分光光度法测定水中的叶绿素a

分光光度法测定水中的叶绿素a
分光光度法测定水中的叶绿素a
1 检出限
水样体积300 mL、使用1 cm比色皿时，叶绿素a的检出限为0.11 μg/L，测定下限为0.5 μg/L；叶绿素b的检出限为0.25 μg/L，测定下限为1.0 μg/L；叶绿素c的检出限为0.25 μg/L，测定下限为1.0 μg/L。

2 方法原理
将一定量水样用玻璃纤维膜过滤，收集藻类，使用反复冻融法对藻类细胞进行破碎，用90%丙酮溶液提取叶绿素，根据叶绿素光谱依次测定750 nm、664 nm、647 nm、630 nm波长下的吸光度，计算叶绿素含量。

3 试剂和材料
3.1 碳酸镁悬浊液：ω（MgCO3）= 1%，1.0 gMgCO3 100 mL纯水
3.2 丙酮溶液：ψ（C3H6O）= 90%，900 mL丙酮加100 mL纯水
3.3 盐酸溶液：c（HCl）=0.1 mol/L。

8.5 mL浓盐酸加入500 mL纯水，冷却后稀释至1000 mL。

4 仪器和设备
4.1 抽滤装置
4.2 滤膜
4.3 具塞玻璃离心管
4.4 水浴锅
4.5 离心机：转速3000 ~ 4000 r/min
4.6 分光光度计
4.7 比色杯：3 cm
5 水样采集
5.1 水样采集
采集500 ~ 1000 mL 水样于棕色玻璃瓶或深色塑料瓶中。

5.2 保存
避光保存，低温运输，在-20℃以下的冰箱内保存，在25 d 内分析测试。

6 分析步骤
6.1 清洗玻璃仪器
所有玻璃仪器应该清洗干净，尤其避免酸性条件下引起的叶绿素a 的分解。

6.2 滤膜过滤
每种测定水样取300 mL ，加入0.6 mLMgCO 3悬浊液，用滤膜过滤。

6.3 提取
将滤膜转移至具塞试管，加少量碳酸镁粉末和10 mL 已水浴加热至50℃的90%丙酮溶液。

塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分震荡，避光提取4 h 。

6.4 离心
提取完毕后，离心管置于离心机上4000 r/min 离心20 min ，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞紧塞子，4000 r/min 再离心10 min 。

记录提取液的体积。

6.5 测定光密度
移入3 cm 比色杯中，以90%的丙酮溶液做为空白，分别在750 nm 、664 nm 、647 nm 、630 nm 波长处测定吸光值。

注意：664 nm 光密度值要求在0.2与1.0之间，如果不在范围内应改变水样量。

7 结果计算 7.1 叶绿素计算公式
[]6647506477506307501chl 211.85() 1.54()0.08()a
A A A A A A V V L
ρ------=
[]6647506477506307501chl 221.03() 5.43() 2.66()b A A A A A A V V L ρ------=
[]6647506477506307501chl 224.52()7.60() 1.67()c A A A A A A V V L ρ------=
式中：
V 1——提取液体体积，mL V 2——水样体积，L
L ——比色皿光程，cm 。

L = 3 cm 。

8 富营养化评价标准
表1 湖泊富营养化的叶绿素a 评价标准
类型
贫营养型中营养型富营养型叶绿素a 浓度（μg/L ）≤4 4 - 10
10 - 150。