饲料中有毒有害物质的测定-课件
饲料分析与质量检测技术_图文
第4页 2016年7月29日
饲料分析及质量检测内容
• 3.饲料分析鉴定方法
– – – （一）物理、化学分析鉴定法：主要以重量法和滴定分析为主，早期的分析方法； （二）微生物法： 将饲料利用酶、酸、碱作用后作为微生物的培养基，通过分析检测评判微 生物的生长繁殖情况，评判饲料的营养价值及相应养分对畜禽的生物学效价指数 （三）模拟动物评定法： 该法是采用模拟动物消化道条件，在实验室中对饲料作离体消化实 验，评定饲料的营养价值，它可克服常规动物消化试验和指示剂法会耗费大量人力、物力、财 力和时间的缺陷。 （四）动物试验法： 包括饲养试验、消化试验、代谢试验、屠宰试验、动物外科造瘘技术、 同位素示踪技术、适口性试验、有毒有害物质的影响程度的比较试验等。可用的试验动物包括 常用的大、小白鼠小试验动物，也可用猪、鸡、牛、羊、鱼、虾等动物作试验； （五）回归预测饲料营养价值法： 通过大量的科学试验、分析测定数据，结合数理统计知识， 建立回归统计公式，在以后的生产或科学研究中，根据饲料中某一种或几种成分的含量，可利 用回归公式，预测饲料的其它有效成分含量和评价饲料的营养价值，
– 2.目的：评定饲料营养价值和营养质量 – 3.作用：为饲料营养价值评定、饲料生产、质量管理以及按照饲养标准
进行饲料配合提供依据；以动物营养学和饲料科学为指导，利用分析化 学的理论与方法，测定饲料中营养素、有毒有害成分的含量
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饲料分析及质量检测内容
• 2.饲料分析及质量检测的内容
• 方法：先将不同的比重液装入不同的试管中，将同一被检原料分别装入这些 试管中，当被检样品在比重液中不浮不沉时，该比重液的比重即可认为等同 于被检样品的比重。
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饲料分析及质量检测内容
食品中有毒有害物质的快速检测方法PPT课件
射性同位素对工作人员有一定的伤害，废弃物又不易处理，这些不
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利因素限制了该法的广泛应用。
2.酶免疫技术(EIA )
❖酶免疫技术是用酶标记的已知抗原或抗体，检测 标本中的相应抗体或抗原，将抗原抗体反应的特异 性与酶催化反应的专一性相结合的免疫检测技术。
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酶联免疫吸附法
（enzyme
linked immunosorbant assay， ELISA）
❖ 加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有 色产物，产物的量与标本中受检物质的量直 接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性 或定量分析。
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ELISA原理图
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ELISA基本的实验过程
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❖ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体
❖在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体 ②酶标记的抗原或抗体 ③酶作用的底物
❖ 农药残留量是施药后的必然现象，但如果超过最大
残留量，对人畜产生不良影响或通过食物链对生态
系统中的生物造成毒害，则称为农药残留毒性（简
称残毒）。
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❖ 目前，我国农药残留较为突出的是蔬菜中的农 药残留问题。近年来蔬菜被农药污染的情况有 增无减，有机磷农药残留尤为突出。
有机磷农药多为磷酸酯类 或硫代磷酸酯： 对硫磷（1605）、内吸 磷（1059）、马拉硫磷 （4049）、乐果、敌百 虫、敌敌畏。
❖ 酶联免疫吸附法是把抗原抗体反应的特异性和酶的 高效催化作用有机结合起来的一种免疫检测技术。
❖ 将已知抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯板)上 进行酶免疫反应，检测相应的抗体或抗原。
❖ 应用：食品中毒素的测定、食品有害微生物的快速 检测、食品中农药残留的检测、食品中抗生素残留 的检测 （如氯霉素）
《动物营养与饲料学》课件
降低应激反应，维持动物健康。
营养与动物疾病治疗
03
在疾病治疗期间，提供适宜的营养供给有助于提高治疗效果，
促进动物康复。
05
动物营养与环境保护
养殖业对环境的影响
养殖业对水资源的污染
养殖过程中产生的粪便和污水未经处理直接排放，导致水体富营 养化，影响水质和生态环境。
养殖业对土壤的污染
养殖场废弃物中含有的重金属、抗生素等药物残留物，长期积累在 土壤中，对土壤生态造成破坏。
维生素饲料
如维生素预混料，用于补充动物所需的维生素。
饲料加工与调制技术
粉碎
将大块的饲料原料粉碎成适当的大小，以便 动物消化。
制粒
将饲料制成颗粒状，以提高饲料的适口性和 利用率。
混合
将多种饲料原料混合均匀，以保证饲料的质 量和营养的均衡。
干燥
将湿的饲料进行干燥处理，以防止霉变和损 失营养。
饲料配方设计与优化
饲养计划的ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ施
确保饲料供应的稳定性和安全性，按照饲养计划 进行定时、定量投喂，并做好饲养记录。
3
饲养计划的调整
根据动物生长状况、生产性能等实际情况，适时 调整饲养计划，以满足动物生产需求。
饲养环境控制
温度控制
01
根据动物种类和生长阶段，保持适宜的饲养温度，避
免过高或过低的温度对动物生长和健康造成影响。
01
根据动物的生长阶段和营养需求，设计合理的饲料 配方。
02
考虑饲料原料的价格和市场供应情况，优化饲料配 方成本。
03
结合动物的生长表现和健康状况，调整饲料配方， 提高饲料的转化率和利用率。
03
动物饲养管理
饲养计划的制定与实施
饲料分析与检测实验：饲料中砷含量的测定免费
实验十七饲料中砷含量的测定【学习目标】了解饲料原料、配合饲料砷含量检测的重要意义，掌握饲料原料、配合饲料砷含量检测的原理、实验方法，并注意对测定结果的分析和讨论。
一、测定方法（一）砷的简单判定法1.将可疑的含砷量高的样品放在火焰上稍加热，如果有砷存在时，从蒸汽中可以明显的嗅到蒜味。
2.在硬质玻璃吸管突出一端的底部放一小块被检材料，其稍上放置木炭。
在酒精灯上先将木炭加热，然后将被检物加热。
如有砷存在时，则在木炭上的管壁上出现“砷镜”。
3.取铜片两块，以1:1的硝酸溶液除去氧化物，并用水冲洗后放在水浴锅上加热1小时。
将被检的样品与浓盐酸混合，然后将两块铜片放在混合物中。
如有砷存在时，铜片上被灰色的亚砷化铜霜所覆盖，如有汞存在时，则铜片用滤纸擦净后因析出汞而呈现银色闪光。
（二）砷测定的判定法1.原理样品经消化后，在酸性条件以碘化钾，氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，然后与锌粒和酸产生的新生态氢生成砷化氢气体，再与溴化汞试纸生成黄色至橙色的色斑，与标准砷斑比较定量。
硫化氢气体有类似反应，可用醋酸铅棉花除去干扰。
2.仪器（1）测砷管全长18.0cm，自管口向下至14.0cm一段的内径约为6.5mm，自此以下逐渐变细，末端内径约为1.0～3.0mm，近末端l.0cm处有一孔，直径.02mm，上部较粗部分装入乙酸铅棉花，长约6.0cm，距离管口至少3.0cm。
管口为圆形平管口，上面磨平，平面两侧各有一钩，为固定玻璃帽用。
（2）玻璃帽下面磨平，与侧面管口相配。
中央有圆孔，孔径为6.5mm，上面有弯月形凹槽以便能用橡皮圈与测砷管的小钩固定和易于取走玻璃帽。
玻璃帽与测砷管之间夹一溴化汞滤纸。
（3）lOO.0ml锥形瓶。
（4）橡皮塞。
3.试剂（1）5.0％溴化汞一乙醇溶液；（2）6.0mol/L盐酸；（3）硝酸，分析纯；（4）10.0％乙酸铅溶液；（5）硫酸，分析纯；（6）硝酸-高氯酸混合液(4:1)；（7）氧化镁，分析纯；（8）盐酸，分析纯；（9）20.0％氢氧化钠溶液；（10）无砷锌粒；（11）硝酸镁及硝酸镁溶液：称取15.0g硝酸镁溶于100.0ml水中；（12）15.0％碘化钾溶液，贮存于棕色瓶中；（13）氯化亚锡溶液：称取40.0g氯化亚锡(SnCl2.2H20)，加盐酸溶解并稀释至100.0ml，加人数颗金属锡粒；（14）溴化汞试纸：将剪成直径2cm的圆形滤纸片，在5.0％溴化汞乙醇溶液上浸渍1小时，保存于冰箱中，临用前置暗处阴干备用；（15）乙酸铅棉花：用10.0％乙酸铅溶液浸透脱脂棉后，压除多余溶液，并使疏松，在100.0℃以下干燥后，贮存于玻璃瓶中。
鸡饲料原料中的有毒有害物质及预防措施
鸡饲料原料中的有毒有害物质及预防措施鸡饲料配制常用的棉籽、菜籽粕等天然成分申存在着大量的有毒化合物。
实际生产中，不少养鸡户因配方比例不合理或处理措施不当使鸡中毒，给养鸡户造成一定的经济损失，严重制约了农村养鸡业的发展。
现笔者根据生产实践，介绍饲料中常见天然成分中主要有害物质及危害预防措施，以供大家参考。
一饲料中的生氰植物1 生氰植物中的毒害物质生氰植物能在体内合成生氰化合物，经水解后释放氢氰酸，氢氰酸被吸收后，动物机体就会出现中毒反应。
2 预防措施植物中大约有2000多种生氰植物，预防植物氢氰酸的中毒，应掌握植物生育期中有毒成分含量的变化规律，加以合理利用。
例如，亚麻籽饼的去毒方法是经水浸泡后煮熟(煮时将锅盖打开)。
橡胶籽饼去毒方法是通过日晒或烘烤。
豌豆的去毒可采用浸泡、蒸煮、焙炒等方法，使毒蚕豆苷水解形成氢氰酸后遇热挥发而除去。
去毒处理后要检测饲料中氰化物的含量。
我国饲料卫生标准中规定：氰化物允许量为木薯干中≤100微克/千克，胡麻饼粕中≤350微克/千克，鸡配合饲料中≤50微克/千克。
二棉籽粕中的有毒物质棉籽粕中的有毒物质主要是棉酚和环丙烯类脂肪酸。
1 棉酚的毒害影响棉酚是细胞、血管和神经的毒物，大量棉酚进入消化道后，可刺激胃肠黏膜，引起胃肠炎。
吸收入血液后，能损害心、肝、肾等实质器官，因心脏损害而致的心力衰竭又会引起肺水肿和全身缺氧性变化。
棉酚能增强血管壁的通透性，促进血浆和血细胞渗向周围组织，使受害者的组织发生浆液性浸润和出血性炎症，以及发生体腔积液。
棉酚的脂溶性使其易积累在神经细胞中，使神经系统的功能发生紊乱。
棉酚在体内可与许多功能蛋白质和一些重要的酶结合，使它们丧失活性。
棉酚与铁结合，可以干扰血红蛋白的合成而引起缺铁性贫血。
棉酚可影响雄性动物的生殖功能，使动物繁殖能力降低，甚至造成雄性不育。
产蛋鸡饲喂棉籽饼时，其产出的蛋经过一定时间的贮存后，蛋黄变成黄绿色或红褐色，有时出现斑点。
棉酚可降低棉籽饼中赖氨酸的有效性。
食品分析--食品中有害物质的检测 ppt课件
–气相色谱仪－电子捕获检测器 –旋转蒸发仪 –凝胶净化柱 30×2.5cm玻璃层析柱
玻璃层析柱
• 操作要点
–提取与分配 –净化
• 将样品浓缩液过凝胶柱，用乙酸乙酯－环乙烷(1+1)溶液 洗脱，弃去0～35ml流分，收集35 ～70ml流分，旋转蒸 发至约1ml，再经凝胶柱净化收集35 ～70ml流分，蒸发 浓缩，用氮气吹除溶剂以石油醚定容至1ml。
精品资料
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
表 我国主要食品中DDT和BHC残留限量标准
表 WHO建议的DDT和BHC在某些食品中允许残留量标准
• 试剂
–丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、环乙烷、正乙烷，重蒸 –石油醚，沸程30～60℃，分析纯重蒸； –氯化钠、无水硫酸钠； –凝胶，Bil-beads S-X3,200～400目； –农药标准品； –标准溶液配制；
• 仪器
– 气相色谱仪－火焰光度检测器 – 旋转蒸发仪 – 凝胶净化柱
• 操作方法
–样品提取制备，同有机氯农药测定；
–净化，同有机氯农药测定；
–测定
• 色谱条件
–色谱柱：涂SE-54 0.25μm,30m×0.32mm(内径)石英弹性毛细 管柱
艾姆斯试验
• 补体结合试验
一种有补体参与，并以绵 羊红细胞和溶血素是否发生溶 血反应作指示的一种高灵敏度 的抗原与抗体结合反应
第三节 食品中农药残留及其检测
饲料中汞的测定国标
饲料中汞的测定国标
1 关于汞测定国标
汞(Hg)，是一种非常有毒的金属元素，由于其有害的特性，国际上普遍认识到汞的可持续和危害，因此在饲料中有出现汞的情况，早已被国际关注，旨在限制对食品安全的隐患。
因此，为了有效控制汞在饲料中的存在，国家制定了《汞类物质在饲料中的限量》（GB 50093-2014）标准，明确禁止含汞的重金属和汞的有机物在饲料中的添加及使用。
标准规定，饲料中汞含量不能超过0.3毫克/千克。
2 汞测定国标的评价标准
GB 50093-2014 标准对汞的检测方法和技术要求进行了详细的规定。
标准中规定：汞测定准确度差异评价和相对标准偏差（RSD）应小于17%，检出限（LOD）应小于0.08毫克/千克。
标准还结合当前国际和国内标准，规定汞测定中用到的试剂、耗材、设备等应符合国家质量标准，针对特殊情况，建议在汞测定中有中国现行推荐值，并且建议汞测定做同时硝酸溶解法或AAS分光光度法两种检测方法相结合，以提高检测的准确性和客观性。
3 关于汞的主要检测方法
汞的检测方法主要有硝酸溶解法、碘溶解法、AAS分光光度法和原子吸收比色法等。
硝酸溶解法是一种常用的饲料汞检测方法，它是使用多氯联芳烃与硝酸把汞配合物氧化分解，使汞变为自由汞挥发，然后用热气流把热汞挥发至质控样直接测定、或经由化学捕集分析仪得到结果。
AAS分光光度法是一种汞检测必不可少的方法，它是用火焰离子化原子吸收光谱仪测定细胞内的汞，并可以根据检测的吸光度判断汞的含量。
4 结论
GB 50093-2014 标准为汞在饲料中的控制提供了完善的规范，要求汞测量具有较高的精准度和准确度，也明确了汞测定的主要检测方法，有助于进一步提高汞在饲料中的安全性控制。
饲料中的抗营养因子和有毒有害物质
饲料中的抗营养因子和有毒有害物质饲料可为动物提供动物所需的各种营养成分，同时有些饲料原料中也存在一些抗营养因子或有毒有害物质。
这些成分中能破坏饲料营养成分或以不同机制阻碍动物对营养成分的消化、吸收和利用并对动物的健康产生副作用的物质被称为抗营养因子;而对动物产生毒性作用的物质，即有毒有害物质。
在实践中，抗营养因子和有毒有害物质并无特别明显的界限。
下面就饲料中常见的抗营养因子或有毒有害物质进行简单介绍：一、蛋白酶抑制因子1、蛋白酶抑制因子包括胰蛋白酶抑制因子和胰凝乳蛋白酶抑制因子，可抑制动物肠道中蛋白质水解酶对饲料的水解作用，从而阻碍动物对饲料蛋白质的消化利用。
常见于生大豆中。
2、受影响的蛋白酶:胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、凝血酶等十多种酶的活性。
3、危害：对植物本身具有保护作用，可防止大豆籽粒自身发生分解代谢使种子处于休眠状态，并具有抗虫害的功能，但对人和动物来说，是一种抗营养因子，会导致动物生长减慢或停滞，引起胰腺肥大、动物胰腺机能亢进，导致胰腺分泌过盛，造成必须氨基酸(特别是含硫氨基酸)的内源性损失。
二、水溶性非淀粉多糖1、水溶性非淀粉多糖是指饲料中除去淀粉和蛋白质后在水中可溶而不溶于80%乙醇的多糖成分。
其化学成分主要有阿拉伯木聚糖、β-葡聚糖、甘露寡糖、葡萄甘露寡糖、果胶等。
2、抗营养机理:(1)增加小肠内容物的粘度，降低消化酶及其底物的扩散速率，降低酶解作用效率;(2)使养分吸收减少，而在肠道蓄积，为肠道大量有害微生物的繁殖提供良好的环境，改变肠道pH值，影响消化酶的发挥，并刺激肠壁，使之增厚，损伤绒毛，引起黏膜形态和功能的变化，进一步降低养分吸收率;(3)非淀粉多糖能与胆汁酸结合，限制胆汁酸的作用;而与胆固醇、脂肪结合则导致脂肪消化吸收显著降低，特别是饱和脂肪酸。
三、抗原蛋白1、抗原蛋白是饲料中的大分子蛋白质或糖蛋白，动物采食后会改变体液免疫功能，因而又被称为致敏因子。
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9 饲料中有毒有害物质的测定
酶联免疫吸附法 B、酶与底物：
在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶 (horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶 (alkaline phosohatase, AP)。在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有 葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
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9 饲料中有毒有害物质的测定
二、饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测 定方法中有3种必要的试剂：
固相的抗原或抗体， 酶标记的抗原或抗体， 酶作用的底物。
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酶联免疫吸附法
染有关。
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二、饲料中总砷的测定
有机砷饲料添加剂：对氨基苯砷酸（阿散酸）、对氨基苯砷酸钠
和3-硝基-4-羟基苯砷酸 （洛克杀生 ）。 促生长，抗球虫及着色（使皮肤红润，毛色发亮）等功效。
我国制定的饲料中砷测定标准方法是测定饲料中总砷含量（目前 的检测方法还不能区分有机砷和无机砷），而卫生标准中砷的限
物性原料 或人造着色剂和调味剂。
公众对饲料质量重要性的认识的变化 表1
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9 饲料中有毒有害物质的测定
一、概述
（二）几起典型的饲料安全事故
➢ ２０世纪８０年代中期至９０年代中期疯牛病（“牛海绵状脑
病” ）的暴发流行。
➢ 1999年1月15日以来，比利时、荷兰、法国、德国相继发生因动物
3
9 饲料中有毒有害物质的测定
一、概述
（三）饲料卫生标准——强制性国家标准 对饲料中有独有害物质及有害微生物以法律形式做出的
统一规定。
1991年版《饲料卫生标准》：
覆盖面较小，造成许多事故纠纷无判定依据，一些
重要的产品卫生指标没有规定等。
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9 饲料中有毒有害物质的测定
一、概述
辣根过氧化物酶底物：邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基 联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS。用2mol/L硫酸终 止酶反应。
碱性磷酸酶底物：一般采用对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate, p-NPP)作为底物，用NaOH终止酶反应。
霉菌毒素、有机农药等。 无机：铅、砷、铬、镉、汞、氟、钼等。
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9 饲料中有毒有害物质的测定
二、饲料中总砷的测定（P248）
砷的毒性：砷与动物体组织中酶的巯基结合使之失活， 损害机体全身组织。
砷的氧化物毒性很高，三价砷毒性>五价；无机砷毒性 >有机砷：砒霜（As2O3 ）。
一般情况下，植物性饲料砷含量很低。 植物饲料中砷含量与土壤中的水平、农药污染和工业污
量标准为无机砷，造成了使用有机砷添加剂的配合料，含砷量超 过我国国家允许量标准，这也使得检测结果无法依据产品卫生标 准进行质量判定。
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9 饲料中有毒有害物质的测定
二、饲料中 总砷的测定
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二、饲料中黄曲霉毒素B1的测定
（一）概述
➢ 黄曲霉毒素（aflatoxins, AF）是由一组真菌（黄曲霉、曲霉等）产生的一 组化学结构类似的真菌毒素。主要污染花生、玉米、棉籽及其饼粕等。对 人和动物均具有极强的毒性和致癌性。黄曲霉毒素还可在动物产品中蓄积， 影响人体健康。
（三）饲料卫生标准——强制性国家标准
2001年新版GB13078－2001《饲料卫生标准》：
有害物质及微生物卫生指标项目增加了“铬”在皮革、蛋白粉和鸡、猪配合 饲料中的允许量指标。即由原标准规定的16项，修订为17项。
新版标准覆盖的产品品种达66种，是原标准的3倍多。 砷在磷酸盐产品中的允许量指标由每千克产品10毫克，修订为20毫克。 氟在磷酸氢钙产品中的允许量指标由每千克2000毫克，修订为1800毫克。 黄曲霉毒素B1指标将肉用仔鸡配合饲料分为前期料和后期料，其允许量分
新农药的不断出现（现行饲料卫生标准只规定了两种农药的限量标准：六 六六、滴滴涕）。敌敌畏 、敌百虫 、甲胺磷 、菊酯类 、马拉磷 、蚜螨磷安全 限量标准草案。
测定方法灵敏度的提高，对于某些有毒有害物质限量的规定将可能发生改 变。
新饲料资源的开发利用。
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9 饲料中有毒有害物质的测定
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0.1
1
10 n5g0/ml
不同温度条件下的标准曲线
O.D.
调零孔
阴性孔
0.1 ng/ml 0.5 ng/ml 1 ng/ml 5 ng/ml 10 ng/ml
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0.1
1
10 n5g1/ml
以相对吸光度值为纵坐标三种不同温度下的标准曲线 Y=A/A阴性孔
100%
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酶标抗原结合得越少，颜色越浅
阳性样品
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加入终止液，反应液由蓝色变成黄色， 上酶标仪读取数据，画标准曲线
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酶联免疫竞争法标准曲线
O.D.
调零孔
阴性孔
0.1 ng/ml 0.5 ng/ml 1 ng/ml 5 ng/ml 10 ng/ml
➢ 目前已分离鉴定出12种，包括B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q、H1、 GM、B2a和毒醇。其中黄曲霉毒B1最为多见，其毒性和致癌性也最强。
➢ 在自然条件下，饲料污染的黄曲霉毒素主要为AFB1、B2 、G1 、G2，其中 以AFB1含量最高。
➢ 黄曲霉毒素的毒性、致癌性和蓄积性——饲料产品质量控制中的必检项目。
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（4）竞争法测定抗原 A. 将抗体吸附在固相载体表面; B. 加入酶标抗原和待测抗原，竞争结合抗体； 对照只加入
酶标抗原；
C. 加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差＝未知抗原量。
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黄曲霉毒素B1酶联免疫竞争检测法
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黄曲霉毒素B1分子
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二、饲料中黄曲霉毒素B1的测定
酶联免疫吸附法
1、原理
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。 以待测抗原（或抗体）与酶标抗体（或抗原）的特异结合反应 为基础，通过酶活力测定来确定抗原（或抗体）含量。
特点： ➢ 很强的特异性：建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上。 ➢ 很高的灵敏度：酶催化反应。对于黄曲霉毒素B1，ELISA法 最低可检出0.1μg。
样品
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AFB1抗体
微孔表面情况
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标准品
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标准溶液
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酶标抗原
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酶标抗原
酶
AFB1
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标准品, 样品 和 酶标抗原 加进微孔
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先
样
品
加
样品
孔
后
加
酶标抗原
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显
色
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反 应孔
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阴性对照孔
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阴性对照孔=没有黄曲霉毒素B1分子与酶标抗原竞争 所有抗体都与酶标抗原结合
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阳性对照孔
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1 ng/ml 标准孔 = 黄曲霉毒素B1分子结合到抗体上 剩余的抗体再与酶标抗原结合
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标
先 加
标准品
准
孔
后
加
酶标抗原
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孵育30分钟 抗原与抗体结合
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微孔清洗
2/24/2021
37
洗涤5次，间隔2分钟
2/24/2021
加入酶催化反应底物
2/24/2021
39
加入反应底物A和B
孵 育 15 分 钟
2/24/2021
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9 饲料中有毒有害物质的测定
酶联免疫吸附法 B、酶与底物：
在ELISA中，常用的酶为辣根过氧化物酶 (horseradish peroxidase, HRP)和碱性磷酸酶 (alkaline phosohatase, AP)。在少数商品ELISA试剂中，应用的酶尚有 葡萄糖氧化酶、β-D-半乳糖苷酶和脲酶等。
调零孔
阴性孔
0.1 ng/ml 0.5 ng/ml 1 ng/ml 5 ng/ml 10 ng/ml
2/24/2021
50%
0.1
1
10 n5g2/ml
表1 公众对饲料质量重要性的认识的变化
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饲料中有毒有害物质的测定-课件
9 饲料中有毒有害物质的测定P244
一、概述
（一）饲料质量
营养质量：饲料营养成分含量； 技术质量：饲料的物理特性、如颗粒大小、形状、硬度、适口性
等、混合均匀度； 卫生（安全）质量：对动物、人和环境的安全； 情绪质量：伦理标准或感觉可影响对质量的讨论， 如有争议的动