大鼠大脑中动脉闭塞模型

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多模态神经成像技术评估缺血性卒中大鼠模型的实验研究

利用多模态神经成像技术评估缺血性卒中大鼠的实验研究作一综述。
【关键词】卒中；灌注成像；扩散加权成像；常压高浓度氧；干细胞
ＤＯＩ：１０．３８７４／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－１８９７．２０１４．０１．ＺＯＩＯ１
ＰｒｅｓｅｎｔｓｔａｔｕｓｏｆＣＴ／ＭＲｍｕｌｔｉ－ｍｏｄａｌｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎｒａｔｓｔｒｏｋｅｍｏｄｅｌｓＣＨＥＮＧＸｉａｏｑｉｎｇ，ＬＵ
Ｇｕａｎｇｍｉｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＭｅｄｉｃｌａＩｍａｇｉｎｇ，ＮａｍｉｎｇＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔｌａｏｆＮａｍｉｎｇＭｉｌｉｔａｒｙＲｅｇｉｏｎ，ＰＬＡ，Ｎａｍｉｎｇ２１０００２，
Ｃｈｉｎａ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｉｓｃｈｅｍｉｃｓｔｒｏｋｅｉｓｔｈｅｍｏｓｔｃｏｍｍｏｎｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌｃａｕｓｅｏｆｓｅｖｅｒｅｄｉｓａｂｉｌｉｔｙａｎｄｄｅａｔｈ．Ｔｈｅｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌ
ｒａｔｓｔｒｏｋｅｍｏｄｅｌｓａｒｅｒｅｖｉｅｗｅｄ．

MCAO模型的制备

实验前准备实验器材：干棉球、酒精棉球、75%酒精、生理盐水、注射器(1ml、2ml)、黑色记号笔、固定大鼠用粗线绳、大鼠板、染色小烧杯、标本瓶手术器械：备皮剪子1、眼科剪1、大直镊 1 只、小弯镊 1 对、(动脉夹2)、止血钳2-3、缝合线、缝合针、持针器麻醉剂：10%水合氯醛( 400mg/kg)保温：60W白炽灯，于37cm高处直接照射能使肛温保持在37C栓线：直径0.24mm,头端光滑圆钝；在栓线18mm的位置用黑色记号笔标记；75%酒精清洁后置1: 2500单位肝素化生理盐水中备用。

体重与栓线直径：直径0.24mm的栓线适用于体重220-280g的SD大鼠。

TTC的配制：用L磷酸缓冲液(PBS)配成2%TTC溶液()，避光保存。

药物配制：无论生理盐水还是受试药物标签均采用代号，给药及评分均采用单盲。

仪器激光多普勒血流仪(Laser Doppler Flowmetry, LDF)系统，包括：PeriFlux 5001 Ma in Unit，PF5010 LDPM Unit (激光多普勒微血流灌注量检测单元) ，LD Probe 407-1 ( Perimed Co., Jarfalla, Sweden ;大鼠脑立体定位仪(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)；牙科手钻(Stron g 90#, Korea);大鼠脑切片模具；荧光正置显微镜(NIKON ECLIPSE 80i, X400)及成像系统( ACT-2U NIKON Imaging System)。

大脑中动脉栓塞( MCAO )模型的制备参照Zea Lon ga等［2］建立的大鼠大脑中动脉内栓线阻断方法，作适当改进。

10 %水合氯醛溶液400mg/kg，腹腔注射麻醉动物。

大鼠仰卧位固定，颈部正中切开皮肤，钝性分离各层组织，暴露右侧颈总动脉(CCA) 。

分离至颈内动脉(internal carotid artery，ICA)、颈外动脉(external carotid artery，ECA)分叉后一段，仔细分离避免损伤迷走神经和气管，置线备用。

线栓法大鼠大脑中动脉脑缺血模型的评价方法初探

性脑血管病的好发部位，因此理论上阻断ＭＣＡ可以产生较为理想的脑缺血动物模型。Ｋｏｉｚｕｍｉ等【：
和Ｌｏｎｇ等【】发明的线栓法大脑中动脉闭塞脑缺血动物模型（ｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，ＭＣＡＯ）具备
线栓法大鼠大脑中动脉脑缺血模型的评价方法初探
邢凤英，周颖，马政文，吴文庆，李圭，陈学进－，严国锋（１．上海交通大学医学院实验动物科学部，上海２０００２５；２．上海交通大学生物医学工程，上海２００２４０）
由于大脑中动脉（ｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙ，ＭＣＡ）是缺血
系十分重要。以往的评价体系多采用神经缺失症状和梗死体积，少数采用了脑含水量及体质量变化【】，但单一指标都不能较全面的反映模型效果。在本实验中，采用线栓法制备永久性大鼠大脑中动脉缺血模型，结合多种参数，初步探讨一种新的评价体系。
Ｏｃｔ．２０１３．３３（５）
实验动物与比较医学ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＡｎｉｍａｌａｎｄＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＭｅｄｉｃｉｎｅ
３３９
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４ — ５８１７．２０１３．０５．００３

移植BDNF和GDNF基因修饰的hMSCs对大鼠大脑中动脉阻塞的影响

移植BDNF和GDNF基因修饰的hMSCs对大鼠大脑中动脉阻塞的影响钟慧霖;陈文明;李翠莹;王茜婷;张静远;兰丹;刘海霞;邹清雁【摘要】目的:构建脑源性神经营养因子(BDNF)和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因的非病毒表达载体,用脂质体法转染人骨髓间充质干细胞(hMSCs),观察其对大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型的影响,探索移植转基因修饰的hMSCs治疗脑血管疾病的可行性.方法:构建高效非病毒表达载体,用脂质体法转染获得高表达2种神经营养因子的hMSCs.建立大鼠MCAO模型,建模后24 h经股静脉进行转基因hMSCs移植,并以磷酸盐缓冲液(PBS)和hMSCs为对照.用脑梗死体积计算、体重变化、行为学评测等指标对大鼠脑损伤程度进行评估,通过大鼠脑组织观察和病理切片对脑组织损伤以及细胞的迁移分化情况进行分析.结果:经股静脉转基因hMSCs移植能够提高大鼠MCAO后的感觉运动功能,减小脑梗死体积,与PBS对照组相比有显著差异;与hMSCs治疗组相比,治疗效果较好且稳定.移植的细胞在脑损伤区域有少数存活但未见分化现象.结论:经静脉移植脂质体介导、GDNF和BDNF基因修饰的hMSCs,可促进缺血脑组织的损伤修复,效果较好,为非病毒载体在干细胞相关转基因治疗的应用提供了理论依据.本研究表明,MSCs的作用不依赖于细胞的分化和神经元的替换,而可能与其分泌细胞因子对抗脑损伤并促进神经修复有关,在MSCs中转入特定的外源性神经营养因子可加强这一作用.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2014(030)001【总页数】8页(P102-109)【关键词】脑源性神经营养因子;胶质细胞源性神经营养因子;间充质干细胞移植【作者】钟慧霖;陈文明;李翠莹;王茜婷;张静远;兰丹;刘海霞;邹清雁【作者单位】广州赛吉生物科技有限公司,广东广州510633;广东三九脑科医院神经医学研究中心,广东广州510510;广州赛吉生物科技有限公司,广东广州510633;广东三九脑科医院神经医学研究中心,广东广州510510;广州赛吉生物科技有限公司,广东广州510633;广州赛吉生物科技有限公司,广东广州510633;广州赛吉生物科技有限公司,广东广州510633;广州赛吉生物科技有限公司,广东广州510633【正文语种】中文【中图分类】R363中风是致残最大诱因，也是第二大致死性疾病［1-2］，在我国每年中风患者有300多万。

[VIP专享]SD大鼠脑缺血模型建立

1.缺血再灌注后，主要的损伤区在纹状体，海马的A1区也会出现损伤。

缺血再灌注损伤不是很严重海马区域就没有明显的缺血现象但是纹状体肯定有明显的缺血现象。

缺血1.5小时再灌注后我也做过尼氏染色，海马区没有见到缺血改变，但是纹状体很明显。

2.#1 大鼠大脑中动脉阻断实验的总结和心得本人现在正在做线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验（MCAO模型），这方面的资料我查了一些，这个实验我也作了一段时间，不敢说很专业了，不过现在基本上我能在15min左右完成手术，而且手术过程中不出一滴血，造模后缺血程度基本一致。

虽然前面有很多前辈发了很多MCAO的很专业的贴子，不过我觉得比较凌乱，现在我把我的心得体会和以前的贴子的精华部分奉献给大家，希望这会对将要做这个实验的朋友有一丝的帮助。

虽然做实验总会有郁闷的时候，不过风雨之后总会见到彩虹的，这可以也是我的心得体会。

衷心祝福大家能把实验做的成功、完美！！！！实验前准备麻醉剂：水合氯醛（应较好的控制大鼠体温）保温：60W白炙灯高度为37cm直接照射能使肛温保持在37℃栓线的制备：1.取熔点为56℃的固体石蜡一块，在瓷杯中加热熔化。

直径为o．24mm、长5cm的鱼线一端5mm长的一段，垂直在熔化的石蜡中迅速浸入并提起，立即凝固的一薄层石蜡可牢固地粘附在鱼线一端的表面，其直径为0.26mm。

就这样，普通的鱼线即可变成规相一致头端光滑圆钝的栓线。

2.在鱼线18mm的位置用涂改液标记一个白色点。

TTC的配制：用0.2mol/L磷酸缓冲液（PBS）配成2%TTC溶液（pH7.5）,避光保存。

体重与栓线直径：线栓直径0.24mm采用的SD大鼠，体重250-300g。

实验方法：动物用10％水合氯醛（35mg/kg）腹腔注射麻醉。

仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），在CCA 远心端和近心端及ECA处挂线备用。

通咽喷雾剂对短暂性大脑中动脉栓塞模型大鼠吞咽功能的干预效应

通咽喷雾剂对短暂性大脑中动脉栓塞模型大鼠吞咽功能的干预效应袁清洁; 冯学功; 刘建勋; 徐立; 郝文杰; 宋文婷; 姚明江; 王光蕊【期刊名称】《《中西医结合心脑血管病杂志》》【年(卷),期】2019(017)013【总页数】5页(P1965-1969)【关键词】脑卒中; 吞咽障碍; 短暂性大脑中动脉栓塞; 通咽喷雾剂; 吞咽潜伏期; 吞咽次数【作者】袁清洁; 冯学功; 刘建勋; 徐立; 郝文杰; 宋文婷; 姚明江; 王光蕊【作者单位】北京市中西医结合医院北京 100039; 中国中医科学院西苑医院基础医学研究所中药药理北京市重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R743; R289.5脑卒中是神经源性口咽部吞咽障碍的常见原因[1]，脑卒中发生72 h内有一半以上的病人存在吞咽障碍，尽管很多急性脑卒中幸存者的吞咽障碍可短期内自发缓解，但仍有约50%的脑卒中后吞咽障碍病人吞咽功能恢复缓慢[2]。

脑卒中后吞咽障碍可使吸入性肺炎等肺部并发症的发生风险增加12倍[3]，且与营养不良、脱水密切相关，严重影响病人和看护者的生活质量，增加了病死率，延长了住院时间。

因此，尽早采取有效的治疗干预有望改善病人临床结局。

目前，针灸、行为干预(包括吞咽训练和食物调整)、药物、神经肌肉电刺激、咽部电刺激、物理刺激、经颅直流电刺激、经颅磁刺激等吞咽疗法被用来治疗脑卒中后吞咽障碍。

然而，除针灸、行为干预疗法可减少吞咽障碍和咽部电刺激可减少咽部传送时间外，其他吞咽疗法的有效性仍不确定[4]。

另外一项Meta分析研究显示，针灸治疗脑卒中后吞咽障碍的短期疗效和安全性肯定，但远期疗效尚无可靠的循证医学证据支持[5]，而且针灸、吞咽训练等的实际疗效还与操作者专业技能水平[6]、病人的认知水平及依从性等有关，故对于初涉临床的医师或看护人员来说更是难以实施。

通咽喷雾剂(Tong-Yan Spray，TY Spray)是由生姜、威灵仙、肉桂三味中药组成的复方喷雾制剂，已获批国家发明专利(专利号ZL 2011 1 0035741.X)。

银杏达莫注射液联合骨髓间充质干细胞移植改善脑梗死后的神经功能

银杏达莫注射液联合骨髓间充质干细胞移植改善脑梗死后的神经功能杨朝阳【摘要】背景：通过细胞移植重建损伤脑组织成为治疗脑梗死的新途径，骨髓间充质干细胞成为近年来细胞移植治疗领域的研究热点。

目的：探讨银杏达莫注射液联合骨髓间充质干细胞移植对脑梗死大鼠神经功能的改善作用及相关机制。

方法：利用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型，建模成功后60只SD大鼠随机分为对照组、细胞移植组及联合组。

对照组尾静脉注射PBS、细胞移植组尾静脉注射2.5×109 L-1的骨髓间充质干细胞悬液、联合组尾静脉注射2.5×109 L-1的骨髓间充质干细胞悬液和银杏达莫2 mL/kg，1次/d，连续注射5 d。

于移植后的1，3 d及1，2周进行mNSS行为学评分，以观察大鼠神经功能缺损状况。

移植后2周RT-PCR检测脑组织中脑源性神经生长因子、生长相关蛋白43基因表达变化，TUNEL法检测细胞凋亡情况，免疫组化法检测BrdU阳性细胞数。

结果与结论：移植后的1，3 d各组大鼠神经功能缺损评分差异无显著性意义(P >0.05)，在移植后1，2周，联合组神经功能缺损评分低于细胞移植组及对照组(P <0.05)；移植后2周，联合组脑源性神经生长因子、生长相关蛋白43 mRNA表达明显高于细胞移植组及对照组(P<0.05)，联合组凋亡细胞数目明显少于细胞移植组及对照组(P <0.05)，联合组BrdU阳性细胞数量明显多于细胞移植组及对照组(P <0.05)。

结果表明骨髓间充质干细胞联合银杏达莫干预能促进脑梗死组织脑源性神经生长因子、生长相关蛋白43 mRNA的表达，抑制细胞凋亡，改善大鼠神经功能。

%BACKGROUND:Reconstruction of damaged brain tissue through cel transplantation has become a new way to treat cerebral infarction. In recent years, bone marrow mesenchymal stem celshave become the new darling in cel transplantation therapy. OBJECTIVE:To investigate the effect of ginkgo-damole injection combined with bone marrow mesenchymal stem cel transplantation to improve the neurological function of acute cerebral infarction rats and its mechanism. METHODS:Animal models of middle cerebral artery occlusion were made in rats using suture method, and then 60 rat models were randomly divided into control group, cel transplantation group and combination group. The control group was given intravenous injection of PBSvia the tail vein; the cel transplantation group was given intravenous injection of bone marrow mesenchymal stem cel suspension (2.5×109/L) via the tail vein; the combination group was given intravenous injection of bone marrow mesenchymal stem cel suspension (2.5×109 /L) and ginkgo-damole injection (2 mL/kg, once a day, totaly 5 days)via the tail vein. Modified neurological severity scores were recorded at 1, 3 days and 1, 2 weeks after transplantation. At 2 weeks after transplantation, expressions of brain-derived neurotrophic factor and growth associated protein 43 in the brain were detected using RT-PCR; cel apoptosis detected using MTT assay; BrdU positive cels counted using immunohistochemistry method. RESULTS AND CONCLUSION:There were no differences in the modified neurologic severity scores among the three groups at 1, 3 days after transplantation (P > 0.05), but the modified neurological severity scores in the combination group were lower than those in the cel transplantation group and control group at 1, 2 weeks after transplantation (P < 0.05). The expressions of brain-derived neurotrophicfactor and growth associated protein 43 in the brain were significantly higher in the combination group than the other two groups at 2 weeks after transplantation (P < 0.05); compared with the other two groups, the number of apoptotic cels was less but the number of BrdU positive cels was higher in the combination group (P < 0.05). These findings indicate that the combination of ginkgo-damole injection and bone marrow mesenchymal stem cel transplantation can increase the expressions of brain-derived neurotrophic factor and growth associated protein 43 in the brain, inhibit cel apoptosis and improve neurological function in rats with cerebral infarction.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2015(000)050【总页数】6页(P8108-8113)【关键词】干细胞;移植;银杏达莫注射液;骨髓间充质干细胞;干细胞移植;脑源性神经生长因子;GAP-43;脑梗死【作者】杨朝阳【作者单位】济源市人民医院普内科，河南省济源市 454000【正文语种】中文【中图分类】R394.2文章亮点：1“干细胞循环”理论与中医理论中的“活血化瘀”法与有相通之处，银杏达莫注射液是从中药银杏叶中提取的复方制剂，能清除自由基、改善血液循环。

大鼠大脑中动脉永久性缺血和缺血再灌注模型的比较

种较理想的模拟脑梗死的动物模型。
主题词大鼠脑缺血大脑中动脉阻塞缺血再灌注
【中图分类号】Ｒ７４３．５【文献标识码】Ａ【文章编号１１０００ — ７３７７（２０１３）０６ — ０６４３ — ０４Ｔｈｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｂｅｔｗｅｅｎｐｅｒｍａｎｅｎｔｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎｍｏｄｅｌａｎｄｔｈｅｍｏｄｅｌｏｆｉｓｃｈｅｍｉａｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎ
ｍｏｄｅｌａｎｄｔｈｅｍｏｄｅｌｏｆｉｓｃｈｅｍｉａ／ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎｉｎｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎａｎｄｔｏｆｉｎｄａｓｉｍｐｌｅａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅ
ｍｏｄｅｌｏｆｃｅｒｅｂｒａｌｉｓｃｈｅｍｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：１５０ｍａｌｅＳｐｒａｇｕｅ — Ｄａｗｌｅｙｒａｔｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏ３ｇｒｏｕｐｓ：ｐｅｒｍａｎｅｎｔｍｉｄｄｌｅ
只。比较模型制作的成功率、术后存活率、神经功能缺失评分、脑梗死体积及模型稳定性。结果：脑

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大鼠大脑中动脉闭塞模型
动脉闭塞是指血管内膜下层有血栓形成或发生动脉狭窄，导致血流受阻的情况。

动脉闭塞是一种常见的心血管疾病，可以引起各种严重的后果，包括心肌梗死、中风等。

为了研究动脉闭塞对大脑的影响，科学家们开发了大鼠大脑中动脉闭塞模型。

大鼠是常用的实验动物之一，其大脑结构与人类相似，因此被广泛用于研究脑血管疾病。

大鼠大脑中动脉闭塞模型是通过手术的方式在大鼠的大脑中模拟动脉闭塞的情况。

手术过程中，科学家会选择一条主要动脉（通常为颈总动脉或大脑前动脉）进行闭塞。

闭塞的方法可以是通过线结扎、气囊压迫或介入手术等方式实现。

动脉闭塞模型的建立旨在模拟人类动脉闭塞的情况，进一步研究其对大脑的影响以及可能的治疗方法。

通过模拟动脉闭塞，研究人员可以观察大脑在缺血（血液供应不足）和再灌注（血液重新供应）过程中的变化，并研究其对神经细胞的损伤程度和康复情况。

在模型建立后的实验中，科学家们可以通过多种方法来评估动脉闭塞对大脑的影响。

例如，可以使用组织学方法观察大脑组织的病理变化，如神经细胞的坏死和炎症反应；可以使用行为学方法评估大鼠的认知和运动功能是否受损；还可以使用分子生物学和生物化学方法研究相关的信号通路和分子机制。

通过大鼠大脑中动脉闭塞模型，科学家们得以深入了解动脉闭塞对
大脑的影响机制，并寻找可能的治疗方法。

例如，一些研究表明，通过干细胞移植、药物治疗或物理疗法等手段，可以促进受损的神经细胞恢复功能，缓解动脉闭塞带来的不良后果。

大鼠大脑中动脉闭塞模型为研究动脉闭塞对大脑的影响提供了有力的工具。

通过这一模型，科学家们能够更好地理解动脉闭塞的发病机制，寻找可能的治疗方法，并为临床实践提供理论依据。

随着科技的不断进步，相信这一模型将继续发挥重要作用，推动脑血管疾病的研究和治疗进程。