以壳聚糖-戊二醛为载体柔性固定假丝酵母脂肪酶candidarugosalipase
医药及中间体
6.2 抗生素类药物及中间体
对氨基苯磺酰胺衍生物
对氨基苯磺酰胺（简称氨苯磺胺或磺胺），是磺胺类药物的母体，由它可 以衍生出多种抗菌优良的磺胺类药物及利尿、降血糖药物。
H2N
SO2NH2
N
H2N
SO2NH R
R=
2-（对氨基苯磺酰氨基）嘧啶
N
H3C R=
CH3
N O
5-（对氨基苯磺酰氨基）-3，4-
（1）替卡西林钠的合成：
S
COONa
H
HO
N
H COONa
N
CH3
O
S HH
CH3
6.2 抗生素类药物及中间体
2-噻吩-2-苄氧羰基乙酰氯对6-APA的苄酯进行酰氨化反应，得到的产物再 氢解脱去两个苄基保护基，然后用碳酸氢钠中和即可得到替卡西林钠。
H2N
S CH3 CH3
N
+
O
COOCH2C6H5
OH H
(11)
在丙醇中用异丙醇铝还原（6）中的羰基成仲醇基，有立体选择性，生成消旋苏阿糖型的 量占绝对优势。生成的(±)-苏阿糖型-1-对硝基苯基-2-胺基丙二醇（简称DL(±)-氨基物）（ 9）用诱导结晶法进行拆分，得到D(－)- 苏阿糖型-1-对硝基苯基-2-胺基丙二醇（10），最后 进行二氯乙酰化即得。此路线已用于生产，各步收率高，但步序较长、原料品种多，副产 物需综合利用。
H2N O
S
N CH2OOCCH3
COOH
这类抗生素广谱、对酸和青霉素霉较稳定和过敏反应较少等优点。 主要用于耐药金葡菌和一些革兰阴性杆菌所引起的各种感染，例如 肺部感染、尿路感染、呼吸道感染、软组织感染、败血病、心内膜 炎、脑膜炎以及伤寒和钩端螺旋体病等。
吸附-聚合物修饰组合固定化Candida antarctica脂肪酶研究
ＺＨＡＮ Ｇ ａ － ｕａ ， ＬＩ Ｊ ｎ ｈ ｇ Ｙｕ ｎ ｙ ｎ Ｕ ｕ － ｏｎ ， Ｘ Ｉ Ｙａ ｍ ｕ Ａ —
（ｏｌ ｅ ｆ ｈｍｉ ｌ ｎ ｉｅｒ ｇ Ｑｉ ｄｏＵ ｉ ｒｔ ｃ ｎｅ ｎ ｅｈ ｏｏｙ Ｑ ｎｄ ｏ ６ ０ ２ Ｃ ｉ ） Ｃ ｌｇ ｅ ｃ ｇｎｅｉ ， ｎ ａ ｎ ｅｓｙｏ Ｓ ｉ ｃ ｄ ｃｎ ｌｇ， ｉｇ ａ ６４ ， ｈｎ ｅ ｏＣ ａＥ ｎ ｇ ｖ ｉ ｆ ｅ ａ Ｔ ２ ａ
ｏ ｔ ｕ ｉ ｏ ｉｉａｉ ｎ ｃ ｎ ｔｏ ｓｏ ｅＣＡＬ ｗｅ ｅｆ ｕ ｄ ａ ｏ ｌｗｓ ｄ ａｏ ｉ ： ｉ ａ ｅ＝ ８ Ｐ ｐ ｉ ｍ ｍｍ ｂ ｌ ｔｏ ｏ ｄｉ ｎ ｆｔ ｍ ｚ ｉ ｈ ｒ ｏ ｎ ｆ ｌ ｓ ｏ ： ｉｔ ｍ ｔ ｌｐ ｅ ｓ ． ＥＧ４ ０ ： ｉａ ｅ ０ ０ ｌｐ ｓ
ｈｇ ｅ ａ ｓｓｅｉ ｃｔ ｎ ａ ｔ ｉ ｈ ｎ ｔａ ｆｔｅ ｉ ｉｈ ｒ仃 ｎ ｅ ｔｒｆ ａｉ ｃｉ ｔ ｔａ ｈ ｏ ｍｍｏ ｉｚ ｄ Ｃ ｔｏ ｔＰ Ｇ ｄｆｃｔ ｎ Ｔ ｅ ｓｅ ｉ ｃ ｉ ｏ ｖｙ ｔ ｈ ｂｌ ｅ ＡＬ ｗｉ ｕ Ｅ ｍｏ ｉ ａｉ ． ｈ ｐ ｃｆ ｉ ｈ ｉ ｏ ｉ
用价值。
关键 词 ：Ｃ ｎ ｉ ｎ ｒｔａ脂肪酶； 固定化 ；非共 价修 饰； 吸附法 ｄ ａ ｔ ｃｃ ｄａ ａ ｉ
中 图 分 类 号 ：Ｑ １ ．； Ｑ５ ６ ８ ４２ ５ 文献标 识码 ：Ａ
Ｉ ｍ ｏ ｌ ａ ｉ ｎ ｏ ｎｄ ｄ ｎｔｒ ｔｃ ｐａ ｅｂ ｈｅＣｏ ｍ ｂｉｉ ｔｏ ｆＣａ ｉ ａ ａ ａ ｃ ｉａ Ｌｉ ｓ ｙ ｔ ｍｂｉ ｔｏ ｆ ｚ ｎａ ｉ ｎ ｏ ｓ ｒ ｔｏ Ａｄ ｏ ｐ ｉ ｎ ａ ｄ Ｐｏ ｙ ｅ ｏ ｆｃ ｔｏ ｎ ｌ ｍ ｒＭ ｄｉ ａ ｉ ｎ ｉ
磁性多孔微球固定化假丝酵母脂肪酶的研究
磁性多孔微球固定化假丝酵母脂肪酶的研究肖志红;吴红;李昌珠;张爱华;刘汝宽;吴晓芙【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2013(028)012【摘要】通过悬浮聚合法制备了含环氧基团的聚合物载体高分子磁性多孔微球(GHD),用TEM、SEM和Micromeritics ASAP 2010等对聚合物载体进行了表征.考察了载体中交联剂含量、固定化时间、给酶量等因素对固定化脂肪酶催化活性的影响.结果表明,Fe3O4纳米粒子粒径20 nm,分布均匀,磁性多孔微球粒径从几十微米到一百多微米,粒子大小大体呈正态分布且分布较窄,平均粒径为110 μm,直径在区间80～150μm范围内的粒子占90％以上.微球表面呈皱褶态且呈现多孔性,孔径从几个纳米到几十纳米,为闭孔,且孔间互相贯穿.固定化酶最适条件为给酶量125 mg/g,固定化时间7h,此时酶的吸附量为118.5 mg/g,比酶活7.56×105 U/g,酶的活力回收率95％.以GHD为载体制备的固定化脂肪酶最佳反应温度从37℃上升到42℃,最适反应pH从7.2提高到7.5,固定化后酶对温度和pH的敏感性降低,重复使用12次,固定化酶的活力都能保持在92％以上.【总页数】6页(P68-73)【作者】肖志红;吴红;李昌珠;张爱华;刘汝宽;吴晓芙【作者单位】中南林业科技大学生命科学与技术学院,长沙410004;湖南省林业科学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;中南林业科技大学生命科学与技术学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;湖南省林业科学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;湖南省林业科学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;湖南省林业科学院,长沙410004;湖南省生物柴油工程技术研究中心,长沙410004;中南林业科技大学生命科学与技术学院,长沙410004【正文语种】中文【中图分类】TQ424.19【相关文献】1.交联剂固定化假丝酵母脂肪酶及其催化反应研究 [J], 杨学昊;张增伟2.214型离子交换树脂固定化假丝酵母脂肪酶的研究 [J], 钱俊青;蒋盛蓝;秦德怀;郭辉;凌春英3.固定化南极假丝酵母脂肪酶B催化合成乳酸乙酯的研究 [J], 苑保国;李素暖;高静4.固定化生物印迹假丝酵母脂肪酶的制备研究 [J], 俞明;钱俊青;龚峰;唐弋奥5.新型磁性高分子多孔微球固定化木瓜蛋白酶活性与稳定性研究 [J], 曾力希;刘琳琳;杨旭;邓乐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体的制备及应用研究
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体的制备及应用研究海藻酸钠-壳聚糖固定化载体是一种新型的生物材料，在生物医学、制药和工业生产等领域具有广泛的应用前景。
本文主要介绍了海藻酸钠-壳聚糖固定化载体的制备方法及其在生物材料领域中的应用研究进展。
一、海藻酸钠-壳聚糖固定化载体的制备。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体是通过将海藻酸钠和壳聚糖两种生物大分子进行交联反应得到的。
交联反应的方法有很多种，如化学交联、生物交联和自组装交联等。
1.化学交联法。
化学交联法是将含有活性基团的交联剂与海藻酸钠及壳聚糖反应形成交联结构。
典型的交联剂有双酚A、多巴胺、低分子量多酚等。
2.生物交联法。
生物交联法是利用一些天然的交联酶如过氧化氢酶、过氧化物酶等，在生物体系中催化分子间交联反应，完成固定化载体的制备。
3.自组装交联法。
自组装交联法是以静电交互作用为基础，利用多元酸和多胺之间的静电相互作用形成交联结构。
典型的多元酸有海藻酸等，多胺有聚丙烯胺等。
二、海藻酸钠-壳聚糖固定化载体在生物材料领域中的应用。
1.细胞培养支架。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体可以作为细胞培养支架，可支持细胞生长和增殖，同时增强细胞与载体之间的交互作用，提高细胞在载体上的生长和分化能力。
2.制药领域。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体可用作药物输送系统的载体，提高药物的稳定性和生物利用度，同时降低药物的毒副作用。
3.工业生产领域。
海藻酸钠-壳聚糖固定化载体在工业生产领域中作为酶的载体，在反应中发挥催化作用，并能保持酶的活性和稳定性，提高反应效率和产量。
总之，海藻酸钠-壳聚糖固定化载体是一种具有广泛应用前景的生物材料，在生物医学、制药和工业生产等领域有着重要的应用价值。
它的制备及应用研究将是未来的一个重要研究方向。
微球形固定化α-葡萄糖苷酶的制备
微球形固定化α-葡萄糖苷酶的制备
微球形固定化α-葡萄糖苷酶的制备
将粉末状壳聚糖制备成微球形多孔载体,采用吸附-交联的方法将TGL固定化.研究表明,制备微球形多孔壳聚糖载体的取决于壳聚糖原料的分子量分布、壳聚糖的稀酸溶液浓度以及凝结液的组成等因素;当壳聚糖的相对分子质量为3.0×105左右,壳聚糖溶液浓度为2.5%,凝结液组成为2 mol/L NaOH∶40%甲醛=3∶2(体积比)或2 mol/L NaOH∶甲醇=3∶1(体积比)时,可制得微球形多孔壳聚糖载体.最佳固定化条件研究表明,对于脱乙酰度为88%的壳聚糖载体,加酶量为3×105 Unit/g 时,在pH 6.0条件下,室温吸附8 h,然后用2.0%的戊二醛在45 ℃交联9 h,可得到固定化酶的活力为2.342×105 Unit/g,酶活力回收率为78.1%,并具有较好的强度.
作者：彭志英岳振峰张学兵徐建祥赵谋明作者单位：华南理工大学生物科学与工程研究中心, 刊名：华南理工大学学报(自然科学版) ISTIC EI PKU 英文刊名：JOURNAL OF SOUTH CHINA UVIVERSITY OF TECHNOLOGY 年，卷(期)： 2001 29(6) 分类号：Q556 关键词：α-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.20) 固定化壳聚糖微球形。
生物柴油生产技术的研究进展
生物柴油生产技术的研究进展赖红星;万霞;江木兰【摘要】生物柴油作为一种新兴的生物能源,以其可降解性、可再生性等优良品性受到人们极大的关注.生物柴油生产技术从最初的直接使用法、稀释混合法等到后来的酸/碱催化法、生物酶法、超临界法,经历了漫长的发展过程.综述了国内外生物柴油生产技术的优缺点及其研究进展.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2010(027)005【总页数】6页(P11-15,20)【关键词】生物柴油;生产技术;物理法;化学法;生物酶法;超临界法【作者】赖红星;万霞;江木兰【作者单位】中国农业科学院油料作物研究所,湖北,武汉,430062;中国农业科学院研究生院,北京,100062;中国农业科学院油料作物研究所,湖北,武汉,430062;湖北省能源油料作物与生物柴油研究中心,湖北,武汉,430062;中国农业科学院油料作物研究所,湖北,武汉,430062;湖北省能源油料作物与生物柴油研究中心,湖北,武汉,430062【正文语种】中文【中图分类】TQ914.3生物柴油是指动植物油脂、餐饮废油等与低碳醇反应所得的脂肪酸甲酯(或乙酯)。
近年来，由于石油价格持续飚升和生物柴油的环境友好性，生物柴油的价值日益凸显。
制备生物柴油的方法可以归为四类：物理法、化学法、生物酶法以及超临界法。
作者在此简要概述了国内外生物柴油生产技术的优缺点及其研究进展。
1 物理法物理法是指通过物理机械的作用，将动植物油脂与石化柴油按比例混合，得到的油品因掺入了一定的动植物油脂而被称为生物柴油。
根据混合方式的不同，物理法分为直接使用法、稀释混合法和微乳化法三种。
1.1 直接使用法直接使用法迄今已有100多年的历史，柴油机的发明者Rudolph Diesel当初就是用花生油为燃料做测试的[1]。
1981年，Bartholomew提出了用食物作燃料的概念，并且指出植物油和酒精必将取代石油，可再生能源一定会取代不可再生能源。
2011酶工程实验指导
壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶一、 实验目的（1） 掌握共价交联法制备固定化酶的一般过程。
（2） 会计算固定化酶的活力回收率。
二、 实验原理壳聚糖（chitosan ，CTS ）)是甲壳素的脱乙酰化产物，是一种氨基多糖，具有生物相容性好、无毒、易得等优点，采用壳聚糖为载体，以戊二醛为交联剂，可实现酶的固定化。
壳聚糖分子及固定化反应：OOnHONH 2OH2(CH 2)3H 2C=N-酶戊二醛、酶三、 实验材料及仪器：壳聚糖、pH7.8磷酸盐缓冲液、5g/L 木瓜蛋白酶（磷酸缓冲液配制）、10%戊二醛溶液、2%的醋酸溶液、20%NaOH 、30%甲醇、10%三氯乙酸、1%酪蛋白（磷酸缓冲液配制）、0.4mol/L 碳酸钠溶液、1N folin-酚试剂。
100ml 烧杯、玻棒、注射器、50ml 具塞三角瓶、三角漏斗、中速定性滤纸、试管、10mL 具塞刻度试管、移液管、紫外-可见分光光度计、恒温振荡器、真空干燥箱。
四、 实验方法1、 壳聚糖微球载体的制备取1.0g 壳聚糖缓慢加于20ml 2%的醋酸溶液中，配制成5%的溶液，用注射器取15 mL 壳聚糖溶液缓缓滴入20%NaOH/30%甲醇溶液中(V/V=1∶1)中，保持注射器针头位于液面上方约20cm 。
2、 固定化酶的制备将全部CTS 微球水洗至中性，吸干表面水分，装入50mL 具塞三角瓶中，加入10mL 乙醇和10mL 戊二醛溶液（10mmol ），60℃反应2h ，水洗，干燥后平均分成4份（每份湿重约2.0-2.5g ），记作A 、A 对照、B 、B对照。
将每份干燥的醛化微球加入50mL 具塞三角瓶中，加入pH7.5磷酸缓冲液浸泡过夜，抽干，加入10mLpH7.8缓冲液和1.0mL 蛋白酶液，室温振荡固定化18h ，收集上清液，再用缓冲液充分洗涤微球三次，吸干水分，即得固定化酶。
3、 固定化酶的活力回收率测定 3.1游离酶（或固定化上清液）活力测定依次加入1 mL 木瓜蛋白酶液（或固定化上清液）、10 mL 酪蛋白溶液(先40℃预热3分钟)，摇匀，在40℃水浴摇床中精确反应 10min ，立刻加入 10 mL 三氯醋酸溶液，摇动，过滤，放置 10min 。
壳聚糖微球制备方法研究
耳烷两种带电聚合物相互作用获得的聚合 （高分子） 电解质复合水凝胶制备微球， 结果显示， 壳聚糖与苍 耳烷的复合使用能更好地控制微球的降解动力学。
［/］ 刘利萍等 采用乳化 % 化学交联法制备了含 /5
!"#$"%&& ’( !)*"+*,%-.’,*/ 0,’%(,%& 出， 洗涤， 干燥， 即得壳聚糖微球。 采用 !"# 等 对乳化%离子凝胶法进行了改进， 浊度滴定法研究了 & 种阴离子化合物 （三聚磷酸盐、 柠檬酸盐和硫酸盐） 与壳聚糖的相互作用。结果发 现， 在一定 ’( 范围内 （硫酸盐 ) 壳聚糖为 ’( *+, ， 柠檬酸盐 壳聚糖为 三聚磷酸盐 ) .+/ ) ’( 0+/ - .+/， 壳聚糖为 ’( *+1 - .+/） ， & 种阴离子化合物与壳聚 糖间存在静电作用， 这与阴离子的自然特性相关； 在 阴离子化合物与壳聚糖可发生静电作用的 ’( 范围 外， 无微粒形成， 且普通的乳化 % 离子凝胶法即使在 该 ’( 范围内， 也只能得到不规则的微粒， 而改进后 的方法则可得到直径为几十微米的球形微粒， 其关 键步骤是凝胶的引入和壳聚糖 ) 凝胶乳剂的离子交 联过程； 硫酸钠和柠檬酸钠交联的壳聚糖凝胶微球 其表面都非常光滑， 但是在三聚磷酸盐交联的壳聚 糖凝胶微球表面可观察到较大缝隙； 提高搅拌速度 可减小微球粒径及其分布范围。 234 等 设计出一种含载有转化生长因子5 !微 球的多孔壳聚糖支架， 并采用三聚磷酸盐制备了载 有模型蛋白 6!7 的微球。释放试验发现， 在磷酸缓 冲液 （ ’( .+0） 中， 两种蛋白可从微球中缓慢释放 / 天以上， 但转化生长因子5 !的释放速度远低于 6!7。 观察发现含载有转化生长因子5 !微球的支架能显著 促进细胞增殖和细胞外基质的增加， 提示此壳聚糖 支架有可能被开发成治疗软骨缺陷的植入剂。 *+& 离子沉淀%化学交联法 该方法的基本操作过程是， 搅拌状态下， 在含有 滴 89::; <, 的壳聚糖溶液中逐滴加入 $,= 硫酸钠， 毕， 继续搅拌几小时， 老化， 离心沉降， 用去离子水洗 再加入 ,+/= 乙二醛， 室温下交联 * 小时， 离 $ 次， 心， 洗涤， 低压冻干， 即得壳聚糖微球。此微球与四 环素溶液孵化 0< 小时， 包封率达 </= 以上， 其在胃 肠中滞留时间延长， 吸收增加， 约 > 小时后到达结
磁性多孔微球固定化假丝酵母脂肪酶的研究
２０１３年１２月 第２８卷第１２期 中国粮油学报
Ｊｏｕｍａｌ ｏｆ ｔ｝ｌｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｒｅａｌｓ ａｎｄ Ｏｉｌｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｖｏ１．２８，Ｎｏ．１２
Ｄｅｃ．２０１３
磁性多孔微球固定化假丝酵母脂肪酶的研究 肖志红 吴 红 李昌珠 张爱华 刘汝宽 吴晓芙 （中南林业科技大学生命科学与技术学院 ，长沙４１０００４） （湖南省林业科学院 ，长沙４１０００４） （湖南省生物柴油工程技术研究中心 ，长沙４１０００４）
摘要通过悬浮聚合法制备了含环氧基团的聚合物载体高分子磁性多孔微球（ＧＨＤ），用ＴＥＭ、ＳＥＭ和 Ｍｉｃｒｏｍｅｒｉｔｉｃｓ ＡＳＡＰ ２０１０等对聚合物载体进行了表征。考察了载体中交联剂含量、固定化时间、给酶量等因素 对固定化脂肪酶催化活性的影响。结果表明，Ｆｅ ０ 纳米粒子粒径２０ ｎｍ，分布均匀，磁性多孔微球粒径从 几十微米到一百多微米，粒子大小大体呈正态分布且分布较窄，平均粒径为１１０ ｍ，直径在区间８０—１５０ ｍ范围内的粒子占９０％以上。微球表面呈皱褶态且呈现多孔性，孔径从几个纳米到几十纳米，为闭孔，且 孔间互相贯穿。固定化酶最适条件为给酶量１２５ ｍｇ／ｇ，固定化时间７ ｈ，此时酶的吸附量为１１８．５ ｍｇ／ｇ，比 酶活７．５６×１０ Ｕ／ｇ，酶的活力回收率９５％。以ＧＨＤ为载体制备的固定化脂肪酶最佳反应温度从３７℃上升到 ４２℃，最适反应ｐＨ从７．２提高到７．５，固定化后酶对温度和ｐＨ的敏感性降低，重复使用１２次，固定化酶的活 力都能保持在９２％以上。 关键词 高分子磁性多孔微球假丝酵母脂肪酶 固定化催化活性 中图分类号：ＴＱ４２４．１９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００３—０１７４（２０１３）１２—００６８—０６ 网络出版时间：２０１３—０９—２４ １ｌ：０７ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／１１．２８６４．ＴＳ．２０１３０９２４．１１０７．００１．ｈｔｍｌ
酶的固定化方案
酶的固定化的方案一、材料和方法1.实验材料及试剂酶，25%戊二醛溶液，带氨基的载体，考马斯亮蓝，牛血清白蛋白。
2. 主要实验仪器紫外可见光分光光度计Uv-1800，THZ一C恒温振荡器，MD200一3型电子天平PHS一3C酸度计3.酶的固定化方法1）载体的活化a 对所得的载体表面带有大量的氨基，对其进行活化处理可用于酶蛋白的共价结合。
采用戊二醛为活化试剂，使凝胶表面连接上游离的醛基。
具体方法为:将lg带氨基的载体颗粒臵于3ml、10%的戊二醛溶液中振荡24h，然后真空过滤。
所得固体用去离子水洗涤多次，干燥后即为戊二醛活化的树脂颗粒。
b大孔树脂预处理方法：称取10g树脂于锥形瓶中，用95%的乙醇浸泡24h，真空抽滤，用1L蒸馏水冲洗。
树脂依次用25mL的5%HCl和5%NaOH溶液浸泡4h后抽滤，用蒸馏水洗至中性。
抽滤后臵于4℃冰箱中干燥4h，室温保存备用。
举例：称取适量经预处理的大孔树脂于50mL锥形瓶中，加入适量磷酸缓冲液（pH7.5，0.05mol/L）和适量的酶，臵于恒温水浴振荡器中吸附一定时间后（37℃，150r/min）真空抽滤，并用100mL缓冲液冲洗载体，抽干后臵于4℃冰箱中干燥4h，并于4℃冰箱中密封保存。
2）固定化方法a 共价结合法准确称量20g戊二醛活化的树脂颗粒臵于50ml的离心管中，向其中加入体积为2ml的一定浓度的酶液(酶粉溶于pH7.0、0.03M的磷酸缓冲液)。
然后于冰浴中缓慢振荡24h。
之后离心收集固体，用相同的磷酸缓冲液洗涤固体5次以上。
b 酶聚集体包被法准确称量20g戊二醛活化的树脂颗粒臵于50ml的离心管中，向其中加入体积为2ml的一定浓度的酶液(酶粉溶于pH7.0、0.03M的磷酸缓冲液)。
然后于冰浴中缓慢振荡24h。
之后向混合液中加入0.5ml、2%的戊二醛溶液，继续振荡10h，离心收集固体。
最后用相同的磷酸缓冲液洗涤固体5次以上。
c.酶活性的测定d. 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度固定化时溶液中的蛋白质含量采用考马斯亮蓝染色法测定：考马斯亮蓝试剂的配制：将考马斯亮蓝 G-250 100mg 溶于 50mL 95%乙醇中，加入100mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至 1000mL。
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壳聚糖，济南海得贝，冰醋酸、六偏磷酸钠、
Fo—空白对照组消耗0.05g mL 'HCl体积，mL。
聚乙烯醇、正庚醇、环己烷、无水乙醇、丙酮、戊
(注：0.05 g-mf1 NaOH溶液由邻苯二甲酸氢钾溶液标定，0.05 g-mL'1 HC1溶液由碳酸钠溶液标定)
二醛均为国产分析纯。Candida rugosa脂肪酶：酶的 稳定温度2〜8 °C,最佳反应温度为37 °C,适于水 解橄榄油等短链底物。
酶活可达240 |x -g-'o Chitosan-GA固定化酶循环使用4次后保留了 20%左右的初始酶活力。固定化酶在水相中
保存185 <1后保留了 40%以上初始酶活力。固定化酶在有机溶剂（正庚醇）中浸泡120 h后固定化酶酶活保留
32.2%,而游离酶只保留原始酶活的&5%。Chitosan-GA载体固定化脂肪酶在水相和有机相中的保存稳定性都
固定化酶是用固体材料将酶束缚或限制于一定 区域内，酶仍能进行其特有的催化反应，并可回收 及重复使用的一类技术冋。与游离酶相比，固定化 酶具有更多优点叫
酶的“柔性固定化”就是在固定化载体上，接 上一些有足够长度的且是亲水的分子链，即所谓的
“柔性链”，接有柔性链的柔性载体的引入，在制备 固定化酶的过程中，当酶与柔性载体相碰撞结合时， 就会因柔性链的缓冲作用，使酶保持构象不变以减 少酶的活力损失；另外，在柔性固定化酶与底物作 用时，被固定到柔性载体上的酶可以更好地保留酶 游离态的均相催化活性，还能使酶蛋白构象因受微 环境的改变而发生折叠、失活处于亚稳态时，当施 加反折叠措施，酶恢复正常构态时，因柔性而位垒 更低，更易于恢复，即可增加酶的自恢复能力，从
1实验部分
1.1仪器与试剂 细胞破碎仪，Biosafer 250-88,赛飞（中国）有
限公司；恒温振荡器，THZ-82,北京国华仪器；真 空干燥器，2K-82A,上海试验仪器总厂；磁力加热 搅拌器，79-1,常州国华电器有限公司。
基金项目 收稿日期K0950。
1.2固定化材料 1.2.1 Chitosan-GA 载体(Chi-GA )的制备
根据文献"制备Chitosan ( Chi)小球：将壳聚 糖5 g溶解于200 mL 8%的醋酸得到2.5%的壳聚糖 的醋酸溶液，并加入20 mL氢氧化钠溶液(0.5 g mL-1 ),将所得壳聚糖的醋酸溶液调至pH=6。注
2018-11-20 周蕊（1984-）,女，陕西省西安市人，实验师，理学硕士，2010年毕业于南京工业大学微生物学专业，研究方向：从事生物化工研 发及教学工作:E-mail： 58086722@o
第48卷第8期
周蕊，等：以壳聚糖-戊二醛为载体柔性固定假丝酵母脂肪酶candidd rugose lipase
第48卷第8期 2019年8月
当
代
化
工
Contemporary Chemical Industry
Vol.4& No.8 August, 2019
以壳聚糖-戊二醛为载体柔性 固定假丝酵母脂肪酶Candida rugosa lipase
周蕊，邢炎华，王燕
（陕西国际商贸学院，陕西 西安712046）
摘
要：以壳聚糖-戊二醛（Chitosan-GA ）为载体固定假丝酵母脂肪酶Candida rugosa lipase （ CRL ）最高
ZHOU Rui, XING Yan-hua, WANG Yan
(Shaanxi Institute of International Trade & Commerce, Shaanxi Xi'an 712046, China)
Abstract: Chitosan support was synthesized by coupling glutaraldehyde (Chitosan-GA) onto the surface. And then Candida rugosa lipase(CRL) was immobilized on this support. The highest activity of immobilized lipase was 240 p g1. The immobilized lipase remained 20% of initial activity even after 4 times of reuse. The drop in the activity of the immobilized lipase after 185 days storage at 4 °C did not exceed 60%. Immobilized enzyme is much more stable than free enzyme in aqueous phase and organic phase. Key words: Chitosan; Candida mycoderma; Initial enzyme activity; Immobilization
好于游离酶。
关键词：壳聚糖；假丝酵母；初始酶活力；固定化
中图分类号：0629.8
文献标识码：A
文章编号：1671-0460（2019） 08-1686-04
Immobilization of Candida Rugosa Lipase by Using Chitosan-Glutaraldehyde as Support
1.3.3游离酶活力的测定
同1.3.2节的空白实验，仅将补加“1 mL缓冲液”
换成“1 mL酶液”，及加入3滴酚駄指示剂后用
NaOH溶液滴至瓶中溶液变成红色，用HC1溶液滴
定至无色，并记录消耗HC1溶液的体积数。
而解决酶蛋白的不稳定性问题1"。 脂肪酶在有机溶剂中具有高的催化活性和立体
选择性，因而已广泛应用于制备具有光学活性的醇、 脂肪酸及其酯等纯手性医药和农药的中间体叫
本文通过研究实现制备Chitosan-GA载体，固 定化商品脂肪酶并优化固定条件；Chitosan-GA载 体固定化实验室自产耐有机溶剂脂肪酶并优化固定 条件。