Modfit分析细胞周期指南
细胞周期病理调节通路的生物信息学分析
细胞周期病理调节通路的生物信息学分析细胞周期是细胞进化过程中最为重要的基本生命过程之一，其调节异常会导致多种人类疾病。
近年来，生物信息学分析作为一种高通量，全局性方法，深入研究细胞周期调节机制已成为替代传统实验方法的重要手段之一。
本文将以“细胞周期病理调节通路的生物信息学分析”为题，探讨生物信息学在该领域的研究进展和展望。
一、细胞周期调节通路的生物信息学分析细胞周期是细胞从出生到分裂的周期性过程，分为G1期、S期、G2期和M期四个阶段。
细胞周期的调控由多个信号传导途径相互作用而成，其中包括细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）和调节因子，如细胞周期素，染色质重塑因子和DNA损伤响应蛋白等。
CDK及其相关调节因子在细胞周期调控中发挥着重要的作用，因此，CDK及其调节因子的下游信号呈现出复杂的网络拓扑关系，通过生物信息学分析可以对这一调控网络进行系统性的揭示和理解。
随着人类基因组计划和高通量基因芯片技术的大力推广，如今的疾病研究已逐渐进入了“大数据”时代。
基于第三代测序技术和高通量蛋白质组学等新技术，大量的生物信息数据已被产生和保存，包括基因表达谱、蛋白质结构组、酶学数据以及微小RNA数据等。
这些数据可以用于揭示基因表达谱变化、相互作用和调控网络特定方面的生物过程。
生物信息学的分析方法通常包括主成分分析（PCA）、聚类分析、生物网络分析、功能注释和表达谱分类。
聚类分析是一种常见的方法，它可以将相似的基因表达谱数据归类到同一群体中，并对其进行分类描绘。
基于聚类分析，细胞周期基因的表达谱特征图已被描绘，揭示了细胞周期调控网络中的不同模块以及不同基因在这些模块中的作用。
生物网络分析则可以通过寻找基因丰度变化的主要可视化属性来发现不同基因之间的关联和相互作用。
与这些方法相似，功能注释法通过基因的功能特征描述来帮助确定生物系统并加强在其中的数据分析。
组合这些方法可以完成组学信息和生物过程的分析和评估。
二、细胞周期病理的生物信息学分析随着对细胞周期调节机制的进一步研究，越来越多的证据表明细胞周期调控异常与发生多种疾病有关，包括癌症、阿尔茨海默病、糖尿病、心血管疾病和神经退行性疾病等。
细胞周期调控的机制与研究方法
细胞周期调控的机制与研究方法自然界中所有的生命体都由细胞组成，这些细胞会通过不同的方式来完成其所需的功能。
然而，细胞并不是一成不变的，而是通过不断地分裂和再生，来维持自身生命。
细胞周期调控是指细胞在其分裂周期中，为了确保细胞准确地进行DNA复制、核分裂等生物学过程，而对细胞周期中的特定事件进行控制的机制。
在本文中，我们将探讨细胞周期调控的机制与研究方法。
## 细胞周期的基本阶段细胞周期是细胞由分裂至再生，再从新分裂的整个过程。
其包含四个基本阶段：G1期（第一次裂解期）、S期（合成期）、G2期（第二次裂解期）和M期（分裂期）。
在G1期，细胞生长并准备进入S期。
在S期，细胞将会进行DNA复制。
在G2期，细胞会进一步生长、增殖和准备进入M期。
在M期，细胞将形成两个新的细胞，即分裂。
## 细胞周期调控的机制细胞周期调控的机制包括多种信号转导途径、激酶、肿瘤抑制剂、癌基因和细胞周期蛋白等。
其中，最重要的是细胞周期蛋白与其活化辅酶蛋白（CDK）的相互作用。
细胞周期蛋白是一组控制细胞周期不同阶段的蛋白。
不同类型的细胞周期蛋白和其活化辅酶蛋白在细胞周期的不同阶段中发挥不同的作用。
例如，在G1期，细胞周期蛋白D与CDK4/6相互作用，促进细胞进入S期。
在M期，是细胞周期蛋白B与CDK1共同释放染色体并促进细胞分裂。
因此，细胞周期蛋白与CDK的相互作用是细胞周期调控机制中必不可少的组成部分。
## 细胞周期调控的研究方法为了探究细胞周期调控的机制，科学家们使用了多种实验技术。
下面，我们将介绍其中最重要的技术。
### 细胞培养细胞培养是细胞周期调控研究的重要手段。
在体外培养系统中，细胞可以获得特定的营养成分和温度，以满足其生存、生长和分裂的需求。
这种体外培养系统为细胞周期分析和相关功能分析提供了较为便捷的手段。
### 流式细胞术流式细胞术是一种基于细胞形态学特征和生物化学差异分析的技术。
该技术可以将不同细胞周期阶段的细胞分开分析并计数。
流式分析细胞周期
流式分析细胞周期
最近在做加药物的细胞周期，做了好几次，出现如下图的流式拟合图，师姐们都说你这样的拟合是强行的拟合，s期不明显，需要重新做，可是做了好多次还是这样的结果。
望专家教教我是哪里出错。
做细胞周期的步骤是：
1. 先铺板，2E5/孔。
过夜培养后加药（24h）
2. 再经过24h后可以进行测量。
3. 收集上清，并用PBS洗涤，再用胰酶消化，接着用PBS再洗一遍（在15ml管子中进行）
4. 1500转离心，小心去除上清，加入1ml的预冷PBS（记得要冲洗一下管壁），混匀后吸到1.5ml管中，再次在大厅中的离心机1500转4-5min（经过这样的一遍洗涤即可）
固定
5. 用枪吸走上清，剩余50ul左右，切勿吸走细胞，随后➕300ul 预冷PBS（用左手拿着EP管小拇指抵住涡旋震荡仪，右手拿住吸有700ul的乙醇的枪）缓慢打入其中，（这个过程尽量要慢）
6. 置于-20°冰箱中20min（有的说1h），若是过夜要要置于4°（有的说4h以上）
7. 1500转离心3-5min，小心吸上清
8. 加入1ml预冷PBS，重悬
9. 1500转离心3-5min，吸取上清，轻弹
染色
10. 0.5ml/管的碘化丙锭染色液（PI）缓慢加入，并充分的混匀
11. 37°避光30min
先配好染色的溶液
12. 4°避光存放2h
13. 上流式仪。
细胞周期调控机制的生物学机制分析
细胞周期调控机制的生物学机制分析细胞是生命的基本单元，细胞的正常生长和分裂是维持生命的关键过程。
细胞周期调控机制是细胞自身内部调控的一个复杂过程，它包括了细胞周期不同阶段的调控，如细胞生长期(G1期)、DNA复制期(S期)、前期(G2期)和分裂期(M期)等，在每个阶段都有非常严格的调控。
这种调控机制涉及到不同细胞器官、代谢途径、信号传递和基因表达等多个方面，对于理解正常细胞生长发育及疾病发生的分子机制都具有深远意义。
1. 细胞周期的控制细胞周期的控制主要是通过细胞周期调控蛋白(Cyclin)及其激酶复合物(Cyclin-dependent kinase, CDK)来完成的。
Cyclin/CDK组成复合物后，Cyclin的种类和浓度决定了复合物所处于细胞周期的不同阶段。
G1期是已分裂的细胞进入下一个细胞周期的生长期，由于它是整个细胞周期的调控点，所以它的长短会对整个周期的长度产生影响。
在G1期，Cyclin D与CDK4/6形成复合物，进一步激活Rb蛋白，使E2F转录因子可以激活S期中DNA 复制所需的细胞因子。
S期是细胞复制染色体的过程，此时Cyclin E/CDK2复合物主要参与。
G2期是在S期后，细胞补充了DNA，为一分为二做好了准备。
在这个阶段，Cyclin A与CDK1或CDK2形成复合物，以准备进入分裂期。
分裂期后，Cyclin B与CDK1形成高度活跃的复合物，开始促进细胞进入有丝分裂阶段。
细胞周期所需的蛋白大部分是受到转录因子家族的协同调控。
它们可以继续调控编码细胞周期蛋白的基因，以确保细胞周期在正常的范围内运行。
2. 信号转导通路控制细胞周期进程细胞的内外环境可以通过信号转导通路对细胞周期的进展进行调控。
该通路可以感受和响应多种生物学信号，从而通过影响细胞周期蛋白的表达和活性来控制细胞周期的进展。
生长因子通过细胞膜接受器激活可激活纤维母细胞生长因子受体(mitogen-activated protein kinase/ERK cascade)的信号转导通路。
《医学细胞生物学课件：细胞周期及凋亡》
在这个医学细胞生物学课件中，我们将探索细胞周期及凋亡的重要性和机制， 并了解它们对生物体的影响。
什么是细胞周期？
细胞周期是细胞从新生到再次分裂的整个生命周期。它包括四个阶段：G1期、 S期、G2期和M期。
细胞周期的四个阶段
G1期
细胞生长阶段，准备进入DNA复制阶段。
姐妹染色体被分隔到不同的 细胞枝。
4 4. 草莓和冰淇淋？
为了记住任务顺序而创造的 词句。
5 5. 细胞分裂
细胞质分裂成两个子细胞。
细胞凋亡的重要性
保持身体健康
细胞凋亡是身体过程中清除老化 细胞的重要机制，帮助保持器官 和组织的健康。
组织发育和维护
细胞凋亡在胚胎发育和组织重塑 中扮演关键角色。
抑制肿瘤形成
2 减少炎症反应
凋亡可帮助减轻炎症疾病 的症状和损伤。
3 调节免疫反应
促进正常免疫反应和抑制 自身免疫疾病的发展。
总结
细胞周期及凋亡是细胞生物学中重要的概念和过程。它们影响着我们的健康和生命。了解细胞周期和凋亡的机 制可以帮助我们更好地理解生命的奥秘。
S期
DNA合成阶段，每个染色体复制成两个同样的 姐妹染色体。
G2期
细胞准备分裂阶段，为有丝分裂做最后的准备。
M期
有丝分裂阶段，细胞核分裂为两个子细胞。
有丝分裂的五个重要步骤
1 1. 同源染色体配对
染色体通过基因重组进一步 排列。
2 2. 纺锤体形成
纺锤体帮助分离染色体到两 个子细胞。
3 3. 染色体分离
细胞凋亡可以防止癌细胞的过度 增殖和损害DNA的进一步扩散。
细胞凋亡与细胞周期
1
凋亡信号
流式细胞周期结果图解读.docx
流式检测细胞周期操作步骤1. 细胞培养：取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。
2. 细胞固定：800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。
3. 细胞染色：1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。
4. 流式分析：以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
注：上机前要以50um尼龙网膜或35um细胞过滤器过滤细胞！因为PI具有很强的粘附性，容易使细胞聚团！流式细胞周期结果图解读1、纵坐标Cell Number：即计数的有效细胞数；2、横坐标DNA Content：即DNA含量；3、G1、G2、S三期在图中已经标示；4、右侧数字含义：Dip G1-53.84% at 55.56，即G1期DNA含量平均值为55.56；53.84%即G1期细胞数占总数的53.84%；Dip G2-5.64% at 107.72，即G2期DNA含量平均值为107.72，5.64%即G2期细胞数占总数的5.64%；以此类推…流式细胞周期结果图的意义，主要从细胞周期的角度看各参数的意义：1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。
1、细胞周期可分为四个阶段：①G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；②S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期；③G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；④M期又称D期(mitosis or division)，细胞分裂开始到结束。
细胞周期的调节机制分析
细胞周期的调节机制分析细胞是生命的基本单位，而细胞的增殖则是生物体生长和发育的基础。
细胞增殖的过程需要经历一系列复杂的调节和控制，这其中最重要的就是细胞周期调节机制。
细胞周期分为G1期、S期、G2期和M期四个阶段，其中细胞在G1/S和G2/M两个关键的检查点上受到严格的限制和控制。
本文将对细胞周期调节机制进行深入探讨。
一、细胞周期调节的基本机制细胞周期的调节主要由细胞周期素和CDK蛋白激酶两类因子共同参与。
细胞周期素是一类能够调节细胞周期的蛋白质，它们主要通过周期素受体（CDK）与CDK激酶结合来促进或抑制细胞周期。
CDK蛋白激酶则根据周期素的指示，分别促进或抑制四个细胞周期阶段的进程。
细胞周期的进行受到多种因素的调控，如DNA损伤、细胞营养状态、细胞因子、激素等。
在G1/S和G2/M检查点上，CDK1/2激酶会被受到的信号激活或抑制，进而影响细胞周期的进程。
此外，p53等多种细胞核内蛋白也参与了细胞周期调节的机制。
二、G1/S检查点的调控机制G1/S检查点又称为开始点，是细胞周期的一个非常关键的检查点，它能够确保细胞进入DNA复制阶段的准确性。
在G1期，细胞周期素D（CDK4、6）和周期素E（CDK2）受到增加的信号刺激，进而使细胞周期素B1（CDK1）大量合成。
细胞周期素B1的存在促使细胞准备进入DNA复制的S期。
在G1/S检查点上，CDK2受到复杂的调节，该蛋白有两个磷酸化位点：T14和Y15。
当CDK2含有磷酸化酪氨酸（Y15）位点时不能结合到周期素E上，从而抑制了S期的进程。
当Y15磷酸化作用消失时，CDK2则能结合到周期素E上，使细胞周期转入S 期。
此外，pRB蛋白还有能够抑制CDK2的作用。
三、G2/M检查点的调控机制在G2期，细胞周期素A（CDK1）和周期素B1受到增加的信号刺激，使得细胞能够进入到M期。
而在G2/M检查点上，CDK1/2受到多种信号的调控，同时还有一些检查机制确保细胞准确进入到M期。
细胞周期调控与肿瘤发生的分子机制分析
细胞周期调控与肿瘤发生的分子机制分析细胞周期是指细胞在生长和分裂过程中经历的一系列有序的事件和阶段。
在正常细胞的生命周期中，细胞周期必须受到严格的调控，以确保细胞能够按照正确的时间和顺序进行复制和分裂。
然而，当细胞周期调控发生异常时，会导致肿瘤的发生和发展。
本文将对细胞周期调控与肿瘤发生的分子机制进行分析。
一、细胞周期的阶段与调控细胞周期可分为四个主要阶段：G1期（Gap1期）、S期（DNA合成期）、G2期（Gap2期）和M期（有丝分裂期）。
每个阶段都有特定的生物学事件发生，并由一系列的蛋白质激活和调控所驱动。
1. G1期：在G1期，细胞从上一个有丝分裂后的分裂阶段进入，主要进行生长、代谢和功能差异化等过程。
G1期的进程受到细胞环调节蛋白（Cyclin）与蛋白激酶复合物（Cdks）的调控。
2. S期：在S期，细胞进行DNA的复制，确保每条染色体都能够得到准确的复制。
S期的进程主要通过Cyclin E与Cdks复合物的调控。
3. G2期：在G2期，细胞在完成DNA复制后进行准备工作，为下一个有丝分裂阶段做准备。
G2期的进程主要依赖于Cyclin A与Cdks复合物的调控。
4. M期：在M期，细胞进行有丝分裂，将复制的染色体平均分配给子细胞。
M期的进程由Cyclin B与Cdks复合物的调控控制。
二、细胞周期调控的主要分子机制细胞周期的调控主要涉及一系列蛋白质调控因子的参与，包括细胞周期蛋白（Cyclin）、蛋白激酶复合物（Cdks）以及细胞周期的调控蛋白（CKIs）等。
1. Cyclin：Cyclin是一类具有周期性表达的蛋白质，其表达量在细胞周期的不同阶段呈现出波动性变化。
Cyclin的主要作用是与Cdks形成复合物，在细胞周期的不同阶段发挥调控作用。
不同类型的Cyclin 与不同的Cdks复合物具有不同的生物学功能。
2. Cdks：Cdks是蛋白激酶复合物，是细胞周期调控的中心。
它的活性受到Cyclin的调控，并通过磷酸化作用来调控细胞周期中的各个阶段。
基于流式细胞术的细胞周期分析
基于流式细胞术的细胞周期分析细胞周期是生命科学中一个非常重要的概念。
细胞周期指的是细胞在生命周期中的一次分裂过程的全过程，包括从细胞生长、DNA复制到细胞分裂等一系列过程。
细胞周期的控制与细胞的增殖和分化、肿瘤的发生和发展密切相关。
因此，研究细胞周期对于我们深入了解生命活动、疾病发生机制以及治疗等方面都有着重要意义。
细胞周期的研究手段有很多，其中流式细胞术技术是一种经典且重要的方法。
流式细胞术是一种将细胞悬浮液通过装置推进以获得细胞个体某些特征的技术，它可以同时获得大量的细胞特征信息，包括细胞的大小、形态、DNA含量等参数，并且可以对这些参数进行统计分析。
在细胞周期研究中，通过采用流式细胞术对细胞进行染色分析，可以准确测定细胞周期的各个阶段，对细胞周期的研究提供了非常有力的工具。
细胞周期可以分为四个主要阶段：G1期、S期、G2期和M期。
G1期为生长期，细胞的体积增大，蛋白质合成增加，准备进行DNA复制。
S期为DNA合成期，细胞的DNA复制分为前期和后期两部分，复制完成后，细胞核内将有两套完全相同的DNA序列。
G2期为后生长期，细胞生长和检查DNA复制的准确性。
M期为分裂期，包括前期、中期和后期三个分阶段。
其中中期时细胞染色体粘附到纺锤体纤维上并完成分离，后期时新核膜形成，染色体解缠并核质分划，两个新的细胞膜形成。
在细胞周期分析中，可以通过多种方法染色来区分不同时期的细胞。
例如，DNA染色剂如荧光素-二乙酸盐（PI）染色，可以区分G1期、S期和G2期细胞；利用蛋白质抗体标记技术可以检测细胞的分裂状态，还可以用流式细胞术探测特定分子（如细胞周期蛋白等）的表达量来分析细胞周期进程。
通过不同的染色方式，我们可以精准地区分不同的细胞周期阶段，实现对细胞周期的深入研究。
细胞周期研究的应用范围非常广泛。
在肿瘤学领域，流式细胞术被广泛应用于分析肿瘤细胞的分裂、生长特性和药物处理后的变化。
通过对细胞周期阶段特异性化合物的筛选，可以发现对某些恶性肿瘤的治疗非常有效的药物。
一步一步教你读流式图：凋亡和坏死的区别(借鉴内容)
一步一步教你读流式图：凋亡和坏死的区别2008-08-05 00:00 来源：丁香园点击次数：841 关键词：流式图调亡坏死区别分享到：•收藏夹•腾讯微博•新浪微博•开心网下图为坏死图。
坏死的位于G0/G1峰前的峰形为从左至右的反抛物线形。
如下：而APOptosis则是一个较为对称的峰。
如下：.而有时凋亡和坏死同时存在。
如下图：蓝色的为apo峰（第一个三角），而白色的为坏死峰。
第二个三角为G0/G1峰。
第三个为异倍体G0/G1峰。
实际上，很多时候我们诱导的凋亡峰不像上图那样明显，如下：原因要从实验的原理开始，到细胞状态，实验步骤，试剂效能等，一一分析。
例如，某因素诱导的凋亡需要较长时间，而我们培养时间还没到，就有可能不出凋亡峰；或是在早期凋亡是用PI染色做SUB-G1，凋亡率会不高，而用API法则更好地测出其凋亡率。
编辑：famsking 一步一步教你读流式图：凋亡诱导2008-08-05 00:00 来源：丁香园点击次数：978 关键词：流式图教程调亡诱导分享到：•收藏夹•腾讯微博•新浪微博•开心网先发一张关于PI染色的uv诱导凋亡的图片，这是con：这是诱导凋亡的流式图，我们称之为sampl：那么怎么看这两张图呢？首先，我们要知道各个参数的意义。
这在流式原理中有介绍。
然后，我们要知道各个图之间的联系。
大家看一下下面的图。
R1主要代表粘连细胞R2主要代表G2/M期细胞R3主要代表G0/G1期细胞R4主要代表s期细胞R5主要代表凋亡细胞“主要”是因为大家可以看到设的gate后各个gate中的细胞有位置重叠。
FL2-W/FL2-A和FL2-A/COUNT之间的关系。
这两张图的最大区别在于G0/G1期前面的亚G1峰。
这个峰就是FL2-W/FL2-A图上的左下方的“小尾巴”，小尾巴越大，SUB-G1峰就越高。
也就是说凋亡的越多。
当然这需要跟整张图比较，就是选取mar k后测量其gate%。
编辑：famsking 一步一步教你读流式图：表型CD4CD82008-08-05 00:00 来源：丁香园点击次数：927 关键词：表型CD4CD8流式图教程分享到：•收藏夹•腾讯微博•新浪微博•开心网大鼠外周血T细胞CD亚群CD4/CD8比值所做的流式分析图右上角的图片是CD4和CD8的双荧光检测。
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Modfit分析细胞周期指南
本指南只提供在guava流式细胞分析仪上使用细胞周期模块分析后产生的数据，其它请参阅
产品使用说明书，本指南仅供参考。
一．概述
细胞周期的概念：细胞由一次分裂结束到下一次分裂结束，都要经历相同的变化阶段(即
G1→S→G2→M )周而复始地进行活动，细胞的这种生长、分裂循环即称为细胞周期(cell
cyc1e)。一个细胞周期包括有丝分裂期(M)和分裂间期(G1、S、G2)。尽管在各种细胞中各期
所占时间都不尽相同，但相对而言M期最短，S期却较长。
分裂间期：
1 、G1期 ，前一次有丝分裂完成到S期开始。各种与DNA复制有关的酶明显增多，线粒
体、叶绿体、核糖体增多，质网在更新扩大，高尔基体、溶酶体都增加，中心粒彼此分离、
复制。
2、S期：DNA、组蛋白合成
3、G2期， S期结束后到有丝分裂开始。由上可以看出G2期 、S期、M期反映了细胞的
增殖活性，特别是G2期 、S期（因M期较短）。因而，G2/M％+S％反映了细胞增殖能力。
二者有无差别要进行统计检验。
细胞周期阻滞：对于生殖细胞及保持增殖能力的细胞(如干细胞)，由于细胞不断的增殖， 细
胞总是处于从G1 、S、G2 和M 期的连续的细胞周期中。 在细胞周期的各阶段， 细胞分
别进行着DNA 复制、蛋白质合成及细胞分裂等重要的生理活动。每一阶段都是下一阶段的
准备期, 真核细胞可以在启动下一个周期前监测与一个细胞周期顺利完成相关的生化事件，
这包括各种体外因素威胁下游事件进行时可逆地将细胞周期阻滞在特定的生理阶段的能力，
而这种特定的生理阶段称为检定点(checkpoint) 。只有前一阶段的生理活动完成后，才能通
过称为检定点的阶段，进入周期的下一步，一些突发事件引发的细胞反应能影响驱动细胞周
期前进的因子，从而使细胞周期停滞在检定点， 这被称为细胞周期阻滞(cell cycle arrest)。
比较相应的细胞G1 、S、G2 期差异有无统计学意义，才能说有无细胞周期阻滞。
第一图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：21.7％
第二图：增值率S（合成期）＋G2/M（合成后期/分裂期）：19.6％
据此分析两者的增值没有明显的差别。虽然第二图比第一图的S期有所增高，但G2期下降
了。
细胞周期是基于细胞处于不同分裂时期具有不同的DNA含量而分析细胞处于不同的时期的
方法。确切的说结果中G1期的百分比实际上是G1＋G0期细胞的百分比。 G2的百分比实
际上是G2＋M期细胞的百分比。
二．细胞样品制备
在样品的制备中存在的问题主要是细胞的聚集和碎片，虽然细胞通透剂种类很多，但用于碘
化丙啶（PI）染色进行细胞周期和倍体分析的细胞通透剂，通常为70％冷乙醇；乙醇必须与
细胞充分快速混匀，避免细胞聚集成团；乙醇必须与细胞充分快速混匀，避免细胞聚集成团；
流式细胞仪获取细胞的速度不宜太快，在guava上要使用最低速。
1. 用户首先使用guava的细胞周期试剂盒，并按相应的操作步骤进行细胞固定、染色后，
使用guava的细胞周期模块进行数据采集和分析，并生成以.ccy.CCY.FCS为后缀的文件。
2. 细胞周期结果受样品制备的影响较大，请参阅相关文献进行样品制备。
3. guava细胞周期试剂盒简要操作步骤：
1) 制备70%的冰乙醇, -20C预冷2小时
2) 制备单细胞悬液,收集细胞,离心去除培液,用PBS重悬
3) 离心,去除PBS. 加入100ulPBS重悬.
4) 将100ulPBS逐滴加入7ml70%的冰乙醇中固定过夜
5) 固定后,450g离心5分钟,弃固定液,用3mLPBS重悬.
6) 再次离心, 弃PBS,留细胞在离心管底部, 加入500ul Cell Cycle试剂
7) 染色30分钟后上机检测.
4. 请注意在固定步骤中，加入－20℃70%酒精（1到2ml）打匀，固定，至少半个小时以上
（约100ul细胞用枪一滴一滴加入到7ml装有预冷70%冰乙醇（-20至少2小时）中，每加
一次都需要反复吹打，以避免细胞成团；需要注意的就是加酒精固定的时候要用4℃预冷的
酒精，缓慢的加，边加边晃动细胞，避免细胞黏连在一起。），（不做的话，可放入4℃冰箱
保存2-3周问题不大。）另在用预冷PBS洗去固定剂时，不宜洗得过多，以免细胞损失。
三．Modfit操作指南
1. 双击Modfit图标，打开Modfit软件（无需安装），打开界面如下：
不用理会弹出的信息，点击OK继续，会出现下述界面，每个均点击OK即可：
2. 点击File，在弹出的对话框中选中要分析的细胞周期文件（FCS3.0文件），点击open以打
开文件：
3. 打开文件，可以看到该文件包含10个数据文件，如果分析第一个文件，则选中第一个文
件（如要在分析完第一个文件再分析第二个文件，需要关闭软件后，再次打开软件，重复上
述过程，再在打开文件后出现的10个数据文件中再选中第二个进行分析，其它8个数据文
件分析方法同上），点击OK以打开该数据文件：
4. 在选择参数（Choose parameter for analysis）时选择第五个（FL2-P-PM2Max）：
5. 选择右下脚的Convert按钮，在下述界面的Linear-to-Log Conversion下选择第六个
（FL2-W-PM2Width），点选Convert to log前的方框，再选中OK继续：
6. 软件会回到前一界面，点击OK继续：
7. 在下述界面中点选Enable Gate 1，并选中Define Gate 1按钮进行设门：
8. 在下述界面中左侧（X Parameter）选第六个参数（FL2-W-PM2Width），右侧（Y Parameter）
选择第五个参数（FL2-P-PM2Max），点击OK继续：
9. 选中图中的黑色方框，当出现+字形调整其位置，正常的细胞周期细胞应为上下两群细胞
的哑铃形状，并调整方框的大小，以去除碎片及粘连细胞：
10. 调整完成后，点击OK按钮，软件会回到设门的界面，点击OK继续：
11. 软件会出现设门的细胞及细胞周期的峰图：
12. 选择Analysis下的Sync Wizard中的第一个Create or edit model:
13. 软件出现下述细胞周期的设置界面，分别进行G0/G1、G2/M和S Phase的设置，调整时
可选择其中的红色三角改变G0/G1、G2/M的位置，一般选择默认即可（如不想设置，可直
接选择第二排的Auto按钮进行自动分析）：
14. 设置完成后，点击Analysis即可自动完成分析过程，并出现分析结果如下，左侧为拟合
的细胞周期图，右为统计数据：
15. 选择 Edit下的Copy按钮，即可将分析结果和图形复制到Word文档或PPT文档中：
16. 下图为复制到Word文档后的情况：
请注意，本指南不排除其编写容可能有不准确甚至错误的地方，仅供各位在做细胞周期时参
考。具体产品使用方法及注意事项，请参阅详细的产品使用说明书以获更详细的使用方法。
指南的编写得到医科大学的玉芳老师的大力协助，在此深表感。
默克密理博生物科学部
市浦东江高科技园区晨晖路88号二号楼2楼
邮编：201203
：2
传真：8
市区曙光西里甲5号院凤凰置地广场A座写字楼18层
邮编：100028
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市黄埔大道西638号富力科讯大厦803A室
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