铜绿假单胞菌
铜绿假单胞菌检验方法
铜绿假单胞菌检验方法铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的细菌，它广泛存在于自然环境中，如土壤、水体和植物表面等。
然而，铜绿假单胞菌也是一种常见的致病菌，它可以导致各种感染，特别是对于免疫系统较弱的人群来说更具威胁性。
因此，为了及时发现和控制铜绿假单胞菌感染，准确快速的检测方法非常重要。
常用的铜绿假单胞菌检验方法包括了生化试验、分子生物学方法和荧光染色法等。
其中，生化试验是最常见的方法之一。
生化试验通过检测铜绿假单胞菌在特定条件下产生的特定酶活性来进行判断。
例如，铜绿假单胞菌可以产生氧化酶、葡萄糖酸激酶和琼脂酶等酶，这些酶的产生可以通过颜色变化或者特定的试剂进行检测。
分子生物学方法是近年来快速发展的一种检测方法，它可以通过检测铜绿假单胞菌的DNA来进行判断。
常用的分子生物学方法包括PCR（聚合酶链式反应）、实时荧光定量PCR和基因测序等。
这些方法可以通过特定的引物和探针来识别并扩增铜绿假单胞菌的DNA，从而进行检测和鉴定。
荧光染色法是一种简单易行的检测方法，它通过使用特定的荧光染料来与铜绿假单胞菌结合，从而进行检测。
荧光染色法可以通过显微镜观察荧光染料的结合情况来判断样品中是否存在铜绿假单胞菌。
这种方法操作简单，结果直观，适用于快速筛查和初步判断。
除了以上几种方法外，还有一些其他的检测方法也可以用于铜绿假单胞菌的检测，如免疫学方法、质谱分析法和电化学法等。
这些方法各有优劣，可以根据实际需要选择合适的方法进行检测。
铜绿假单胞菌的检验方法多种多样，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，应根据需求和实际情况选择合适的方法进行检测。
同时，为了保证检测结果的准确性，还应注意样品的采集和处理过程，并遵循标准操作规程。
只有通过科学准确的检测方法，才能及时发现和控制铜绿假单胞菌感染，保障人们的健康。
铜绿假单胞菌检验方法标准
铜绿假单胞菌检验方法标准
铜绿假单胞菌检验是用来检测铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的存在和数量的方法。
以下为一般的检验方法标准：
1. 样本采集：从疑似感染物表面或体液样本中采集适量样本。
2. 培养基选择：选择适当的培养基，如铜绿假单胞菌选择性琼脂培养基（Cetrimide agar）。
3. 菌落培养：将样本均匀涂敷于琼脂培养基上，并在适当温度下孵育。
4. 观察和计数：观察培养基上的菌落形态，并对可疑的铜绿假单胞菌菌落进行计数。
5. 形态特征：使用显微镜观察菌落的形态特征，铜绿假单胞菌通常呈圆形或不规则形态，有金属绿色色素产生。
6. 生化试验：进行生化试验以确认菌株是否为铜绿假单胞菌，如利用氧化酶试验、葡萄糖氧化试验等。
7. 分子生物学检测：使用PCR或其他分子生物学方法进行靶向检测，以确认菌株是否为铜绿假单胞菌。
8. 结果判定：根据以上检验结果，判断样本中是否存在铜绿假单胞菌，并确定其数量。
需要注意的是，具体的检验步骤和标准可能会因实验室和应用环境的不同而有所差异，因此应根据实际情况进行相应的调整。
同时，在进行铜绿假单胞菌检验时，要严格遵守无菌操作规范，确保准确可靠的结果。
铜绿假单胞菌的特征与生物学特性探究
铜绿假单胞菌的特征与生物学特性探究铜绿假单胞菌是一种常见的细菌，属于假单胞菌属中的一员。
它的正式学名为Pseudomonas aeruginosa。
铜绿假单胞菌广泛存在于自然环境中，如土壤、水体和植物表面等，同时也可以在动物和人体内引起感染。
本文将详细探讨铜绿假单胞菌的特征与生物学特性。
1. 形态特征：铜绿假单胞菌是革兰阴性菌，呈杆状或短绒毛状，单个或成对存在。
菌体具有髭毛，可产生多种色素，其中以铜绿色素为主要特征，因此得名。
其菌落呈圆形，具有金属光泽，有时散发葡萄酒般的异味。
2. 营养要求：铜绿假单胞菌是一种兼性厌氧菌，但更适应于氧气充足的环境。
它是一种非发酵菌，可以利用多种有机物和无机盐作为碳源和能源。
铜绿假单胞菌可以合成和分解多种复杂有机物，如蛋白质、脂肪和糖类。
同时，它还可以利用硫酸和硝酸等无机盐，进行硫酸还原和硝酸酸化反应。
3. 耐受性与适应性：铜绿假单胞菌具有很强的耐受性和适应性，在广泛的环境条件中存活和繁殖。
它能够忍受高浓度的盐、酸、碱和温度等逆境条件。
铜绿假单胞菌还具有抗多种抗生素的能力，这使得它在临床感染中成为一个常见的致病菌。
4. 生长特性：铜绿假单胞菌的生长速度相对较快，通常在温度范围为25-37摄氏度下最适宜生长。
它以固体或液体培养基上形成黏性的、浑浊的生长状态。
铜绿假单胞菌的生长过程可以被分为四个阶段：潜伏期、指数增殖期、对数生长期和平稳期。
在适宜的生长条件下，它可以迅速扩增并占据优势地位。
5. 引起感染的能力：铜绿假单胞菌具有强大的致病能力，是医院感染和疾病传播的常见致病菌之一。
它可以引起多种感染，包括呼吸道、泌尿道和伤口感染等。
铜绿假单胞菌在潜伏期内能够黏附在宿主组织上，并释放多种外毒素，导致炎症和组织损伤。
6. 耐药性机制：铜绿假单胞菌是一种多重耐药菌株，其耐药性机制非常复杂。
它可以通过多种机制获得耐药性，如产生具有降解活性的酶、改变外膜通透性、产生耐药蛋白等。
这使得铜绿假单胞菌对大部分常用的抗生素表现出抗药性，给临床治疗带来了一定的挑战。
铜绿假单胞菌的生物学特性及对人类健康的影响
铜绿假单胞菌的生物学特性及对人类健康的影响铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，它具有广泛的生存能力和适应性，并可在各种生态系统中找到。
本文将介绍铜绿假单胞菌的生物学特性以及对人类健康的影响。
铜绿假单胞菌主要生活在水、土壤、植物、动物以及人类的皮肤和黏膜表面。
它能够存活在各种环境条件下，包括常温、高温、低温和极端酸碱环境。
此外，它还能耐受抗生素、化学清洁剂和紫外线照射等，这使得它在感染过程中更具侵袭性和抵抗力。
铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性杆菌，这意味着它具有双层细胞壁，使得它对许多抗生素具有较高的耐药性。
它还具有许多代谢途径和酶系统，使其能够在各种营养条件下生存和繁殖。
此外，铜绿假单胞菌可以通过产生一种特殊的芽孢来增加其在环境中的存活能力，这是一种非常罕见的特征。
铜绿假单胞菌对人类健康具有重要的影响。
它是一种常见的医院获得性感染病原体，在免疫力较弱的人群中特别容易感染。
它可引起多种感染，包括呼吸道感染、尿路感染、创伤感染等。
铜绿假单胞菌感染对患者健康状况造成严重威胁，尤其是对于老年人、免疫功能受损的人群和慢性疾病患者。
铜绿假单胞菌感染的症状包括发热、咳嗽、气促、粘液、尿频等。
对于存在器官移植、严重烧伤、坏死组织等情况的患者，铜绿假单胞菌感染可能导致严重的并发症，甚至危及生命。
此外，铜绿假单胞菌还被发现可以引发痰液的黏稠化，导致困扰呼吸道疾病患者的呼吸道阻塞。
对于铜绿假单胞菌感染的治疗，选择合适的抗生素非常重要。
由于其高度耐药性，传统的抗生素对于治疗感染效果有限。
治疗过程中，医生通常会根据感染部位和病人的个体情况选择合适的药物。
此外，预防措施也是减少铜绿假单胞菌感染传播的重要手段。
在医疗机构中，应加强手卫生、环境清洁和感染控制等措施，以减少感染的风险。
综上所述，铜绿假单胞菌具有广泛的生态适应性和生存能力。
它对人类健康构成了重要威胁，尤其是对于免疫功能较弱的人群。
铜绿假单胞菌的生物膜形成及其致病机制
铜绿假单胞菌的生物膜形成及其致病机制铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，它产生的生物膜在其致病机制中起着重要的作用。
本文将探讨铜绿假单胞菌生物膜的形成机制以及致病机制的相关内容。
生物膜是由微生物聚集在生物界面上形成的一种复杂的结构。
它由多种微生物、水分、有机物质和矿物质组成，形成了一种稳定的生态系统。
在铜绿假单胞菌中，生物膜的形成是通过一系列复杂的步骤完成的。
首先，菌体附着在生物界面上，形成团块。
接着，菌体在团块之间建立起一种可以将细胞聚集在一起的基质。
这种基质通常由多糖、DNA以及蛋白质等分泌物组成，在保护细菌免受外界环境的侵害方面起到了重要的作用。
最后，菌体在这种环境中继续增殖，形成三维的生物膜结构。
生物膜的形成使得铜绿假单胞菌具有了许多特殊的性质，这些性质有助于其在致病过程中的适应和存活。
首先，生物膜提供了一种有效的保护罩，使得菌体免受抗生素和宿主免疫系统的攻击。
这也是为什么铜绿假单胞菌常常引起慢性感染的原因之一。
其次，生物膜提供了菌体相互作用和信号传递的平台，从而增强了菌体的适应能力和生存能力。
此外，生物膜还为菌体提供了营养物质，以支持其生长和繁殖。
铜绿假单胞菌生物膜形成的致病机制主要与其产生的一些分泌物有关。
其中，腺嘌呤环化酶是铜绿假单胞菌生物膜形成的关键酶之一。
腺嘌呤环化酶能够将腺嘌呤转化为二鸟苷酸（c-di-GMP），从而促进生物膜的形成。
c-di-GMP是一种重要的信号分子，能够调控一系列与生物膜形成相关的基因表达。
除了腺嘌呤环化酶，铜绿假单胞菌还能产生一些胞外信号分子，如N-3-氧代十二碳烯酰-L-丙氨酸（3O-C12-HSL）和N-但酰-L-丙氨酸（C4-HSL）。
这些信号分子能够介导菌体之间的相互作用和协调菌群行为，进一步促进生物膜的形成。
铜绿假单胞菌的生物膜形成和致病机制还与许多其他因素有关。
例如，菌体与宿主细胞表面的相互作用以及细胞外基质的组成都会影响生物膜的形成和稳定性。
铜绿假单胞菌的生物特性及其对人类健康的影响
铜绿假单胞菌的生物特性及其对人类健康的影响铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种革兰氏阴性的非发酵杆菌，被广泛分布于自然环境中，如水体、土壤、植物表面等。
它是一种具有很高的适应能力和耐受性的致病菌，对人类健康有着潜在的负面影响。
一、铜绿假单胞菌的生物特性1. 形态特征：铜绿假单胞菌呈革兰氏阴性杆状菌，通常呈直杆状，有多种形态变异，如丝状、球状等。
2. 色素产生：铜绿假单胞菌能产生特有的铜绿色素，这种色素在细菌培养物中形成特殊的金绿色。
3. 运动性：铜绿假单胞菌拥有一到多个单枝鞭毛，使其具备游动能力。
4. 增殖速度和产生毒素：铜绿假单胞菌生长迅速，并能产生多种外毒素和内毒素，具有强大的毒力。
二、铜绿假单胞菌对人类健康的影响1. 医院感染：铜绿假单胞菌是医院和医疗设施中常见的致病菌之一，尤其感染免疫系统较弱的患者，如免疫缺陷患者、器官移植患者等。
它可以引发呼吸道感染、泌尿道感染、伤口感染等，并且在医疗设备上形成生物膜，导致难以治疗的慢性感染。
2. 危害呼吸系统：铜绿假单胞菌是造成囊性纤维化和肺炎等呼吸系统疾病的主要病原菌之一。
它产生的外毒素和内毒素能够导致肺组织损伤和炎症反应，进而引发呼吸道感染和慢性支气管炎等疾病。
3. 多重耐药性：铜绿假单胞菌具有较高的耐药性，对多种常用抗生素表现出抗药性。
这使得铜绿假单胞菌感染难以治疗，使患者面临治疗困难和感染控制问题。
应对铜绿假单胞菌的策略1. 严格医院感染控制：医疗机构应加强感染控制措施，包括手卫生、环境清洁和医疗设备的消毒等，以阻断感染传播途径。
2. 合理使用抗生素：医生和患者要合理使用抗生素，不滥用或乱用抗生素，以减少抗生素耐药性的发展。
3. 推进创新治疗手段：研发新的抗菌药物和治疗方法，以应对铜绿假单胞菌感染的多重耐药性。
4. 提高公众健康意识：加强对铜绿假单胞菌感染的宣传教育，提高公众的健康意识和防护意识，避免感染的发生。
铜绿假单胞菌在环境中的分布及影响因素分析
铜绿假单胞菌在环境中的分布及影响因素分析铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性杆菌，广泛分布于自然环境中，包括土壤、水体、植物表面以及动物等。
它是一种自养性细菌，具有较强的环境适应性和抗逆能力。
1. 铜绿假单胞菌在环境中的分布铜绿假单胞菌作为一种广泛分布的菌种，在环境中可以通过空气、水和土壤等途径进行传播。
它可以存在于水中的沉淀物、水污染源以及各种水利设施中，如水龙头、水箱、水泵等。
此外，铜绿假单胞菌也能够生存于土壤中，特别是具有污染的土壤环境。
2. 影响铜绿假单胞菌分布的因素（1）温度：铜绿假单胞菌对温度有一定的适应范围，一般在20-42摄氏度之间生长最为适宜，但它也可以在较低和较高的温度下生存。
温度的变化会影响铜绿假单胞菌的生长速度和繁殖能力，在不同的温度条件下，菌落的形态和颜色也会有所不同。
（2）pH值：酸碱度对铜绿假单胞菌的分布也有一定影响。
它一般适应于pH为6.0-9.0的中性或弱碱性环境。
较低或较高的pH值都会对其生长和繁殖产生不利影响。
（3）湿度：湿度对铜绿假单胞菌在环境中的存活和繁殖起到重要作用。
在适宜的湿度条件下，菌落生长迅速，而在较低湿度下，菌落的生长会受到抑制。
（4）营养物质：铜绿假单胞菌对营养物质的需求较高，特别是碳源和氮源。
缺乏或不适当的营养物质供给会对其生长和繁殖产生负面影响。
（5）竞争菌种和生物相互作用：环境中存在的其他菌种和生物会与铜绿假单胞菌进行竞争和相互作用，与其他菌种的竞争关系以及共生关系都会影响到其分布。
3. 铜绿假单胞菌的影响因素（1）人类健康：铜绿假单胞菌是一种重要的人类病原菌，在医疗机构、长期护理设施和免疫功能低下人群中造成许多感染。
它可以引发多种感染，如呼吸道感染、泌尿道感染以及伤口感染等，严重感染甚至可以导致败血症。
（2）环境污染：铜绿假单胞菌在水体和土壤中的存在会污染环境，对生态系统造成一定的影响。
特别是在水污染源中的大量繁殖和堆积，会对水质造成严重污染，威胁到人类的饮用水安全。
铜绿假单胞菌诊治共识幻灯片
大多数临床检出的主要致病菌同时也是人体体表定植的正常菌群，因此，临 床报告的细菌检出率可能包含了人体定植的细菌！
1.翁心华等.现代感染病学.上海医科大学出版社.1998年第一版：23-29 2.汪复等. 中国感染与化疗杂志. 2010;10(5):325-334.
1.0 1.2 30.9 26.1 7.9 5.2
9.3 9.4 34.8 24.7 15.8 15.9
29.1 25.0 19.5 19.0 19.8 21.7
60.4 61.4 60.7 64.6 39.1 63.9
胡付品, 朱德妹，汪复等. 2011年中国CHINET细菌耐药性监测. 中国感染与化疗杂志.2012;12(5):321-329
铜绿假单胞菌对碳青霉素类耐药率不断增加
• 2011年CHINET细菌耐药性检测结果显示，铜绿假单胞菌对碳青霉 烯类的耐药率已经高于青霉素类和头孢菌素类抗生素，其机制尚需要 进一步探讨，但应引起临床的高度重视。
大肠埃希菌 肺炎克雷伯 铜绿假单胞 鲍曼不动杆
菌
菌
菌
亚胺培南 美洛培南 头孢他啶 头孢比肟 头孢哌酮/舒巴坦 哌拉西林/他唑巴坦
正常菌群在宿主细胞上定居 、生长和繁殖的现象称为定 植
汪复等.实用抗感染治疗学.人民卫生出版社.2005年第一版:7-8
内源性感染
当机体免疫功能低下时，原 来正常寄居或致病力很低的 微生物可能侵入人体其他部 位造成内源性感染
这些微生物称为条件病原微 生物，若是细菌或真菌则称 为条件致病菌
体表定植的正常微生物群与临床检出的主要致病菌
铜绿假单胞菌感染在呼吸系统感染中更为突出国外数据 ：
铜绿假单胞菌检验方法
铜绿假单胞菌检验方法铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，常见于土壤、水体和人体的各种环境中。
铜绿假单胞菌在医院感染中占有重要地位，对多种抗生素具有耐药性，且能产生多种外毒素和酶，致病力强。
因此，对于铜绿假单胞菌的检验方法十分关键。
一、样本采集与保存铜绿假单胞菌的检验样本主要包括病人的分泌物、组织、血液和环境中的物品等。
在采集样本前，应做好手部消毒，并使用无菌的采样器具进行采集。
分泌物样本应用拭子进行擦拭，血液样本应用无菌注射器采集，组织样本应用无菌手术器械进行切取。
采集的样本应放入无菌容器中，并迅速送至实验室进行检验。
如果无法立即送检，应将样本保存在4℃的冰箱中，避免细菌的繁殖。
二、铜绿假单胞菌的培养与鉴定1. 培养条件铜绿假单胞菌在常规的培养基上生长良好，如血琼脂、肉汤琼脂、MacConkey琼脂等。
其中，肉汤琼脂是常用的选择，其成分为牛肉膏和琼脂，可提供足够的营养物质供细菌生长。
在培养前，应先将琼脂烧开，然后冷却至50℃左右，将琼脂倒入培养皿中，使其凝固。
2. 鉴定方法铜绿假单胞菌的鉴定主要包括形态学观察、生理生化试验和分子生物学检测等。
（1）形态学观察：铜绿假单胞菌在琼脂培养基上生长出大片绿色的菌落，有金属光泽，边缘清晰。
菌落直径一般在2-3mm左右，表面光滑，整体呈圆形或不规则形状。
（2）生理生化试验：铜绿假单胞菌是一种革兰氏阴性菌，对氧耐受性强，可在无氧和有氧条件下生长。
其产生的酶包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，可以通过相关的生化试验进行检测。
（3）分子生物学检测：通过PCR方法对铜绿假单胞菌的特异基因进行扩增和检测，可以快速准确地鉴定出铜绿假单胞菌。
三、铜绿假单胞菌的药敏试验铜绿假单胞菌对多种抗生素具有耐药性，因此，进行药敏试验可以指导临床的抗菌治疗。
常用的药敏试验方法有纸片扩散法和肉汤稀释法。
纸片扩散法是将含有不同抗生素的纸片放置在琼脂培养基表面，待细菌生长后，观察菌落周围的抗生素是否产生抑制圈，从而判断细菌对抗生素的敏感性。
铜绿假单胞菌检验方法标准
铜绿假单胞菌检验方法标准铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种广泛存在于环境中的革兰氏阴性细菌。
铜绿假单胞菌可以导致多种感染，特别是对于免疫系统功能较弱的患者，如免疫抑制剂使用者或者长期使用呼吸机的患者。
因此，及时、准确地检验并识别铜绿假单胞菌对于预防和控制感染至关重要。
本文将介绍铜绿假单胞菌的检验方法，并提供一个标准的检验方案，以确保测试的准确性和可靠性。
一、铜绿假单胞菌检验前的准备工作1.1 样本采集从患者身上采集适当的样品，如各种体液（如血液、尿液、脑脊液等）或病灶分泌物。
确保样本获取的无菌操作，以避免外界细菌的污染。
1.2 检验材料准备准备必要的检验材料，包括培养基（如MacConkey琼脂培养基、肉汤培养基等）、培养皿、菌液吸管、无菌显微镜玻片、无菌移液器等。
一、铜绿假单胞菌检验方法2.1 培养方法将适量的样品分别接种于不同种类的培养基上。
通常情况下，MacConkey琼脂培养基和肉汤培养基可以用于初步选择铜绿假单胞菌的生长。
将培养皿置于适当的温度下（通常在35-37摄氏度），保持培养皿适当湿润。
在培养过程中要注意杂菌的干扰，定期观察培养皿上的菌落的形态、颜色等特征。
2.2 生理生化试验经过初步培养，我们可以利用各种生理生化试验来确认菌种的鉴定。
例如，碳水化合物利用试验、氧化酶试验、羟基苯丙酮酸酶试验等。
这些试验可以帮助我们确定菌株是否为铜绿假单胞菌。
2.3 PCR检测使用聚合酶链反应（PCR）技术是一种快速而准确的方法来检测铜绿假单胞菌。
通过选择合适的引物和扩增条件，可以从样品中扩增出铜绿假单胞菌特异性的基因片段。
通过检测PCR反应产物，可以确认铜绿假单胞菌的存在。
2.4 抗生素敏感性试验由于铜绿假单胞菌普遍存在多重耐药性的问题，进行抗生素敏感性试验十分必要。
通过将不同的抗生素添加到含有菌落的培养皿中，观察菌落的生长情况及抗生素对菌落的抑制作用，可以确定铜绿假单胞菌的抗生素敏感性谱。
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1>假单胞菌属（Pseudomonas）种类：
铜绿假单胞菌(P.aeruginosa，PA) 荧光假单胞菌(P.fluorescence ) 恶臭假单胞菌(P.putica ) 斯氏假单胞菌(P.stutizeri) 曼多辛假单胞菌(P.mendocina) 产碱假单胞菌(P.alcaligenes) 假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)
PA外膜蛋白中的OprC、OprD、OprE是小分子亲水性 抗生素进入细菌的通道。OprD又分为OprD1、OprD2、 OprD3三种，其中OprD2孔道是小分子碳青酶烯类（美罗 培南除外）选择性快速进入菌体的特异性通道。如果 oprD2基因缺失或者表达减少，引起OprD2蛋白缺失或者 表达减少，导致亚胺培南渗透障碍。
②
细菌生物薄膜的形成：细菌分泌多糖基质、纤 维蛋白、脂蛋白等将菌体包绕成膜样物。
物理阻挡作用：逃避宿主免疫清除和抗菌药物的杀 伤。 耐药基因的开启：生物膜在较低血药浓度下开启耐 药基因表达形成细菌耐药。
3.细菌药物主动转运系统
主动外排泵分类：
主要易化超家族 （Majior Facilitator Superfamily,MFS）
。
第三类：金属酶，由假单胞菌属、脆弱拟杆菌属、 产黄菌属、沙雷菌属及嗜麦芽黄单胞杆菌属产生的可水解 碳青霉烯类抗生素的金属酶。 第四类：其他不能被克拉维酸完全抑制的青霉素酶
②
Ambler分类：
根据β-内酰胺酶的特殊性、动力学参数及其 基因的核苷酸序列，将β酶分为A、B、C、D四 类：
A：青霉素酶，活性部位为丝氨酸残基，由多种质粒 编码。如TEM1、SHV1、ROB1或PC1酶。 B ：金属酶(metalloenzymes)，活性部位为半胱氨 酸残基。主要为碳青霉烯酶，耐药的抗生素包括碳青霉 烯类、青霉素、第一、二、三代头孢菌素、氨曲南。
1> 非发酵菌主要特点：
氧化酶：＋（不动杆菌属除外） O/F试验：O/－ 动力试验：多数有鞭毛，但半固体动力试验 不明显，常采用镜检或鞭毛染色。
2>非发酵菌分类：
假单胞菌属 不动杆菌属 莫拉杆菌属 金氏杆菌属 土壤杆菌属 产碱杆菌属 黄杆菌属 窄食单胞菌属 艾肯菌属 丛毛单胞菌属 等
3>非发酵菌的分离率：
淡红褐色
3>假单胞菌属鉴定程序：
第二部分 铜绿假单胞菌
1.PA培养特性：
专性需氧、营养要求不高 最适温度35℃，42 ℃ 生长，4℃不生长 产生荧光素和蓝绿色水溶性的绿脓素，培 养物呈 蓝绿色，故俗称“绿脓杆菌”。 培养物有生姜气味
2.PA菌落特征:
典型菌落：扁平湿润，边缘不规则，菌落和培养 基灰绿色，表面有金属光泽 大肠型菌落：菌落圆形凸起，似大肠杆菌 黏液型菌落：菌落凸起，呈粘液状 侏儒型菌落：细小，无光泽 粗糙型菌落：菌落中央凸起、边缘扁平、表面粗 糙
绿脓菌素：绿色色素，由铜绿假单胞菌的 RpoS基因编码产生的代谢产物，具有氧化还原 活性的化合物，能催化超氧化物和过氧化氢产生 有毒氧基团，引起组织损伤。在致病中起重要作 用 弹性蛋白酶：降解弹性蛋白，引起肺实质损伤 和出血；降解补体和白细胞蛋白酶抑制物；可与 相应抗体形成复合物，沉积于感染组织中 磷脂酶C ：能分解脂质、卵磷脂，损伤组织 细胞 内毒素、外毒素
C ：头孢菌素酶(AmpC 酶)，活性部位为丝氨酸残基， 由染色体上一组Amp基因介导，它的产生与β-酶诱导剂 有关，归因于调控基因突变。 D ：主要为苯唑西林酶（ OXA ），可水解苯唑西林、 氯唑西林等。
分类法 Bush 分 类 1 2a 2b 2be 2br 2c Ambler分 类 C A A A A A 优先水解底物 头孢菌素类 青霉素类 头孢菌素类、青霉素类 青、头孢菌素类、单环类 青霉素类 青霉素类、羧苄西林
4>鉴定： 初步鉴定
最终鉴定
菌体形态 菌落特征 产色素 气味 氧化酶 非发酵菌生化鉴定系统 API-NE试条
PA鉴定程序
非发酵菌鉴定系统
7.铜绿假单胞菌耐药性： 多重耐药，能天然抵抗多种抗生素。比如氨苄 青霉素、磺胺甲噁唑等。常用三代头孢和氨基糖 苷类联合治疗。 各种抗生素治疗过程中（铜绿假单胞菌所致感 染）都可能发生耐药。初代敏感菌株在治疗3－4 天后可能发生耐药，有必要重复分离菌株。
抑制剂 克拉 维 酸 － ＋ ＋ ＋ ± ＋ EDTA 代表性酶 G－菌AmpC酶、MIR-1 G＋青霉素酶 TEM-1、TEM-2、SHV-1 TEM-3至TEM-26、SHV-2至 SHV-6、产酸克雷伯菌K1 TEM-30至TEM-36、TRC-1 PSE-1、PSE-3、PSE-4
－ ＋ － － － －
5.PA生化反应
氧化酶＋ O/F：O（氧化分解葡萄糖） 枸櫞酸盐利用＋ 精氨酸双水解＋ 乙酰胺酶＋ 明胶液化＋
6.PA临床检验： 1>采集标本：各种临床标本
医疗器械 环境用品
2>检验方法：直接镜检
分离培养(血平、MAC平板) 鉴定 分型：血清学分型 质粒指纹图谱分型 脉冲场凝胶电泳分型等
3>分离培养： 普平 18-24h圆形 大小不一 边缘不整 扁平 湿润 常呈融合态 琼脂被染成绿或黄 绿色 血平 扁平 湿润 有金属光泽 琼脂被染成 蓝绿或灰绿 有溶血环 MAC平 微小无光泽半透明 48h后菌落呈 棕色
铜绿假单胞菌及其 耐药机制
衡阳市中心医院检验科
彭咏麟
一.非发酵菌、假单胞菌 二. 铜绿假单胞菌
三.细菌常见耐药机制
第一部分 非发酵菌、假单胞菌
1.非发酵菌(Nonfermentative Bacilli)：一群不 发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖、需氧或 兼性厌氧、革兰阴性无芽胞杆菌。
葡萄糖氧化发酵试验（O/F） 溴甲酚紫
细 菌 常 见 耐 药 机 制
药物作用靶位的改变
抗菌药物的渗透障碍
药物的主动转运系统 药物灭活酶的产生
转座子和整合子介导的耐药基因盒 转移和水平传播
1.药物作用靶位的改变
①
青霉素结合蛋白（penicilin binding protein,PBP）位点：
目前研究最多的药物结合靶位，它是β内酰胺类抗生 素结合位点。 正常情况下，某种抗生素与其相应PBP结合，抑制 细菌细胞壁生物合成，引起细菌死亡。 但是，如果其相应PBP发生改变，抗生素不能与其 位点结合，导致耐药。
药 物 灭 活 酶
水解酶 修饰酶
①
Bush β-内酰胺酶分类：
根据生化特征或氨基酸序列的同源性，将其分为四 类： 第一类为头孢菌素水解酶（Amp-C酶），产生菌主 要是革兰阴性菌，如假单胞菌、肠杆菌、不动杆菌和克 雷伯杆菌等，由染色体介导。 第二类为青霉素酶和超广谱酶，包括革兰阳性菌的 青霉素酶，质粒介导的TEM和SHV酶及其衍生物组成的 超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、羧苄青霉素酶、苯唑西 林酶（OXA酶）和由沙雷菌属与肠杆菌属产生的非金属 碳青霉烯酶。
第三部分
细菌常见耐药机制
多重耐药（Multi-drug-resistance ，MDR):又称多 药耐药，它是指对三类或者三类以上的抗生素耐 药的现象。但细菌天然抵抗的抗生素除外。 泛耐药 （Pan-drug- resistance ，PDR):它是指对 所有抗生素（除多粘菌素外）耐药的现象。临床 上以假单胞菌属、不动杆菌属、窄食单胞菌属等 常见。新的超广谱内酰胺酶和碳青酶烯酶的大量 使用导致泛耐药 现象增多。
②DNA解旋酶和拓扑异构酶Ⅳ位点：它是喹诺 酮类药物结合靶位。
解链
DNA解旋酶 菌体DNA断裂
喹诺酮类药物
菌体死亡
菌体DNA 拓扑异构酶
喹诺酮类-DNA拓扑异构酶三元 复合物
菌体DNA复制 叉不能正常复制
2.抗菌药物的渗透障碍
①
菌体外膜抗生素通道蛋白(Opr)的缺失或者表达 量减少：导致抗生素不能进入菌体或者进入菌 体的药物剂量少，从而导致细菌的耐药。
Ambler分类
部分广谱β -内酰胺酶 丝氨酸 A 酶 C 部分超广谱β -内酰胺酶 部分碳青酶烯酶
实例
TEM-1、2，SHV-1等 TEM 系 列 ， SHV 系 列 ， BES-1 ， PER-1、2，CTM-M系列等 KPC-1、2、3等
AmpC 酶 （ 头 孢菌素酶 ，不 AAC-1 ， ACT-1 ， CFE-1 ， CMY 系 被克拉维酸抑制） 列，DHA系列，FOX系列，LAT 系列，MIR，MOX 部分广谱β -内酰胺酶、 部分超广谱β -内酰胺酶 OXA系列 OXA系列
2d
2e 2f 3 4
D
A A B 其它
青霉素、氯唑西林
头孢菌素类 青、头孢菌素类、碳青酶烯 大多β内酰胺类、碳青酶烯 青霉素类
±
＋ ＋ 至OXA-11，PSE-2
诱导性头孢菌素酶 阴沟肠杆菌NMC-A,粘质沙雷菌 Sme-1 嗜麦芽窄食单胞菌L-1、脆弱类 杆菌CcrA 洋葱伯克霍德菌的青霉素酶
4.药物灭活酶的产生
钝化酶 ：如氨基糖苷类钝化酶。 ：如氨基糖苷类修饰酶，主要有N-乙酰转移酶 （AAC）、O-核苷转移酶（ANT）等，它主要通过共 价修饰的方式使氨基糖苷类药物与核糖体的结合减少， 促进药物摄取EDP-Ⅱ被阻断，从而导致耐药。aac(6′)Ⅱ基因主要决定庆大霉素耐药；ant(2′′)-Ⅰ可使庆大霉 素和妥布霉素修饰失活。 ：主要指β内酰胺酶，它包括广谱酶、超广谱酶、金 属酶（MBL）和AmpC酶等 。
典型型（普通平板） 产绿脓素 琼脂染成黄绿色
菌落呈灰绿色 大小不一 扁 平湿润 边缘不规则呈伞 状伸展 表面常可见金属光 泽 典型型（麦康凯平板）
菌落圆形凸起 似大肠埃希菌菌落
大肠型（麦康凯平板）
粘液型（普通平板）
菌落光滑凸起 成粘液状