多糖的提取分离方法
枸杞多糖的不同提取分离方法比较
枸杞多糖的不同提取分离方法比较2.1 枸杞多糖的提取方法2.1.1 溶剂提取法因为多糖在水溶液中的溶解度较高，所以可以用水、酸、碱等极性溶剂或者甲醇、乙醇等质子型溶剂溶解。
研究证明了碱性条件下会通过破坏植物细胞壁及细胞膜，从而增加了细胞内多糖的溶出度，以此枸杞多糖的提取量就提高了。
但是酸碱提取法并不常使用，原因是其法会破坏糖苷键，使多糖的构型发生改变等，并且提取过程提取的物质在酸碱条件下，会发生特殊反应，产生干扰最终结果的副反应产物，提取后液体需要中和PH，其后期处理较为繁琐[3]，所以在溶剂提取法中最适宜和应用最广泛的是热水提取法，热水有成本低、来源广等优势，所以作为最优的溶媒介质。
下文的溶剂提取法主要探究热水提取法的有关事项。
热水提取法因为其简单的操作和实验设备简易的优点，是国内外提取多糖最常用的方法，但提取效率和纯度偏低。
在这个方法中，研究表明提取温度是影响提取率的最大因素，其中影响程度大小排列为提取温度>提取时间>提取次数>料液比[4]，根据查阅资料整理如下探究不同条件下热水回流法对提取率的影响，从而发现热水回流法提取枸杞多糖最适条件为下文序号1的条件。
详见表2-1。
表2-1 热水回流法提取枸杞中多糖的提取参数对比分分析图序号提取方法优化方法提取参数提取率/％10.33[5]1热水回流法单因素，正交温度为90℃，时间为2.5h，料液比为1：25，提取3次5.4[6]2热水回流法正交实验PH为1.5，温度为80℃，提取1.5h，提取2次，料液比为1：605.53[7]3热水回流法单因素，正交温度100℃，浸提4次，时间5h，料液比1：404热水回流法提取两次，每次3h 5.17[8]3.04[9]5热水回流法提取温度为80℃，提取时间为2h 6热水回流法单因素，正交提取温度为90℃，2.96[10]提取时间为4h，料液比为1：10，提取3次2.1.2 酶解提取法酶解法提取是在溶剂提取法之上加入合适的酶，利用酶的高度专一和高效的特点，分解或降解组成细胞壁的纤维素，果胶，蛋白质等物质，破坏枸杞细胞的细胞壁，这样，细胞里的多糖就会被释放，这样多糖提取量也就得到了增加，提取率也会升高。
测多糖提取率实验报告
一、实验目的1. 掌握多糖提取的基本原理和操作方法。
2. 通过实验，了解不同提取方法对多糖提取率的影响。
3. 优化多糖提取工艺，提高多糖提取率。
二、实验原理多糖是一类重要的生物大分子，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖的提取方法主要有水提法、醇提法、酸提法等。
本实验采用水提法，利用多糖在水中的溶解度较高，通过加热、搅拌等手段使多糖从植物原料中提取出来。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：植物原料（如大枣、紫菜、桑叶等）、蒸馏水、无水乙醇、95%乙醇、苯酚、硫酸等。
2. 实验仪器：电子天平、恒温水浴锅、锥形瓶、玻璃棒、烧杯、离心机、紫外可见分光光度计等。
四、实验方法1. 样品制备：称取一定量的植物原料，加入适量蒸馏水，加热搅拌，使多糖溶解。
2. 提取：将溶解好的多糖溶液进行离心分离，取上清液作为提取液。
3. 纯化：将提取液加入无水乙醇，静置沉淀，离心分离，取沉淀物作为纯化后的多糖。
4. 多糖含量测定：采用苯酚-硫酸法测定多糖含量。
5. 多糖提取率计算：根据实验结果，计算多糖提取率。
五、实验步骤1. 样品制备：称取5.0g大枣，加入100mL蒸馏水，加热搅拌30min。
2. 提取：将大枣溶液进行离心分离（3000r/min，10min），取上清液作为提取液。
3. 纯化：将提取液加入5倍体积的无水乙醇，静置沉淀，离心分离（3000r/min，10min），取沉淀物作为纯化后的多糖。
4. 多糖含量测定：取1.0mL纯化后的多糖溶液，加入5.0mL苯酚-硫酸溶液，沸水浴10min，冷却后，于490nm波长下测定吸光度。
5. 多糖提取率计算：根据标准曲线，计算多糖含量；多糖提取率 = (多糖含量/样品质量) × 100%。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：以不同浓度的葡萄糖溶液为标准，绘制标准曲线。
2. 多糖含量测定：根据实验结果，得到纯化后多糖的吸光度，查标准曲线得到多糖含量。
3. 多糖提取率计算：根据实验数据，计算多糖提取率。
香菇多糖的分离提取
香菇多糖的分离提取一、实验目的掌握水溶醇沉法分离多糖类化合物的原理和方法。
二、实验原理在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。
碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。
现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。
提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。
苯酚试剂可与香菇多糖中的已糖及其糖醛酸起显色反应，生成橙黄色化舍橱，于49Ohm处比色，定量。
三、实验材料1.实验器材循环水式真空泵；旋转蒸发仪；粉碎机；恒温水浴锅；纱布；搪瓷缸；真空干燥器；721型分光光度计；15ml具塞试管。
2．实验试剂（1）95%乙醇；甲醇（化学纯）；乙醚（化学纯）；木瓜蛋白酶（中性）；纤维素酶；0.2 mol/L十六烷基三甲基氢氧化铵水溶液；10 mol/L 氢氧化钠溶液；葡萄糖标准溶液(1mg/ml，10m/m])；苯酚试液。
（2）复合酶液：以PBS缓冲液做溶剂，其中蛋白水解酶浓度为8 %，纤维素酶浓度为4%；（3）苯酚溶液：称取苯酚(AR级)10 g加水190 g溶解后，置于棕色瓶，备用。
四、实验方法步骤（一）香菇多糖的分离1、预处理：取干香菇4 g，用粉碎机粉碎或捣碎。
2、提取：将捣碎的干香菇置于250 ml三角瓶中，在搅拌的条件下加7倍量水混匀, 加热至90℃，搅拌保温60 min，降温至40℃时转移到40℃水浴保温；并加入适量0.45 ml 复合酶（蛋白水解酶浓度为8 %，纤维素酶浓度为4%），pH值为自然(pH 6.4)，搅拌反应60 min，然后迅速升温到90-100 ℃，灭活1min，降温后纱布过滤，收集滤液。
3、浓缩：将以上滤液置于旋转蒸发仪中，然后减压浓缩至l/5体积时，停止浓缩。
4、沉淀：将浓缩液置于搪瓷缸中，在搅拌的条件下，加1 倍量乙醇，然后静置过夜。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化目前，真菌多糖的提取可从子实体和采用深层培养发酵液的菌丝中分离获得，但以从子实体中提取多糖为主。
首先是将子实体粉碎，加入甲醇或乙醇乙醚1:1混合液，水浴加热搅拌1一3小时除去表面脂肪。
其次是用残渣提取多糖，常用的方法有不同温度下的水提法、稀酸提法、冷热稀碱提法。
水提法采用的较多，适合于提取水溶性多糖。
稀酸提取法适用于提取酸溶性多糖、时间宜短，温度不超过50℃，以防止糖昔键断裂。
稀碱法适合于提取碱溶性糖。
然后除去小分子杂质，常采用透析法，将多糖提取液置于半透膜透析袋中，逆向流水透析1一3天。
第四步是沉淀多糖。
大部分多糖在有机溶剂中的溶解度极小，所以可用有机溶剂来沉淀。
常用4一5倍低级醇、丙酮，一般在pH=7.0左右沉淀多糖，制得粗多糖。
最后是除去蛋白质。
除去多糖中的蛋白质常用的方法是三氯醋酸法。
得到的溶液基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物或单一多糖。
多糖的纯化是将多糖混合物分离为单一的多糖。
纯化方法很多，主要纯化方法有:(l)分步沉淀法根据不同多糖在不同浓度的低级醇或酮中具有不同溶解度的性质，逐次按比例由小而大加入这些醇或酮分步沉淀。
此法适用于分离各种溶解度相差较大的多糖。
(2)盐析法根据不同多糖在不同浓度盐中具有不同溶解度而分离。
纯度鉴定和分子量测定多糖纯度标准不能用通常化合物纯度标准来衡量，因为我们所说的多糖纯品实质上是一定分子量范围内的均一组成。
因此，测得的分子量一般为平均分子量。
过去常用粘度法、蒸气压渗透计法、沉降法、超速离心法、光散射法等测定高分子化合物分子量的方法测定真菌多糖的分子量，但由于这些方法测定起来比较麻烦，且误差较大，现多数已不采用。
目前实验室常用的方法为凝胶过滤法和高压液相色谱法，对于分子量小于1百万的多糖用高压液相法为最好。
1.2.1发酵、提取取香菇465菌株斜面菌种接人摇瓶培养基中振荡培养，逐级扩大培养至10O0L，25℃下通气培养72h，压滤，得香菇深层培养菌丝体。
提取多糖的实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握多糖提取的原理和操作流程；2. 了解不同提取方法对多糖提取率的影响；3. 学习多糖的鉴定方法；4. 熟悉实验仪器的使用。
二、实验原理多糖是一类高分子碳水化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如抗炎、抗氧化、免疫调节等。
多糖的提取方法主要有热水提取法、酸提取法、碱提取法等。
本实验采用热水提取法提取多糖，并利用苯酚-硫酸法对提取的多糖进行鉴定。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：干燥的植物原料（如香菇、大枣、紫菜等）；2. 实验试剂：蒸馏水、NaOH、HCl、苯酚、硫酸、乙醇、DPPH、卡拉菲指示剂等；3. 实验仪器：组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计、容量瓶、移液管、烧杯、漏斗等。
四、实验步骤1. 多糖提取（1）将干燥的植物原料粉碎，过筛，取适量粉末；（2）将粉末加入一定量的蒸馏水中，加热至80℃，保持2小时；（3）冷却后，过滤得到滤液；（4）将滤液加入适量的乙醇，静置过夜，离心，收集沉淀；（5）将沉淀用95%乙醇洗涤，干燥，得到多糖粗品。
2. 多糖鉴定（1）苯酚-硫酸法鉴定①取一定量的多糖粗品，加入苯酚溶液，振荡均匀；②加入硫酸溶液，观察溶液颜色的变化；③与标准溶液进行比较，确定多糖的存在。
（2）DPPH自由基清除法①配制一定浓度的DPPH溶液；②取一定量的多糖粗品，加入DPPH溶液，振荡均匀；③在一定时间后，测定溶液的吸光度；④计算DPPH自由基清除率，评估多糖的抗氧化活性。
五、实验结果与分析1. 多糖提取实验结果表明，热水提取法能够有效地提取植物原料中的多糖，提取率较高。
2. 多糖鉴定（1）苯酚-硫酸法鉴定实验结果显示，多糖粗品与苯酚-硫酸溶液反应后，溶液颜色变为深棕色，说明多糖的存在。
（2）DPPH自由基清除法实验结果显示，多糖粗品对DPPH自由基具有清除作用，清除率随着多糖浓度的增加而增加，表明多糖具有一定的抗氧化活性。
六、实验结论1. 热水提取法能够有效地提取植物原料中的多糖，提取率较高；2. 多糖具有抗氧化活性，可作为天然抗氧化剂；3. 本实验为多糖的提取和鉴定提供了一种简单、实用的方法。
天然药物多糖的主要生物活性及分离纯化方法
天然药物多糖的主要生物活性及分离纯化方法一、本文概述天然药物多糖是一类具有广泛生物活性的天然高分子化合物，其独特的结构和功能使得它们在医药、食品、化妆品等多个领域具有广阔的应用前景。
本文旨在全面概述天然药物多糖的主要生物活性以及分离纯化方法，以期为相关领域的研究和应用提供有价值的参考。
我们将深入探讨天然药物多糖的主要生物活性，包括其免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖等多方面的药理作用。
这些生物活性使得天然药物多糖在预防和治疗多种疾病方面具有独特的优势。
我们将详细介绍天然药物多糖的分离纯化方法。
由于天然药物多糖的来源广泛，结构复杂，因此其分离纯化过程往往具有一定的挑战性。
我们将从样品的采集、预处理、提取、分离、纯化以及结构鉴定等方面，系统地介绍天然药物多糖的分离纯化流程，以期为相关实验提供技术指导和参考。
通过本文的阐述，我们期望能够为读者提供全面而深入的天然药物多糖知识，进一步推动其在医药、食品、化妆品等领域的应用和发展。
二、天然药物多糖的主要生物活性天然药物多糖作为一大类生物活性物质，具有多种独特的生物活性，这些活性使其在医药、保健品、食品等领域具有广泛的应用前景。
以下将详细介绍天然药物多糖的几种主要生物活性。
免疫调节作用：许多天然药物多糖具有显著的免疫调节作用，能够激活并增强机体的免疫功能。
它们可以促进免疫细胞的增殖与分化，提高免疫细胞的活性，从而增强机体的免疫力，对预防和治疗免疫相关疾病具有重要意义。
抗肿瘤作用：许多研究表明，天然药物多糖具有抑制肿瘤细胞生长、诱导肿瘤细胞凋亡、增强抗肿瘤药物疗效等作用。
这些作用使得天然药物多糖成为肿瘤治疗中的重要辅助药物，具有广阔的应用前景。
抗氧化作用：天然药物多糖中的许多成分具有显著的抗氧化活性，可以清除体内的自由基，减轻氧化应激损伤，保护细胞和组织免受氧化损伤。
这对于预防和治疗氧化应激相关疾病具有重要意义。
降血糖作用：部分天然药物多糖具有降低血糖的作用，可以通过提高胰岛素敏感性、促进胰岛素分泌、抑制肝糖原分解等途径来调节血糖水平。
多糖的提取和纯化
多糖的提取和纯化Company Document number：WUUT-WUUY-WBBGB-BWYTT-1982GT多糖的提取和纯化→粉碎→脱脂→粗提（2－3次）→吸滤或离心→沉淀→洗涤→干燥首先除去表面脂肪。
原料经粉碎后加入甲醇、乙醚、乙醇、丙酮或1：1的乙醇乙醚混合液，水浴加热搅拌或回流1－3小时，脱脂后过滤得到的残渣一般用水作溶剂（也有用氢氧化钾碱性水液、氯化钠水液、1％醋酸和1％苯酚或－1M氢氧化钠作为提取溶剂）提取多糖。
温度控制在90－100℃，搅拌4－6小时，反复提取2－3次。
得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤。
也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上清液混合（得到的多糖若为碱性则需要中和）。
然后浓缩，再加入2－5倍低级醇（甲醇或乙醇）沉淀多糖；也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。
然后依次用乙醇、丙酮和乙醚洗涤。
将洗干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷和氢氧化钠的真空干燥器中减压干燥（若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时，可直接冷冻干燥）。
干燥后可得粉末状的粗多糖。
微波辅助提取法：其原理为利用不同极性的介质对微波能的不同吸收程度，使基体物质中的某些区域和萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使萃取物质从基体或体系中分离出来，进入到介电常数小，微波吸收能力较差的萃取剂中[14]。
由于微波能极大加速细胞壁的破裂，因而应用于中草药中有效成分的提取能极大加快提取速度，增加提取产率。
而且由于其选择性好，提取后基体能保持良好的性状，提取液也较一般的提取方法澄清[15]。
聂金源等在柴胡多糖和黄酮化合物的提取[18]中对微波辅助提取法、超声辅助法和索氏提取法进行比较，发现微波辅助提取法所需时间最短（10min），多糖的提取率最高（％）。
超声辅助法：其原理是利用超声波的空化作用加速植物有效成分的浸出提取，另外超声波的次级效应，如机械振动、乳化、扩散、击碎、化学效应等也能加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合，利于提取[16]。
多糖提取实验报告
一、实验目的1. 了解多糖的基本概念、性质和分类；2. 掌握多糖提取的基本原理和实验方法；3. 学习利用水提法、醇沉法等方法提取多糖；4. 掌握多糖的纯化、鉴定和含量测定方法。
二、实验原理多糖是一类由单糖分子通过糖苷键连接而成的天然高分子化合物，广泛存在于植物、动物和微生物中。
多糖具有多种生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、降血糖、抗病毒等。
本实验主要采用水提法、醇沉法等方法提取多糖，并对其纯化、鉴定和含量进行测定。
三、实验材料1. 实验材料：植物样品（如玉米、小麦、胡萝卜等）；2. 实验试剂：蒸馏水、乙醇、丙酮、苯酚、硫酸、蒽酮、葡萄糖标准品等；3. 实验仪器：组织捣碎机、离心机、分光光度计、磁力搅拌器、容量瓶、移液管、试管等。
四、实验方法1. 植物样品预处理：将植物样品洗净、晾干、磨碎，过筛，得到植物粉末。
2. 水提法提取多糖：（1）称取一定量的植物粉末，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（2）在80℃条件下加热提取2小时；（3）冷却后，用离心机分离溶液和沉淀；（4）取上清液，加入乙醇，使多糖沉淀；（5）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到粗多糖。
3. 醇沉法提取多糖：（1）称取一定量的植物粉末，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀；（2）在80℃条件下加热提取2小时；（3）冷却后，用离心机分离溶液和沉淀；（4）取上清液，加入丙酮，使多糖沉淀；（5）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到粗多糖。
4. 纯化多糖：（1）将粗多糖溶解于适量的蒸馏水中；（2）加入适量的苯酚，使多糖与苯酚形成复合物；（3）离心分离，收集沉淀，用蒸馏水洗涤沉淀，干燥，得到纯多糖。
5. 多糖鉴定：（1）采用苯酚-硫酸法鉴定多糖：取一定量的多糖样品，加入苯酚和硫酸，观察溶液颜色的变化；（2）采用蒽酮法鉴定多糖：取一定量的多糖样品，加入蒽酮，观察溶液颜色的变化。
6. 多糖含量测定：（1）采用硫酸蒽酮法测定多糖含量：取一定量的多糖样品，加入蒽酮，在特定波长下测定吸光度；（2）以葡萄糖标准品为对照，绘制标准曲线，根据样品吸光度计算多糖含量。
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1、多糖得提取方法 生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、动物多糖 3 大类。 多糖得提取首先要根据多糖得存在形式及提取部位,决定在提取之前就是否做预处理、 动物多糖与微生物多糖多有脂质包围,一般需要先加入丙酮、乙醚、乙醇或乙醇乙醚得混合液进行回流脱脂,释放多糖。 植物多糖提取时需注意一些含脂较高得根、茎、叶、花、果及种子类,在提取前,应先用低极性得有机溶剂对原料进行脱脂预处理,目前多糖得提取方法主要有溶剂提取法、生物提取法、强化提取法等。 １.1溶剂法 1.１、1水提醇沉法 水提醇沉法就是提取多糖最常用得一种方法。 多糖就是极性大分子化合物,提取时应选择 水、醇等极性强得溶剂。 用水作溶剂来提取多糖时,可以用热水浸煮提取,也可以用冷水浸提渗滤,然后将提取液浓缩后,在浓缩液中加乙醇,使其最终体积分数达到 7０ ％左右,利用多糖不溶于乙醇得性质,使多糖从提取液中沉淀出来,室温静置 5 h,多糖得质量分数与得率均较高。 影响多糖提取率得因素有:水得用量、提取温度、浸提固液比、提取时间以及提取次数等、 水提醇沉法提取多糖不需特殊设备,生产工艺成本低,安全,适合工业化大生产,就是一种可取得提取方法。但由于水得极性大,容易把蛋白质、苷类等水溶性得成分浸提出来,从而使提取液存放时腐败变质,为后续得分离带来困难,且该法提取比较耗时,提取率也不高。 1。1、2酸提法 为了提高多糖得提取率,在水提醇沉法得基础上发展了酸提取法。 如某些含葡萄糖醛酸等酸性基团得多糖在较低 pH 值下难以溶解,可用乙酸或盐酸使提取液成酸性,再加乙醇使多糖沉淀析出,也可加入铜盐等生成不溶性络合物或盐类沉淀而析出。 由于 H+得存在抑制了酸性杂质得溶出,稀酸提取法提取得到得多糖产品纯度相对较高,但在酸性条件下可能引起多糖中糖苷键得断裂,且酸会对容器造成腐蚀,除弱酸外,一般不宜采用。 因此酸提法也存在一定得不足之处。 1.1.3碱提法 多糖在碱性溶液中稳定, 碱有利于酸性多糖得浸出,可提高多糖得收率,缩短提取时间,但提取液中含有其它杂质,使粘度过大,过滤困难,且浸提液有较浓得碱味,溶液颜色呈黄色,这样会影响成品得风味与色泽、 1.1.4超临界流体萃取法 超临界流体萃取技术就是近年来发展起来得一种新得提取分离技术。 超临界流 体就是指物质处于临界温度与临界压力以上时得状态,这种流体兼有液体与气体得特点,密度大,粘稠度小,有极高得溶解,渗透到提取材料得基质中,发挥非常有效得萃取功能。 而且这种溶解能力随着压力得升高而增大,提取结束后,再通过减压将其释放出来,具有保持有效成分得活性与无溶剂残留等优点。 由于 ＣO２得超临界条件(TC=304。6 ℃,Tp＝7.38 MPａ)容易达到,常用于超临界萃取得溶剂,在压力为 8～40 ＭPａ 时得超临界CO2足以溶解任何非极性、中极性化合物,在加入改性剂后则可溶解极性化物、 该法得缺点就是设备复杂,运行成本高,提取范围有限。 1.2酶解法 1.2.1单一酶解法 单一酶解法指得就是使用一种酶来提取多糖,从而提高提取率得生物技术。 其中经常使 用得酶有蛋白酶、纤维素酶等。 蛋白酶对植物细胞中游离得蛋白质具有分解作用,使其结构变得松散;蛋白酶还会使糖蛋白与蛋白聚糖中游离得蛋白质水解,降低它们对原料得结合力,有利于多糖得浸出。 1.2。2复合酶解法 复合酶解法采用一定比例得果胶酶、纤维素酶及中性蛋白酶,主要利用纤维素酶与果胶 酶水解纤维素与果胶,使植物组织细胞得细胞壁破裂,释放细胞壁内得活性多糖,多糖释放得多少与复合酶得加入量、酶解温度、酶解时间、酶解 pH 值有直接得关系。 酶解法提取得实质就是通过酶解反应强化传质过程。 此法具有条件温与、杂质易除与得率高等优点。 １。3物理强化法 １.３.1微波辅助提取法 微波萃取就是高频电磁波穿透萃取媒质,到达被萃取物料得内部,能迅速转化为热能使细胞内部温度快速上升,细胞内部压力超过细胞壁承受力,细胞破裂,细胞内有效成分流出,在较低得温度下溶解于萃取媒质,通过进一步过滤与分离,获得萃取物料。 微波辅助提取多糖与其她得萃取方法比较,微波萃取效率高,操作简单,且不会引入杂质,多糖纯度高,能耗小,操作费用低,符合环境保护要求,就是很好得多糖提取方法。 １、3.２超声波辅助提取法 超声波提取就是利用超声波得机械效应、空化效应及热效应。 机械效应可增大介质得运动速度及穿透力,能有效得破碎生物细胞与组织,从而使提取得有效成分溶解于溶剂之中;空化效应使整个生物体破裂,整个破裂过程在瞬间完成,有利于有效成分得溶出;热效应增大了有效成分得溶解速度,这种热效应就是瞬间得,可使被提取成分得生物活性尽量保持不变;此外,许多次级效应也能促进提取材料中有效成分得溶解,提高了提取率。 超声波提取与水煮法醇沉法相比,萃取充分,提取时间短;与浸泡法相比,提取率高。 1、3.３高压脉冲法 高压脉冲法就是对两电极间得流态物料反复施加高电压得短脉冲(典型为 2０～８0 kV／cm) 进行处理,作用机理有多种假说,如细胞膜穿孔效应、电磁机制模型、粘弹极性形成模型、电解产物效应、臭氧效应等,研究最多得就是细胞膜穿孔效应。 动物、植物、微生物得细胞,在外加电场作用下,产生横跨膜电位,绝缘得生物膜由于电场形成了微孔,通透性发生变化,当整个膜电位达到极限值(约为 1 V)时,膜破裂,膜结构变成无序状态,形成细孔,渗透能力增强。 电位差达到临界点,细胞破裂。
2。多糖得分离纯化 2.1 除蛋白 2。1、1Sevａge 法 根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性得特点,用 V(氯仿)∶V(戊醇或正丁醇)为 5∶1 或 ４∶1,混合物剧烈振摇 2０~３0 ｍin,蛋白质变性生成凝胶,离心分离,分去水层与溶剂层交界处得变性蛋白质。 此种只能除去少量蛋白质,效率不高,须反复多次,多糖有损失。 但此方法比较温与,在避免多糖降解上效果较好,如配合加入一些蛋白质水解酶,用 Ｓevage 法效果更佳。 此法不能除去脂蛋白,因为脂蛋白溶于氯仿。 2、1.2三氟三氯乙烷法 将多糖溶液与三氟三氯乙烷等体积混合,低温搅拌 10 ｍiｎ 左右,离心分离得上层 水层,水层继续用上述方法反复处理几次,得无蛋白质得多糖溶液,此法效率较 Seaｖg 法高,但溶剂沸点低,易挥发,不宜大量应用。 ２.1。3三氯乙酸法 三氯乙酸就是一种有机酸,使多糖提取液中得蛋白质与有机酸作用而变性沉淀。 该法就是 在多糖水提液中滴加 ５ %～10 %与多糖水提取液等体积得三氯乙酸,混匀静置过夜,离心除去胶状沉淀,重复以上得操作直至溶液不再继续混浊为止,得无蛋白质得多糖。 三氯乙酸浓度越大,除蛋白质效果越好,但对多糖得影响也越大,可能就是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用,使多糖降解,而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度增大而增强。 植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白质,也可先用蛋白水解酶,使样品中得蛋白质部分降解后再用 Seｖag 法效果更好;微生物多糖去除蛋白常采用 Seｖａg 法、三氟三氯乙烷法;也可用盐析法、有机溶剂萃取等方法除蛋白、 ２.2多糖得分离 主要有分级沉淀、季铵盐沉淀法、金属盐沉淀法、色谱分离、膜分离、透析、电渗析等,目前大多采用 DEAE—凝胶或其她各种不同类型得凝胶柱层析以及离子交换色谱法。 2。２.1分级沉淀法 大多数活性多糖可溶于水,３ 个碳以下得多糖还可溶于乙醇,随着聚合度得增大,多糖 在乙醇中得溶解度逐渐降低、 根据这一性质可在多糖得浓缩水溶液中分批加入乙醇,使乙醇得体积浓度逐渐增加到 50,100,200,900 mL/Ｌ,从而使不同聚合度得多糖分别沉淀析出。 ２、2.２色谱分离法 常用两种色谱分离方法:一就是凝胶柱色谱法,二就是离子交换色谱法。 2、2.3膜分离法 膜分离技术(membraｎｅ ｓｅpａrａtｉｏn tｅｃhnology,MST)就是一种高效分离技术,分离过程以选择透过性膜作为分离介质,通过在膜两侧施加某种推动力(压力差、化学位差、电位差等),使原料液中组分有选择性得通过膜、 目前应用较多得就是超滤与微滤技术、
3多糖得分析鉴定 3。1含量得测定 测定方法:硫酸－苯酚法、硫酸－蒽酮法、比色定量法、分光光度法、纸色谱法、离子交换色谱法、yaphe 法、薄层色谱法、酶法、原子吸收法、HPLＣ 法、凝胶电泳法、亲与电泳法、连续流动分析法检测法［４4]、次亚碘酸盐定量法、蒽酮—硫酸法(总糖)、DNＳ 法(还原法)、磷钼比色法、邻钾苯胺比色法等。 每种方法只对某些多糖得测量效果好。 比色法、分光光度法、离子交换色谱法、酶法与电泳法等可同时用于多糖得定性定量分析。 3、2纯度鉴定 多糖就是高分子化合物,其纯品微观上就是不均一得,通常所说得多糖纯品实质上就是一定分子量范围得均一组分、 多糖纯度鉴定得常用方法:超离心、高压电泳、凝胶层析、HLPC 法等、 现在应用较多得就是 HＬPＣ 法,旋光度测定也就是纯度测定得一种方法、 ３。３分子量得测定 多糖分子量得测定就是研究多糖性质得一项重要工作。 常用方法:渗透压法、蒸气压渗透剂法、端基法、粘度法、光散射法、凝胶色谱法、超过率法、沉淀法、凝胶电泳法、HPLC 法、超离心分析法、分子筛色谱法、GPC 法、MALDI—TＯＦ-MS 法。 ３.4结构测定 3.４、1多糖一级结构测定 多糖得一级结构分析,主要就是分析组成多糖得单糖类型、数目、连接方式及苷建 构型、 常用化学法与仪器分析法。 多糖组分与分子比例测定法:部分酸解法、完全酶解法、色谱法;吡喃、呋喃环形式结构得分析:红外光谱;连接次序:选择性光谱法、糖苷键顺序水解、核磁共振;α-β－异头异构体:糖苷酶水解、核磁共振;羟基被取代情况:甲基化反应、气相色