微生物基本试验原理及操作教学文稿
微生物培养实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握微生物的纯系分离技术。
2. 掌握微生物的接种方法和培养技术。
3. 了解微生物在不同培养基上的生长特征。
二、实验原理微生物的纯系分离是指从混杂的微生物群体中分离出单一菌种的过程。
常用的分离方法有平板划线法、稀释涂布法等。
微生物的培养是指为微生物提供适宜的生长条件，使其能够繁殖和生长的过程。
培养基是微生物生长的营养来源，包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- 琼脂培养基（牛肉膏蛋白胨培养基）- 蒸馏水- 无菌接种环- 灭菌器- 培养皿- 显微镜- 移液器- 恒温培养箱2. 实验仪器：- 电子天平- 高压蒸汽灭菌器- 酶标仪- 离心机四、实验步骤1. 土壤样品的采集与处理- 采集土壤样品，放入无菌容器中。
- 将土壤样品与蒸馏水按1:10的比例混合，搅拌均匀。
2. 稀释涂布法分离微生物- 取适量的土壤样品稀释液，用无菌移液器吸取适量样品，均匀涂布在琼脂培养基平板上。
- 将平板倒置放入恒温培养箱中培养。
3. 平板划线法分离微生物- 取适量的土壤样品稀释液，用无菌接种环蘸取样品，在琼脂培养基平板上划线。
- 将平板倒置放入恒温培养箱中培养。
4. 观察和记录- 观察平板上生长的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
- 用无菌接种环挑取单个菌落，进行纯化培养。
5. 纯化培养- 将挑取的单个菌落接种到新的琼脂培养基平板上。
- 将平板倒置放入恒温培养箱中培养。
6. 观察和记录- 观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
- 将纯化后的菌落接种到液体培养基中，进行扩大培养。
7. 扩大培养- 将纯化后的菌液用无菌移液器移入无菌锥形瓶中。
- 加入适量的琼脂，搅拌均匀。
- 将锥形瓶放入高压蒸汽灭菌器中灭菌。
- 将灭菌后的锥形瓶冷却至室温，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
- 将锥形瓶放入恒温培养箱中培养。
8. 观察和记录- 观察扩大培养后的菌液，记录菌液的颜色、透明度等特征。
微生物实验教案实验
微生物实验教案实验一、实验目的：1.了解酵母菌的呼吸过程；2.学习使用显微镜观察微生物；3.培养学生的观察能力和实验操作能力。
二、实验材料：1.酵母菌培养液；2.盖玻片；3.种子盘；4.显微镜；5.显微镜玻璃片。
三、实验步骤：1.将适量的酵母菌培养液倒入种子盘中；2.在盖玻片上滴一滴酵母菌培养液；3.将盖玻片盖在种子盘中，使酵母菌培养液与空气充分接触；4.将培养好的酵母菌制备好的盖玻片放于显微镜上；5.用10倍的放大倍数观察盖玻片上的酵母菌。
四、实验原理：1.酵母菌是一种单细胞真菌，通过呼吸过程从有机物中释放出能量；2.酵母菌在呼吸的过程中，吸收氧气进行有机物分解，产生二氧化碳和水，释放出能量；3.在酵母菌呼吸过程中，可以观察到酵母菌的运动、分裂和部分内部细胞结构。
五、实验注意事项：1.操作时需注意实验室卫生，保持实验台面整洁；2.使用显微镜时，需小心操作，以免损坏仪器；3.为了观察更清晰的图像，可以调整显微镜的焦距和光亮度；4.实验结束后要清洗仪器，并将实验台面清理干净。
六、实验结果分析：1.通过显微镜观察可以看到酵母菌的细胞结构；2.可以观察到酵母菌的运动和分裂情况；3.在呼吸的过程中，可以观察到酵母菌释放出二氧化碳气泡。
七、实验延伸：1.可以通过样品的收集和培养，观察不同环境下酵母菌的生长情况；2.可以进行控制实验，比较不同实验条件下酵母菌的呼吸速率差异。
八、实验总结：通过本实验，我们了解了酵母菌的呼吸过程，并学习了使用显微镜观察微生物。
实验中我们观察到了酵母菌的运动、分裂和部分细胞结构。
通过这个实验，我们不仅培养了我们的观察能力和实验操作能力，同时也更加了解了微生物的基本特性。
微生物检验(完整版)
微生物检验(完整版)微生物检验是一种用于检测和鉴定微生物的方法，它在医学、食品安全、环境保护等领域都有着重要的应用价值。
微生物检验可以帮助人们了解微生物的种类、数量、分布以及对人类和环境的影响，从而采取相应的控制和预防措施。
本文将从微生物检验的基本原理、常见方法和应用领域等方面进行介绍。
一、微生物检验的基本原理。
微生物检验的基本原理是通过对样品中的微生物进行分离、培养、鉴定和计数，从而得到微生物的种类和数量。
其主要包括以下几个步骤：1. 取样，首先需要从待检样品中取得适当的样品，如食品、水、空气、土壤等。
取样的方法和条件需根据具体的检验要求和标准来确定。
2. 分离，将样品中的微生物分离出来，通常采用的方法有稀释涂布法、滤膜法、过滤法等。
分离出的微生物可以进行后续的培养和鉴定。
3. 培养，将分离出的微生物进行培养，提供适当的营养物质和环境条件，促使微生物的生长和繁殖。
培养的时间和温度等条件需根据不同的微生物种类来确定。
4. 鉴定，对培养出的微生物进行形态学、生理学和生物化学特性等方面的鉴定，确定其种属和数量。
常用的鉴定方法有显微镜观察、生化试验、分子生物学方法等。
5. 计数，对培养出的微生物进行计数，得到微生物的数量。
常用的计数方法有平板计数法、膜过滤法、涂片计数法等。
二、微生物检验的常见方法。
微生物检验的常见方法主要包括传统方法和现代方法两大类。
1. 传统方法，传统方法主要包括涂布法、滤膜法、过滤法、薄层法等。
这些方法简单易行，成本低廉，适用于一般的微生物检验需求。
但传统方法通常需要较长的培养周期，且对微生物的种类和数量有一定的限制。
2. 现代方法，现代方法主要包括PCR法、蛋白质质谱法、流式细胞术等。
这些方法具有高灵敏度、高特异性和高通量的特点，能够快速准确地检测和鉴定微生物。
但现代方法的设备和技术要求较高，成本较高，适用于对微生物检验有较高要求的领域。
三、微生物检验的应用领域。
微生物检验在医学、食品安全、环境保护等领域都有着重要的应用价值。
微生物实验报告范文
微生物实验报告范文一、实验目的1.了解微生物在日常生活中的广泛应用；2.探究微生物的生长特性和繁殖能力；3.学习一种简单的微生物染色技术；4.观察并研究微生物生态系统。
二、实验原理本实验采用常见的革兰氏染色法，革兰氏染色是细菌分离鉴定的重要方法之一、此方法能将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类，从而对细菌种类和数量进行初步分析。
三、实验器材和药品器材：培养基、恒温箱、显微镜、移液器、架子、微观移液棒、塑料杯、锡纸；药品：蓝尼罗红、革兰氏染色药液（碘液、乙醇、碱性溶液、脱脂牛奶）。
四、实验步骤1.选取培养基，将固体培养基倒入塑料杯中；2.加入足够的蓝尼罗红；3.使用移液器将所需的微生物液滴于培养基上；4.用移液器挖取适量的微生物液，均匀滴到培养基上并轻轻摇晃使其均匀分布；5.将杯子放入恒温箱中，以适合微生物生长的温度进行培养；6.观察培养基上的微生物生长情况，进行观察和记录；7.观察菌落特征，进行革兰氏染色。
五、实验结果和讨论通过实验观察，我们发现微生物在培养基上生长迅速。
菌落在培养基上形成并逐渐扩大，最终形成肉眼可见的结构。
通过革兰氏染色，我们能辨别出革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色能够将革兰氏阳性菌染色为紫色，而革兰氏阴性菌则被染色为红色。
通过观察染色后的微生物，我们可以从中获得有关细菌种类和数量的信息。
在实验中还观察了微生物的生态系统。
我们发现不同微生物在培养基上的生长速率和菌落形状各异，这可能是由于不同的细菌种类或菌株之间的差异造成的。
六、实验结论通过本次实验，我们了解了微生物在日常生活中的广泛应用，增加了对微生物的认识。
革兰氏染色技术的运用使我们能够进一步了解细菌的种类和数量。
同时，我们还观察并研究了微生物生态系统，发现微生物的生长速率和形态特征有一定差异。
七、实验中的注意事项1.在进行微生物培养实验时，要保持操作环境的清洁，避免细菌污染；2.实验过程中需要严格控制温度；3.在染色过程中，应注意使用染色药液的顺序和浓度。
平板菌落计数法操作步骤（精）教学文稿
平板菌落计数法操作步骤（精）教学⽂稿平板菌落计数法操作步骤（精）平板菌落计数法⼀、⽬的要求学习平板菌落计数的基本原理和⽅法。
⼆、基本原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微⽣物充分分散为单个细胞，取⼀定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞⽣长繁殖⽽形成的⾁眼可见的菌落，即⼀个单菌落应代表原样品中的⼀个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的⼀个单菌落也可能来⾃样品中的2~3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
现在常使⽤菌落形成单位。
该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养⼀段时间才能取得，⽽且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数⽅法最⼤的优点是可以获得活菌的信息，所以被⼴泛⽤于⽣物制品检验，以及⾷品、饮料和⽔等含菌指数或污染度的检测。
三、器材⼤肠杆菌悬液，LB琼脂培养基，1mL 5mL⽆菌吸管，⽆菌平⽫，⽆菌⽔，⽆菌试管，试管架和记号笔等。
四、操作步骤1、编号取⽆菌平⽫9套，分别标明为10-4、10-5、10-6各三套，另取6⽀⽆菌试管分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2、稀释⽤1mL⽆菌吸管吸取1mL已充分混匀的⼤肠杆菌菌悬液，精确地放0.5mL⾄10-1的试管中，此即为10倍稀释，将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1试管充分振荡、混匀。
另取⼀⽀1ml吸管插⼊10-1试管中来回吹吸菌液三次，进⼀步将菌体分散、混匀。
动作不要太猛太快，吸时插⼊，吹时提出，再⽤此吸管吸取10-1菌液1mL精确地放0.5mL⾄10-2试管中，此即为100倍稀释，依次类推，3、取样⽤三⽀1ml⽆菌吸定分别吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌悬液各1mL对号放⼊编好号的⽆菌平⽫中，每个平⽫放0.2mL4、倒平板尽快向上述盛有不同稀释菌液的平⽫中倒⼊融化后冷却⾄45度的LB培养基约15-20ml，置⽔平位置迅速旋动平⽫，使培养基与菌液混合均匀。
微生物实训课实验报告
一、实验目的1. 熟悉微生物实验室的基本操作规程和安全知识。
2. 掌握微生物分离纯化的基本方法，包括平板划线法和稀释涂布平板法。
3. 学会观察和识别不同微生物的菌落特征。
4. 了解微生物的培养方法和培养基的配制。
二、实验原理微生物分离纯化的基本原理是利用微生物在生长过程中对营养、氧气、温度等环境条件的需求差异，通过选择合适的培养基和分离方法，使混合微生物中的某一类微生物获得纯化。
平板划线法是将微生物在固体培养基表面划线，使微生物在培养基表面逐渐稀释，最终获得单菌落。
稀释涂布平板法是将微生物稀释液均匀涂布在固体培养基表面，使微生物在培养基表面形成单菌落。
三、实验材料与仪器材料：1. 菌种：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌2. 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、营养琼脂培养基3. 稀释液：无菌生理盐水4. 工具：无菌镊子、无菌滴管、酒精灯、培养皿、平板划线器、显微镜等仪器：1. 培养箱2. 显微镜3. 灭菌器四、实验步骤1. 平板划线法：a. 将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于牛肉膏蛋白胨培养基平板上。
b. 用无菌镊子取一端菌液，在平板表面划线，依次划三横三纵，使菌液逐渐稀释。
c. 将平板倒置，放入培养箱中，37℃培养24小时。
d. 观察菌落特征，记录菌落形状、大小、颜色等。
2. 稀释涂布平板法：a. 将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌分别接种于无菌生理盐水中，制成10^-3、10^-5、10^-7等不同浓度的稀释液。
b. 取适量稀释液，用无菌滴管均匀涂布在营养琼脂培养基平板上。
c. 将平板倒置，放入培养箱中，37℃培养24小时。
d. 观察菌落特征，记录菌落形状、大小、颜色等。
3. 显微镜观察：a. 将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的菌落分别挑取少量，制成悬液。
b. 将悬液滴于载玻片上，加盖玻片。
c. 在显微镜下观察细菌的形态、大小、排列等特征。
五、实验结果与分析1. 平板划线法：a. 金黄色葡萄球菌菌落呈金黄色，表面光滑，边缘整齐。
微生物的实验
微生物的实验实验一油镜的使用方法与革兰氏染色实验目的:掌握油镜的使用方法与革兰氏染色的方法实验原理: 革兰染色法⑴革兰阳性菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入；革兰阴性菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，脂质含量多，乙醇易透入。
⑵革兰阳性菌等电点（pI 2~3）比革兰阴性菌（pI 4~5）低，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带负电荷比革兰阴性菌多，故与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。
⑶革兰阳性菌菌体含大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫牢固结合，使已着色的细菌不被乙醇脱色；革兰阴性菌含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色。
实验步骤: 1.涂片取洁净载玻片1张，用接种环取1～2环生理盐水放于载玻片上，用灭菌的接种环在固体培养基上挑取少许细菌与盐水混合，涂布成直径１cm左右的菌膜（可视挑取菌落的多少涂片范围相应变化）。
若采用液体培养物，可直接取1～2环菌液涂布。
接种环须经火焰灭菌方可放回原处，以免造成污染。
2.干燥涂片最好在室温中自然干燥，或将标本接种面向上，置酒精灯火焰高处慢慢烘干，切勿在火焰上烤。
3.固定干燥后的标本面向上迅速通过火焰3次，这样既可杀菌，又能将细菌固定在玻片上，以免玻片上细菌在染色过程中被水冲洗掉。
2.染色(1)初染：滴加结晶紫染液2～3滴于涂布细菌处，覆盖菌膜，1min后以细水漫过轻洗，将积水甩干。
(2)媒染：滴加卢戈碘液同上，1min后水洗，并将标本片上的积水甩净。
(3)脱色：加95%乙醇数滴于标本片上，轻轻摇晃数秒，斜持玻片使乙醇流掉，再滴加乙醇直至无紫色脱下为止（约30s，灵活掌握时间），细水冲洗，甩干。
(4)复染：滴加石炭酸复红染液，30s～1min后水洗，用吸水纸吸去积水。
3. 镜检用油镜观察，并判断细菌的染色性。
记录实验结果。
4.实验后处理擦干油镜镜头，整理、清洁显微镜，把显微镜放回原处，把标本片放入消毒缸中。
注意事项: 1.标本片涂的太薄或太厚，菌体分散布不均匀，都可影响染色结果。
微生物学实验教案
微生物学实验教案第一篇：微生物学实验教案实验一显微镜的构造和使用方法一、实验目的及要求1.了解显微镜的构造和性能2.掌握显微镜的正确使用和维护方法二、原理微生物最显著的特点是个体微小，必须借助显微镜才能观察它们的个体形态和细胞构造，熟悉显微镜和掌握其操作技术是研究微生物不可缺少的手段。
本实验主要介绍目前微生物学研究中最常用的普通光学显微镜的结构和使用方法，目的在于使同学们通过本实验，对光学显微镜有比较全面的了解，并重点掌握明视野普通光学显微镜中油镜的使用。
三、显微镜的构造和性能1.构造（1）机械系统：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、推进器、调节螺旋。
（2）光学系统：目镜、物镜、聚光器、反光镜、滤光片。
2.性能（1）分辨力和数值孔径分辨力用D表示，D=0.5×(λ/N.A)N.A=n×Sin(α/2)N.A为数值孔径；λ为入射光波长；n为介质折射率。
α为镜口角。
（2）放大倍数放大倍数 = 物镜的放大倍数×目镜的放大倍数四、实验器材显微镜、标本、擦镜纸、香柏油、二甲苯五、显微镜的使用方法1、对光：光强时用平面镜，光弱时用凹面镜，视野明亮即可。
2、镜检：低倍镜——定位；高倍镜——观察；油镜——观察3、镜检完毕后的工作：擦拭镜头（标本）等，还原显微镜，登记，洗手，离开。
4、总流程：安装—调光源—调目镜—调聚光器—镜检—擦镜头——复原—登记。
六、作业（可选）1、哪些方法可以提高显微镜的分辨率？2、2、为什么有时候在低倍镜下可看到的目标，换用高倍镜则无法看到？实验二细菌、放线菌的形态观察一、实验目的及要求1.掌握细菌的制片和染色技术2.掌握放线菌形态观察方法3.熟练油镜的使用方法二、细菌染色的基本原理 1.革兰氏染色G＋与G－细胞壁结构不同，当用结晶紫初染后，像简单染色法一样，所有细菌都被染成兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘的复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。
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各种酶类试验
过氧化氢酶（触酶）试验 氧化酶试验 血浆凝固酶试验 硝酸盐还原试验 胆汁溶解试验 环腺苷酸（cAMP）试验
过氧化氢酶（触酶）试验
原理：有些细菌具有过 氧化氢酶，能将过氧化 氢酶分解为水。
试剂：3%过氧化氢溶液。
方法：①玻片法：用牙签挑取 18～24小时培养的菌苔，置于 洁净的玻片上，滴加3%过氧化 氢溶液1～2滴。②试管法：取 不含血液的18～24小时培养物 一接种环于试管内，加入1ml 3%过氧化氢溶液。3%过氧化氢 溶液应置于棕色瓶内冷藏。
胆汁七叶苷试验
原理：在10-14%胆汁存 在下，测定细菌水解葡 萄糖苷七叶苷为七叶亭 和葡萄糖的能力。
胆汁七叶苷培养基成分
蛋白胨 5g
牛肉浸膏 3g
牛胆汁（胆汁）40g
七叶苷 1g
柠檬酸铁 0.5g
琼脂
15g
蒸馏水 1000ml
结果：培养基变为黑色或 深褐色为阳性。有生长物 时，并不表示七叶苷裂解， 仅表示胆汁浓度不能抑制D 群链球菌外的细菌生长。
结果
代谢类型 发酵型 氧化型 产碱型
加蜡封口管 开放管
产酸
产酸
不变色
产酸
不变色
不变色
糖醇发酵试验
原理：各种细菌因含有发酵不同 糖、醇类的酶，所以分解糖、醇 类的能力各不相同。分解糖、醇 类后产生的代谢产物可因菌种不 同而异，有的产酸、产气，有的 仅产酸，故用于鉴别细菌。
糖、醇类试验培养基成分
结果：产生大量气泡为 阳性，不产生气泡为阴 性。
血浆凝固酶试验
原理：凝固酶能凝固血浆纤维蛋 白，是鉴定金黄色葡萄球菌的主 要试验。本试验分玻片法和试管 法，玻片法主要是检测结合凝固 酶，试管法是为了肯定玻片法试 验结果和对玻片法试验阴性者进 行复查，检测游离凝固酶。
Hugh-Leifson二氏培养基（O-
F培养基）成分
蛋白胨 2g
磷酸氢2钾0.3克
氯化钠 5g
葡萄糖 10g
0.2%溴麝香酚蓝溶液 12ml
琼脂
2.5g
蒸馏水 1000ml
方 法 ： 将 待 检 菌 接 种 于 二 支 Hugh-Leifson 培 养 基 的 试 管 中 ，
均用接种针穿至管底，其中五支 加入灭菌的液体石蜡约1厘米厚。 35，培养48小时观察结果。培养 基颜色变黄即为产酸。
方 法 ： 接 种 大 量 待 检 菌 于 培养基内，35，24-48小时， 0.5ml培养基加班氏试剂3滴
左右，加热煮沸后观察结 果。
葡萄糖酸盐蛋白胨肉汤成分
蛋白胨 0.15g 酵母浸膏 0.1g 磷酸二氢钾 0.1g 葡萄糖酸钾（或钠）4g 蒸馏水 100ml
结果：出现黄色到橙 红色沉淀为阳性，无 颜色变化为阴性。
西蒙氏柠檬酸盐培养基成分
MgSO4-7H2O 0.2g
NH4H2PO4 1g
K2HPO4
1g
柠檬酸钠
5g
氯化钠
5g
琼脂
20g
0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40ml
蒸馏水
1000ml
结果：阳性者表面上 长有菌落，培养基 变为蓝色。
葡萄糖酸盐试验
原 理 ： 检 查 细 菌 是 否 具 有 氧化葡萄糖作为唯一碳源， 并具有还原2-酮基葡萄糖酸 盐与班氏试剂混合加热生 成黄红色酮类的能力。
微生物基本试验原理及操作
微生物基本试验
碳源和氮源利用试验 碳水化合物的代谢试验 各种酶类试验 氨基酸和蛋白质代谢试验
碳源和氮源利用试验
柠檬酸盐试验 葡萄糖酸盐试验
柠檬酸盐试验
原理：有些细菌能利用柠檬酸盐 作为唯一碳源，分解柠檬酸钠生 成碳酸钠，使培养基呈碱性。能 利用柠檬酸盐作唯一碳源的细菌， 也能利用铵盐作为唯一氮源，铵 盐被分解为氨而产生碱性。
原理：有的细菌可产生B-半乳糖 苷酶，此酶可分解邻-硝基酚-BD- 半 乳 糖 苷 （ ONPG）。ONPG 为无色，经B-半乳糖苷酶水解后， 可产生黄色的邻硝基酚，即使浓 度很低也能检出。
结果
呈 现 黄 色 为 阳 性 反 应 。 迅 速 及迟缓分解乳糖的细菌ONPG 试验为阳性，本试验可作为 迟缓发酵乳糖菌株的快速鉴 定方法。
碳水化合物的代谢试验
氧化-发酵试验（OF试验） 糖醇发酵试验 B—半乳糖苷酶试验（ONPG试验） 甲基红试验 VP试验 胆汁：细菌在分解葡萄糖的过 程中，必须有分子氧参加的称 为氧化型；在无氧条件下降解 葡萄糖的称为发酵型；不分解 葡萄糖的细菌称为产碱型。利 用此试验可以区别细菌的代谢 类型。
蛋白胨水或肉膏汤 100ml 所需的糖、醇或苷类 0.5或1g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 0.1ml
结果
接种的细菌，若能耐分解培 养基中的糖类产酸时，则使 培养基中的指示剂呈酸性反 应。若产气可使半固体培养 基内或液体培养基中的倒管 内出现气泡。若不分解则无 变化。
B—半乳糖苷酶试验（ONPG 试验）
试剂：甲液：6%a-萘酚乙醇溶液
乙液：40%氢氧化钾溶液
方法：将被检菌接种葡萄糖 蛋白胨水培养基后，于35培 养48小时，于2ml培养基内 加入甲液1ml和乙液0.4ml， 振摇后观察结果。
结果：于数分钟内呈红
色为阳性；如无红色出 现，而且于35℃中4小时
后仍如故者即为阴性。 本试验较为敏感。
甲基红试验
原理：某些细菌在糖代谢过程中， 分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸 可进一步被分解为甲酸、乙酸、 乳酸等，而使培养基的pH下降至 4.5以下，加入甲基红指示剂出现 红色（阳性）。
甲基红试验
原理：有些细菌分解葡萄糖产酸 量少，或产生的酸进一步转化为 其它物质（如醇、酮、醛、气体 和水），则培养基的酸碱度仍在 6.2以上，故加入甲基红指示剂呈 黄色（阴性）。
葡萄糖蛋白胨水培养基成分
多价蛋白胨 7g
葡萄糖
5g
磷酸氢二钾 5g
蒸馏水
1000ml
方法：被检菌接种于上 述培养基内，于35℃培 养48小时，于2ml培养液 内加甲基红指示剂2滴， 立即观察结果。
结果：红色为阳性；桔 红色为弱阳性；黄色为 阴性。
VP试验
原理：有些细菌在葡萄糖的代谢过 程中生成丙酮酸，丙酮酸进一步脱 羧后可产生乙酰甲基甲醇。乙酰甲 基甲醇在碱性溶液中被空气的氧氧 化为二乙酰（丁二酮），进而与培 养基内蛋白胨中的精氨酸所含的胍 基发生反应，生成红色化合物，即 VP反应阳性。培养基中的胍基太少 时，加入少量含胍基的化合物，如 肌酸或肌酸酐等，可加速此反应。