Biolog方法与ECO板碳源
(新)微生物自动鉴定系统使用
BUG + M = BUG琼脂加 0.25%麦芽糖
• 革兰氏阴性菌524种(106个属）
• 革兰氏阳性菌341种(55个属）
• 厌氧菌361种(73个属）
• 酵母267种(52个属）
• 丝状真菌619种(106个属）
•
• •
独一无二的丝状真菌数据库，种类齐全，800多张 图片供用户参考； 数据库中植物病源菌种类齐全； 用户可生成自定义数据库；
•世界范围内16项专利
GN2 MicroPlate
GP2 MicroPlate
YT MicroPlate
Wells With Tels Without Tetrazolium Violet
AN MicroPlate
FF MicroPlate
Biolog微生物分析系统的型号
GP2 微孔鉴定板
GP2微孔板执行95种 离散的代谢测试，用 于鉴定和分析革兰氏 阳性好氧菌。目前的 这部分的数据库为 341种。 每个孔都进行一种独 特的基于四唑变化的 氧化还原反应。 鉴定过程无需加任何 其它试剂。
RESERVOIR 加样槽
V型加样槽用于方 便的吸取制备好的 菌悬液。
对于GP-COCCUS,GP-ROD，如果A1孔阳性，接种液中除加 疏基乙酸钠外，还需加水杨酸钠。
说明
氧化酶反应：判断细菌是否产氧化酶，其产生的氧离子与氧化酶 试剂(对盐酸四甲基对苯二胺或盐酸二甲基对苯二胺)反应生醌类物质 ，颜色变化为：粉红—紫色—蓝色—黑色。 TSI反应：用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。 该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖 的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量 酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性 产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧 化，所以仍保持黄色。 而发酵乳糖的细菌(E.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现 黄色。 如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基 酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚 铁沉淀。
采用Biolog法分析餐厨垃圾厌氧消化微生物群落多样性
采用Biolog法分析餐厨垃圾厌氧消化微生物群落多样性梅冰;彭绪亚;谢影【摘要】该研究在中温条件下进行实验室规模的连续式餐厨垃圾厌氧消化试验,用Biolog方法分析了反应器各个运行阶段污泥中微生物群落的多样性.多样性指数分析结果表明:反应器中各个阶段微生物物种丰富度和常见的物种接近,但均一性各阶段有较大的差异.ECO板上碳源的利用情况不同,表明反应器各个阶段微生物群落呈现出不同的微生物多样性.主成分分析结果显示,反应器在启动与稳定运行阶段微生物种群多样性较为接近,而与反应器抑制阶段和恢复阶段微生物种群多样性差异性明显.【期刊名称】《中国沼气》【年(卷),期】2016(034)001【总页数】5页(P14-18)【关键词】餐厨垃圾;微生物多样性;Biolog法;主成分分析;厌氧消化【作者】梅冰;彭绪亚;谢影【作者单位】云南农业大学云南农业大学节能减排检测工程中心,昆明650000;重庆大学,重庆400045;重庆大学,重庆400045【正文语种】中文【中图分类】S216.4;X705长期以来由于技术和管理手段的缺乏，我国餐厨垃圾未能得到有效处理，引发了一系列社会民生问题，同时也造成大量生物质资源的浪费。
为避免餐厨垃圾带来的公共卫生安全隐患，利用厌氧消化处理餐厨垃圾，并回收其中蕴含的丰富资源，已成为餐厨垃圾资源化的重要途径[1] 。
厌氧消化是一个复杂的过程包括一系列的微生物将有机物质转化为甲烷。
降解过程非常复杂，依赖于多种微生物维持系统平衡。
餐厨垃圾厌氧消化处理过程中，厌氧消化反应器内的微生物种群对有机成份的高效转化、反应器的稳定运行都有极为重要的影响。
因此，对餐厨垃圾厌氧消化反应器内微生物群落多样性进行研究，对于指导餐厨垃圾厌氧消化反应器的稳定运行具有十分重要的理论意义与工程应用价值。
Biolog最初被用于纯种微生物鉴定, 1991年Garland和Mills首次将该方法应用于土壤微生物多样性的研究[2]。
微生物多样性评估
微生物对碳源的利用能力则是表征环境微生物生长情况的主要指。
BIOLOG ECO微平板技术可以用于估价环境微生物群落代谢多样性和功能多样性的研究。
环境中物种多样性与物种的丰富度及均匀度相关，群落内组成的物种越丰富、均匀度越大，则该群落的多样性越高。
群落多样性和均匀度是间接反映群落结构和功能的重要特征，通过BIOLOG ECO微平板测定，可以反映出环境中微生物的群落多样性和均匀度，而这两种指数可以反映群落的稳定性和群落的组成结构，从而更好的反映环境微生态的状况。
科易公司为您提供专业的BIOLOG ECO微平板检测及分析技术用于环境微生物多样性研究，为您提供样品分析、检测及数据软件处理分析的服务，可提供主要包括
1、AWCD值测定（评判微生物群落对碳源利用的总的能力）
2、Shannon指数H’测定（用于评估丰富度）
3、Simpson指数D测定（用于评估优势度的指数）
4、Mcintosh指数U（基于群落物种多维空间距离的多样性指数）
5、主成分因子分析（PCA）测定（采取降维的方法，使用少数的相互无关的综合指标反映原统计数据中所包含的绝大多数信息）。
Biolog微生物鉴定系统在丝状真菌鉴定碳源同化方面的应用
菌进行分类。 1 1． 1 材料与方法 材料 试验所用 31 株具有较强抗菌和细胞毒活性的
真菌来源于课题组前期分离和初筛活性菌种保藏库。 Biolog 微生物鉴定系统 95 种不同碳源分别为： A111： 氨基半乳糖、 葡（ 萄） 糖胺、 甘露糖胺、 核糖醇、 苦 DLarabinos、 杏素、 树胶醛醣、 树胶醛醣、D阿拉伯糖、 杨梅 苷、 纤维二糖。 B112： αD环式糊精、 β环式糊精、 糊精、 赤藻糖醇、 果 D 半乳糖、 糖、 海藻糖、 半乳糖醛酸、 龙胆二糖、 葡（ 萄） 糖酸、 葡（ 萄） 糖胺、 α葡萄糖。 C112： 葡萄糖磷酸盐、 葡糖醛酰胺、 葡（ 萄） 糖醛酸、 丙三 Laculose、 醇、 糖原质、 纤维醇、 葡（ 萄） 糖酸、 乳糖、 麦芽糖醇、 麦芽糖、 麦芽三糖。 D112： DDD甘露醇、 甘露糖、 松三糖、 纤维素、 α甲基DDD半乳糖苷、 β甲基半乳糖苷、 α甲基配糖物、 β甲基DPalatinose、 DDL配糖物、 阿洛酮糖、 棉白糖、 鼠李糖。 E112： 核糖、 Sedoheptulosan、 DL柳醇、 山梨醇、 山梨糖、 DD水苏 （ 四） 糖、 蔗 糖、 塔 格 糖 （ 一 种 已 酮 糖） 、 海 藻 糖、 Turanose、 D木糖醇、 戊醛糖。 F112： γBromosuccinic acid、 氨基 － 丁酸、 反丁烯二酸、 pDβ羟基丁酸、 γ羟基丁酸、 羟苯基乙酸、 α戊二酸、 乳酸甲 LDL基酉旨、 乳酸、 苹果酸、 苹果酸、 金鸡纳酸。 G112： D糖酸、 癸二酸、 琥珀酰胺酸、 琥珀酸、 琥珀酸甲 NAlaninamide、 LL基酉旨、 乙酸谷氨酸、 丙氨酸、 丙氨酰甘氨 LLL酸、 天冬酰胺酸、 天（ 门） 冬氨酸、 谷氨酸。 H112： 甘氨酰谷氨酸、 LLL鸟氨酸、 苯基丙氨酸、 脯氨 LLL2酸、 焦谷氨酸、 丝氨酸、 苏氨酸、 氨基乙醇、 腐胺、 腺 苷、 尿（ 嘧啶核） 苷、 腺苷磷酸盐。 1． 2 方法 接种： 挑少许丝状真菌孢子在 ME 培养基上划 7 d。Biolog 系统浊度计调零： 调 于 25 28 ħ 下培养 5 线，
【国家自然科学基金】_biolog方法_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140731
科研热词 推荐指数 biolog 4 土壤微生物 2 黄瓜 1 魔芋 1 间栽 1 证实 1 细菌 1 红壤 1 碳源利用 1 生物强化技术 1 激活剂 1 梨芽枯 1 梨花枯 1 未培养微生物 1 数据处理 1 微生物群落 1 尖峰岭 1 基肥 1 土壤性质 1 可培养微生物 1 功能多样性 1 分子生态学技术 1 代谢功能多样性 1 rapd 1 pseudomonas syringae pv.syringae 1 biolog法 1
科研热词 biolog 杨树 五氯酚 魔芋 香蕉 降解动力学 防病效果 通径分析 血吸虫病 菌种鉴定 苯系物(btex) 苍术 耐低温 统计学关系 碳代谢 番茄青枯病生防菌 生长发育 生物肥 理化性质 环境微生物 温度胁迫 混菌 油田土壤 植被类型 根际微生物 株高 枯萎病 数据分析 挥发油 抗生素溶杆菌 微生物群落代谢活性 微生物群落代谢多样性 微生物生物量 微生物生态 微生物熵 微生物 定殖能力 多元统计 地径 土壤微生物群落 土壤微生物多样性 功能多样性 分类地位 biologeco-plate
53 54 55 56 57 58
2011年 科研热词 biolog方法 根际 土壤微生物群落 功能多样性 biolog 高温堆肥 降解菌 镰孢菌属 解钾率 虎榛子 聚类分析 群落结构 群落多样性 红壤 空间移位 秦岭 禾本科牧草 硅酸盐细菌 石油烃 疫霉菌属 生理生化 生物反应墙 油松 水解酶 森林凋落物 根际土壤 暖温带 施氮水平 微生物群落代谢 微生物群落 微生物区系 微生物功能多样性 形态学 宁南山区 大刀螳螂 地下水 土壤酶活性 土壤置换试验 土壤微生物功能多样性 固氮细菌 功能微生物 分类鉴定 农田黑土 内生真菌ifb-tl01 典型植物 代谢特性 二甲基二硫 中亚热带 simpson指数 shannon指数 pca分析 mcintosh指数 推荐指数 4 2 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
土壤微生物研究方法
第二节 土壤微生物的计数与分析
• 一、培养计数法
•
根据培养基上所生长微生物的数量来 估算土壤中微生物的数量的方法
（一）一般微生物的分离与计数
• 稀释平板法
• 最大或然数法（MPN稀释法） • 土粒法
• 稀释平板法：
•
用已知质量的土壤在适量的溶液中搅拌的时候，微生 物和土壤分离，这些分开的微生物细胞在营养琼脂平板上 生长成为分散的菌落，根据菌落数换算得单位重量土壤中 微生物的数量。土壤中微生物的数量很多，因此必须取少 量样品制成土壤悬液，然后稀释，使发育在培养皿中的菌 落可以很好地分散开
测定是微生物在与野外环境完全不同的溶液 中的代谢活性，因此，也不能确定它的结果能 否反映土壤区系的实际代谢情况；
二、土壤微生物结构多样性分析
• 磷脂脂肪酸法也称为PLEA法 • （phospholipid fatty acid 法）； • 磷酸脂肪酸是所有微生物细胞膜磷脂的组分，具有结构多 样性和较高的生物学特异性，用磷酸脂肪酸作为标记物来 研究鉴别土壤微生物群落结构多样性变化。
?土壤微生物细胞利用31种碳源进行代谢以代谢过程产生的酶与四唑类显色物质如种碳源进行代谢以代谢过程产生的酶与四唑类显色物质如ttctv发生颜色反应的浊度差异为基础运用独有的显性排列技术分析土壤微生物的代谢特征指纹图谱反映不同环境条件引起的土壤微生物群落变化发生颜色反应的浊度差异为基础运用独有的显性排列技术分析土壤微生物的代谢特征指纹图谱反映不同环境条件引起的土壤微生物群落变化?biolog测试板含有96个小孔除对照外其余孔内分别含有不同的有机碳源和一种指示剂通过接种菌悬液根据微生物对碳源利用时指示剂颜色变化差异来鉴定微生物群落功能多样性个小孔除对照外其余孔内分别含有不同的有机碳源和一种指示剂通过接种菌悬液根据微生物对碳源利用时指示剂颜色变化差异来鉴定微生物群落功能多样性该法优点?灵敏度高分辨力强?无需分离培养纯种微生物可以最大限度地保留微生物群落原有的代谢特征无需分离培养纯种微生物可以最大限度地保留微生物群落原有的代谢特征?测定简便数据读取与记录可以由计算机辅助完成测定简便数据读取与记录可以由计算机辅助完成?可以连续监测微生物的变化可批量分析该法缺点?特别依赖于群体生理活性不能监测休眠体也不能检测那些不能利用特别依赖于群体生理活性不能监测休眠体也不能检测那些不能利用biolog碳源底物的群体
Biolog
运 移途 径 一沉 降模 式 等方 面 ＿ Ｊ虽然 也 有 部 分 学 者 涉 及 过 城 市 土 壤 与 邻 近农 村 土 壤 ３ ，
在污 染物 等 方 面 的差异 性 比较 研 究 ＿ ， 目前 尚未 有 涉 及 过 从 农 村 土 壤 到 城 市 土壤 由于 ８ 但 Ｊ 生态 功 能 的转变 来 研究 城 市土 壤 与农 村 土壤 在微 生 物群 落结 构 方 面 的差 异性 以及 由此 导 致 的土壤 在 转化 有 机质 、 环 养分 功 能及 降低 污 染物 的土壤 毒性 功 能等 等 方面 。 循 Ｂｏ ｇ方法 是 通 过测 试微 生 物 对 单 一 能 源 碳 利 用 程 度 ， 反 映 微 生 物 群 体 水 平 的生 ｉｏ ｌ 来 理轮廓 Ｊ 。最 早 是 由 Ｇ ｒ ｎ 和 Ｍ ｌ 【 ］ 出 来 的 ， 于 测 定 微 生 物 群 落 的 功 能 多 样 ａ ａｄ ｌ ｉｓ ０提 ｌ１ 用 性 …ｊ但 近 年来 多用 于 污染 物 胁迫 下 的土 地利 用 和扰 动 对土 壤 微 生物 的影 响 研 究【 ， １ ２ ，
杨元根 Ｐｔ ｓｎＥ Ｃ ｍ ｂｌＣ ａ ｒ ２ ａ ｐｅ ２ ｅｏ ｌ
（ 中 国科 学 院地 球 化 学 研 究 所 ， 州 贵 阳 １ 贵 ５００ ） ５ ０２
（ Ｔ ｅ Ｍ ｃ ｕａ ａ ｄ Ｕ ｅ Ｒ ｓａｃ ｎｔｕｅ ｂ ｒｅｎ Ｋ，Ａ １ Ｑ ２ ｈ ａ ａ ｌ Ｌ ｎ ｓ ｅｅ ｒｈＩｓ ｔ ，Ａ ｅｄ ｅ ，Ｕ ｙ ｉｔ Ｂ ５８ Ｈ）
＊ 中 国科 学 院 王 宽 诚 留 学基 金 资 助
收 稿 日期 ：００—０ ２０ ８—０ ； 到修 改 稿 日期 ：０ ０ Ｏ一２ ８收 ２０ 一ｌ ０
维普资讯
４期
Biolog-Eco法检测尸体微生物群落的代谢功能变化
Biolog-Eco法检测尸体微生物群落的代谢功能变化江鑫钰;王江峰;朱光辉;马孟云;赖跃;周晖【摘要】目的检测死后不同时间尸体上微生物群落功能多样性的变化并评估其在死亡时间推断中的应用价值.方法采用Biolog-Eco微平板对野外实验中来自于死后0~240 h猪和人尸体的肛门拭子进行微生物群体的培养,监测其引起的光密度值变化,结合法医病理学及蝇类演替,观察自然腐败尸体微生物群落的代谢特性及其变化.结果微生物代谢功能多样性与蛆虫数量变化呈负相关关系.冷冻在0h对每孔颜色平均变化率影响最大,48 h后基本消失,192 h后尸体微生物群落多样性相对不稳定.主成分分析将31种碳源综合为5个主成分(累积贡献率>90%).碳源tsquare分析显示,N-乙酰-D-葡萄糖氨和L-丝氨酸是推断人和猪样品PMI(0~240 h)的优势碳源.结论 Biolog-Eco法能表现死亡后0~240 h尸体上微生物群落对部分碳源利用的代谢差异,有望为死亡时间推断提供新依据.%Objective To detect the changes of microbial community functional diversity of corpses with different postmortem interval(PMI)and to evaluate forensic application value for estimating PMI. Methods The cultivation of microbial community from the anal swabs of aSusscrofaand a human corpse placed in field environment from 0 to 240 h after death was performed using the Biolog-Eco Mi-croplate and the variations of the absorbance values were also monitored. Combined with the technology of forensic pathology and flies succession, the metabolic characteristics and changes of microbial commu-nity on the decomposed corpse under natural environment were also observed.Results The diversity of microbial metabolism function was found to be negatively correlated with the number of maggots in thecorpses. The freezing processing had the greatest impact on average well color development value at 0 h and the impact almost disappeared after 48 h. The diversity of microbial metabolism of the samples be-came relatively unstable after 192 h. The principal component analysis showed that 31 carbon sources could be consolidated for 5 principal components(accumulative contribution ratio >90%). The carbon source tsquare-analysis showed thatN-acetyl-D-glucosamine andL-serine were the dominant carbon sources for estimating the PMI(0=240 h)of theSusscrofaand human corpse.Conclusion The Biolog-Eco method can be used to reveal the metabolic differences of the carbon resources utilization of the microbial community on the corpses during 0-240 h after death, which could provide a new basis for estimating the PMI.【期刊名称】《法医学杂志》【年(卷),期】2016(032)003【总页数】6页(P171-175,179)【关键词】法医病理学;微生物学;代谢;Biolog生态板【作者】江鑫钰;王江峰;朱光辉;马孟云;赖跃;周晖【作者单位】汕头大学医学院,广东汕头 515041;苏州大学医学部法医学系,江苏苏州 215123;汕头大学医学院,广东汕头 515041;深圳市公安局刑警支队,广东深圳 518040;深圳市公安局刑警支队,广东深圳 518040;深圳市公安局刑警支队,广东深圳 518040【正文语种】中文【中图分类】DF795.1死亡时间（postmortem interval，PMI）推断一直是法医学领域重要的研究课题之一，法医学者已经从尸体现象、直肠温度变化、眼球玻璃体化学物质的变化、核酸的变化［1］、昆虫演替［2］等多角度进行了研究，但并没有促成该问题的完美解决。
生物炭对堆肥过程中微生物群落多样性及抗生素抗性基因的影响
基金项目资助情况●国家自然科学基金（41671474）●国家自然科学基金（41171203）●国家高技术研究发展计划（863计划）资助项目（2013AA102802）生物炭对堆肥过程中微生物群落多样性及抗生素抗性基因的影响摘要抗生素在规模化养殖业中的大量使用致使畜禽粪便成为重要的抗生素抗性基因（ARGs）贮存库，畜禽粪便会通过施肥方式进入到农田，ARGs会通过基因的水平转移在不同的微生物之间进行传播，这些ARGs对人类的健康构成了严重的威胁。
因此，在施肥之前将ARGs去除对于降低ARGs对人类健康威胁有着重要的意义。
本试验选取了一种比表面积较大的生物炭和使用抗生素频繁鸡的粪便作为研究对象，通过添加不同比例的生物炭与鸡粪、小麦秸秆混合堆肥。
分析理化性质、酶活性，以及微生物群落多样性的影响，然后进一步研究生物炭对ARGs丰度影响，及其影响ARGs的环境因素，得到的主要研究结果和结论如下：（1）所有处理的堆体温度50℃以上均维持5天（或以上），满足无害化处理和腐熟标准。
生物炭可增加高温期堆体温度，并有利于有机物的矿化。
生物炭在高温期显著增加了NH4+-N，并在堆肥结束时增加NO3–-N 16.7~69.0%。
堆肥结束后，与对照处理相比，添加生物炭的处理有效铜和有效锌分别降低 2.3%~13.0%，10.6%~24.2%。
生物炭在堆肥的前期对纤维素酶和脲酶活性均有促进作用，在堆肥结束时，这种作用有所减弱。
（2）通过Biolog方法分析表明，在堆肥高温期，添加生物炭的处理能显著增加高温期微生物活性，且随着添加比例的增加，微生物活性越高；在降温期生物炭比例过高（20%）时，对提高微生物活性不利；在腐熟期各处理间无显著差异。
添加高比例的生物炭（BC10和BC20）降低了高温期的微生物多样性。
主成分分析表明，添加生物炭改变了堆肥过程中微生物群落结构，BC10处理作用更为显著，起分异作用的碳源主要为糖类、氨基酸类及羧酸类。
吡虫啉对枸杞土壤微生物群落功能多样性的影响
吡虫啉对枸杞土壤微生物群落功能多样性的影响沙月霞【摘要】采用Biolog方法研究吡虫啉对枸杞土壤微生物群落功能多样性的影响.结果表明,吡虫啉3 000倍稀释液在施用后1d对土壤微生物群落功能多样性影响显著;在施用后3d对土壤微生物群落功能多样性的影响仍然十分明显,施用后5d开始减弱;即使极低浓度30 000倍稀释液的吡虫啉对枸杞土壤微生物群落多样性仍然会产生影响.施用吡虫啉后不同时间对枸杞土壤微生物群落功能多样性的影响大小为:施用后第1天＞第3天＞第5天＞第7天.施用吡虫啉后物种数量呈现增加趋势,个体数减少,Simpson指数无变化,Shannon指数、均匀度和Brillouin降低,未施药土壤和30 000倍稀释液处理的土壤McIntosh指数相同,3 000倍稀释液处理的McIntosh指数较低.【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2015(024)009【总页数】8页(P119-126)【关键词】吡虫啉;枸杞;土壤微生物群落;功能多样性;影响【作者】沙月霞【作者单位】宁夏植物病虫害防治重点实验室,宁夏农林科学院植物保护研究所,银川 750002;中国农业大学植物病理学系,农业部植物病理学重点实验室,北京100193【正文语种】中文【中图分类】Q938.1枸杞( Lycium barbarum L.) 属于茄科多年生落叶灌木，主要包括枸杞L.chinense Mill．和宁夏枸杞L.barbayum L.。
枸杞子具有抗氧化、抗衰老、调节免疫、降血糖、降血脂等多种功效，人工栽培发展很快 [1-2]。
20世纪 90 年代开始，吡虫啉(Imidacloprid)作为烟碱类农药是枸杞种植地区蚜虫的主要杀虫剂。
微生物群落在污染土壤的有机质分解和氮碳物质循环以及生物修复等方面扮演着非常重要的角色，因此，微生物群落功能多样性成为微生物多样性研究的重要因素[3-4]。
Biolog技术在污染土壤微生物多样性的研究中主要用来评价污染物对土壤微生物群落生态功能的影响，以及产生的生态毒理效应与土壤化学性质的关系。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
EcoPlateTM各区井中的碳源 A1空白 Water 水 一区 A2多碳糖 ß-Methyl-D-Glucoside ß-甲基D-葡萄糖苷 A3有机酸 D-Galactonic Acid y-Lactone D-半乳糖内酯 A4氨基酸 L-Arginine L-精氨酸 A1 Water 水 二区 A2 ß-Methyl-D-Glucoside ß-甲基D-葡萄糖苷 A3 D-Galactonc Acid y-Lactone D-半乳糖内酯 A4 L-Arginine L-精氨酸 A1 Water 水 三区 A2 ß-Methyl-D-Glucoside ß-甲基D-葡萄糖苷 A3 D-Galactonic Acid y-Lactone D-半乳糖内酯 A4 L-Arginine L-精氨酸
B1有机酸 Pyruvic Acid Methyl Ester 丙酮酸甲脂 B2多碳糖 D-Xylose D-木糖 B3有机酸 D-Galacturonic Acid D-半乳糖醛酸 B4氨基酸 L-Asparagine L-天冬酰胺酸 B1 Pyruvic Acid Methyl Ester 丙酮酸甲脂 B2 D-Xylose D-木糖 B3 D-Galacturonic Acid D-半乳糖醛酸 B4 L-Asparagine L-天冬酰胺酸 B1 Pyruvic Acid Methyl Ester 丙酮酸甲脂 B2 D-Xylose D-木糖 B3 D-Galacturonic Acid D-半乳糖醛酸 B4 L-Asparagine L-天冬酰胺酸
C1聚合物 Tween 40 吐温40 C2其他多元醇 I-Erythritol I-赤藻糖醇 C3有机酸 2-Hydroxy Benzoic Acid 2-羟苯甲酸 C4氨基酸 L-Phenylalanine L-苯基丙氨酸 C1 Tween 40 吐温40 C2 I-Erythritol I-赤藻糖醇 C3 2-Hydroxy Benzoic Acid 2-羟苯甲酸 C4 L-Phenylalanine L-苯基丙氨酸 C1 Tween 40 吐温40 C2 I-Erythritol I-赤藻糖醇 C3 2-Hydroxy Benzoic Acid 2-羟苯甲酸 C4 L-Phenylalanine L-苯基丙氨酸
D1聚合物 Tween 80 吐温80 D2其他多元醇 D-Mannitol D-甘露醇 D3有机酸 4-Hydroxy Benzoic Acid 4-羟基苯甲酸 D4氨基酸 L-Serine L-丝氨酸 D1 Tween 80 吐温80 D2 D-Mannitol D-甘露醇 D3 4-Hydroxy Benzoic Acid 4-羟基苯甲酸 D4 L-Serine L-丝氨酸 D1 Tween 80 吐温80 D2 D-Mannitol D-甘露醇 D3 4-Hydroxy Benzoic Acid 4-羟基苯甲酸 D4 L-Serine L-丝氨酸
E1聚合物 a-Cyclodextrin a-环式糊精 E2胺 N-Acetyl-D-Glucosamine N-乙酰基-D-葡萄胺 E3有机酸 y-Hydroxybutyric Acid y-羟基丁酸 E4氨基酸 L-Threonine L-苏氨酸 E1 a-Cyclodextrin a-环式糊精 E2 N-Acetyl-D-Glucosamine N-乙酰基-D-葡萄胺 E3 y-Hydroxybutyric Acid y-羟基丁酸 E4 L-Threonine L-苏氨酸 E1 a-Cyclodextrin a-环式糊精 E2 N-Acetyl-D-Glucosamine N-乙酰基-D-葡萄胺 E3 y-Hydroxybutyric Acid y-羟基丁酸 E4 L-Threonine L-苏氨酸 F1多碳糖 Glycogen 肝糖 F2胺酸 D-Glucosaminic Acid D-葡萄胺酸 F3有机酸 Itaconic Acid 衣康酸 F4氨基酸 Glycyl-L-Glutamic Acid 甘氨酰-L-谷氨酸 F1 Glycogen 肝糖 F2 D-Glucosaminic Acid D-葡萄胺酸 F3 Itaconic Acid 衣康酸 F4 Glycyl-L-Glutamic Acid 甘氨酰-L-谷氨酸 F1 Glycogen 肝糖 F2 D-Glucosaminic Acid D-葡萄胺酸 F3 Itaconic Acid 衣康酸 F4 Glycyl-L-Glutamic Acid 甘氨酰-L-谷氨酸
G1多碳糖 D-Cellobiose D-纤维二糖 G2其他 Glucose-1-Phosphate 葡萄糖-1-磷酸盐 G3有机酸 a-Ketobutyric Acid a-丁酮酸 G4胺 Phenylethyl-amine 苯乙基胺 G1 D-Cellobiose D-纤维二糖 G2 Glucose-1-Phosphate 葡萄糖-1-磷酸盐 G3 a-Ketobutyric Acid a-丁酮酸 G4 Phenylethyl-amine 苯乙基胺 G1 D-Cellobiose D-纤维二糖 G2 Glucose-1-Phosphate 葡萄糖-1-磷酸盐 G3 a-Ketobutyric Acid a-丁酮酸 G4 Phenylethyl-amine 苯乙基胺
H1多碳糖 a-D-Lactose a-D-乳糖 H2多元醇 D,L-a-Glycerol D,L-a-甘油 H3有机酸 D-Malic Acid D-苹果酸 H4胺 Putrescine 腐胺 H1 a-D-Lactose a-D-乳糖 H2 D,L-a-Glycerol D,L-a-甘油 H3 D-Malic Acid D-苹果酸 H4 Putrescine 腐胺 H1 a-D-Lactose a-D-乳糖 H2 D,L-a-Glycerol D,L-a-甘油 H3 D-Malic Acid D-苹果酸 H4 Putrescine 腐胺
1.4.3 统计试验 采用ＳＡＳ/ｐｃ统计分析系统(6.04版本)中的Ｐｒｏｃｃｌｕｓｔｅｒ,ＰｒｏｃＰｒｉｎｃｏｍｐ(ｆａｃｔｏｒ) 程序分别进行聚类、主成份(因子)分析;并采用Ｂｉｏｌｏｇ系统的Ｍｌｃｌｕｓｔ程序进行聚类分析.
表2.9 计算微生物群落多样性指数的公式 多样性指数 用途 公式 备注 Shannon多样性指数 评估丰富度和均度 H′=-∑pi （lnpi） Pi为第i孔的相对吸光值（C-R）与整个平板相对吸光值总和的比率 Shannon均匀度 通过Shannon指数计算出的均度 E= H′/lnS S为颜色变化的孔的数目 Simpson指数 评估某些最常见种的优势度指数 ((1))(1)niniDNN ni是第i孔的相对吸光值（C-R）； N是相对吸光值总和；Simpson指数用1/D表示 McIntosh指数 基于群落物种多维空间上的Euclidian距离的多样性指数 2()Uni 同上
McIntosh均匀度 由McIntosh指数计算得出的均匀度 /NUENNs 同上
2.2.4.6.1 BIOLOG GN微平板 BIOLOG GN微平板是一种多底物的96孔ELISA反应平板。除对照孔A1只装有四氮叠茂和一些营养物质外， 其余95孔作为反应孔还装有不同的单一碳底物。在进行ELISA反应时，各孔中的微生物利用碳底物，呼吸作用产生 NADH，引起四氮叠茂发生氧化还原变色反应用于检测(BIOLOG Inc,1993)。微生物对不同碳底物的利用情况可用反应 孔中的颜色变化来表示。通过对孔中颜色变化的光吸收值的测量，可获得较准确的信息。 2.2.4.6.2 操作步骤 参照Garland 和 Mills（1991）和杨永华等（2000）的方法，利用BIOLOG GN 微平板来研究不同微生物群落对 不同单一碳源利用能力（Sole-Carbon-Sourse Utilization,SCSU）的差异，以获得堆肥微生物群落结构和功能多样性 方面的信息。具体步骤如下： a. 加250mL 0.1mol/L磷酸缓冲液（K2HPO4/KH2PO4,pH7.0）于三角瓶中，灭菌;或用250ml 0.85%的NaCl生理盐溶液，灭菌。 b. 称相当于25g烘干重的新鲜堆肥，加入三角瓶中，封口（1：10提取液）; c. 摇床振荡1min后，冰浴1min，如此重复3次; d. 静置2min，取上清液3mL于已灭菌的50mL的三角瓶中，加入27mL无菌0.1moL/L磷酸缓冲液，稍加振荡（1：100提取液）; e. 重复步骤d, 直至稀释到每毫升稀释液大约3×104～4×104 个微生物; f. 将BIOLOG GN 微平板从冰箱内取出，预热到25℃; g. 用200 µL移液器将稀释液加到微平板孔中，每孔加150µ L。将加好样的BIOLOG GN 微平板在28℃ 条件下温育; h. 在温育过程中，每隔一定时间(24、48、72、96、120h)，用318-微平板读数器（318-microplate reader）在590nm处读数来 测定各孔吸光值（abs），凡吸光值大于0.25的井，则属于阳性反应。与对照井abs相减得负值的井，在统计分析时其反应定为零。 i.在实验过程中，应记录的数据为：吸光值（abs）、吸光值（abs）大于0.25的井数、呈阳性反应井对应的碳源类型。
2.3.2 生物多样性数据处理方法 堆肥微生物群落BIOLOG GN 微平板在温育过程中的平均每孔颜色变化率（Average well color development, AWCD）的计算方法 如下：AWCD值=[∑（C-R）]/95，其中C指各反应孔在578nm下测定的吸光值（OD578）， R是对照孔