超氧化物歧化酶生产方法
土壤超氧化物歧化酶
土壤超氧化物歧化酶
《土壤中一种新型超氧化物歧化酶的生产和鉴定》
摘要：
超氧化物歧化酶（SOD）是一类在生物体内广泛存在的重要酶，能够催化超氧自由基的转化，起到抗氧化防御作用。
本研究通过土壤样品的采集和筛选鉴定，成功分离出一种新型超氧化物歧化酶，并对其生产工艺进行优化。
介绍：
超氧化物歧化酶是一种以金属离子为辅助因子的酶类，主要催化超氧自由基的转化为氧和过氧化氢，从而减少有害的超氧离子对细胞的损伤。
目前已经发现的超氧化物歧化酶的种类较多，但仍有很大的空间用于发现新型的SOD酶。
实验方法：
1. 土壤样品的采集：在不同地理位置的土壤采样点采集土壤样品。
2. 筛选鉴定：将土壤样品接种于含有超氧化物歧化酶补充物质的培养基中进行培养筛选，利用草酸钠显色法进行初步检测，选出具有显著SOD活性的菌株。
3. 生产工艺的优化：通过调整培养基成分、培养条件和发酵时间等因素，优化超氧化物歧化酶的生物合成。
结果与讨论：
经过筛选鉴定，成功分离出一株具有较高SOD活性的菌株，并确定其为一种新型超氧化物歧化酶。
在优化的生产工艺条件下，该酶的产量显著提高，并且质量也得到了保证。
进一步对该酶的特性和稳定性进行研究，有助于揭示其在土壤环境中的功能和应用价值。
结论：
本研究成功分离出一种新型超氧化物歧化酶，并优化了其生产工艺，为探索土壤中超氧化物歧化酶的多样性及其应用奠定了基础。
该结果对于增强土壤环境的抗氧化能力以及提高农业生产效益具有重要意义。
关键词：超氧化物歧化酶；土壤；筛选鉴定；生产工艺；抗氧化。
mn型超氧化物歧化酶
mn型超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，简称SOD）是一类专一催化超氧自由基（Superoxide，O2^-）转化成分子氧（O2）和过氧化氢（Hydrogen Peroxide，H2O2）的酶。
这一反应对维持细胞内氧化还原平衡以及保护细胞免受氧化损伤具有重要作用。
超氧自由基是含有未配对电子的高活性氧分子，即它们具有强氧化性。
在正常细胞代谢过程中，细胞产生一定量的超氧自由基，如果不能及时转化成分子氧和过氧化氢，将会对细胞结构和功能造成严重伤害。
而SOD则扮演着细胞防御系统的重要角色，促进超氧自由基的正常代谢。
根据金属离子辅助的催化反应机制，超氧化物歧化酶被分为三类：Cu/Zn-SOD、Mn-SOD和Fe-SOD。
其中，Mn-SOD是一种金属离子为锰的超氧化物歧化酶。
它广泛存在于细菌、植物和动物的细胞内，起到了重要的保护作用。
Mn-SOD能够高效催化超氧自由基的歧化反应，将其转化为无害的氧分子和过氧化氢。
这一反应不仅减少了细胞内的有害氧化物，还提供了细胞活动所需的分子氧供给。
此外，经过丰富的研究表明，Mn-SOD还能够参与调节细胞的再生和凋亡过程。
由于Mn-SOD在维持细胞功能和健康方面的重要作用，其活性的变化会直接反映在机体的疾病发生和发展过程中。
例如，大量的研究表明，Mn-SOD活性的下降与多种疾病的发生相关，如神经系统疾病、心血管疾病和癌症等。
因此，科学家们通过对Mn-SOD的研究，解析其活性调控机制，有望为疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。
进一步研究Mn-SOD的结构和功能，不仅有助于揭示其催化反应的分子机制，也可以为开发针对其活性调控的药物提供基础。
通过人工合成活性类似物和调控剂，或通过基因工程改良同源蛋白的催化性能，对调节细胞内的氧化还原平衡，改善机体的整体健康具有重要意义。
总之，Mn-SOD作为一种重要的超氧化物歧化酶，在维持细胞内氧化还原平衡方面起到至关重要的作用。
大蒜SOD的制备工艺实验报告
大蒜SOD的制备工艺一、实验目的1、学习超氧化物歧化酶的提取与分离方法；2、熟练掌握操作过程中的操作要点，并能应用到实际生产中。
二、实验原理超氧化物歧化酶（SOD）是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。
它可催化超氧负离子（O2-）进行歧化反应，生成氧和过氧化氢：2O2-+H2=O2+H2O2。
大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，通过组织或细胞破碎后，可用pH7.8的磷酸缓冲液提取。
由于SOD不溶于丙酮，可用丙酮将其沉淀析出。
三、实验器材1、仪器或其他用具：电子天平、研磨器、高速离心机、水浴锅、移液枪、50ml试管、分光光度计等。
2、溶液及材料（1）磷酸缓冲液：0.05mol/L，pH7.8的磷酸缓冲溶液；（2）氯仿-乙醇混合溶剂：氯仿：无水乙醇=3：5（V/V）（3）丙酮：用前冷却至4-10℃；（4）碳酸盐缓冲液：0.05mol/L，pH10.2；（5）EDTA溶液：0.1mol/L；（6）肾上腺素液：0.2mol/L；（7）新鲜蒜瓣；（8）大蒜细胞，通过细胞培养技术获得。
四、实验过程大蒜细胞破碎→缓冲液提取SOD→离心（得提取物）→氯仿-乙醇混合溶剂，沉淀蛋白→离心（除杂蛋白）→粗酶液→加等体积冷的丙酮→离心→SOD沉淀→除去丙酮（加磷酸缓冲液并加热）→SOD酶液→SOD活力测定。
五、实验结果及分析讨论对照管光密度值为：0.010提取液光密度值为：0.056精酶液光密度值为：0.079提取液酶活力单位/ml=2×（A−B）×NA1×VV1=2×（0.010−0.056）×200.010×0.5×6.50.5=−4784精酶液酶活力单位/ml=2×（A−B）×NA×VV1=2×（0.010−0.079）×50.010×0.5×6.50.5=−1794六、问题回答1、酶的定义、酶的化学本质、酶的特性分别是什么？①定义：酶是由活细胞合成的，对特异底物起高校催化作用的蛋白质，是机体内催化各种代谢反应的最主要的催化剂；②化学本质：蛋白质；③特性：高效性、专一性、多样性、温和性、活性可调节、易变性。
超氧化物歧化酶的研究
超氧化物歧化酶的研究班级：生物班姓名：胡金金学号：11摘要：超氧化物歧化酶是生物体内清除超氧阴离子自由基的一种重要酶，具有重要的生理功能，在医药、食品、化妆品中有广泛的应用前景。
现从分类、分布、结构、理化性质、催化机理、分离提取工艺、应用前景等方面探讨了超氧化物歧化酶的基础研究进展。
个人收集整理勿做商业用途关键词：超氧化物歧化酶、理化性质、生物学功能、提取工艺、应用前景到现在为止，人们已从细菌、原生动物、藻类、霉菌、植物、昆虫、鸟、鱼类和哺乳动物等生物体内分离得到SOD超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, 简称SOD),是一类广泛存在于生物体内的金属酶，能够催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，平衡机体内的氧自由基，己成为化学及生物化学热个人收集整理勿做商业用途门的研究课题。
作为生物体内超氧阴离子自由基的清洁剂，SOD在防辐射、抗衰老、消炎、抑制肿瘤和癌症、自身免疫治疗等方面显示出独特的功能，在医学、食品、化妆品等领域得到越来越多的应用。
目前，世界各地学者对SOD的研究方兴未艾，深入研究SOD不仅有着大的理论意义，也有着重大的实际应用价值。
个人收集整理勿做商业用途1 超氧化物歧化酶的结构和理化性质1.1超氧化物歧化酶的结构超氧化物歧化酶(SOD)从结构上可分为两族:CuZn-SOD为第一族，Mn-SOD和Fe-SOD为第二族。
天然存在的SOD虽然活性中心离子不同，但催化活性部位却具有高度的结构同一性和进化的保守性，即活性中心金属离子都是与3或4个组氨酸(His)、咪唑基(Mn-SOD含1个天门冬氨酸羧基配位)和1个H20分子呈畸变的四方锥或扭曲的四面体配位。
CuZn-SOD作为SOD吉构上的第一族，是人们对于SOD吉构研究的突破口，也是人们了解最多的一种SOD比较不同来源的CuZn-SOD的氨基酸序列可以发现，它们的同源性都很高。
有些氨基酸还很保守，在所有序列中都不变，这暗示着这些氨基酸与活性中心有关。
超氧化物歧化酶(SOD)
超氧化物歧化酶（）超氧化物歧化酶（）简称，是一种广泛存在于自然界地生物酶，按所含金属种类不同可分为铜锌、锰和铁三种.现在市场上出售地大多都从血液中提取，属铜锌（，）.，分子由两个亚基组成，每个亚基含有一个铜离子和一个锌离子，分子量在左右.是一种生物酶，其化学本质是蛋白质，国内外对其毒性进行了广泛地研究.实验表明，它对人体无毒副作用，是一种纯天然地生物活性物质.地抗氧化作用年发现能催化清除超氧阴离子自由基地反应.自由基是具有不配对价电子地原子或原子团, 分子或离子构成.在正常生理状况下, 生物体内不断地产生自由基, 自由基地产生与清除处于平衡状态.但在某些病理情况下, 自由基产生量多时, 就会对、蛋白质和脂类等生物大分子造成损伤, 导致机体疾病地产生.由于自由基具有高度地化学活性, 是人体生命活动中多种生化反应地中间代谢产物, 自由基攻击生物大分子导致组织损伤是许多疾病发生发展地根源.因而在防御生物体免受超氧阴离子自由基损伤, 抗辐射, 抗肿瘤及延缓机体衰老等方面具有重要地作用.、清除机体代谢过程中产生过量地超氧阴离子自由基延缓由于自由基侵害而出现地衰老现象, 即延缓皮肤衰老和脂褐素沉淀地出现.衰老自由基学说认为衰老是来自机体正常代谢过程中所产生地自由基随机附带破坏性地作用结果, 自由基引起机体衰老地主要机制可概括为以下三方面.（）减少生物大分子地交联聚合和脂褐素地堆积；（）减缓器官组织细胞地损伤与减少；（）防止免疫能力地降低.、提高人体对自由基损伤而诱发疾病地抵抗力自由基损伤而诱发疾病地抵抗力主要包括肿瘤、炎症、肺气肿、白内障和自身免疫疾病等当作为功能性食品基料加入食品中时, 可有效抑制许多疾病地发生、发展, 对人体健康有极大作用.、提高人体对自由基外界诱发因子地抵抗力如烟雾、辐射、有毒化学品和有毒药品等增强机体对外界环境地适应能力.电离辐射引起生物体内生成、等自由基.·对机体损伤作用大且其产生部位常为其作用部位, 故远离·产生部位地生物大分子受损地机会小.地损伤作用虽远小于·, 但可从产生部位扩散到其他部位, 并在铁离子鳌合剂存在下与反应生成·, 从而造成、生物膜等损伤.烟雾、有毒化学品和药品也产生过量地损伤机体, 同样可以减少这些损伤.、清除机体疲劳, 增强对超负荷大运动量地适应力在军事、体育和救灾等超负荷大运动量过程中, 机体中部分组织细胞会交替出现暂时性缺血及重灌流现象, 引起缺血后重灌流损伤, 加之乳酸量地增加, 导致肌肉地疲劳与损伤.若在运动前供给, 则可保护肌肉避免出现上述现象.单次强烈运动可使体内自由基水平明显升高, 过量地自由基作为引发剂攻击细胞膜中地不饱和脂肪酸造成脂质过氧化, 引起膜流动性下降, 脆性增强.过氧化脂质地一个特征是生成丙二醛, 形成磷脂之间地交联, 也可与血红蛋白形成褐色产物.机体经剧烈运动后, 含量有所降低肌酸激酶活力暂时下降, 含量升高, 在腺嘌呤转氨酶地作用下促使增高, 然后在核苷酸酶和核苷酶地作用下, 生成次黄嘌呤, 运动后过量地次黄嘌呤在次黄嘌呤氧化酶地作用下, 形成过量地 .因此补充外源能够有效抑制运动引起地细胞损伤.地作用机理超氧阴离子( ) 是生物体内主要地自由基,很多情况下对机体是有害地, 它也是导致衰老地原因之一.而是一类重要地清除氧自由基地抗氧化酶, 它能催化使其发生歧化反应, 生成和; 又在过氧化氢酶( ) 地作用下, 生成无毒地和 , 从而起到抗衰老作用.医学界普遍认为, 发挥作用时, 首先是金属离子与形成内界络合物, 再发生后续反应.因此, 地催化作用是通过其所含金属地氧化和还原过程地电子得失来实现.地应用由于是一种特殊地生物酶，因此具有许多特殊地功能，目前国内外应用主要集中在以下几方面：、作为药用酶原料研究表明，机体内由各种原因产生地过量自由基，尤其是超氧阴离子自由基（），它与很多疾病如炎症、放射病、自身免疫性疾病、肿瘤及衰老等有关，而是体内氧自由基地专一清除剂，因此，它在治疗自身免疫性疾病（如类风湿性关节炎、肺气肿、红斑狼疮等）、放射治疗、心血管疾病、延缓机体衰老等方面有明显地作用.作为药用酶，牛血在美国、德国、澳大利亚等国家已经有产品，商品名分别为、、、和等.在我国，猪血来源肌注也已经通过卫生部地新药评审.、作为化妆品地添加剂根据衰老自由基学说，老化是由自由基地产生和清除功能发生障碍造成地结果.在正常情况下，自由基地产生与清除处于平衡状态，但随着机体地衰老和外界因素地影响，这种平衡往往会被打破，多余地自由基就能通过多种渠道损伤机体.例如氧自由基能引起脂质过氧化.过氧化脂质会同蛋白质交联，产生不溶性蛋白质.这种变化以结缔组织中胶原蛋白最为明显，它能导致胶原变韧、长度缩短，使皮肤失去膨胀力，产生皱纹.此外，过氧化脂质在氧化酶地作用下能分解产生丙二醛等化学物质，在体内迅速同磷脂酰乙醇胺交联生成黄色色素，然后再与蛋白质、核酸、脂质等结合生成无生理活性地棕褐色地色素，即所谓老年斑.经临床验证和长期使用表明，超氧化物歧化酶()是氧自由基地克星，它不仅能抗皱、祛斑、去色素，还有抗炎、防晒、延缓皮肤衰老等作用.我国还将添加到牙膏中，使牙膏具有更强烈地消炎作用，用来治疗牙周炎等口腔炎症.. 作为功能食品地强化剂当被证实口服有效后，世界各国争相开发口服产品.保健品之所以能在众多地保健品中异军突起，独占鳌头，主要是因为它具有以下几个功效：（）增强免疫功能抗疲劳有明显增强免疫功能地功效.实验表明，还有改善缺氧和增强耐疲劳地能力，具有抗疲劳地效果.（）延年益寿抗衰老服用天然超氧化物歧化酶()可以显著提高腺细胞中地含量，具有确切地抗衰老作用.（）治病防病有功效是氧自由基地克星，它能治疗由氧自由基引起地多种疾病.实验表明，它对胃肠道功能失调、食欲不振、失眠、记忆力衰退、改善心血管功能，均有明显地防治作用.有人把它地功能归之为“一清四抗”——一清即有效清除体内多余地氧自由基（体内垃圾），“四抗”即抗衰老、抗疾病.抗辐射和抗疲劳.目前国内外正广泛应用在奶制品、糖果、果汁、饮料、啤酒和保健胶囊（片剂）等中间.作为保健食品地特殊添加剂，有着广泛地应用前景.制备工艺目前国内已开发地产品绝大分都是／—，它们最早是从动物地血、肝中分离提取地，主要有以下几个步骤：溶血液地制备、选择性热变性、超滤浓缩、丙酮沉淀、柱层析、冷冻干燥.但是由于这种方法不可避免地发生一些交叉感染，过敏性反应等现象，开发研究从植物中提取就显得尤为重要.我国近年来在植物地研究领域有大量相关报道.许平、袁艺、赵文芝、余旭亚等分别从大蒜、桑叶、沙棘、仙人掌中提取并进行了相关研究.其提取方法主要有分步盐析法、有机溶剂沉淀法、层析柱法等.除了从动植物中提取外，选育高产菌株进行发酵生产也是比较有价值地一种方法.年王岁楼等人自然筛选出株高产菌株一，酶活可达／湿菌体，并对其形成地生理条件作了初步研究，为地工业化发酵生产打下了基础.吴思芳等人研究了从啤酒废酵母生产、提取、纯化地方法和条件，得到比活为／地酶，指出开展啤酒废酵母生产地综合利用具有经济价值和社会意义.由于天然来源有限，且具有异体蛋白免疫原性，外源不易被人体接受等缺陷，使之在应用方面受到很大限制.基因工程是广开酶源，降低成本和获得无抗原性地人源地有效途径.近年来，美、日、英、德相继开发了微生物基因工程产品，并进行了临床实验.我国医学科学院基础医学研究所和海军总医院分子生物学研究室已成功将人血—克隆到大肠杆菌中，表达率高达％.施惠娟等分别以人胎肝组织及人肝细胞株()总为模板，以—法获得—和—，构建表达质粒，并导入．细胞中使之表达.分别获得了％和％地高表达率，且表达地有酶活性.鉴于重组地人在体内半衰期仍很短，施惠娟等又通过基因工程地方法将—基因改造得到了更加稳定地酶.以上说明了我国人源在微生物细胞中地克隆和表达已达到了国际水平.目前，国内外在基因工程生产方面均取得了可喜地成果.前沿研究与天然相比，地模拟物有着更显著地优点.首先是获取和制备比天然要简单得多.天然要从人或其它生物中提取，这就决定了天然地提取必然困难重重，而且产量不高.而模拟可以用化学方法来人工合成，其物质和能量消耗低，且产量不会受到限制.其次，天然作为一种生物大分子，在进入体内时存在着诸如进入细胞能力弱、细胞渗透性差、在血中半衰期短(在人体中只是在很短时间内稳定，其半衰期为分钟级)、不能口服、价格昂贵等缺点.另外，对于非人体还存在着造成免疫损伤地可能.所以人们把目光投向了模拟物，尤其是低分子量模拟物上.目前，生物无机化学家们合成和表征了一系列含铜、锰、铁等金属离子地小分子配合物来模拟，期待将来能用小分子模拟化合物代替应用于临床.其中研究最多地含铜络合物是，一二异丙基水杨酸铜[(，一)]，这是一种低分子量地亲脂性络合物，具有天然—样活性，可以起到抗炎及减轻由链脲菌素诱导产生地糖尿病.刘京萍等合成地铁(Ⅱ)一酪氨酸模拟金属酶，分子量比天然酶小得多，与天然活性差距较小，且毒性小，从而大大推进了人工合成具有分子质量较小、稳定性高、毒性较底、活性较高等优点地模拟物地研究工作.但是由于超氧化物歧化酶地模拟属于新型交叉学科，需要化学和生物学知识乃至技术地高度结合，目前地模拟还没有走向成熟，相信随着世纪化学生物学地崛起，这一新兴交叉学科将会对化学、生物学及医学产生深远地影响.。
超氧化物歧化酶
• 药物类 主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、 主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、 慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、 慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患 者以及放射性治疗炎症病患者； 者以及放射性治疗炎症病患者； • 用于生化制药 作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上， 作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上， 具有极强的抗衰老，抗肿瘤、 调节人体内分泌系统 具有极强的抗衰老，抗肿瘤、 作用； 作用；
应用前景
• SOD 是一种新型的抗炎症药 尤其对关节炎和类风湿关节 是一种新型的抗炎症药,尤其对关节炎和类风湿关节 炎有明显疗效,根据 根据SOD 作用机制和毒性试验 它对治疗因 作用机制和毒性试验,它对治疗因 炎有明显疗效 根据 O·2 引起的各种疾病都有一定的疗效 为此 引起的各种疾病都有一定的疗效. 为此,SOD 可作为抗 衰老、抗炎症、 衰老、抗炎症、自身免 • 疫疾病患者广泛应用的医药品. 此外,SOD 对治疗贝切特氏 疫疾病患者广泛应用的医药品 此外 症、心肌梗塞等血虚性心脏病、胶原病、新生 心肌梗塞等血虚性心脏病、胶原病、 • 儿呼吸困难综合症、防御放射性伤害等也可望有效. 近年 儿呼吸困难综合症、防御放射性伤害等也可望有效 来美、 英国等对SOD 作为药品开发应用进行了 来美、日、德、英国等对 一系列研究和临床试验并得到广泛应用。 一系列研究和临床试验并得到广泛应用。
大蒜中提取sod
• 采用热变性，聚乙二醇（PEG）6000沉淀作用和DEAE-纤 维素柱层析3种方法对大蒜细胞溶质中的超氧化物歧化酶 进行分离纯化。其方法如下：
• 大蒜→粉碎→水提→过滤→热变性→离心分离 →超滤→纳滤浓缩→真空冷冻干燥→大蒜SOD。
大蒜中sod的提取
超氧化物歧化酶SOD的分离提取
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２ 结果
经过 质粒 大小 比较 ，ｃ Ｐ Ｒ初 筛 ， 酶切重组 子鉴定 （ ｉ Ｈ和 Ｈｎ Ｉ ｄ Ｓｔ 烈酶切 ， 】 ｕＩ Ｈｒ Ⅲ与 Ｃａ 双酶切 ）得到 ６个正 向插人重组子， Ｉ 【 ｌ Ｉ ．
见 同 Ｉ 。
巴
喾
３ 讨论
本文 在平端连接克 隆过程 中筛选 了 １０多个菌斑 ， １ ３ 得到 ６ 个 插人 子 均 为 正 向插 人 ， 能 是 因 为 序 列 原 因 使 反 向 插 人 重 组 可 子不稳定所致 ， 具体原 因待查。
参 考 文献 ： ｌ萨姆布鲁克 ． 等
一
园囊 水平
圈 ２ 各荤取剂使用量 与酶活 力的关 系
袅 ２ 正 交试 暄 结 集 ｃ ／ ｌ Ｕ ｍ
分子克隆！ ：第 ２ ． 京： Ｍ 版 北 科学 出版杜 ． ９ ． １ ５４ ９ ７
超氧化物歧化酶
超氧化物歧化酶(SOD)简述YB 2012级生物技术摘要：超氧化物歧化酶首先由Mann和Keilin从牛红细胞中分离提取出,是生物体内一种重要的抗氧化酶,由于其具有清除生物体内超氧阴离子自由基的作用,而引起广大学者的关注。
本文概述了SOD的分类、结构、理化性质及研究进展,并对其应用前景进行了展望。
关键词：超氧化物歧化酶;SOD;理化性质生物体内低浓度超氧阴离子自由基(O-2)是维持生命活动所必需的,其浓度过高时,可引起机体组织细胞氧化损伤,导致机体发生疾病,甚至死亡。
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,简称SOD)是清除生物体内超氧阴离子自由基的一种重要抗氧化酶,具有抗衰老、抗癌、防白内障等作用[1],因而受到全世界学术界广泛关注,使之成为涉及分子生物学、微生物学、医学等学科领域及医药、化工、食品等生产行业的一个热门研究课题[2]。
1.SOD的分类SOD广泛存在于动、植物及微生物中[1]。
根据其结合金属种类不同,可分为三类:第一类为Cu·Zn-SOD,呈蓝绿色,相对分子量约为32kDa,主要存在于真核细胞细胞浆、叶绿体和过氧化物酶体内;第二类为Mn- SOD,呈紫红色,相对分子量约为40kDa,主要存在于真核细胞线粒体和原核细胞中;第三类为Fe-SOD,呈黄褐色,相对分子量约为38.7kDa,主要存在于原核细胞及一些植物中[2]。
2.SOD的结构1975年Richardson得到了Cu?Zn-SOD的三维结构[5],发现它是由2个基本相似的亚基组成的二聚体,且每个亚基含有1个铜原子和1个锌原子。
2个相同亚基之间通过非共价键的疏水相互作用而缔合,类似于圆筒的端面。
Cu?Zn-SOD的单个亚基活性中心结构见图1。
从图中可知Cu与4个来自组氨酸残基(His44,46,61,118)的咪唑氮配位呈现1个三角双锥畸变的四方锥构型,Zn则与3个来自组氨酸残基(His61,69,78)的咪唑氮和1个天门冬氨酸残基(Asp81)的羧基氧配位,呈畸变的四面体构型。
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紫草种籽超氧化物歧化酶提取方法：属于生物工程领域，涉及一种紫草种籽ＳＯＤ及其用提
取紫草种籽油后的残渣为原料，用生物工程装置提取紫草种籽ＳＯＤ的方法，迄今为止紫草
种籽是植物中ＳＯＤ含量最高、质量最好、最有提取价值的唯一原料，含量为２０万Ｕ／公
斤种籽，是用任何动物血提取的ＳＯＤ所不能比拟的，创下了国内外唯一的用植物提取ＳＯ
Ｄ的记录，不仅填补了国内外空白，在科学研究上也是一个重大突破，它将在人类的延年益
寿、防衰抗皱、抗紫外线辐射、清除人体内氧自由基保证身体健康上做出巨大的贡献。
超氧化物歧化酶耐高温、不失活的制备方法：该方法是在提取的固体粉末状超氧化物歧化酶
中加入２—８％固体状保护剂，该方法是将它们按上述比例混匀后再进行冻干处理。该技术
保证了添加超氧化物歧化酶的产品，如化妆品、口服液、啤酒、牛奶等等中的超氧化物歧化
酶酶活力的稳定性，并扩充了产品开发和应用范围，相对保证了含超氧化物歧化酶的产品在
高温工艺中及常温储存下不易变质。
从鸡雏胴体中提取超氧化物歧化酶的方法：取雏鸡胴体将其绞碎、浸泡、过滤、离心，将上
清液在一定时间和温度控制下，加入丙酮提取超氧化物歧化酶，本发明用鸡场孵化鸡雏淘汰
的蛋用公雏鸡胴体为原料，变废为宝产生高附加值，雏鸡与人无共患病，避免造成如牛、羊、
猪血来源的污染，其工艺简单、产率高、活性好、利润高，并可提取一系列副产物，如表皮
生长因子、精细蛋白、氨基酸等，为大批量生产超氧化物歧化酶开辟了广阔的前景。
重组人源锰超氧化物歧化酶的制备工艺：属于生物工程技术领域，其特点是先进行工程菌扩
增，收集菌体，然后将菌体裂解，加热处理后离心取可溶部分，经离子交换柱层析纯化。本
发明具有工艺流程简便、ＳＯＤ半衰期长、质量稳定、单位成本低等特点，产品不仅可用于
化妆品、保健品等民用领域，更适用于医疗领域。
重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺：其特点是先进行工程菌发酵，发酵后收集菌体，
然后将菌体裂解，分离包含体，采用巯基乙醇尿素变性剂进行抽提，经加热处理后用硫酸铜
复性，并经ＤＥ－５２离子交换层析纯化。本发明具有工艺流程简便、ＳＯＤ产量高、单位
成本低等特点，产品适用于医疗领域。
从植物材料中提取超氧物歧化酶的方法：包括：ａ．称取植物材料，加入Ｋ#-[２]ＨＰＯ#-[４]
溶液，捣碎匀浆，并压榨过滤；ｂ．滤液中加入乙醇∶氯仿混合溶液，搅拌均匀，离心２０
分钟；ｃ．取上清液加入Ｋ#-[２]ＨＰＯ#-[４]，搅匀，再加入丙酮，离心２０分钟；ｄ．取
上清液，加入丙酮，离心２０分钟；ｅ．弃上清液，沉淀溶于磷酸缓冲液（ｐＨ７．５）中，
并透析；ｆ．透析液进行胶过滤，收集活性部分。该方法流程简单明了，生产出的产品具有
高比活、高纯度、高稳定性。
用植物提取超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）的方法：其技术方案是将植物的根、茎、叶、种子、
果实任选其一，经消毒后，净水浸泡，粉碎成浆体，再用０．５—１０倍的保护液提取，然
后过滤、除渣，得ＳＯＤ粗品，将ＳＯＤ粗品进行精制得营养原液，将粗品与酒液调配得保
健液。本发明的优点是：从植物的根茎叶及种子、果实中提取ＳＯＤ，原料广泛，工艺简单，
生产成本低，产品质量安全可靠，适合大批量生产，扩大了使用范围。
从玉米籽粒制取超氧化物歧化酶的方法：属于生物化学领域中酶的制取方法，涉及从玉米中
制取超氧化物歧化酶的方法。其特征是工艺方法为：浸泡玉米；粉碎；上清液超滤浓缩；浓
缩液反复浓缩；浓缩液离心除去沉淀物得上清液；上清液超滤脱盐得超氧化物歧化酶。本发
明工艺简单，生产周期短，适合于工业化生产，可向医药、食品、日用化妆品等行业提供价
格低廉、安全可靠的超氧化物歧化酶产品。
由植物沙棘提取分离超氧物歧化酶（ＳＯＤ）的工艺方法：是采用多级离心分离，超滤膜浓
缩及凝胶过滤法进行。在该工艺中有机处理溶剂为氯仿－乙醇混合溶剂，加入铵盐使ＳＯＤ
从原液中分离。同时为提高收率采用先进超滤膜分离技术进行浓缩并采用凝胶过滤进行精
制。该工艺提取率高，设备投资少，有机溶剂使用量少。此外该技术也适于从其它天然植物
中提取分离ＳＯＤ，不但为ＳＯＤ制备开辟新途径，也为高效综合利用天然植物ＳＯＤ提供
一种实用可行技术。
大豆超氧化物歧化酶生产方法：是以大豆（豆类）为原料生产大豆超氧化物歧化酶（大豆Ｓ
ＯＤ），其生产方法是将大豆依次经过：制作膨胀大豆、制取豆浆、调值处理、离心处理得
上清液、加热过滤、超滤浓缩、干燥等工序。该方法有原料廉价充足、方法简便、成本较低、
适于工厂化大量生产的特点。
从海藻中提取铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)的方法：由于该方法是从天然材料中提取铁超氧化
物歧化酶，海藻原料充足，不存在紧缺现象，同时材料成本相对于提取产品来说也是十分低
廉。得到的产品比活相当高，活力损失相对较小，可以满足一般的医药需求，并且符合当代
人“崇尚自然，回归自然”的心理需求，不存在转基因生产导致的基因污染问题。工艺中采
用了 DEAE-Sepharose Fast Flow和CM-Sepharose Fast Flow两种层析材料，其特点是流速快、
可大量分离样品，同时可反复再生利用，能实现大规模工业化生产。
从紫草种子中提取超氧化物歧化酶的方法：依次包括如下步骤：将紫草种子废渣、水、氯化
铜、氯化锌、氯化钙按比例混合并浸泡24～32小时；提取上清液；热变上清液；用大超滤
器过滤上清液得滤液1；在滤液1中加入酶保活剂后用小超滤器过滤；用赛氏过滤器加压过
滤，冻干过滤液。其关键是在提取步骤中，加入了触酶活剂及保酶活剂，并且选择了合适的
上清液热变温度，使其提取物——超氧化物歧化酶活性高，酶活性为3750单位/毫克，酶比
活性1950 单位/毫克蛋白。
基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺：其特征是首先进行工程菌发酵扩增，热激诱
导，收集菌体。经缓冲液抽提、再经离子交换、分子筛柱层析分离纯化。本发明具有工艺流
程简单、SOD半衰期长、产量高、单位成本低等优点，本产品可广泛应用在化妆品、保健食
品、医疗等领域。
大规模生产超氧化物歧化酶的新工艺：采用冻结的动物血液凝块，磨浆融冻使红血球破裂溶
血，在铜盐保护下加热除去变性血红蛋白，粗提液经膜分离除盐和小分子杂蛋白。二次加热
除去大部分杂蛋白，冻干，得SOD。比活≥4,000u/mg pro.。
从螺旋藻中提取含铁氧化物歧化酶的方法：藻体经超声波破碎、硫酸铵分级沉淀、ＤＥＡＥ
—２３柱层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ—７５凝胶过滤提取含铁超氧化物歧化酶，具有工艺
简便，Ｆｅ—ＤＯＳ纯化到均一程度，并具有较高的比活。Ｆｅ—ＳＯＤ应用于医药、化妆
品、保健品和食品等许多领域。
玉米超氧化物歧化酶(SOD)复合酶大规模制造方法：超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）复合酶，广
泛存在于所有需氧生物体中，其功能为清除对细胞破坏力极强的自由基，自由基是生物在不
良环境和失常代谢中产生的，是细胞致病和衰亡的主要原因之一。故ＳＯＤ对延缓衰老、抑
制肿瘤、消除炎症、抗辐射功效显著。其制剂可用于医药、保健品、食品、饮料、化妆品和
日用化学品诸多领域。ＳＯＤ与自由基作用后，产生的过氧化氢对细胞也有毒，还必须有过
氧化氢酶或过氧化物酶的作用才能清除过氧化氢。本发明产品具有上述三种酶，故称ＳＯＤ
复合酶，清除自由基更彻底、抗氧力更强，酶活保持更久。用玉米为原料价廉易得易贮存，
安全无毒，工艺适宜大规模生产，经济效益与社会效益俱佳。
从蚯蚓中提取SOD的方法及SOD系列保健食品：提取ＳＯＤ的工艺步骤为：洗蚓，净化，
渗透溶液制取ＳＯＤ母液，粗滤，离心制取上清液，超滤，反渗透浓缩，冷冻干燥、包装入
库。ＳＯＤ酒含：红枣４％、山楂２％、灵芝０．４％、大蒜０．２％、一级茉莉花茶０．４％，
乙醇（Ｖ／Ｖ）２３°～２８°，ＳＯＤ酶活力≥８０单位／毫升。ＳＯＤ饮料为：山楂、
红枣、茶叶浸提液中加２．５克／升的天然ＳＯＤ干粉、微量的甜菊糖、柠檬酸、香料。Ｓ
ＯＤ酶活力≥５０单位／毫升。本发明方法的突出效果是：选用原料广、工艺简单，ＳＯＤ
提取率高，成本低。ＳＯＤ保健食品的风味独特，保健功效独特。