富血小板血浆(PRP)常温保存理化指标变化的研究

富血小板血浆（PRP）常温保存理化指标变化的研究【摘要】目的：评价富血小板血浆在20～24℃连续温和振荡保存三天后血小板形态、代谢、功能及损伤情况。方法：采用白膜回浆法制备prp标本，分别测定静脉血、新鲜prp（fresh

platelet-rich plasma fprp）、20～24℃连续温和振荡保存三天后prp（storage platelet-rich plasma sprp）中的血小板计数、wbc浓度、rbc浓度、血小板平均体积（mpv）、ph、二氧化碳分压（po2）、氧分压（pco2）、乳酸脱氢酶（ldh）、乳酸（lac）含量，统计分析fprp和sprp各项检测指标变化。结果：静脉血制备prp后，plt明显升高，wbc、rbc剩余量少，mpv、ph值有所下降，po2、pco2、ldh，lac皆有不同程度升高。sprp组与fprp组比较，plt计数无显著性差异（p>0.05），mpv 、wbc、rbc、ph值之间均有显著性差异（p0.05），mpv 、wbc、rbc、ph值之间均有显著性差异（p随着临床医生和患者对prp技术认识的逐步提高，prp应用范围的不断扩大，临床对prp的需求量会越来越多，只靠临时分离制备已远不能满足临床需要。而且prp的制备必须在手术操作之前进行，抽血后，若制备未成功，如血凝、血小板浓度未达标准、血被污染等，术中则无法应用，而且无补救措施。制备过程和手术操作分开，可防止一次手术操作过于繁琐，节省人力、时间，减少了失败机率。prp制备后，医生和患者在一定期限内可随机选取手术时间，尤其适合门诊患者，如种植牙，牙周病治疗等。口腔科临床应用prp技术，如牙周病治疗、种植牙、颌骨重建等，要求短期，

少量保存即可满足临床应用。

目前，国内外学者对prp保存的研究主要集中在保存后血小板形态学、体外聚集功能指标及输注后临床止、凝血功能的改变等方面。然而从口腔临床医学角度，血小板数量、形态和代谢无疑是血小板保存研究基本而重要的指标。prp保存对血小板形态、代谢、功能、损伤评价的研究尚未见报道。

marx对prp定义的血小板的浓集倍数在500%左右。本项实验标本prp中血小板富集系数约为5.3±1.0，血小板获得率约为69.12±8.6%，符合marx对prp的定义标准。实验结果显示：sprp与fprp 中血小板计数无显著性差异（p>0.05），结果与聂咏梅、林俊杰等的研究一致。但随着保存时间的延长，血小板计数呈下降的趋势，说明血小板随保存时间的延长有聚集、粘附现象。

实验结果显示，fprp与静脉血中血小板相比，mpv减小，说明通过离心后得到的fprp血小板群体发生了改变，可能是由于体积较大的血小板亚群留在浓缩红细胞内的比例较高所致，体积较大的血小板亚群减少后，血小板更趋于均一。sprp中血小板mpv增大，表明保存后血小板形态在一定程度上有所改变。而血小板亚群之间相关特性的不同对保存血小板的影响有待进一步研究[8]。

保存期间的ph值是影响血小板保存效果极其重要的因素，ph值应保持在6.0～7.6之间，否则表示血小板有严重损伤。holme[9]等的研究证实当血小板ph 值下降至6.7以下，血小板的功能出现损伤，它的形态由圆盘形变为圆球形，当ph值下降至6.0～6.1时，

这种形态出现不可逆的变化，它的功能全部丧失。ph值下降与保存期间乳酸浓度有关，乳酸浓度的升高不仅与血小板代谢有关，而且与贮血容器对气体的通透性有关，po2、pco2可综合反映容器的透气性和血小板代谢情况。本实验采用prp标本为密闭式产品，因其与外界接触机会少，且产品袋体积大、透气性强，sprp与fprp相比，po2上升、pco2下降明显，说明o2、co2能够充分完成快速、完全的气体交换，可以防止组织缺氧，降低血小板代谢，减慢乳酸生成速度。在20～24℃连续温和振荡保存条件下sprp的ph值维持在较稳定的水平（7.0左右），表明20～24℃连续温和振荡保存三天能够维持血小板的基本正常形态和代谢功能。

血小板细胞内ldh明显高于血浆内ldh浓度，具有较高的ldh活性，在其受损时可大量释放入血浆，ldh的释放量与血小板活化及破损程度成正比[10]，其检测结果可客观地反映出血小板的受损情况。因此本项实验选择ldh作为检测指标来初步评估血小板的损伤情况。20～24℃连续温和振荡保存三天前、后ldh值升高（p<0.05），表明prp常温振荡保存可导致少部分血小板激活或损伤并释放出ldh，使ldh浓度升高，这与其它理化指标的改变结果相一致。但本项实验结果显示ldh浓度在350mmol/l左右，pdgf-ab、tgf-β1含量没有明显降低，表明此保存条件下，没有造成血小板大量的活化或不可复性损伤。

sloand[11]等的研究表明，在全血在采集过程中，特别是采集开始时，较少量的全血被暴露在大量的高浓度枸橼酸盐和低ph值（4.5～

5.5）的抗凝液中，即使是短时间也会发生血小板的活化，使其cd62p 的含量上升，血小板功能受损。这可以解释本项实验中fprp较静脉血ph值下降，ldh、lac轻度升高的原因。

20～24℃连续温和振荡保存prp的方法简便易行，要求设备少，临床操作简单方便，是口腔科临床少量应用，短期保存prp的首选方法。prp保存三天前、后，血小板数量无明显变化，理化指标发生了一定程度的变化，但能够维持血小板的基本正常形态和代谢功能。prp保存后其生长因子浓度的变化及促进局部创伤修复再生能力的相关机制尚有待进一步深入研究。

参考文献：

[2] 胡立功.提高成份血质量方法的探讨.中国输血杂志，1993，6（2）：84．

[8] 刘玉英，欧阳锡林，刘景汉，等.富含血小板血浆冰冻保存及保存效果的研究．第三军医大学学报，2001，23（12）：1455-1456．[9] holme s. storage and quality assessment of platelets. vox sang，1998，74 （suppl. 2）：207-216.

[10] 钱开诚，张晰，冷翠霞，等．gma保存血小板的实验研究．中国输血杂志，1999，12（4）：216-218．

[11] sloand em，yu m，klein parison of

random-donor platelets concentrates prepared from whole blood units and platelets prepared from

single donor apheresis collections.transfusion，1996，