实验室方法全集
实验室质量常见的5种控制方法
实验室质量常见的5种控制方法1.实验室内部质量控制：实验室内部质量控制是确保实验室内所有操作过程的准确性和一致性的关键措施。
这包括各个实验室环节的质量控制，如实验室设备和仪器的校准和验证、实验室操作规程的编制和执行、实验材料的管理和控制等。
这些控制方法可以通过内部培训、标准操作规程、实验记录和标准操作程序来实施。
2.外部参照物质控制：外部参照物质控制是通过采用认证的参考材料或方法来检验实验室测量结果的准确性和可重复性的方法。
这些参照物质可以是国际、国家或行业标准物质，在大量实验室中得到证实，具有可追溯性和可靠性。
实验室可以通过参与国际或国家组织的质量控制测试和对比试验，获得与其它实验室的实验结果比较和验证。
3.标准操作规程控制：标准操作规程控制是通过编制标准操作规程，并确保实验室操作规程的正确执行来保证实验结果的准确性和可靠性。
标准操作规程应包括实验流程、操作步骤、实验条件、检测方法、数据处理方法等内容，以确保实验过程的一致性和可重复性。
4.数据管理和分析控制：实验室质量控制的一个关键方面是数据管理和分析控制。
数据管理包括数据收集、记录、存储和传输过程的管理措施，旨在确保实验数据的准确性、完整性和一致性。
数据分析控制包括数据处理和分析方法的验证和校正，以及数据结果的解释和评估，以确保实验结果的可靠性和可重复性。
综上所述，实验室质量控制方法包括实验室内部质量控制、外部参照物质控制、标准操作规程控制、数据管理和分析控制，以及定期质量审查和内部审核。
这些控制方法可以保证实验室操作过程、实验数据和实验结果的准确性和可靠性，提高实验室的工作效率和研发能力。
实验室常用统计方法
实验室常用统计方法1.描述统计方法：描述统计方法是通过汇总和整理实验数据的相关特征来进行分析的方法。
包括计算数据的均值、标准差、中位数等，以对数据的集中趋势、离散程度、分布情况等进行描述。
2.参数检验方法：参数检验方法用于比较两个或多个样本之间的差异，并判断这些差异是否显著。
常见的参数检验方法包括t检验、方差分析等。
t检验用于比较两个样本均值之间的差异，方差分析则用于比较多个样本均值之间的差异。
3. 非参数检验方法：非参数检验方法是针对无法满足参数检验假设的实验数据而设计的。
常见的非参数检验方法包括Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis检验等。
Wilcoxon秩和检验用于比较两个相关样本之间的差异，Kruskal-Wallis检验则用于比较多个独立样本之间的差异。
4.回归分析：回归分析用于研究自变量和因变量之间的关系，并建立预测模型。
在实验室中，回归分析常用于研究因变量与多个自变量之间的线性关系。
通过回归分析可以确定自变量对因变量的贡献程度，以及预测因变量的可能取值。
5. 生存分析：生存分析是用于研究事件发生的时间和相关因素之间的关系的统计方法。
在实验室中，生存分析常用于研究生物学实验中事件发生的概率和时间。
生存分析的常见方法包括Kaplan-Meier生存曲线分析和Cox比例风险模型分析。
6.方差分析：方差分析是用于比较多个样本均值差异的统计方法。
在实验室中，方差分析常用于比较多个处理组之间的差异，并确定是否存在显著差异。
方差分析可分为单因素方差分析和多因素方差分析，用于比较不同因素对实验结果的影响。
7.聚类分析：聚类分析是将样本按照相似性分为不同的组别的统计方法。
在实验室中，聚类分析常用于将实验数据按照其特征进行分类，以寻找样本之间的相似性和差异性。
综上所述，实验室常用的统计方法涵盖了描述统计、参数检验、非参数检验、回归分析、生存分析、方差分析和聚类分析。
通过运用这些统计方法，实验室可以更好地处理和分析实验数据，为科研工作提供有力的支持。
化学实验室测试方法
化学实验室测试方法化学实验室测试方法是科学研究和工程应用中不可或缺的一环。
通过合理设计和选择测试方法，可以有效地进行物质分析和性质评估，为实验室工作提供准确和可靠的数据支持。
本文将介绍一些常用的化学实验室测试方法，包括质量分析、物理性质测试和反应性评估等方面。
一、质量分析质量分析是化学实验室进行物质组成鉴定和含量测定的重要手段。
常用的质量分析方法包括色谱法、质谱法和光谱法等。
1.色谱法色谱法通过分离和鉴定混合物中各组分的相对含量，广泛应用于物质成分分析。
高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）是常用的色谱法。
HPLC适用于检测溶液中的化合物，而GC适用于检测挥发性物质。
2.质谱法质谱法主要用于物质的分子结构鉴定和含量测定。
质谱仪可以通过测量物质中离子的质量和相对丰度，确定其分子量和结构。
质谱法在有机化学研究和有机合成中具有重要的地位。
3.光谱法光谱法是利用物质对电磁辐射的吸收、散射、发射等现象进行分析的方法。
常用的光谱方法包括紫外可见光谱（UV-Vis）、红外光谱（IR）和核磁共振光谱（NMR）等。
UV-Vis可以测定物质的吸收峰和吸光度，IR可以分析物质的官能团，NMR可以确定物质的结构。
二、物理性质测试物理性质测试是研究物质的物理性质和特性的重要手段。
常用的物理性质测试方法包括密度测定、粘度测定和熔点测定等。
1.密度测定密度是指物质单位体积的质量。
通过测量物质的质量和体积，可以计算出物质的密度。
常用的密度测定方法包括质量法和比重法。
质量法通过称量物质的质量和体积，直接计算出密度。
比重法则是将物质浸入不同密度的液体中，根据物质的浮沉情况确定密度。
2.粘度测定粘度是指物质流动阻力的大小，可以反映物质的粘稠程度。
粘度测定常用的方法有落球法和旋转粘度计法。
落球法是通过测量物质内部流动物体的下落速度，计算出物质的粘度。
旋转粘度计法则是利用旋转粘度计测量物质在不同转速下的阻力，根据阻力大小计算出粘度。
实验室制取气体方法
实验室制取气体方法
在实验室中，制取气体的方法可以根据气体的性质和制备要求不同而有所差异。
以下是一些常见的实验室制取气体的方法：
1. 蒸发法：某些易挥发的液体可通过加热使其蒸发，然后将气体冷凝收集。
2. 氢化物法：将适量的金属与酸性溶液反应，生成氢气。
例如，铍与硫酸反应生成硫酸铍，然后通过加热分解得到氢气。
3. 碱金属与水反应法：将碱金属（如钠、钾）与水反应，产生氢气。
4. 酸与金属反应法：将适量的酸性溶液与金属反应，生成相应的金属盐和氢气。
例如，用盐酸与锌反应可以制取氢气。
5. 高温分解法：一些化合物在高温下可以分解产生气体。
例如，高温下加热重铬酸钠可以产生氧气。
6. 导电式电解法：利用电解原理将水或者其他适合的溶液分解为氧气和氢气。
例如，用电解法可以制取氧气和氢气。
7. 吸附法：某些气体可以通过特定的材料吸附和分离出来。
例如，通过活性炭吸附可制取氯气。
以上只是一些常见的实验室制取气体的方法，还有其他更具体的制取方法根据不同气体的性质和要求而存在。
在操作中，要注意安全操作和防范有毒或易燃气体的泄漏。
实验室室内检测常用方法技巧及特点经典案例
2021/5/27
15
８、保存图谱 保存图谱：待所有峰都检测出来后，按
GC-1690气相色谱仪“停止”按钮；N2000工 作站继续采集数据1~10min，在电脑上用鼠标 点击“停止采集”。实验图谱会自动保存于 设定的文件夹内。到此，一个进样实验完成。
若再次进样，等待柱箱温度下降至柱箱初温 5~10min后，再次按上述流程进样。
2021/5/27
19
光谱法
根据我们实验室常用的光谱法有以下三种： 紫外-可见分光光度法 原子吸收分光光度法 原子荧光分光光度法
2021/5/27
20
紫外-可见分光光度法
一、基本原理 二、分析条件的选择 三、分析方法及注意事项
2021/5/27
21
一、基本原理
紫外-可见分光光度法——根据被测物质在 紫外-可见光的特定波长处或一定波长范围内 对光的吸收特性而对该物质进行定性、定量分 析的方法称紫外-可见分光光度法。
2021/5/27
16
９、关机
关机前先关闭N2000色谱数据工作站和电 脑；将GC-1690气相色谱仪的柱箱、检测器、 热解吸仪、辅助2的温度参数设定为≤99℃， 等待温度全部降低至99℃以下。关闭燃气控 制器的空气流量，使氢气火焰检测器火焰熄 灭，火焰熄灭后讲空气流量调回正常，最后 关闭气相色谱仪；
实验室检测常用方法及特点
一、称量法 二、色谱法 三、光谱法 四、样品预处理 五、校准曲线的要求
2021/5/27
1
称量法
实验室一般的分析称量方法有以下几种：
1、直接称量法 2、增量法 3、减量法 4、指定法
2021/5/27
2
1、直接称量法
称量物体，如烧杯、表面皿、坩埚等， 一般采用直接称量法。即用砝码直接与被 称物平衡，此时砝码的重量就是被称物的 重量。所称固体试样如果没有吸湿性并在 空气中是稳定的，可用直接称量法。 方法如下：用一条干净的纸条拿取被 称物放入天平的称量盘，然后去掉纸条， 在砝码盘上加砝码。此时，砝码所标示的 重量就等于被称物的重量。
实验室需要掌握的四种比对方法
实验室需要掌握的四种比对方法今天给大家总结实验室需要掌握的四种内部比对方法：人员比对、方法比对、仪器比对、留样再测。
一）人员比对人员比对试验是指在相同的环境条件下，采用相同的检测方法、相同的检测设备和设施，由不同的检测人员对同一样品进行检测的试验。
当某项试验可由多人进行操作时，实验室可采用人员比对试验的方式进行内部质量控制，通过安排具体具有代表性的不同层次的两人或者多人展开，考核测试人员的能力水平，判断检测人员操作是否正确、熟练、用以评价人员对试验检测结果准确性、稳定性和可靠性的影响。
作为实验室内部质量控制的手段、人员比对优先适用于以下情况：1）依靠检测人员主观判断较多的项目、例如食品中的感官、品尝的项目；2）在培员工和新上岗的员工；3）检测过程的关键控制点或关键控制环节；4）操作难度大的项目和或者样品；5）检测结果在临界值附近；6）新安装的设备；7）新开验的检测项目。
二）方法比对方法比对试验是指在环境条件相同、相同的人员采用不同的检测方法对同一样品进行的检测。
当某个检测项目可以由多种方法进行操作时，实验室可以采用方法比对进行内部质量控制，判断检测所遵循的标准或者方法是否被严格地理解和执行，用以评价检测方法对试验检测结果准确性、稳定性和可靠性的影响。
作为实验室内部质量控制的手段、方法比对优先适用于以下情况：1）刚实施的新标准或者新方法；2）引进的新技术、新方法和研制的新方法；3）已有的具有多个检验标准或方法的项目。
三）仪器比对仪器比对试验是指在相同的环境、相同的方法、由相同的检测人员采用不同的仪器设备对同一样品进行检测的试验。
当某项试验可由多种设备进行操作时，实验室可采用设备比对试验的方式进行内部质量控制，判断对测量准确度、有效性有影响的设备是否符合测量溯源性的要求，用以评价仪器设备对实验室检测结果准确性、稳定性和可靠性的影响。
作为内部质量控制手段，设备比对试验优先适用于以下情况：①新安装的设备；②修复后的设备；③检测结果出现在临界值附近的设备。
实验室制取氯气的方法
实验室制取氯气的方法
一、反应原理：
最常用MnO2 + 4HCl(浓） ==加热== MnCl2+ 2H2O + Cl2 ↑
常用的氧化剂还有有KMnO4、KClO3、Ca(ClO)2等。
1、2KMnO4+16HCl=2KCl+2MnCl2+5Cl2↑+8H2O
由于KMnO4的氧化性比MnO2强，所以用KMnO4制Cl2，通常不需加热。
2、KClO3+6HCl==== KCl+3Cl2↑+3H2O
3、Ca(ClO)2+4HCl(浓)==== CaCl2+2Cl2↑+2H2O
二、用向上排空气法或者排饱和食盐水法收集。
三、用饱和食盐水出去HCl气体，用浓硫酸除去水蒸气。
四、用强碱溶液（如NaOH溶液）吸收尾气。
五、验满：
1、将湿润的淀粉-KI试纸靠近盛Cl2瓶口，观察到试纸立即变蓝，则证明已集满。
2、将湿润的蓝色石蕊试纸靠近盛Cl2瓶口，观察到试纸先变红后褪色，则证明已集满。
3、实验室制备氯气时，常常根据氯气的颜色判断是否收集满。
实验室制取二氧化碳的方法
实验室制取二氧化碳的方法
制取二氧化碳的实验室方法有多种。
下面将介绍几种常用的方法。
1.酸与碱反应法：
将酸和碱按适当的配比混合，然后通入一定量的冷水，产生大量的气体。
将气体通过通气管引入盛有冷却剂的集气瓶中，并使气体冷却凝结下来。
冷凝后的液体就是二氧化碳。
2.碳酸盐与酸反应法：
将碳酸盐与酸反应制备二氧化碳是较为常用的方法之一。
首先，取适量的酸（如稀盐酸）放入集气瓶中，再加入含有碳酸盐的物质，如碳酸氢钠（小苏打），两者反应后即产生二氧化碳。
气体通过集气瓶的通气口进入集气瓶内。
3.热分解法：
将适量的碳酸盐样品（如碳酸钠或碳酸氢钠）放入玻璃试管中，加热试管使其发生热分解反应。
反应产物中产生大量的二氧化碳气体，可以通过连接在试管口上的集气瓶进行收集。
4.发酵法：
将适量的有机物质（如蔗糖、果糖等）溶解在水中制备好发酵液，然后加入适量的酵母或其他发酵产物，将反应容器密封。
在一定的温度和适宜的环境条件下，酵母（或其他微生物）分解有机物，产生二氧化碳和酒精。
二氧化碳气体可以通
过管道引入收集瓶中。
需要注意的是，实验室制取二氧化碳过程中，应当采取适当的安全防护措施，确保操作人员的安全。
同时，在进行实验之前，应仔细准备实验所需的试剂和设备，并对实验条件进行充分的调整和控制，以确保实验能够取得预期的结果。
总之，通过酸与碱反应、碳酸盐与酸反应、热分解和发酵等方法都可以在实验室中制取二氧化碳。
这些方法都比较简单易行，能够满足实验要求。
实验室管理方法
中小学实验室工作方法一、存放管理1.分类科学，整齐有序。
教学仪器要按教育部颁布的配备标准按学科分类存放，同一学科的仪器分成九大类：0通用、1测量、2专用、3模型、4标本、5挂图、6玻璃仪器、7药品、8工具。
每一大类中仪器种数较多的，又可细分成几个小类。
如化学仪器中玻璃仪器较多，可进一步分为：60计量、61加热、62一般、63容器、64材料，而物理、生物仪器中玻璃仪器较少，就不需再细分，按序排列即可。
每一类中的仪器通常按照配备标准中编号的顺序，从左到右，由下而上（由上而下也可）排列。
同时还要遵循里高外低，上轻下重原则，即轻件、小件在上，重件、大件在下；矮件、小件在前，高件、大件在后。
小件仪器可实行捆扎式、盒式或花式存放，便于清点，方便使用，节省空间。
如试管、直尺、导管等细长的仪器，可以“五”或“十”为捆扎单位，用皮筋捆绑存放。
橡胶塞、小灯座、单刀开关等小件仪器可集中放入盒内摆放。
有些小件仪器也可视其形态的不同和数量的多少，组成各种花样图案摆放于橱中，如止水夹摆放成梅花型，燃烧匙、试管夹摆放为扇型。
另外，随着新课程的实施，有部分不符合新课程的旧仪器被淘汰。
这部分仪器有的可作为课外实验、科技活动继续使用，有的随着教材的变动又可能被重新采用，所以要单独列为一类存放，其排序可按老目录中的编号顺序，没有编号的，可自行编号摆放。
2.标识准确，取用方便。
通常采用“一表、一牌、一卡、一签”模式对仪器进行标识，帮助查找，方便取用。
即每一个仪器室有教学仪器存放一览表，每一个仪器橱有橱号牌，每一层有定位卡，每一件仪器有标签。
教学仪器存放一览表张挂在仪器室比较显眼的地方，一览表应有仪器编号、名称、数量、位置等栏目，其中存放位置可由三个数字组成，即橱号、层号、位置号；橱号牌贴或喷在仪器橱的正面上方或放置橱顶；定位卡贴在每一橱层的一侧橱板上，有条件学校可制作精美的定位卡贴在橱门上，不仅便于查阅，同时起到美化仪器室的作用；标签一般要粘贴在仪器前端左下方，不影响实验观察与操作的位置，同种仪器粘贴的位置要相同。
实验室主要技术方法和项目范围
主要技术方法和项目范围
主要技术方法:
细菌的分离培养、血清学分型、生化鉴定；病毒血清学检测、非高致病性病毒的分离、组织培养；病原微生物的分子生物学检测和鉴定、分子生物学分型。
项目范围:
1、卫生微生物学实验：涉及菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群的检测及各种致病菌的增菌和分离工作，对分离到的各种常见的肠道致病菌的鉴定工作；
2、消毒产品与医院消毒监测工作：工作内容同上；
3、传染病细菌监测/检测工作：涉及肠道传染病中的霍乱、伤寒、痢疾等以及呼吸道传染病中的流脑、军团菌等分离培养与鉴定；
4、病毒性传染病检测/监测工作：涉及各种肠道和呼吸道病毒的血清学检测、HIV血清学检测、流感病毒的分离工作，均为已知病原；
5、不明原因肺炎检测/监测工作：对传染性未知、不能预测潜在的感染性的标本，进行多种病原微生物的排查检测，操作包括标本的初步处理和分离物的血清学检测。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验室方法全集 实验室方法全集 .............................................................................................. 1
1 Western Blot Protocol ............................................................................................................ 2 2 RT-PCR 的实验过程 ............................................................................................................ 6 3 细胞的冻存、复苏、传代和计数 ........................................................................................ 8 4 外周血中提取DNA ............................................................................................................ 11 5 组织中提取DNA ................................................................................................................ 12 6 小鼠髓源性树突状细胞的提取和培养 .............................................................................. 13 7 细胞组织样品...................................................................................................................... 14 8 原代培养人HSCs的表型确定 ...................................................................................... 17 9 ELISA操作步骤： ............................................................................................................. 18 10 鼠尾胶原制备方法 .............................................................................................................. 18 11 QIAEX II 试剂盒提取琼脂糖凝胶电泳DNA方法 ......................................................... 19 12 Ltn重组腺病毒扩增、纯化、滴度测定及鉴定 ............................................................... 20 13 狭缝印迹杂交...................................................................................................................... 22 14 细胞核蛋白提取步骤： ...................................................................................................... 26 15 EC were treated with IFN-γ(1000u/ml) for 72h to induce MHC class II. ............................ 28 1 Western Blot Protocol 1) 样品处理 1．培养细胞： ⑪ 去培养液后用温的PBS冲洗2~3遍（冷的PBS有可能使细胞脱落）。 ⑫ 胰蛋白酶消化细胞，PBS漂洗2～3次。 ⑬ 加入适量的冰预冷的裂解液后置于冰上30～60min。 ⑭ 12000g离心，4℃，2min。 ⑮ 取少量上清进行定量。 ⑯ 将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合沉淀后加loading buffer（终浓度为1×）后，100℃，5～10min变性，低温储存，-70℃一个月，-20℃一周，4℃ 1~2天。 2．组织： ⑪ 匀浆 对于心肝脾肾等组织可每50~100mg加1ml裂解液，肺100~200mg加1ml裂解液。可手动或电动匀浆。注意尽量保持低温，快速匀浆。 ⑫ 12000g离心，4℃，2min。 ⑬ 取少量上清进行定量。 ⑭将所有蛋白样品调至等浓度，充分混合沉淀后加loading buffer（终浓度为1×）后，100℃，5～10min变性，低温储存，-70℃一个月，-20℃一周，4℃ 1~2天。
2) 配胶 1． 注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。 2． 各种不同浓度的胶配方见下表：
裂解液配方： Tris-Cl (pH7.4) 20 mM EDTA 1 mM NaCl 150 mM Triton X-100 1%(v/v) 去氧胆酸钠 0.5％ cocktail 25ug/ml 提取磷酸化的蛋白还需加Na3VO4及NaF各 1mM。
4×loading buffer配方： 甘油 40% Tris·Cl (pH6.8) 200mM 溴酚蓝 0.4％ SDS 8% DTT 200mmol/L
Buffer可配成2~5×，注意SDS终浓度勿超过10%。 分离胶(10ml) 8％胶 12%胶 15%胶 积层胶(5ml) 5％胶 H2O 4.6 ml 3.3 2.3 H2O 3.4 30%丙烯酰胺 2.7 ml 4.0 5.0 30%丙烯酰胺 0.83 1.5M Tris (pH8.8) 2.5 ml 2.5 2.5 1.0M Tris (pH6.8) 0.63 10% SDS 0.1 ml 0.1 0.1 10% SDS 0.05 10% APS 0.1 ml 0.1 0.1 10% APS 0.05 TEMED 0.006 ml 0.004 0.004 TEMED 0.005
丙烯酰胺浓度（％） 线性分离范围（kD） 15 12～43 10 16～68 7.5 36～94 5.0 57～
3． 封胶： 灌入2/3的分离胶后应立即封胶，一般可用ddH2O，待分离胶凝固后，将ddH2O倒掉。 4．灌好积层胶后，约30～60min后小心拔除梳子、以免上样孔变形。若上样孔有变形，可用适当粗细的针头拨正；若变形严重，可在去除残胶后用较薄的梳子再次插入梳孔后加水拔出。30min后即可上样，长时间有利于胶结构的形成，因为肉眼观的胶凝时其内部分子的排列尚未完成。
3) 电泳 1．上样前将胶板下的气泡赶走。 2．所有蛋白样品调至等浓度后上样，样品两侧的泳道用等体积的1×loading buffer上样，Marker也用1×loading buffer调整至与样品等体积。 2．跑积层胶时以100V进行稳压电泳，跑分离胶时改为200V进行稳压电泳。 3．在目的蛋白泳动至距胶下缘1cm以上结束。
5×电泳液配方：Tris-base 15.1g, glycine94g, 50ml 10% SDS，溶至终体积1000ml。待用时稀释至1×。
10%的APS最好现配现用，如在4℃存放勿超过两周。30%的丙烯酰胺如有沉淀，最好弃掉。 30％丙烯酰胺：29g丙烯酰胺＋亚甲基叉双丙烯酰胺，溶至终体积为100ml。 4) 转膜 1． 浸泡硝酸纤维素膜：将膜平铺于去离子水面，靠毛细作用自然吸水后再完全浸入水中10min以排除气泡，随后浸泡入转移液中。PVDF膜则在M-OH中浸泡20min以上后转入转移液中。将滤纸也浸入转移液中。 2．将胶卸下，保留30-100KD或分子量范围更广些的胶（以便以后杂其他感兴趣的蛋白），右下切角，在转移液中稍稍浸泡一下，置于洁净玻璃板上，按顺序铺上膜与每侧2张滤纸，注意用玻棒逐出气泡。 3．转膜： 湿转：转膜槽用去离子水淋洗晾干，加入1000ml转膜液。将胶平铺于海绵上，滴加少许电转液再次驱赶气泡，封紧后放入电转槽，注意膜在正极一侧。将电泳槽置于冰水混合物中冷却。恒流200mA1～3h（不同大小蛋白转膜时间不同）。
5) 封闭及杂交 1．封闭： 将膜从转膜槽中取出， TBS-T稍加漂洗，浸没于封闭液中缓慢摇荡1～2h。必要时可先用丽春红染色（2%乙酸，0.5%丽春红的水溶液）观察蛋白条带，再用去离子水和TBS-T将丽春红洗脱后封闭。 2．结合一抗： 抗体液制备：10mlTBS-T＋5％脱脂奶粉（用于单抗）或胎牛白蛋白（用于多抗）＋0.02％叠氮钠＋抗体（1：1000稀释） 3．洗涤： 一抗孵育结束后，用TBS-T漂洗膜洗三次，每次5-10min。 4．结合二抗： 根据一抗来源选择合适的二抗，根据鉴定方法选择HRP或AP标记的抗体，按相应比例稀释（1:1000~1:10000），室温轻摇一小时。 5．洗涤： 二抗孵育结束后，用TBS-T漂洗膜后再浸洗三次，每次5~10min。
（六）发光鉴定 一般使用辣根过氧化物酶HRP-ECL发光法或碱性磷酸酶AP-NBT/BICP显色法。 1．HRP-ECL发光法：
TBS-T： Tris-HCl 20mM, pH 7.4 (25℃) NaCl 150mM Tween-20 0.05% 封闭液: 5%脱脂奶粉(用于单抗)或胎牛白蛋白（用于多抗）的TBS-T 一抗液： 0.2% 叠氮钠＋10ml封闭液＋一抗原液（一般按1：1000稀释） 一抗溶液中加入0.2% 叠氮钠后4℃可长时间存放（至少2月）
1×转膜液配方： Tris-base 5.8g, glycine 2.9g, 0.37g SDS，200ml 甲醇，溶至终体积1000ml