。
- 加入5ml 95%乙醇，继续研磨至叶片组织变白。
2. 叶绿素提取：- 将提取液转移至10ml试管中，用少量95%乙醇冲洗研钵、研杵及残渣，合并于试管中。
- 用滤纸过滤提取液，收集滤液。
3. 叶绿素分离：- 将滤液转移至比色皿中，以无水乙醇为空白，在波长663nm、645nm和652nm处测定吸光度值。
4. 叶绿素含量计算：- 根据吸光度值和标准曲线，计算出叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素含量。
- 叶绿素总含量 = 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量。
五、实验结果与分析以菠菜叶片为例，实验结果如下：| 植物种类 | 叶绿素a含量（mg/g） | 叶绿素b含量（mg/g） | 类胡萝卜素含量（mg/g） | 叶绿素总含量（mg/g） || -------- | ------------------- | ------------------- | --------------------- | ------------------- || 菠菜 | 1.23 | 0.78 | 0.45 | 2.46 |通过比较不同植物叶片的叶绿素含量，可以分析其光合作用能力和生长发育状况。
关于叶绿素的实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿素的提取方法；2. 掌握叶绿素的鉴定方法；3. 探究叶绿素在不同植物组织中的含量差异。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，主要由叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
叶绿素易溶于有机溶剂，如乙醇、丙酮等，因此可用有机溶剂提取。
叶绿素在紫外光下呈现绿色荧光，可用于鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜、新鲜小麦、新鲜胡萝卜；2. 仪器：研钵、剪刀、漏斗、100ml三角瓶、酒精灯、紫外灯、比色皿、吸管、滴管、天平。
四、实验步骤1. 叶绿素提取：（1）将新鲜菠菜、小麦、胡萝卜分别洗净，剪碎；（2）将剪碎的植物材料放入研钵中，加入少量石英砂和碳酸钙；（3）加入2-3 mL 95%乙醇，研磨至糊状；（4）将研磨好的植物材料倒入100ml三角瓶中，过滤，收集滤液；（5）将滤液倒入比色皿中，用紫外灯照射，观察叶绿素荧光。
2. 叶绿素鉴定：（1）将提取的叶绿素溶液与已知浓度的叶绿素标准溶液进行比色；（2）记录吸光度值，计算叶绿素含量。
3. 叶绿素含量差异探究：（1）分别对菠菜、小麦、胡萝卜提取的叶绿素溶液进行比色；（2）记录吸光度值，计算叶绿素含量；（3）比较不同植物组织中叶绿素含量的差异。
五、实验结果与分析1. 叶绿素提取：实验成功提取了菠菜、小麦、胡萝卜中的叶绿素，且在紫外光下呈现绿色荧光。
2. 叶绿素鉴定：通过比色实验，确定提取的叶绿素溶液中叶绿素含量。
3. 叶绿素含量差异探究：实验结果表明，菠菜、小麦、胡萝卜中的叶绿素含量存在差异。
菠菜中叶绿素含量最高，小麦次之，胡萝卜最低。
六、实验结论1. 成功提取了菠菜、小麦、胡萝卜中的叶绿素；2. 掌握了叶绿素的鉴定方法；3. 不同植物组织中叶绿素含量存在差异，其中菠菜中叶绿素含量最高。
七、实验反思1. 实验过程中，要注意研磨充分，以确保叶绿素充分提取；2. 实验过程中，要注意操作规范，避免污染；3. 实验结果受多种因素影响，如植物品种、生长环境等，需进一步研究。
绿叶素的提取实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习从植物叶片中提取叶绿素的方法。
2. 了解叶绿素的性质和功能。
3. 掌握层析技术的基本原理和操作方法。
4. 通过实验，加深对绿色植物光合作用的理解。
二、实验原理叶绿素是绿色植物进行光合作用的重要色素，主要存在于植物的叶绿体中。
叶绿素分子由卟啉环和长链脂质组成，具有亲水和亲脂性。
在提取过程中，利用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）可以将叶绿素从植物组织中溶解出来。
层析技术是分离混合物中各组分的一种常用方法，通过不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，实现分离。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜绿色植物叶片、无水乙醇、丙酮、层析纸、层析缸、滤纸、镊子、剪刀、研钵、研杵、移液管、滴管、天平等。
2. 实验仪器：分析天平、紫外-可见分光光度计、显微镜等。
四、实验步骤1. 准备植物样品：取新鲜绿色植物叶片，洗净、晾干，用剪刀剪成小碎片。
2. 提取叶绿素：将剪碎的叶片放入研钵中，加入适量无水乙醇，用研杵充分研磨，使叶片充分溶解。
3. 过滤：将研磨后的溶液用滤纸过滤，收集滤液。
4. 蒸发溶剂：将滤液倒入蒸发皿中，在通风橱内蒸发溶剂，直至出现固体。
5. 层析分离：将得到的固体溶解于少量丙酮中，用移液管吸取少量溶液滴在层析纸上，待溶剂挥发后，将层析纸放入层析缸中，加入适量丙酮作为流动相，观察层析过程。
6. 观察与记录：观察层析纸上色素带的分布情况，记录色素带的颜色、位置和宽度。
五、实验结果与分析1. 叶绿素提取：通过研磨和过滤，成功从植物叶片中提取出叶绿素。
2. 层析分离：在层析纸上观察到三条明显的色素带，从上到下依次为胡萝卜素、叶黄素和叶绿素。
3. 叶绿素性质：叶绿素具有绿色，在紫外-可见光范围内有特定的吸收光谱，可被分光光度计检测。
4. 光合作用：叶绿素是光合作用的主要色素，参与光能的吸收和转换。
六、实验讨论1. 叶绿素的提取：在提取过程中，有机溶剂的选择和用量对叶绿素的提取效果有较大影响。
叶绿素荧光的实验报告
1. 了解叶绿素荧光的基本原理和特性；2. 掌握叶绿素荧光光谱的测定方法；3. 分析叶绿素荧光与光合作用的关系。
二、实验原理叶绿素荧光是指叶绿素分子在吸收光能后，部分能量以热能形式散失，另一部分能量被叶绿素分子重新吸收并转化为光能的过程。
叶绿素荧光光谱的测定可以反映叶绿素分子在光合作用过程中的能量转移和转化情况。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜叶片（如菠菜、小麦等）2. 实验仪器：荧光分光光度计、荧光激发光源、比色皿、剪刀、镊子、滤纸、乙醇等四、实验步骤1. 叶片制备：取新鲜叶片，用剪刀剪成约1cm²的小块，放入装有少量乙醇的比色皿中，浸泡约10分钟，使叶片脱色。
2. 荧光激发：将脱色后的叶片放入荧光分光光度计的样品室中，调整荧光激发光源的波长为440nm，激发叶片。
3. 荧光光谱测定：在荧光激发光源照射下，分别测定叶片在440nm、490nm、530nm、565nm、590nm、620nm、640nm、660nm、680nm、700nm等波长下的荧光强度。
4. 数据处理：将测得的荧光强度数据输入计算机，利用荧光分光光度计自带软件进行数据处理和分析。
五、实验结果与分析1. 荧光光谱分析：根据实验数据绘制叶绿素荧光光谱图，分析叶绿素分子在光合作用过程中的能量转移和转化情况。
2. 荧光与光合作用的关系：比较不同处理条件下（如光照、温度、氮素供应等）叶绿素荧光光谱的变化，分析叶绿素荧光与光合作用的关系。
1. 叶绿素荧光光谱反映了叶绿素分子在光合作用过程中的能量转移和转化情况；2. 叶绿素荧光强度与光合作用强度呈正相关，即光合作用强度越高，叶绿素荧光强度越大；3. 光照、温度、氮素供应等因素对叶绿素荧光有显著影响。
七、实验讨论1. 实验过程中，叶片制备和荧光激发光源的调整对实验结果有较大影响，需严格控制实验条件；2. 叶绿素荧光光谱的测定结果受多种因素影响，如叶片种类、生长环境等，实验结果具有一定局限性；3. 叶绿素荧光光谱分析为研究光合作用过程提供了一种新的手段，有助于深入了解光合作用机理。
提取叶绿素实验报告
提取叶绿素实验报告提取叶绿素实验报告引言：叶绿素是植物体内的一种重要色素，它在光合作用中起着关键的作用。
为了深入了解叶绿素的结构和功能，我们进行了一次提取叶绿素的实验。
本篇报告将详细介绍实验的目的、过程和结果，并对实验结果进行分析和讨论。
实验目的：本次实验的目的是通过提取叶绿素，观察叶绿素的溶解性和吸收光谱特性，从而了解叶绿素的结构和功能。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 新鲜的叶片样本（如菠菜、植物苗等）- 丙酮、乙醇、二氧化碳等有机溶剂- 室温下的蒸馏水- 研钵、研杵、滤纸等实验器材2. 实验步骤：1) 将新鲜的叶片样本切碎，并放入研钵中。
2) 加入适量的丙酮，用研杵研磨叶片，使叶绿素溶解在丙酮中。
3) 将研磨后的混合液过滤，得到含有叶绿素的丙酮溶液。
4) 将丙酮溶液转移至离心管中，离心5分钟，使悬浮在溶液中的杂质和叶绿素分离。
5) 将上清液转移到另一个离心管中，加入适量的乙醇，使叶绿素重新溶解。
6) 将乙醇溶液通过滤纸过滤，得到纯净的叶绿素提取物。
7) 将提取物转移到试管中，用分光光度计测量其吸光度，得到吸收光谱。
实验结果：通过实验，我们成功提取到了叶绿素，并得到了其吸收光谱。
在可见光波长范围内，叶绿素的吸光度呈现出两个峰值，分别位于绿色和红色光波段。
其中，绿色峰值的波长大约在430-450nm左右，红色峰值的波长大约在640-660nm 左右。
实验分析与讨论：1. 叶绿素的溶解性：通过实验我们发现，叶绿素在丙酮中具有良好的溶解性。
这是因为丙酮是一种极性有机溶剂，能够有效溶解叶绿素的疏水性结构。
而乙醇则起到了将叶绿素重新溶解的作用。
2. 叶绿素的吸收光谱特性：叶绿素的吸收光谱特性是由其分子结构所决定的。
叶绿素分子中的大环结构（叶绿素a）和侧链结构（叶绿素b）使其能够吸收可见光中的特定波长，从而实现光能的转化。
绿色峰值的波长对应着叶绿素吸收蓝光的能力，而红色峰值的波长则对应着叶绿素吸收红光的能力。
叶绿素含量实验报告
一、实验目的1. 了解叶绿素的提取和分离方法。
2. 掌握分光光度法测定叶绿素含量的原理和步骤。
3. 分析不同植物叶片中叶绿素含量的差异。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，主要由叶绿素a和叶绿素b组成。
叶绿素在特定波长下具有特征吸收峰，利用分光光度法可以测定叶绿素的含量。
本实验采用95%乙醇提取植物叶片中的叶绿素，通过测定叶绿素a和叶绿素b在最大吸收波长下的吸光度，计算出叶绿素含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜、新鲜青菜、新鲜甘蓝叶片。
2. 仪器：分光光度计、研钵、剪刀、移液管、比色皿、电子天平、75%乙醇、碳酸钙、蒸馏水。
四、实验步骤1. 称取新鲜菠菜、青菜、甘蓝叶片各0.5g，分别放入研钵中。
2. 加入少量碳酸钙，用研钵研磨至叶片组织变白。
3. 将研磨好的叶片转移至75%乙醇溶液中，用移液管加入5mL乙醇，充分混合。
4. 将混合液转移至比色皿中，用蒸馏水定容至10mL。
5. 以75%乙醇为空白，分别在波长663nm和645nm处测定吸光度。
6. 根据吸光度计算叶绿素a和叶绿素b的含量。
7. 分别计算三种植物叶片中叶绿素的总含量。
五、实验结果与分析1. 叶绿素a和叶绿素b的含量计算：叶绿素a含量（mg/g）= A645nm × 1000 × 0.5 / 12.0叶绿素b含量（mg/g）= A663nm × 1000 × 0.5 / 27.02. 叶绿素总含量计算：叶绿素总含量（mg/g）= 叶绿素a含量 + 叶绿素b含量3. 实验结果：菠菜叶片叶绿素总含量为：3.25mg/g青菜叶片叶绿素总含量为：2.10mg/g甘蓝叶片叶绿素总含量为：2.85mg/g4. 结果分析：通过实验结果可以看出，菠菜叶片中叶绿素含量最高，其次是甘蓝叶片，青菜叶片叶绿素含量最低。
这可能是由于不同植物叶片中叶绿素含量存在差异，与植物种类、生长环境等因素有关。
植物科学叶绿素实验报告
一、实验目的1. 掌握叶绿素提取的方法。
2. 学习叶绿素含量测定的原理及方法。
3. 了解叶绿素在植物生长过程中的作用。
二、实验原理叶绿素是植物进行光合作用的重要色素，其主要成分包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素。
叶绿素具有吸收光能、传递电子、参与光合作用等生理功能。
本实验通过提取叶绿素，测定其含量，了解叶绿素在植物生长过程中的作用。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶、乙醇、丙酮、石英砂、碳酸钙粉、碳酸镁悬浮液、微孔滤膜等。
2. 实验仪器：研钵、剪刀、电子天平、分光光度计、比色杯、移液管、量筒、烧杯、漏斗、滤纸等。
四、实验步骤1. 叶绿素提取（1）称取新鲜菠菜叶1克，洗净，擦干，去掉中脉，剪碎。
（2）将剪碎的菠菜叶放入研钵中，加入少量石英砂和碳酸钙粉，再加入2-3 mL 95%乙醇，研磨至糊状。
（3）将研磨好的菠菜叶转入小烧杯中，加入2-3 mL 95%乙醇，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。
（4）将烧杯中的菠菜叶浸泡在乙醇中，浸泡时间分别为10、15、20、25、30、35、40、45、50、55分钟。
（5）浸泡结束后，将菠菜叶连同乙醇一起用纱布挤入漏斗中，过滤得到叶绿素提取液。
2. 叶绿素含量测定（1）取3 mL叶绿素提取液，加入碳酸镁悬浮液1 mL，充分混合。
（2）用微孔滤膜过滤混合液，收集滤液。
（3）将滤液转移到比色杯中，以95%乙醇为空白，在波长665nm、663nm、645nm处测定吸光度。
（4）根据吸光度值，计算叶绿素含量。
五、实验结果与分析1. 叶绿素提取根据实验结果，菠菜叶绿素提取液呈现绿色，说明叶绿素已成功提取。
2. 叶绿素含量测定通过测定不同波长处的吸光度，可以计算出叶绿素含量。
根据实验结果，菠菜叶绿素含量为0.5 mg/g。
六、实验结论1. 通过本实验，掌握了叶绿素提取的方法。
2. 通过叶绿素含量测定，了解了叶绿素在植物生长过程中的作用。
3. 本实验结果说明，菠菜叶绿素含量较高，有利于植物进行光合作用。
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叶绿素铜钠的合成、分离、分析及结构测定 食品092 一、实验目的： 1、从蚕沙中提取叶绿素并计算提取率。 2、初步研究叶绿素合成叶绿素铜钠的工艺条件。 3、分析叶绿素铜钠产品的纯度并计算其产率。 4、通过试验提高综合能力及练习巩固各种相关操作。
二、产品验收指标 项目和指标 ───────────────┬────────── 项 目 │ 指 标 ───────────────┼────────── pH │ 9.0～10.7 1％ │ E 405nm ≥ │ 568 1cm │ 消光比值 │ 3.2～4.0 总铜(Cu),％ │ 4.0～6.0 游离铜(Cu),％ ≤ │ 0.025 砷(As),％ ≤ │ 0.0002 铅(Pb),％ ≤ │ 0.0005 干燥失重,％ ≤ │ 4.0 硫酸灰分,％ ≤ │ 36.0 ───────────────┴──────────
三、实验原理: 叶绿素是一种含有卟吩环的天然色素，它与蛋白质结合存在于植物的绿叶 和绿色的茎中，是植物进行光合作用所必须的催化剂，叶绿素难溶于水，而易溶于极性有机溶剂。叶绿素有a和b 两种，a为蓝黑色结晶 叶绿素是一种含有卟吩环的天然色素，在叶绿素的结构中，含有一个由四个吡咯环和四个次甲基交替相联形成的卟吩环．卟吩环闭合的共轭体系提供了包围镁离子(或其它相似离子)的刚性平面． 叶绿素的结构如图l所示： 蚕沙中含有丰富的叶绿素，其纯含量达0.8—1.0%，居所有天然色素之首，故可用蚕沙来提取叶绿素，由于叶绿素易溶于乙醚、苯、丙酮、乙醇的脂性溶剂，故可用乙醇、丙酮混合液来提取。所得的叶绿素由于遇热、光、酸、碱等易分解，且又不溶于水。110度左右会分解，故把叶绿素制备成叶绿素铜钠，其性质更稳定溶解性也会有所提高。 叶绿素分子中的镁原子和四个吡咯上的氮原子相结合，环上是双羧酸的酯，一个被四所酯化，另一个被叶醇基所酯化，故可以发生皂化反应生成钠盐： Ｃ55Ｈ72Ｏ5Ｎ4Ｍｇ + 2ＮａＯＨ = Ｃ34Ｈ30Ｏ5Ｎ4ＭｇＮａ2 + ＣＨ3ＯＨ + Ｃ20
Ｈ39ＯＨ
Ｃ55Ｈ70Ｏ6Ｎ4Ｍｇ + 2ＮａＯＨ = Ｃ34Ｈ28Ｏ6Ｎ4ＭｇＮａ2 + ＣＨ3ＯＨ + Ｃ20
Ｈ39ＯＨ
在酸性条件下，叶绿素钠盐分子中的镁极易被氢原子取代生成褐色的叶绿酸： Ｃ34Ｈ30Ｏ5Ｎ4ＭｇＮａ2 + 4Ｈ+ = Ｃ34Ｈ34Ｏ5Ｎ4 + Ｍｇ2+ + 2Ｎａ+ Ｃ34Ｈ28Ｏ6Ｎ4ＭｇＮａ2 + 4Ｈ+ = Ｃ34Ｈ32Ｏ6Ｎ4 + Ｍｇ2+ + 2Ｎａ+ 叶绿酸可与铜盐在加热条件下生成叶绿素铜酸析出，将叶绿素铜酸溶于丙酮，再与碱反应生成叶绿素铜钠： Ｃ34Ｈ34Ｏ5Ｎ4+Ｃｕ2+ = Ｃ34Ｈ32Ｏ5Ｎ4Ｃｕ+ 2Ｈ+ Ｃ34Ｈ32Ｏ6Ｎ4+Ｃｕ2+ = Ｃ34Ｈ30Ｏ6Ｎ4Ｃｕ+ 2Ｈ+ Ｃ34Ｈ32Ｏ5Ｎ4Ｃｕ + 2ＮａＯＨ = Ｃ34Ｈ30Ｏ5Ｎ4CｕＮａ2 + 2Ｈ2Ｏ Ｃ34Ｈ30Ｏ6Ｎ4Ｃｕ + 2ＮａＯＨ = Ｃ34Ｈ28Ｏ6Ｎ4CｕＮａ2 + 2Ｈ2O
蚕粪叶绿素铜钠盐的光谱特性 蚕粪叶绿素铜钠盐水溶液在360~700之间有2个吸收峰在波长440处有一最大吸收峰,其吸光度为114;在630处有一较小的吸收峰,其吸光度为017"在波长440的吸收峰为叶绿素铜钠盐特有,而在630处的 吸收峰为叶绿素特有,叶绿素铜钠盐的含量约是蚕粪中叶绿素含量的2倍，所以试验中均采用440的波长测定叶绿素铜钠盐的稳定性。 下图是蚕粪叶绿素铜钠盐的光谱特性［5］。
四、仪器和试剂 （一）、试剂： 1、蚕沙（50克） 2、95%乙醇 3、NaOH 溶液 4、稀盐酸 5、丙酮 6、石油醚 7、CuSO4 溶液 8、蒸馏水 9、40%乙醇(纯乙醇与蒸馏水按2:3配) 10、5%NaOH-乙醇溶液 11、pH试纸 12、磷酸盐缓冲液（pH=7.5） 取0.15mol/L磷酸氢二钠与同浓度的磷酸氢二钾以21：4混合 （二）、仪器： A、叶绿素的提取叶绿素铜钠合成 1、温度计1支 回流冷凝管1支 500ml 圆底烧瓶1个 恒温槽1台 滤瓶及漏斗1个 胶头胶管1个 玻璃棒1支 100mL量筒1个 铁架台1台 电热恒温水浴装置1套 2、减压蒸馏装置 1台 3、台氏天平 1台 4、PH试纸若干 B、叶绿素铜钠质量分析 1、751分光光度计 1台 2、台式天平、分析天平 各1台 3、玻棒1支 胶头滴管1支 10mL、50mL量筒各一个 100mL、50mL容量瓶各1个 25mL、1mL吸量管各一支 4、试纸若干 吸耳球 一个
五、实验步骤 （一）叶绿素铜钠的合成 1、叶绿素的提取： （1）在500ml圆底烧瓶中，先加入50g干蚕沙，再加入95%乙醇100ml。 （2）将反应瓶用水浴加热，使水浴温度在60℃（防止叶绿素a和b分解），浸泡提取2小时，滤出提取液。 （3）按步骤2用乙醇重复2次。 （4）合并3次提取液，在减压、不超过60摄氏度下蒸出乙醇。趁热倾出瓶中液体，冷却至室温，得到墨绿色膏状物（叶绿素粗品，不宜久置）。 2、皂化： 将浓缩液置于带搅拌子三口烧瓶中，用5%NaOH-C2H5OH溶液调节使其pH=11，用水浴加热在60℃下皂化回流1小时。 3、萃取： 将皂化液冷却后转入分液漏斗加入等量石油醚萃取除去杂质（黄色）静置分层，下层为可溶性叶绿酸盐（绿色），取上层液检验是否完全皂化：取上层液少许置于小烧杯中，加入2—3倍石油醚静置，用玻棒沾取上层液去试纸上，呈绿色则不完全皂化。取下层溶液，上层溶液用旋转蒸发器蒸发回收石油醚。平行萃取3次。 4、调酸铜代： 将下层溶液装入三口烧瓶中，往其中慢慢加入稀盐酸溶液调节pH=7后，加入10%的硫酸铜10ml，搅拌均匀后，再用盐酸将溶液调节pH为2-3，在水浴60℃下保温搅拌1小时。 趁热过滤，用95%乙醇洗涤3次后抽干。合并滤液和洗液，加入4倍的蒸馏水，析出叶绿素铜，静置过夜后过滤，滤饼依次用适量的纯水、40%乙醇及石油醚
洗涤3次至石油醚层变为浅绿色，以除去其中的H+、 及残留的叶黄素和其他有机杂质。 5、成盐： 洗涤结束后滤干，滤饼用丙酮溶解，加入5%NaOH-乙醇溶液，调节pH=11，搅拌，成盐（用滤纸法检验成盐情况：用玻棒点少许溶液放在滤纸上，滤纸不显绿色则说明完全成盐），将其在60℃下加热蒸发以除去水分得墨绿色结晶物，然后再在60℃下烘箱中烘干结晶物，即制得墨绿色光泽的成品（略有胺味）。 流程图: 溶 剂 NaOH溶液 不皂化物 溶剂 酸 CuSO4溶液 滤渣 ↓ ↓ ↑ ↓ ↓ ↓ ↓
蚕砂 → 预处理→浸 提→ 皂 化→ 分 离→ 萃 取→调pH值→铜 化→
过 滤→ 水 稀酒精 NaOH ↓ ↓ ↓
→离 析→ 沉 淀→ 烘 干→ 纯 化→ 成 盐→ 过 滤→ 干 燥→ 成品
（二）、纯度分析： 1、标准叶绿素铜钠盐的标准曲线 称取标准样品0.01克（精确至0.0002克），加水溶解，移入10 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。准确取1mL溶液以pH=7.5磷酸盐缓冲液定容为100mL，摇匀，即为0.001%溶液，用分光光度计测定，在15分钟内用1cm 的比色杯，在405nm 波长处测定吸光值（A），以缓冲液作空白对照。类似地配制0.0005%溶液、0.0015%溶液、0.002%溶液、0.0025%溶液，用分光光度计测定，在15分钟内用1cm 的比色杯，在405nm波长处测定它们的吸光值（A），以缓冲液作空白对照，并绘制标准曲线。 2、标准叶绿素铜钠盐的吸收曲线 称取标准样品0.01克（精确至0.0002克），加水溶解，移入10 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。准确取1mL溶液以pH=7.5磷酸盐缓冲液定容为100mL，摇匀，即为0.001%溶液，此液最大吸收峰为405nm与630nm， 吸光比A405nm/A630nm 为3.2～4.0。用分光光度计测定，用1cm 的比色杯，在400nm-700nm波长处测定溶液吸光值A（每隔5nm或10nm测定一次），以缓冲液作空白对照，并绘制吸收曲线。 3、产品叶绿素铜钠盐的吸光比测定 称取烘干成品0.01克（精确至0.0002克），加水溶解，移入10 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。从容量瓶中准确取2mL溶液移入50mL容量瓶，用pH=7.5磷酸盐缓冲液定容至刻度，摇匀，即为0. 004%溶液，此液最大吸收峰为405nm与630nm。用分光光度计测定，用1cm 的比色杯，在400nm-700nm波长处测定溶液吸光值A（每隔5nm或10nm测定一次），以缓冲液作空白对照，并绘制吸收曲线。 六、实验现象 试验操作 试验现象 备注
称取蚕沙50g 墨绿色 加入去离子水浸润和95%乙醇 60℃搅拌回流2h 蚕沙部分溶解
抽滤，保存滤液 得到呈墨绿色的液体 剩余蚕沙用95%乙醇再次回流2次 抽滤，混合三份滤液 得到呈墨绿色的液体 提高产率
水浴，减压蒸馏，把合并滤液放入旋转蒸发仪，并在55℃水浴中 加热蒸馏回收95%乙醇 得约50mL左右溶液，溶液成糊状，蒸发液呈无色 防止污染
循环利用
在浓缩液中加5% NaOH-乙醇调PH值到11，在温度为60℃， 皂化时为1h
溶液出现小气泡 皂化过程
皂化后，并洗涤加HCl调，PH＝7加入10%CuSO4调PH＝2-－3，在搅拌下温度60℃，保持1 h左右 PH试纸变红色此时慢慢出 现胶状墨色悬浮物 叶绿素铜酸
趁热过滤，滤渣先用水洗去，再用95%乙醇洗涤3次后抽干。合并滤液和洗液，加入4倍的蒸馏水， 静置过夜后过滤
得墨绿色物质 洗涤液呈绿色 固体溶解得绿色液体 得墨绿色粉末 叶绿素铜钠