防腐剂的测定山梨酸苯甲酸
火腿肠中苯甲酸和山梨酸的高效液相检测方法 江苏上海液相色谱仪
火腿肠中苯甲酸和山梨酸的高效液相检测方法一、简介火腿肠是深受广大消费者欢迎的肉类食品,我国已出台并在2007年6月1日实施《火腿肠》国家标准(GB/T2012-2006)，标准规定了根据原料不同又有“鸡肉肠”、“鱼肉肠”、“牛肉肠”等品种。
为防止食品变质，生产厂家常在火腿肠中加入防腐剂。
我国目前常用食品防腐剂主要有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐为主。
防腐剂可以抑制和杀灭微生物，但过量和超范围使用会破坏食品中维生素、加重人体肝脏负担并引起毒性反应。
国标GB2760-1996《食品添加剂使用卫生标准》中规定火腿肠类肉制品食品中苯甲酸不得检出，山梨酸及其钾盐(以山梨酸计)不得超过0.075g/kg。
在日常检测工作中仍可在火腿肠样品中检出苯甲酸和超标加入的山梨酸。
火腿肠中苯甲酸和山梨酸的测定样品处理方法，在国标GB/T5009. 29 - 2003中苯甲酸、山梨酸测定的液相色谱法中，只规定了饮料和配制酒样品处理方法,其它样品处理没有提及。
火腿肠食品中含高蛋白、高脂肪及淀粉等基质成份较多,并且苯甲酸、山梨酸具有脂溶性的性质决定了样品处理的复杂性。
南京科捷针对火腿肠食品特点，对液相色谱法测定火腿肠中苯甲酸、山梨酸的样品处理方法进行了改进和研究，建立了有效的高效液相色谱法测定火腿肠食品中防腐剂含量的样品处理方法。
LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪配置LC-10Tvp高压恒流泵：2台SPD-10Tvp紫外检测器：1台SCL-10Tvp 系统控制器：1台7725i手动进样阀：1套色谱工作站：1套（VI2010、N2000、N3000选用）液相色谱柱：1支（C18 4.6*250mn,5um）微量进样器：1支（50ul/100ul）进样支架：1只（进样阀用）三、LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪特点LC-10Tvp梯度高效液相色谱仪是南京科捷分析仪器有限公司为了快速地满足多样化的客户需求，在原有的STI501液相色谱仪的基础上经过优化，利用美国先进技术开发设计，国内加工生产的的一款新型的液相色谱仪。
HPLC法测定牛奶中山梨酸苯甲酸的含量-普源精仪
RIGOL 应用技术文档2016版 RIGOL SCIENTIFIC, INC. 第1页，共2页HPLC 法测定牛奶中山梨酸、苯甲酸的含量摘要：山梨酸是国际粮农组织和卫生组织推荐的高效安全的防腐保鲜剂，广泛应用于食品、饮料、烟草、农药、化妆品等行业，作为不饱和酸,也可用于树脂、香料和橡胶工业。
苯甲酸为消毒防腐剂，具有抗细菌作用，通常在低pH 值下效果较好，将 0.05—0.1％浓度加入药品制剂或食品作防腐剂，可阻抑细菌和真菌生长。
食品中添加的山梨酸、苯甲酸若超标严重，在一定程度上会抑制骨骼生长，危害肾、肝脏的健康。
本文应用RIGOL L-3000高效液相色谱系统，以食品安全国家标准GB 21703—2010指定的高效液相法测定山梨酸，苯甲酸含量，获得了理想的分析结果，方法验证实验表明，RIGOL L-3000高效液相色谱系统完全符合国标规定的各项要求，数据结果准确，重现性良好。
关键词：牛奶，山梨酸，苯甲酸，C18色谱柱，高效液相色谱 色谱条件及谱图：仪器：RIGOL L-3000高效液相色谱仪 色谱柱：Agela XBP C18(2), 5um, 4.6×250 mm柱温：25℃ 流动相：A ：磷酸盐缓冲溶液(2.5gKH2PO4+2.5gK2HPO4溶于1L 水中）B: 甲醇 A : B = 1 : 9 检测波长：227nm流速：1.0mL/min进样体积：10μL图1. 山梨酸、苯甲酸对照品的色谱图图2. 牛奶样品的色谱图结论：本文根据食品安全国家标准GB 21703—2010乳和乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定方法，对伊利液奶样品进行含量测定及定性定量重复性，加标回收率等方法学验证。
借以验证RIGOL L-3000高效液相系统在苯甲酸、山梨酸测定方面的性能。
国标方法要求，在重复性条件下所获两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。
本实验结果表明，采用RIGOL L-3000高效液相系统进行乳和乳制品中苯甲酸和山梨酸的测定，能完全满足中华人民共和国食品安全国家标准要求，方法准确、灵敏。
高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量
分析检测高效液相色谱法测定山梨酸、苯甲酸含量字琴江1，杨 冲1，王 瑾2，左李美3，赵 芳1，罗桂槐1（1.洱源县检验检测院，云南洱源 671200；2.云南农业职业技术学院，云南昆明650031；3.昆明市城市排水监测站，云南昆明 650118）摘 要：本文采用高效液相色谱法对橙汁中的防腐剂山梨酸、苯甲酸含量进行测定，对方法的线性、加标回收率、精密度进行验证。
结果显示，山梨酸和苯甲酸浓度与峰面积在0.5～20.0 mg/L呈良好的线性关系，相关系数为0.999 6，样品的加标回收率为93.60%～95.90%，RSD为0.97%~1.96%。
该方法能准确测定橙汁中的防腐剂山梨酸和苯甲酸，且操作简单、准确度高，适用于大多数检测机构。
关键词：山梨酸；苯甲酸；高效液相色谱Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid by HPLC ZI Qinjiang1, YANG Chong1, WANG Jin2, ZUO Limei3, ZHAO Fang1, LUO Guihuai1(1.Eryuan County Inspection and Testing Institute, Eryuan 671200, China; 2.Yunnan V ocational and Techical College of Agriculture, Kunming 650031, China; 3.Kunming City Drainage Monitoring Station, Kunming650118, China)Abstract: In this paper, determination sorbic acid and benzoic acid in orange juice by high performance liquid chromatography (HPLC), and the linearity, recovery rate and precision of the method were verified. The results show that there is a good linear relationship between the concentration of 0.5～20.0 mg/L, and the correlation coefficient is 0.999 6, the recovery rate of the samples is between 93.60%～95.90%, and the relative standard deviation (RSD) ranged from 0.97%～1.96%. This method is suitable for accuracition of determination of the content of benzoic acid and sorbic acid in orange juice, which showed great prospect most institutions.Keywords: sorbic acid; benzoic acid; high performance liquid chromatography近年来，随着食品工业的快速发展，食品添加剂已被广泛应用于食品加工、储存中，防腐剂能抑制微生物繁殖，延长食品的保质期，防止食物变质、腐败，防腐剂的出现给人们生活带来极大便利[1]。
山梨酸苯甲酸
1.甜味剂的测定（糖精钠） 2.防腐剂的测定（山梨酸、苯甲酸） 3.发色剂的测定（亚硝酸盐、硝酸盐） 4.漂白剂的测定（二氧化硫及亚硫酸盐） 5.抗氧化剂的测定（BHA、BHT） 6.合成着色剂的测定
食品添加剂定义： 所谓食品添加剂是指在食品生产、加工或贮存过 程中，添加进去的天然或化学合成的物质。对食 品的色、香、味或质量起到一定的作用，本身不 作为食用目的，也不一定具有营养价值。 特点：无营养性 功能：保持食品营养、防止腐败变质，增强食品 感官性状、满足加工工艺要求，提高食品 质量。
食品添加剂的检测内容
食品添加剂的检测除已列入国家标准的 品种外，不断有新的品种、新的卫生标准出 现。随着技术的进步，许多快速的新检测方 法也相继出现。 1.甜味剂的测定（糖精钠） 2.防腐剂的测定（山梨酸、苯甲酸） 3.发色剂的测定（亚硝酸盐、硝酸盐） 4.漂白剂的测定（二氧化硫及亚硫酸盐） 5.抗氧化剂的测定（BHA、BHT） 6.合成着色剂的测定
（2) 按食品添加剂的功能、用途划分，各国分类 不尽相同，我国《食品添加剂使用卫生标准》 将其分为22大类：甜味剂、抗氧化剂、防腐剂、 着色剂、护色剂、香精香料、酸度调节剂、抗 结剂、消泡剂、漂白剂、膨胀剂、胶姆糖基础 剂、乳化剂、酶制剂、增味剂、面粉处理剂、 被膜剂、水分保持剂、营养强化剂、稳定剂和 凝固剂、增稠剂和其他类添加剂。
6.3.3气相色谱法测定山梨酸、苯甲酸 测定原理
（1）气相色谱原理： 气相色谱法是采用惰性气体为流动相（称为载气）的一 种色谱法。即载气载着“气化”的试样，通过色谱柱中 的固定相，使试样中各组分分离，并先后从柱中流出。 其检测流程：被测样品被气化后，在流速保持一定的惰 性气体的带动下，进入填有固定相的色谱柱。在色谱柱 中样品被分离成一个个单一组分，并以一定的次序从色 谱柱中流出，进入检测器，转变为电信号，再经放大后 由记录仪记录下来并进行数据处理。
食品中山梨酸苯甲酸含量的测定方法
食品中山梨酸苯甲酸含量的测定方法本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸苯甲酸含量的测定方法。
本标准适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸苯甲酸含量的测定。
最低检出浓度：气相色谱法最低检出量为1 g，用于色谱分析的样品为1g时，最低检出浓度为1mg/kg。
第一篇气相色谱法2 原理样品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。
3 试剂3.1 乙醚：不含过氧化物。
3.2 石油醚：沸程30～60℃。
3.3 盐酸。
3.4 无水硫酸钠。
3.5 盐酸1+1：取100mL盐酸，加水稀释至200mL。
3.6 氯化钠酸性溶液40g/L：于氯化钠溶液40g/L中加少量盐酸1+1酸化。
3.7山梨酸、苯甲酸标准溶液：准确称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚 **3+1混合溶剂溶解后并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸或苯甲酸。
3.8山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油醚-**3+1混合溶剂稀释至每毫升相当于50，100，150，200，250mg山梨酸或苯甲酸。
4 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。
5 分析步骤5.1 样品提取称取2.50g事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸1+1酸化，用15，10mL**提取两次，每次振摇1min，将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中。
合并**提取液。
用3mL氯化钠酸性溶液40g/L洗涤两次，静止15min，用滴管将**层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。
加乙醚至刻度，混匀。
准确吸取5mL**提取液于5mL带塞刻度试管中，置40℃水浴上挥干，加入2mL石油醚-**3+1混合溶剂溶解残渣，备用。
5.2 色谱参考条件5.2.1：玻璃柱，内径3mm，长2m，内装涂以5%m/mDEGS+1%m/mH3PO4固定液的60～80目Chromosorb WAW。
果汁中防腐剂含量的测定及方法验证
学生实训
➢完成果汁中苯甲酸和山梨酸测定方法的回收率测定。 测定果汁试样中的苯甲酸和山梨酸含量 分别在果汁试样中加入一定量的苯甲酸和山梨酸的标准溶液，然后测 定总的苯甲酸和山梨酸含量，计算回收率 ➢完成果汁中苯甲酸和山梨酸测定方法的检测限测定用外标法处理数据 配制一浓度尽量小的苯甲酸和山梨酸的标准溶液，进样，记录峰面积 或峰高，计算检测限
液相色谱分析法模块之
任务7 果汁中防腐剂含量测定 及分析方法的验证
能力目标
完成果汁中防腐剂含量的测定 完成果汁中防腐剂含量测定及方法
验证
课程引入
苯甲酸和山梨酸是我国目前最常用的食品防腐剂，广泛应用 于各种果汁饮料中，以防止其发霉。但如果防腐剂的含量超过 标准限度，或者长期饮用含有防腐剂的饮料，则会对人体健康 造成不得影响，因此检测果汁中的苯甲酸和山梨酸含量是非常 有必要的，请设计方案检测果汁中的苯甲酸和山梨酸?并对选定 的分析方法予以验证。 （学生查阅资料，讨论并提出解决方案： “采用外标法测定果 汁中的防腐剂含量” 。 问题：如何验证该方案是合理可行的？
10.2 外汇与汇率 （四）按外汇交易期限可分为即期汇率和远期汇率 ➢前者指即期外汇交易所使用的汇率，后者指远期外汇交易所使用的汇率。
10.2 Байду номын сангаас汇与汇率
（五）按外汇市场营业时间可分为开盘汇率和收盘汇率
➢开盘汇率也称为开盘价，收盘汇率也称为收盘价。 （六）按外汇买卖对象可分为银行同业汇率（Inter-Bank Rate）和商 业汇率（Mercantile Rate）。 （七）按外汇资金的性质不同，可分为贸易汇率和金融汇率 （八）根据汇兑方式的不同，分为电汇汇率、信汇汇率、票汇汇率和 现钞汇率。
分析方法验证的内容
橘子汁中苯甲酸和山梨酸的测定(精)
问题的再一次提出——如何解决两种
酸在测定过程中的相互影响？ 有人认为，用一空白实验就、能获得较好的结 果，这个空白实验是用无防腐剂的样品得到的。 这样的空白通常是不可能得到的。因为用商业性 样品很难知道它的所有成分，而这些成分的存在 和浓度是由生产技术和贮藏条件决定的。还有一 些人使用中性样品蒸馏得到的一个空白（样品中 研究的防腐剂不是挥发性的）。然而，这样的空 白有缺陷，因为它并不反映出从酸性样品中蒸馏 出的这些干扰成分。
实验
仪器
蒸馏装置，见图2。 分光光度计：可见光和紫外光范围。
试剂(略) 方法
1.预备实验的操作 2.主要蒸馏的制备 3.空白蒸馏液的制备（空白1） 4.苯甲酸的测定 5.山梨酸的测定
标准曲线的制备 准确吸取标准苯甲酸工作液1，2，3，4，5毫升分别移入10 毫升容量瓶中，每一瓶中含有1毫升0.1N氢氧化钠溶液。每 一瓶溶液用蒸馏水稀释至刻度。并且摇匀。每一瓶溶液以 0.01N氢氧化钠溶液为空白在225毫微米处测出光吸收值。以 苯甲酸浓度（以ppm表示）对吸收值（在225毫微米）绘制曲 线。 蒸馏液的测定： 吸取每一种蒸馏液（主要和空白的）25毫升分别移入250毫 升蒸馏瓶中，各加入25毫升0.2N重铬酸钾溶液和6.5毫升4N 硫酸。在沸水浴中准确加热10分钟，然后冷却，按照“主要 蒸馏液制备”所述的“加入磷酸1毫升……”开始进行。以 0.01N氢氧化钠溶液为空白，在225毫微米处测定两种溶液的 吸收值。从主要溶液的吸收值减去空白的吸收值，然后从标 准曲线中相对的吸收值查出苯甲酸的浓度。按下列方式计算 出橘子汁中苯甲酸的含量。 苯甲酸钠(ppm)=100M/W 式中M代表部分蒸馏液中苯甲酸 的浓度(ppm)，即从标准曲线中查出相对值；W代表吸收蒸馏 液中含样品的克数（克）当使用单独蒸馏时，空白1（经中和的橘子汁的蒸 馏液）在紫外区并不出现橘子汁中某些挥发性物质光的吸收值。 这些挥发性物质存在于经酸化的橘子汁蒸馏液中。空白2（同样来 源的经酸化但不含防腐剂的橘子汁蒸馏液）总是记录较高的吸收 值。事实上，苯甲酸和山梨酸的测定应该使用后面的空白，但是， 这是不可能的，因为在商业样品中，同样来源，不含防腐剂和经 同样加工，同样贮藏的橘子汁在测定防腐剂时是找不到的根据 Monselise方法的分析操作是采用空白1。所以得到的结果太高 （由于空白的吸收值 ，见上述）。 本文的方法通过在两个阶段中得到的结论，克服了这些困难（见 图1）。（i）酸化的橘子汁的一部分蒸馏液中采用强氧化作用可以 除干扰物质，这可以连接用重蒸馏苯甲酸。在氧化作用中，山梨 酸也被破坏这是有利的。因为测定重蒸馏液中，苯甲酸可不受其 他防腐剂的干扰。（ii）其他部分酸化橘汁蒸馏液中，山梨酸首先 转化为甲酰化合物，然后变为有色的衍生物，后者的吸收值可、 是可在可见光范围内读出的，这一波长中，橘子汁中的挥发性物 质或苯甲酸都不能干扰。
检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解
检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解检测苯甲酸、山梨酸、糖精钠的疑难详解(转自仪器信息网色谱论坛)苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB/T5009.29-1996，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-1996，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2 样品前处理的注意事项GB/T5009.28-1996和GB/T5009.29-1996 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/T5009.29-1996使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1m ol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液， 9.50mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。