水体中叶绿素的测定
水质叶绿素a的测定分光光度法编制说明
⽔质叶绿素a的测定分光光度法编制说明附件3《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》（征求意见稿）编制说明《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》标准编制组⼆○⼀五年⼋⽉项⽬名称：⽔质叶绿素a的测定分光光度法项⽬统⼀编号：939承担单位：辽宁省环境监测实验中⼼编制组主要成员：王秋丽、赵丽娟、王琳、丁振军、刘畅、徐天赐、姜永伟、秦⾬、郭杨、朱⼴钦、叶明、贺业菊标准所技术管理负责⼈：周⽻化、雷晶、张虞标准处项⽬负责⼈：张朔⽬录1项⽬背景 (1)1.1任务来源 (1)1.2⼯作过程 (1)2标准制订的必要性分析 (3)2.1叶绿素A的环境危害 (3)2.2相关环保标准和环保⼯作的需要 (4)3国内外相关分析⽅法研究 (5)3.1主要国家、地区及国际组织相关分析⽅法研究 (5)3.2国内相关分析⽅法研究 (8)4标准制订的基本原则和技术路线 (10)4.1标准制订的基本原则 (10)4.2标准制订的技术路线 (10)5⽅法研究报告 (12)5.1⽅法研究的⽬标 (12)5.2⽅法原理 (13)5.3试剂和材料 (13)5.4仪器和设备 (16)5.5样品的采集和保存 (17)5.6分析步骤 (21)5.7结果计算 (31)5.8质量保证和质量控制 (34)5.9注意事项 (34)6⽅法验证 (35)6.1⽅法验证⽅案 (35)6.2⽅法验证过程 (36)7与开题报告的差异说明 (38)8本标准实施的建议 (39)9参考⽂献 (39)《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》编制说明1项⽬背景1.1任务来源（1）2006年6⽉，根据《关于下达2006年度国家环境保护标准制订项⽬计划的通知》（环办函[2006]371号），原国家环保总局办公厅下达了制订《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》国家环保标准制修订计划，项⽬统⼀编号为：939。
（2）《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》项⽬承担单位为：辽宁省环境监测实验中⼼。
1.2 ⼯作过程1.2.1 前期调研⼯作（1）成⽴标准编制组2006年7⽉，辽宁省环境监测中⼼承接了《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》制修订任务以后，成⽴了标准编制组。
叶绿素含量测定的简化
叶绿素含量测定的简化一、本文概述本文旨在探讨叶绿素含量测定的简化方法。
叶绿素是植物进行光合作用的关键色素，其含量直接反映了植物的生长状况和健康程度。
因此，准确、快速地测定叶绿素含量对于植物生理生态学、农业生产和环境保护等领域具有重要意义。
本文将介绍几种简便易行的叶绿素含量测定方法，包括比色法、光谱法以及便携式叶绿素计等，这些方法不仅操作简便，而且具有较高的准确性和灵敏度，能够满足不同场合下叶绿素含量测定的需求。
通过本文的阐述，读者可以了解叶绿素含量测定的基本原理和方法，掌握叶绿素含量测定的简化技术，为相关领域的研究和实践提供有益的参考。
二、叶绿素含量测定的简化方法叶绿素含量的测定是植物生理学研究中的一项基础实验，传统的测定方法虽然准确，但操作繁琐，耗时较长。
因此，科学家们一直在寻求更简便、快速的方法。
近年来，随着科技的发展，一些新的简化方法应运而生，为叶绿素含量的测定提供了更多的选择。
其中，最为常见的简化方法是利用叶绿素在特定波长下的吸收特性进行测定。
这种方法通常使用便携式叶绿素计或分光光度计，通过测量叶片在特定波长（如663nm和645nm）下的吸光度，再根据特定的公式计算出叶绿素含量。
这种方法操作简单，快速准确，适用于大规模的叶绿素含量测定。
还有一些基于化学提取的方法也被用于简化叶绿素含量的测定。
这些方法通常使用有机溶剂（如丙酮、乙醇等）将叶绿素从叶片中提取出来，然后通过比色法或荧光法等方法进行测定。
这些方法的优点是可以直接获取叶绿素的纯品，便于后续的分析和研究。
但需要注意的是，这些方法在操作过程中可能会受到一些干扰因素的影响，如温度、光照等，因此需要严格控制实验条件以保证结果的准确性。
叶绿素含量测定的简化方法在提高实验效率、降低成本方面发挥了重要作用。
在实际应用中，我们可以根据具体的研究需求和实验条件选择合适的方法进行测定。
我们也应该注意到这些简化方法可能存在的局限性和影响因素，并在实验过程中采取相应的措施加以控制。
初级生产力的测定
水生生态系统初级生产力的测定——叶绿素法一、实验目的1.学习测定水体初级生产力的原理和操作过程。
2.学习估算水体初级生产力方法，为评价水体生产性能做准备。
二、实验原理叶绿素a是植物光和作用的重要光合色素，在一定的光照强度下，叶绿素a的含量与光合作用强度之间存在密切关系，因此，叶绿素a的含量是水生生态系统初级生产力的中的重要指标。
同时，叶绿素a的含量的测定，也可以用于水体富营养化水平的评价，是水质监测的重要项目。
浮游植物叶绿素的测定方法常用分光光度法，初级生产力Ps=CaQ(Q=3.7)三、实验器具及试剂采水器、抽滤器、研钵、滤纸、玻璃棒、矿泉水瓶、分光光度计、离心机、漏斗、丙酮等三、实验步骤取适量水样，加少量碳酸镁粉，经滤膜减压过滤，截留水样的浮游植物细胞；将滤膜放入冰箱低温干燥后，以90％丙酮研磨提取样品滤膜，将滤液离心分离，提取上清液定容10mL 比色管，于1cm比色皿中，以90％丙酮为参比，在TU- 1901 型分光光度计于750nm、663nm、645nm、630nm 波长处测定吸光度值后，按下式计算叶绿素含量。
叶绿素a （mg/m3） = [11.64（A663- A750）- 2.16(A645- A750)+0.10(A630- A750)]×V1/(V×C)五、实验结果叶绿素a含量的计算叶绿素a （mg/m3） = [11.64（A663- A750）- 2.16(A645- A750)+0.10(A630- A750)]×V1/(V ×C)C——比色皿光程(1cm)；A——吸光度；V1——提取液定容后体积(mL)；V——水样体积(L)所以叶绿素a的含量Ca=11.64（0.036- 0.014）- 2.16(0.019- 0.014)+0.10(0.020- 0.014)]×2.8/(0.5×10)=1.374（mg/m3）2.初级生产力的估算Ps=1000CaQCa——为表层叶绿素a含量（mg/m3）Q——通话系数（3.7）所以Ps=1000CaQ=1.374×3.7=5.0801六、分析和讨论结果分析有以上数据显示，华师湖泊表层水的叶绿素含量为1.374（mg/m3），初级生产（mgC/mgChla.h）。
水体叶绿素a评价标准
水体叶绿素a评价标准
水体叶绿素a是反映水体中藻类和悬浮物生长状况的重要指标，其含量与水体中的营养盐、有机污染物等有关。
下面是一些常用的水体叶绿素a评价标准：
1. 优良水质：叶绿素a浓度低于5μg/L，表明水体富营养化程度较低，水质清洁。
2. 良好水质：叶绿素a浓度在5~10μg/L之间，表明水体处于
营养状态较好的状态，水质较好。
3. 一般水质：叶绿素a浓度在10~30μg/L之间，表明水体营养状况较高，有轻微的富营养化现象，水质一般。
4. 较差水质：叶绿素a浓度在30~50μg/L之间，表明水体富营养化现象比较明显，已经对水质产生了一定的影响。
5. 差水质：叶绿素a浓度超过50μg/L，表明水体已经非常富
营养化，水质很差，可能会出现赤潮等环境问题。
需要注意的是，不同地区、不同水体类型的叶绿素a评价标准可能会有所不同，因此在具体应用时需要结合实际情况进行分析和判断。
同时，叶绿素a浓度只是水质评价的一个指标，还需要综合考虑其他水质参数如溶解氧、pH值等，以全面评估水体的环境状况。
叶绿素含量的测定
海洋生物学实验浮游植物叶绿素含量的测定一、实验目的：１、通过浮游植物细胞密度与单位水体叶绿素a（Chla）含量的测定，了解浮游植物数量和生物量的表示方法，并对不同粒径浮游植物加以比较。
２、学会使用采水瓶、水样固定、浓缩及浮游植物计数框的方法，掌握叶绿素ａ的测定方法。
二、原理：见《海洋生态学》P192-194生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量。
浮游植物是海洋生态系统的初级生产者，而初级生产水平与叶绿素a 含量存在密切关系，因而往往用叶绿素a含量来表示浮游植物的生物量。
海洋生态系统的种类组成结构以及能流、物质流特征与初级生产者的粒径大小有密切关系。
不同类型海区初级生产者的粒径组成存在很大差异，了解某一特定海区初级生产者的粒径组成，有助于深入研究海区的新生产力水平、营养平衡状态等结构、功能特征。
三、仪器与设备：１、分光光度计3、采水瓶4、抽滤器5、微孔滤膜6、冰箱7、离心机四、药品与试剂：丙硐、甲醛、MgCO3等。
五、实验步骤：1、采样：选择完站位后，以500mL、或1000mL采水瓶采取一定水层（也可几个水层比较）的水样。
2、水样处理：将所取水样分别以0.45μm微孔滤膜（叶绿素a 总量）、2μm核孔滤膜（＞2μm孔径叶绿素a含量）以及先经20μm孔径筛绢过滤后再以2μm核孔滤膜（2-20μm孔径叶绿素a含量）过滤，以90%丙酮溶解滤膜后冰冻过夜。
3、数据测定：滤膜冰冻24小时后取出离心，取上清液于分光光度计测定叶绿素a含量（方法见附页），将所得不同孔径叶绿素a 含量及占叶绿素a总量比例等数据填入测定数据表中。
附：叶绿素a含量测定方法（分光光度法）：A．检测限：0.02mg/m3。
B．方法概述：已知体积的海水以玻璃纤维过滤器过滤，用90％丙酮将色素从滤器上萃取出来，其浓度以分光光度法测定。
C．仪器和设备：１、分光光度计２、抽滤器３、电动吸引器４、采水瓶５、微孔滤膜６、离心沉淀器７、冰箱８、离心管D．取样方法和贮存：将0.5-10升海水经0.45μm微孔滤膜过滤。
分光光度法测定水体中叶绿素a含量的改进
置于 ４℃冰 箱中 ｌ 放
避 光 浸 泡 ４ １ 用 。 ￣ ２ｈ备
６ 离心 。 离心管放人离心机 中 ， ３５０ｒｒ ｎ的速 ） 将 以 ０ ｎ ／ｉ 度离心 １ ｎ ５ｍｉ。
７ 测定和 计算 。将离心 后的上清液 倒入 １ ｍ 比色皿 ） ｃ
水 生态 环境
【 文章编号 ］ｏ ２—０２ （０ ２０ —０ ３ １ｏ ６ ４ ２ １ ）６ ０２—０ ２
东 北水利水 电
２ １ 年 第 ６期 ０２
分光光度法测定水体中叶绿素 ａ 含量的改进
戴 欣 ，杨 航 ・石 岩 ， 雪 ， ， ， 鲁 王玲静 ｚ李 聪 ，
（． １ 松辽流域水资源保护局松辽流域水环境监测中心 ， 吉林 长春 １０２ ；． ３０ １２ 河海大学 ， 江苏 南京 ２０９ ） １０８
Ｓ ８ —１９ Ｌ ８ ９ ４标准 方法使用 的是一般 微孔 滤膜 ， 多为醋
酸 纤维材质 。叶绿素 ａ 定时要求 ７０ｎ 处吸光 度值低 测 ５ ｍ 于 ０ ０， ． ５ 因醋酸 纤维 滤膜在丙酮 溶液 中溶解 ， 一次离心 ０ 用
方 法有时很难达 到分 析要求 。在 实际 测试 中 ， 用醋酸 纤 使
附滤膜残渣， 不易洗脱 ， 易造成样品损失； 由于实验人员的差 ・
异， 对研磨的操作不尽相同 ， 引起实验 结果重现性差。 容易
本方 法中使用 的反 复冻融 法 【 即 使用 超低 温冰 箱对 ３ １ ，
于室温下 ５ｍｉ， ｎ 此过程反 复 ３次。向离心管 中加入 ９ ％ ０ 丙
游植物 的数 量 ， 而表征水 体富营养化 的程度 。 进
目前国 内 测定叶 绿素 ａ的方 法主 要是 使 用分 光光 度 法和 荧光 法 ， 其中 分光 光度法 较为 常用 。方法 上主要 采用 Ｓ ８ — ９ ４ 标准 规定 的方法 ， 该标准 方法在 实践工作 中 Ｌ８ １９ｍ 但 还存在 着实验 结果平行性 不好 、叶绿素 ａ 取效率不高 等 提
实验九++水体藻类的计数与叶绿素含量分析
实验九水体藻类的计数与叶绿素含量分析一、目的要求掌握藻类的接种方法；掌握水样中藻类计数方法；了解检测水样藻类计数方法的原理及其应用中的优缺点；了解水质与藻类之间的相关性，明白其应用的重要性；掌握藻类叶绿素含量的测定方法及原理。
二、实验原理藻类个体数与光密度值成正比；藻细胞过小，密度过大,在显微镜下计数时容易出现较大的人为误差；用显微镜对水中藻类计数的工作强度大，耗时长，且检测人员存在主观判断差异，不同的检测人员测得的藻类计数结果往往相差较大。
藻类生长的测定方法（一）测生长量适合于所有藻类直接法（1）测体积法：离心，测体积（2）干重法：离心或过滤，干燥称重间接法（1）光密度OD 672 nm（2）生理生化指标法（二）测繁殖数适合于单细胞直接法（1）血球记数板间接法（2）活菌计数法藻类叶绿素测定原理三、实验试剂与器材藻类样品（小球藻）培养基配制的各种化学物品、丙酮三角瓶、纱布、移液管、纱绳等超净工作台、分光光度计、离心机等四、实验步骤1 藻类培养基的配置2 藻类培养基的灭菌3 藻类的接种4 藻类的OD值的测（1）取两种藻类样品加入1cm比色皿中，样品高度要高于1/2低于2/3比色皿；（2）用吸水纸吸干比色皿周边的水；（3）以水为对照，在672 nm波长条件下进行比色。
5 水体藻类叶绿素含量的测定（1）取25 ml 已经培养好的藻类细胞，5000 rpm离心8 min，弃去上清液；（2）用80 %丙酮把离心物洗至25 ml容量瓶，然后定容至刻度线；（3）在黑暗的条件下放置30 min，浸提叶绿素；（4）取上清液于比色皿中，在663 nm和645 nm波长条件下进行比色。
五、计算方法六、作业1. 藻类叶绿素测定的基本原理；2. 结果分析与讨论；3. 计算藻类叶绿素a与叶绿素b含量的比值，可以得到什么结论？。
HJ897-2017水质-叶绿素a的测定验证报告
方法验证报告项目名称：水质叶绿素ａ的测定方法名称：《水质叶绿素ａ的测定分光光度法》HJ897-2017报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1 人员情况实验室检测人员已通过标准《水质叶绿素ａ的测定分光光度法》HJ897-2017的培训，熟知标准内容、检测方法及样品数据采集和处理等，考核合格，得到公司技术负责人授权上岗。
表1参加验证人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2主要仪器基本情况1.3 检测用试剂情况表3主要试剂及溶剂基本情况1.4 环境设施和条件情况实验室具有校准合格的温湿度计，环境可以控制在标准要求范围内，满足检测环境条件。
另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。
2 实验室检测技术能力2.1方法原理将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm、630nm波长处测定提取液的吸光度，根据公式计算水中叶绿素ａ的浓度。
2.2.样品的采集按照GB/T14581、HJ/T91和HJ494中的相关规定进行样品的采集。
样品的采集用有机玻璃采水器采集水面下0.5m样品，采样体积为1L，在样品中加入1ml碳酸镁悬浊液，以防止酸化引起色素溶解。
2.2.样品的保存样品采集后应在0℃-4℃避光保存、运输，24h内运送至检测实验室过滤（若样品24h 不能送达检测实验室，应现场过滤，滤膜避光冷冻运输）。
2.3试样的制备2.3.1过滤在过滤装置上装好玻璃纤维滤膜。
确定取样200ml（根据水体的营养状态确定取样体积富营养和中营养过滤体积为100-200ml，贫营养过滤体积为500-1000ml），用量筒量取200ml混匀的样品，进行过滤，最后用少量的蒸馏水冲洗滤器壁。
过滤时负压不超过50kpa，在样品刚刚完全通过滤膜时结束抽滤，用镊子将滤膜取出，将有样品的一面对折，用滤纸吸干滤膜水分。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
水体中叶绿素的测定
叶绿素是藻类的重要成分之一，所有的藻类都含有叶绿素a。
叶绿素a的含量与水中藻类的种类和数量以及水环境质量密切相关。
因此，水中叶绿素a的含量可以在一定程度上反映水质。
近年来，叶绿素在水体富营养化评价中也发挥着越来越重要的作用。
水体富营养化是指在人类活动的影响下，大量的氮、磷等营养物质进入湖泊、河口、海湾等缓慢流动的水体，导致藻类等浮游生物快速繁殖，溶解氧减少在水体中，水质恶化和鱼类物种和其他生物大量死亡。
水中叶绿素测定仪由便携式主机以及便携式叶绿素传感器组成。
叶绿素传感器是利用叶绿色素在光谱中有吸收峰和发射峰这一特性，在叶绿素的光谱吸收峰发射单色光照射到水中，水中的叶绿素吸收单色光的能量，释放出另外一种波长发射峰的单色光，叶绿素发射的光强与水中叶绿素的含量成正比。
水中叶绿素测定仪可以广泛应用于水产养殖、地表水、科研高校等行业和领域水中蓝绿藻/叶绿素的现场便携式检测。
主机具有IP67防护等级，3.5寸彩屏显示，界面菜单设计美观，操作简单方便。