2024版药典悬浮粒子检测操作规程
微生物限度检查法-检验标准操作规程
——————————文件类别：技术标准 1/25文件名称微生物限度检查法(二部)检验标准操作规文件编号：09T-I636-01 起草人审核人批准人日期：日期：日期：颁发部门：质量管理部生效日期：分发部门：质量控制科1.目的：建立微生物限度检查法(二部)检验标准操作规程，并按规程进行检验，保证检验操作规范化。
2.依据：2.1.《中华人民共和国药典》2010年版二部。
3.范围：适用于所有用微生物限度检查法(二部)测定的供试品。
4.责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。
5.正文：5.1.简述：5.1.1. 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。
5.1.2. 微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
5.1.3.供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。
5.1.4.除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃。
5.1.5.检验结果告以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。
5.2. 检验量。
5.2.1.检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml 或cm2）。
5.2.2.除另有规定外，一般供试品的检验量为10 g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml（其中10g或10ml用于阳性对照试验）。
5.2.3.检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。
9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则
第三次公示稿
方法、清洁/消毒剂及微生物监测方法的有效性，尤其当超过监 测限度时，微生物鉴定信息有助于污染源的调查。关键区域分离 到的菌落应先于非关键区域进行鉴定。微生物鉴定参照微生物鉴 定指导原则（通则 9204）进行。
微生物控制 为了保证药品洁净实验室环境维持适当的水平，并处于受控 状态，除保持空调系统的良好运行状态，对设施进行良好维护， 洁净室内人员应严格遵守良好的行为规范，并定期进行环境监 控。减少人员干预比监测更有效。其次是通过有效控制人员和物 品的移动，适当的控制温度和湿度。微生物控制措施还包括良好 的清洁和卫生处理，应定期对药品洁净实验室进行清洁和消毒， 应当监测消毒剂和清洁剂的微生物污染状况，并在规定的有效期 内使用，A/B 级洁净区应当使用无菌的或经无菌处理的消毒剂和 清洁剂。所采用的化学消毒剂应经过验证或有证据表明其消毒效 果，其种类应当多于一种，并定期进行更换以防止产生耐受菌株。 不得用紫外线消毒代替化学消毒。必要时，可采用熏蒸等适宜的 方法降低洁净区的卫生死角的微生物污染，并对熏蒸剂的残留水 平进行验证。
C级
非单向流
-
-
20-40h-1 监测周期
压差 温度 相对湿度
洁净区与 20-24℃ 非洁净区 监测周期 之间压差 每次实验 不小于
10Pa;
45-65% 监测周期 每次实验
不同级别 洁净区之 间的压差 不小于
10Pa
D级
非单向流 -
-
第三次公示稿
12 个月 6-20h-1 监测周期 12 个月
监测周期 每周一次
洁净度级别
浮游菌纠偏限（1） 沉降菌纠偏限（2）（φ90mm，
（cfu/m3）
cfu/4 小时）
A级
<1（3）
悬浮粒子在线监测警戒限度报警值的2种方法
悬浮粒子在线检测警戒限度值的2种设置方法苏州工业园区鸿基洁净科技有限公司曾世清悬浮粒子在线监测系统中如何设置警戒限度报警值？根据2010版GMP要求，第十条应对洁净区的悬浮粒子进行动态监测。
对A级区必须进行动态监测，监控的警戒/纠偏限度要求根据所从事操作的性质来确定。
判断监测点在生产过程中人为干预、偶发事件及系统的损坏的状态。
所以监测的警戒值的设置根据不同点的状况设置，每个点的警戒值可能都不完全一样。
具体设置警戒值有如下两个方法：1、第一种方法，一般将一周的数据作为基数，平均值*d作为基准，参照一周的最大值，在洁净度允许范围内，以（平均值*d）作为警戒值。
这里的d值一般为1.1-1.5范围内。
也就是将基数值放大10%-50%作为基准值。
运行一个月后再以同样的方式调整该值。
警戒值不是一成不变的，在一段时间内是随着工位和环境的变化而变化的。
但必须保证警戒值不得超过环境洁净度的要求值。
2、第二种方法：设置警戒值按环境洁净度值设置。
对于A级，警戒值直接设置为A级洁净度超标值的50%-80%，可根据实测的洁净环境情况和工位点状况设置。
比如：按A级环境洁净度超标值的60%设置如下：0.5um警戒值=3520*60%=2112,5.0um警戒值=20*60%=12过了一段时间之后，如经常出现报警的话，再调整该值，一般上浮10%，直至到超标限度范围。
这种两种设置警戒限度值中，第二种方法设置比较简单，大部分操作者喜爱采用。
鸿基洁净科技的悬浮粒子在线检测系统是通过计算机化验证的系统，以上两种设置警戒报警值时，鸿基在线检测系统按时间、操作人员、系统状态等信息记录警戒值变更情况并形成报表，符合2015药典计算机化验证要求。
在线悬浮粒子监测如何设置警戒限度报警值
悬浮粒子在线监测警戒值和纠偏值的设置方法苏州工业园区鸿基洁净科技有限公司曾世清悬浮粒子在线监测系统中如何设置警戒限值和纠偏限值？根据2010版GMP要求，第十条应对洁净区的悬浮粒子进行动态监测。
对A级区必须进行动态监测，监控的警戒/纠偏限度要求根据所从事操作的性质来确定。
判断监测点在生产过程中人为干预、偶发事件及系统的损坏的状态。
所以监测的警戒值的设置根据不同点的状况设置，每个点的警戒值可能都不完全一样。
具体设置警戒值有如下两个方法：1、第一种方法，一般将一周的数据作为基数，平均值*d作为基准，参照一周的最大值，在洁净度允许范围内，以一周的（平均值*d）作为警戒值。
这里的d值一般为1.1-1.5范围内。
也就是将基数值放大10%-50%作为基准值。
运行一个月后再以同样的方式调整该值。
警戒值不是一成不变的，在一段时间内是随着工位和环境的变化而变化的。
但必须保证警戒值不得超过环境洁净度的要求值。
纠偏限值可以设置为警戒限值上浮15%-20%，当警戒限值调整后，纠偏限值也同时调整。
注意;纠偏限值必须在超标值范围内,不得超过洁净度超标值。
2、第二种方法：设置警戒限值按环境洁净度值设置。
对于A级，警戒值直接设置为A级洁净度超标值的50%-80%，可根据实测的洁净环境情况和工位点状况设置。
比如：按A级环境洁净度超标值的60%设置如下：0.5um警戒值=3520*60%=2112,5.0um警戒值=20*60%=12过了一段时间之后，如经常出现报警的话，再调整该值，一般上浮10%，直至到超标限度范围。
同样，纠偏限值可以设置为警戒限值上浮15%-20%。
这种两种设置警戒限度值中，第二种方法设置比较简单，大部分操作者喜爱采用。
鸿基洁净科技的悬浮粒子在线检测系统是通过计算机化验证的系统，以上两种设置警戒报警值时，鸿基在线检测系统按时间、操作人员、系统状态等信息记录警戒限值和纠偏限值的变更情况并形成报表，符合2015药典计算机化验证要求。
2015版药典悬浮粒子检测操作规程完整
1、目得:阐述洁净室空气中悬浮粒子数检测操作规程,保证药品质量,防止生产环境对产品得污染;规范洁净区悬浮粒子监测。
2、范围:适用于对洁净区悬浮粒子监测得操作。
3、责任:尘埃粒子检测员。
4、内容:4、1概述:洁净室(区)悬浮粒子监测采用计数浓度法,通过测定洁净区环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径得悬浮粒子数,来评定洁净室(区)得悬浮粒子洁净度等级。
4、2监测原理:空气中悬浮粒子在激光束得照射下产生衍射现象,衍射光得强度与悬浮粒子得体积成正比。
4、3测试状态:静态测试与动态测试“静态”就就是指所有生产设备均已安装就绪,但没有生产活动且无操作人员在场得状态。
在进行“静态”监测时,需注意应在生产操作全部结束,操作人员撤离生产现场并经过15-30分钟自净后进行监测。
“动态”就就是就是指生产设备按预定得工艺模式运行并有规定数量得操作人员在现场操作得状态。
在空调系统验证时、长期停产恢复生产前、设施设备大修复产前进行静态测试,在日常监测时进行动态监测(D级区域除外),对于D级区域得日常监测可以在静态进行。
如必要(如偏差调查或其她得一些验证需要),可以进行动态测试。
洁净室(区)得温度与相对湿度应与其生产及工艺要求相适应(温度控制在18℃-26℃相对湿度控制在45%-65%之间为宜)。
4、4压差:压差应符合规定,即洁净区与非洁净区之间,洁净级别不同得相邻房间得静压差应大于10Pa。
4、5测试时间:测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始,具体严格遵循不同状态得测试要求。
4、6测试方法:4、6、1仪器:空气悬浮粒子计数器4、6、2采样点数目:利用公式计算NL=A0、5、NL:最少采样点数(四舍五入整数)A:洁净室或洁净区得面积,以平方米计。
注:在单向流情况下,面积A可以认为就是垂直于气流方向上得横截面面积。
最少取样点数目:注:表中得面积,对于单向流得指送风面积,对于乱流洁净室就是指房间得面积。
4、6、3采样点得布置(附图供参考)4、6、4采样量:每次采样得最小采样量4、6、5采样注意事项:任何洁净区内取样点应不少于两个。
无菌操作规程
无菌检验操作规程及记录表1目的通过无菌检验，确保灭菌后产品能够到达无菌的要求。
2 适用范围适用于灭菌后医疗器械产品的无菌检验。
3 检验依据3.1、产品注册标准3.2、?中国药典?〔2021年版〕3.3、GB14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第二局部：生物试验方法3.4、GB15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准4 仪器、设备百级层流超净工作台、电热枯燥箱、电热恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、电子天平、酒精灯、，无菌棉签、镊子，试管架，大试管假设干等。
5 无菌检验室的环境要求5.1 无菌检验应在环境干净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进展。
5.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。
无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。
无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。
5.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按?医药工业干净室〔区〕悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法?的现行国家标准进展悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。
每年至少检测一次。
5.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1cfu/平板。
6 无菌检验前的准备6.1 器具灭菌、消毒6.1.1 灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。
可经电热枯燥箱160℃以上干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用〔根据灭菌效果验证决定灭菌参数〕。
所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否那么应重新灭菌。
6.1.2 消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。
如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。
可采用消毒剂浸泡或擦拭。
2020中国药典洁净区等级划分
2020中国药典洁净区等级划分根据2020版《中国药典》9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则，药品洁净实验室的洁净级别按空气悬浮粒子大小和数量的不同参考现行“药品生产质量管理规范”分为A 、B、C、D 4个级别。
为维持药品洁净实验室操作环境的稳定性、确保药品质量安全及检测结果的准确性，应对药品洁净实验室进行微生物监测和控制，使受控环境维持可接受的微生物污染风险水平。
洁净实验室初次使用应进行参数确认，内容包括物理参数、空气悬浮粒子和微生物。
为确保设备运行系统的可靠性，物理参数的监测应在微生物监测之前进行。
物理参数主要包括高效过滤器完整性，气流组织、平均风速，换气次数、压差、温湿度等。
各级别洁净环境物理参数建议标准微生物监测应定期进行，内容包括空气悬浮粒子、浮游菌、沉降菌、关键的检测台面、人员操作服表面及5指手套等。
空气悬浮粒子采样点位置要求：一般距离地面0.8m水平面上均匀布置。
采样点多于5点时，可在0.8m～1.5m高度内分层布置，但每层不少于5点。
采样时，人员应站在采样口的下风侧，尽量减少活动。
沉降菌采样点位置要求：工作区测点离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）；对关键设备或关键工作活动范围处可增加测点。
浮游菌采样点位置要求：工作区测点离地0.8m～1.5m左右（略高于工作面）；送风口测点位置离开送风面30cm左右；对关键设备或关键工作活动范围处可增加测点。
各洁净级别空气悬浮粒子的标准各洁净级别环境微生物监测的动态标准若有超净工作台、空气调节系统等关键设备发生重大变化时应重新监测物理参数、空气悬浮粒子和微生物。
当微生物监测结果或样品检测结果发生偏离时，经评估洁净区可能存在被污染的风险，应对洁净区清洁消毒后重新进行监测。
为确保洁净实验室环境的稳定性，并处于受控状态。
实验室人员应遵守良好的行为规范，定期对洁净实验室进行环境监测和清洁消毒。
清洁剂和消毒剂应在规定的有效期内使用，并监测其是否有微生物污染状况。
无菌检查法-版中国药典-电子版
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、及其他品种是 否无菌的一种方法。
若供试品符合无菌检查法的规定，仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污 染。
无菌检查应在环境洁净度B 级背景下的局部A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进 行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检 出。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的 测试方法》的现行国家标准进行洁净度确认。
隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的 洁净度须符合无菌检查的要求。
日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术的培训。
培养基硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养， 也可用于需气菌培养；胰酪大豆胨液体培养基 适用于真菌和需气菌的培养。
培养基的制备及培养条件培养基可按以下处方制备，亦可使用按该处方 生产的符合规定的脱水培养基。
配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
制备好的培养基应保存在2〜25°C 、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3周内使用；若保存于密闭容器中，一般可在一 年内使用。
1. 硫乙醇酸盐流体培养基葡萄糖新配制的%刃天青溶液 硫乙醇酸钠 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分混合，微温溶解，调节pH 为弱碱性，煮沸，滤清，加入葡 萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节 pH 值使灭菌后为土。
分装至适宜的容器中，其装量与容器高度的比 例应符合培养结束后培2养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的 1/2。
灭菌。
在供试品接种前, 培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的 1/5,否则，须经100C 水浴加热至粉红色消失（不超过 20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。
除另有规定外，硫乙醇酸盐流体培养基置30〜 35C 培养。
酪胨（胰酶水解）酵母浸出粉（或硫乙醇酸）（ml ） 纯化水1000ml 氯化钠琼脂2. 胰酪大豆胨液体培养基胰酪胨氯化钠大豆木瓜蛋白酶消化物磷酸氢二钾葡萄糖（一水合/无水）（）纯化水1000mL除葡萄糖外，取上述成分，混合，微温溶解，滤过，调节pH值使灭菌后在25°C的pH值为土，加入葡萄糖，分装，灭菌。
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2024版药典悬浮粒子检测操作规程
一、目的
本操作规程的目的是规范药典对悬浮粒子的检测操作流程，保证检测结果的准确性和可靠性。
二、适用范围
本操作规程适用于所有进行药典悬浮粒子检测的实验室和检测单位。
三、仪器和材料
1.悬浮粒子检测仪器：包括激光粒度仪、显微镜等。
2.检测样品：药品或药物原料。
3.纯水：用于样品的稀释和清洗。
4.玻璃容器：用于样品的保存和搅拌。
5.离心机：用于沉淀悬浮粒子。
四、操作流程
1.样品准备
(1)将样品制备成悬浮液：将一定量的样品取出放入玻璃容器中，加入适量的纯水，然后搅拌均匀，制备成悬浮液。
(2)离心沉淀：将悬浮液置于离心机中，进行高速离心，使悬浮粒子沉淀到底部。
2.仪器准备
(1)激光粒度仪准备：打开激光粒度仪，等待其预热，确保仪器处于工作状态。
(2)显微镜准备：将显微镜调至合适的倍数，并调整焦距，确保观察的图像清晰。
3.悬浮粒子检测
(1)激光粒度仪检测：取出悬浮粒子样品，将其放入激光粒度仪中，按照仪器使用手册的要求进行操作，记录检测结果。
(2)显微镜检测：将沉淀的悬浮粒子取出，放置在玻璃片上，使用显微镜观察其形态、大小等特征，并记录观察结果。
4.结果记录和分析
(1)将激光粒度仪和显微镜的检测结果整理成报告。
(2)对比两种检测方法的结果，进行分析。
如果结果存在差异，需重复检测或采用其他检测方法确定。
五、注意事项
1.操作过程中需保持实验环境清洁，防止样品受到外界污染。
2.悬浮液的制备应注意悬浮粒子的浓度和均匀性。
3.在进行激光粒度仪检测时，需根据样品特性选择合适的测试参数。
4.在进行显微镜观察时，需保持显微镜的清洁和调焦准确。
5.检测结果需按照规定的格式进行记录和整理，确保结果的准确性和可靠性。
六、附录
1.悬浮粒子检测报告模板：包括样品信息、仪器使用参数、检测结果等。
2.相关仪器的操作手册和维护规范。
以上为药典悬浮粒子检测操作规程，根据不同实验室和检测单位的需求和具体情况，可以进行相应的调整和修改。
操作规程的执行者应严格按照规范要求进行操作，确保检测结果的准确性和可靠性。