水质 叶绿素a的测定
水质叶绿素a的测定分光光度法编制说明
⽔质叶绿素a的测定分光光度法编制说明附件3《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》（征求意见稿）编制说明《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》标准编制组⼆○⼀五年⼋⽉项⽬名称：⽔质叶绿素a的测定分光光度法项⽬统⼀编号：939承担单位：辽宁省环境监测实验中⼼编制组主要成员：王秋丽、赵丽娟、王琳、丁振军、刘畅、徐天赐、姜永伟、秦⾬、郭杨、朱⼴钦、叶明、贺业菊标准所技术管理负责⼈：周⽻化、雷晶、张虞标准处项⽬负责⼈：张朔⽬录1项⽬背景 (1)1.1任务来源 (1)1.2⼯作过程 (1)2标准制订的必要性分析 (3)2.1叶绿素A的环境危害 (3)2.2相关环保标准和环保⼯作的需要 (4)3国内外相关分析⽅法研究 (5)3.1主要国家、地区及国际组织相关分析⽅法研究 (5)3.2国内相关分析⽅法研究 (8)4标准制订的基本原则和技术路线 (10)4.1标准制订的基本原则 (10)4.2标准制订的技术路线 (10)5⽅法研究报告 (12)5.1⽅法研究的⽬标 (12)5.2⽅法原理 (13)5.3试剂和材料 (13)5.4仪器和设备 (16)5.5样品的采集和保存 (17)5.6分析步骤 (21)5.7结果计算 (31)5.8质量保证和质量控制 (34)5.9注意事项 (34)6⽅法验证 (35)6.1⽅法验证⽅案 (35)6.2⽅法验证过程 (36)7与开题报告的差异说明 (38)8本标准实施的建议 (39)9参考⽂献 (39)《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》编制说明1项⽬背景1.1任务来源（1）2006年6⽉，根据《关于下达2006年度国家环境保护标准制订项⽬计划的通知》（环办函[2006]371号），原国家环保总局办公厅下达了制订《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》国家环保标准制修订计划，项⽬统⼀编号为：939。
（2）《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》项⽬承担单位为：辽宁省环境监测实验中⼼。
1.2 ⼯作过程1.2.1 前期调研⼯作（1）成⽴标准编制组2006年7⽉，辽宁省环境监测中⼼承接了《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》制修订任务以后，成⽴了标准编制组。
叶绿素a测定实验报告
叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。
（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。
称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。
每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。
将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。
（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。
2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。
3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。
将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。
此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。
4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。
水体叶绿素a测定方法
水体叶绿素a测定方法文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-叶绿素a的测定方法——乙醇+分光光度法1、水样的保存水样注入水样瓶后，应放置在阴凉处，并避免阳光直射。
若水样的进一步处理需要较长时间（大于12h），则应置于0℃~4℃低温下保存。
水样量视水体中浮游植物多少而定，一般应采0.5~2L。
2、抽滤在抽滤装置的滤器中放入GF/C滤膜。
抽滤时负压应不大于50kPa。
抽滤完毕后，用镊子小心地取下滤膜，将其对折（有藻类样品的一面向里），再用普通滤纸吸压，尽量去除滤纸上的水分。
如不立即提取，应将滤膜放在黑暗低温条件下保存。
在普通冰箱冷冻室中可存放几天，在-20℃低温冰箱中可保存30天。
3、提取研磨可用玻璃研钵。
将滤膜剪碎放入研钵，加入90%乙醇溶液7~8ml，研磨3~5分钟直至变为匀浆。
将研磨后的匀浆移入具塞带刻度的离心管中。
用少量提取液冲洗研钵或匀浆器，冲洗液并入离心管中，使终容积略小于10ml。
盖上关塞，摇动后置于黑暗低温处进行提取至少6-24h。
4、离心将装有提取液的离心管放入离心机中，转速3500~4000rpm，离心10~15min。
将上层叶绿素提取液移入定量试管中，再用少量提取液清洗、离心二次取得提取液。
最后将提取液定容到10ml。
如果大批样品需同步操作时，可减少离心步骤，直接在提取液中浸泡滤膜6-24h，取其清液即可。
5、测定用90%乙醇溶液作为参照液（参照比色皿中盛放90%乙醇溶液，并用90%乙醇调分光光度计零点）。
测定定容后的提取液在665nm和750nm处的吸光度，并计算两个吸光度的差记为A1；然后向比色皿中加入1滴1mol/L的盐酸酸化，酸化5—10min(可以用不同时间实验再进行调整)后再次测定酸化后的提取液在665和750nm处的吸光度，并且把酸化后的两个吸光度的差记为A2.则提取液中叶绿素a的浓度为：Chla=27.9×（A1－A2）×V提取液/V脱镁叶绿素浓度为：Chla=27.9×（1.7 A2－A1）×V提取液/V其中Chla为水样中的叶绿素a含量，单位为ug/L；V提取液为提取液的最终定容体积,单位为mL；V为抽滤水样的体积，单位为L。
水中叶绿素a检测方法-丙酮萃取法
水中葉綠素 a 檢測方法－丙酮萃取法/分光光度計分析法NIEA E507.02B 一、方法概要水樣經過濾後，以90﹪丙酮溶液萃取其中之葉綠素a，再以分光光度計測得萃取液之吸光值，最後依吸光值計算水樣中葉綠素a含量。
二、適用範圍本方法適用於池、河、湖泊、水庫等地面水體及海域水中浮游植物所含葉綠素a之檢測。
三、干擾（一）葉綠素a之分解產物，如脫鎂葉綠素（pheophytins）及脫鎂葉綠甲酯－酸（pheophorbides），因其吸收波長與葉綠素a相同會產生之干擾。
（二）浮游植物內之其他色素，如葉綠素b、c、葉黃素（xanthophyll）、藻膽色素（phycobilins）及類胡蘿蔔素（carotenoids）等會產生干擾。
（三）樣品具濁度時會產生干擾。
四、設備（一）組織研磨器。
（二）離心機。
（三）離心管：10 mL，具螺紋蓋。
（四）分光光度計：頻寬（band width）2.0 nm以下。
（五）過濾裝置。
（六）抽氣幫浦。
（七）玻璃纖維濾紙：直徑為47 mm或25 mm，孔徑約0.7 μm(Whatman GF/F或同等級產品)。
（八）定量瓶：100 mL。
（九）移液管：10 mL。
（十）採樣瓶：500 mL或1 L 塑膠瓶。
（十一）鑷子。
（十二）酸鹼度計。
五、試劑(一)試劑水：導電度25℃10 μmho / cm以下，二氧化矽< 1 mg / L。
（二）90﹪丙酮溶液：將試藥級之丙酮與-試劑水以90：10 之體積比混合。
（三）葉綠素a標準品。
六、採樣及保存（一）視水中浮游植物密度採取代表性水樣約0.1 至4 L，並記錄使用水樣體積及pH。
（二）採樣後立即放置暗處密封，以4℃冷藏方式保存，期限不得超過24 小時。
（三）以幫浦過濾水樣於玻璃纖維濾紙上。
（四）過濾後之樣品亦可用冷凍方式保存，期限不得超過三星期。
七、步驟（一）萃取葉綠素a1、將過濾後之濾膜放入組織研磨器中，並加入2 至3mL 90﹪丙酮溶液，再以500 rpm 研磨1 分鐘。
浅析地表水叶绿素a的测定
浅析地表水叶绿素a的测定地表水是指地球表面流动或静止的水体，是人类生活和生产所必需的重要资源之一。
地表水的质量直接关系到人类的健康和生存环境，其中叶绿素a是一种能够反映水体叶绿素含量的重要指标。
本文将对地表水叶绿素a的测定进行浅析，以期为相关工作者提供一定的参考。
一、地表水叶绿素a的概述叶绿素a是光合作用中最主要的光合色素，也是植物和浮游植物的绿色素。
它是一种重要的生物标志物，是测定水质的重要指标之一。
叶绿素a的含量可以反映水体的营养盐含量、浊度和有机物质等。
一般情况下，水体中含有叶绿素a的浓度越高，其水质也就越差。
测定地表水中叶绿素a的含量对于评价水质具有重要意义。
二、地表水叶绿素a的测定方法1. 比色法比色法是测定叶绿素a含量的常用方法之一，可以根据样品的吸光度值来计算出叶绿素a的浓度。
具体测定步骤为：首先将样品经过预处理后，用特定的波长的光源辐射，测出样品的吸光度值，然后根据已知的标准曲线来计算叶绿素a的浓度。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法是一种精密准确的测定方法，通过色谱柱的分离和检测系统的测定，可以快速准确地测定出叶绿素a的含量。
这种方法的优点是测定结果准确可靠，可以应用于对于叶绿素a的精确测定。
3. 荧光法荧光法是一种快速灵敏的测定方法，通过叶绿素a在光照下的荧光特性来快速准确地测定其含量。
这种方法的优点是操作简便，结果迅速，适用于对叶绿素a含量的快速筛查。
三、地表水叶绿素a的影响因素1. 光照条件光照条件是影响叶绿素a含量的重要因素之一，充足的光照可以促进叶绿素a的生物合成，有利于提高其含量。
2. 营养盐含量水体中的营养盐含量是影响叶绿素a含量的关键因素之一，过高或过低的营养盐含量都会影响叶绿素a的生物合成。
3. 温度水体中的温度也会对叶绿素a的含量产生一定的影响，适宜的温度条件有利于叶绿素a的稳定合成和积累。
4. pH值水体的酸碱度也会对叶绿素a的含量产生一定的影响，过高或过低的pH值都会影响叶绿素a的生物合成和稳定性。
水质 叶绿素a 的测定 荧光分光光度法
标题：水质中叶绿素a的测定——荧光分光光度法一、概述水是生命之源，保持水质清洁对人类健康和生态环境至关重要。
叶绿素a是植物和浮游生物体内的主要叶绿素成分，它对于水体中的生物和化学过程具有重要影响。
对水体中叶绿素a的测定具有重要意义。
在众多叶绿素测定方法中，荧光分光光度法以其快速、灵敏、准确的特点而受到广泛关注。
二、荧光分光光度法原理及优势1. 荧光分光光度法原理荧光分光光度法是通过叶绿素a在特定激发光波长下产生荧光信号，并测定荧光光谱的强度来间接测定叶绿素a的浓度的一种方法。
其原理是叶绿素a在特定波长范围内吸收光线后发生激发态转变为基态过程中发射荧光。
通过检测叶绿素a的荧光强度，可以推断水体中叶绿素a的浓度。
2. 荧光分光光度法优势a. 灵敏度高：荧光分光光度法对叶绿素a含量的检测具有高灵敏度，能够在较低浓度范围内进行准确测定。
b. 非破坏性：该方法无需对样品进行破坏性处理，不影响样品原有特性，适用于连续监测和长期调查。
c. 快速准确：荧光分光光度法测定简单快速，结果准确可靠。
三、荧光分光光度法测定叶绿素a的步骤1. 样品采集样品来源于自然水体或实验室模拟水体。
应在样品收集后尽快进行实验分析，或进行样品的冷冻保存。
2. 仪器调试根据仪器操作手册调试荧光分光光度仪，确定最佳激发波长和检测波长。
3. 样品处理将样品进行预处理，如滤过滤膜去除颗粒物，或使用溶解剂提取叶绿素a。
4. 校准仪器利用标准叶绿素a溶液校准荧光分光光度仪，确定荧光强度和叶绿素a浓度的线性关系。
5. 测定样品放置校准后的仪器测定样品荧光强度，根据标准曲线计算叶绿素a 的浓度。
四、荧光分光光度法在水质监测中的应用荧光分光光度法在水质监测中具有广泛的应用价值，主要体现在以下几个方面：1. 监测水体富营养化程度：叶绿素a是水体富营养化的重要指标之一，荧光分光光度法可以快速准确地测定水体中叶绿素a的含量，从而评估水体富营养化程度。
2. 生态环境评估：荧光分光光度法可对水体中微生物的活性和生态环境进行评估，对水体生物多样性和生态平衡的研究具有重要意义。
水质叶绿素a的测定
水质叶绿素 a 的测定1. 定义叶绿素是植物光合作用中的重要光合色素。
通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产情况，在环境监测中，可将叶绿素 a 含量作为湖泊富营养化的指标之一。
2. 水样的采集与保存可根据工作的需要进行分层采样或混合采样。
湖泊、水库采样500mL,池塘300mL,采样量视妇幼植物分布而定。
若浮游植物数量较少，也可采样1000mL。
采样点及采样时间同“浮游植物”。
水样采集后应放在阴凉出, 避免日光直射。
最好立即进行测定的预处理, 如需经过一段时间（4~48h）方可进行预处理，则应将水样保存在低温（0~4C）避光处。
在每升水样中加入1%碳酸镁悬浊液1mL，以防治酸化引起色素溶解。
水样在冰冻情况下（-20C）最长可保存30d。
3. 仪器和设备3.1 分光光度计。
3.2 真空泵。
3.3 离心机。
3.4乙酸纤维滤膜（孔径0.45 m）。
3.5 抽滤器。
3.6 组织研磨器或其他细胞破碎器。
3.7 碳酸镁粉末。
3.8 90%丙酮。
4. 试验程序4.1 以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。
倒入定量体积的水样进行抽虑，抽虑时负压不能过大（约为50kPa）。
水样抽完后，继续抽1~2min, 以减少滤膜上的水分。
如需短期保存1~2d时，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存（30d），则应放入低温冰箱（-20T）保存。
4.2 取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6~8h 后放入组织研磨器中，加入受凉碳酸镁粉末及2~3mL 90%丙酮，充分研磨，提取叶绿素a。
用离心机（3000~4000r/min）离心10min。
将上清液倒入5mL或10mL容量瓶中。
4.3在用2~3mL的90%的丙酮，继续研磨提取，离心10min,并将上清液再转入容量瓶中。
重复1~2次，用90%的丙酮定容为5mL或10mL，摇匀。
4.4将上清液在分光光度计上用1cm光程的比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。
水质叶绿素a的测定分光光度法
HJ897-2017水质叶绿素a的测定分光光度法Water quality—Determination of chlorophyll a—Spectrophotometric method（发布稿）本电子版为发布稿。
请以中国环境出版社出版的正式标准文本为准。
2017-12-21发布2018-02-01实施环境保护部发布目次前言 (ii)1适用范围 (1)2规范性引用文件 (1)3方法原理 (1)4试剂和材料 (1)5仪器和设备 (2)6样品 (2)7分析步骤 (3)8结果计算与表示 (4)9精密度和准确度 (4)10质量保证和质量控制 (5)11废物处理 (5)i前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护环境，保障人体健康，规范水中叶绿素a的测定方法，制定本标准。
本标准规定了测定地表水中叶绿素a的分光光度法。
本标准为首次发布。
本标准由环境保护部环境监测司和科技标准司组织制订。
本标准起草单位：辽宁省环境监测实验中心。
本标准验证单位：上海市环境监测中心、大连市环境监测中心、丹东市环境监测中心站、辽阳市环境监测站、朝阳市环境监测中心站和辽宁北方环境检测技术有限公司。
本标准环境保护部2017年12月21日批准。
本标准自2018年2月1日起实施。
本标准由环境保护部解释。
ii水质叶绿素a的测定分光光度法警告：丙酮对人体健康有一定危害，操作时应在通风橱中进行，佩戴防护器具，避免接触皮肤和衣物。
1适用范围本标准规定了测定水中叶绿素a的分光光度法。
本标准适用于地表水中叶绿素a的测定。
本标准测定丙酮提取液中叶绿素a的检出限为0.04mg/L。
当取样体积为200ml，丙酮提取液体积为10ml时，本方法的检出限为2μg/L，测定下限为8μg/L。
2规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。
凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。
GB/T14581水质湖泊和水库采样技术指导HJ494水质采样技术指导HJ/T91地表水和污水监测技术规范3方法原理将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm和630nm波长处测定提取液吸光度，根据公式计算水中叶绿素a的浓度。
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水质叶绿素a的测定
1. 定义
叶绿素是植物光合作用中的重要光合色素。
通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产情况，在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一。
2. 水样的采集与保存
可根据工作的需要进行分层采样或混合采样。
湖泊、水库采样500mL，池塘300mL，采样量视妇幼植物分布而定。
若浮游植物数量较少，也可采样1000mL。
采样点及采样时间同“浮游植物”。
水样采集后应放在阴凉出，避免日光直射。
最好立即进行测定的预处理，如需经过一段时间（4~48h）方可进行预处理，则应将水样保存在低温（0~4℃）避光处。
在每升水样中加入1%碳酸镁悬浊液1mL，以防治酸化引起色素溶解。
水样在冰冻情况下（-20℃）最长可保存30d。
3. 仪器和设备
3.1 分光光度计。
3.2 真空泵。
3.3 离心机。
3.4 乙酸纤维滤膜（孔径0.45µm）。
3.5 抽滤器。
3.6 组织研磨器或其他细胞破碎器。
3.7 碳酸镁粉末。
3.8 90%丙酮。
4. 试验程序
4.1 以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。
倒入定量体积的水样进行抽虑，抽虑时负压不能过大（约为50kPa）。
水样抽完后，继续抽1~2min，以减少滤膜上的水分。
如需短期保存1~2d时，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存（30d），则应放入低温冰箱（-20℃）保存。
4.2 取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6~8h后放入组织研磨器中，
加入受凉碳酸镁粉末及2~3mL 90%丙酮，充分研磨，提取叶绿素a。
用离心机（3000~4000r/min）离心10min。
将上清液倒入5mL或10mL容量瓶中。
4.3 在用2~3mL的90%的丙酮，继续研磨提取，离心10min，并将上清液再转入容量瓶中。
重复1~2次，用90%的丙酮定容为5mL或10mL，摇匀。
4.4 将上清液在分光光度计上用1cm光程的比色皿，分别读取750nm、663nm、645nm、630nm波长的吸光度，并以90%的丙酮作空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。
5. 计算方法
6. 参考文献
水质叶绿素a的测定《水和废水监测分析方法》（第四版）国家环境保护总局（2002年）5.1.5（一）。