植物、动物细胞工程练习
植物细胞工程练习
学校:___________姓名：___________班级：___________座号：___________
一、非选择题
1．草莓是人们经常食用的一种水果，有较高的营养价值。草莓是无性繁殖的作物，长期种植会使病毒积累在体内，产量降低，品质下降。下图是利用植物组织培养技术培育草莓脱毒苗的过程，请据图回答：
（1）外植体能够形成幼苗所依据的原理是____________。培育脱毒苗时，一般选取_________作为外
植体，其依据是__________________。
（2）①是脱分化过程，细胞脱分化是指已经分化的细胞，经过诱导后，失去其__________而转变为未分化细胞的过程。②是_______________过程。
（3）研究表明，多倍体草莓产量高于二倍体，利用组织培养技术获得多倍体草莓的方法有两种:一是使用__________〔药剂）处理草莓的愈伤组织，再经培养获得多倍体植株；二是利用_________(药剂)诱导草莓体细胞融合形成杂种细胞后，再经组织培养获得多倍体植株，这种育种技术被称为
___________技术。
2．选取A、B植株的细胞进行如下图操作，请回答问题:
(1)实现图中的①过程最常用的方法是________。
(2)②过程的发生，必须进行____________,其方法有____________法和____________法。
(3) 若细胞A内含a个染色体，细胞B内含b个染色体，则“杂种细胞”内含________个染色体；若A、
B植株采用常规杂交育种方法成功的话，得到的后代含_____个染色体，必须用______________来处理
幼苗，才能得到可育的杂种植株，其中含有_____个染色体。这两种方法相比，体细胞杂交方法的优点是：__________________________________。
(4)如果原生质体A为小鼠的浆细胞，原生质体B为小鼠的骨髓瘤细胞，诱导二者融合时，独特的方法
是用_______处理。
3．细胞工程是一门新兴的生物工程技术。在动、植物的育种；药物提取；药物生产等领域的应用十分
广泛。利用所学知识回答以下关于细胞工程的相关问题。
（1）釆用植物细胞工程育种的方法如下：
①以胚状体为材料，经过人工薄膜包装得到的人工种子，在适宜条件下同样能够萌发成幼苗，与天然
种子培育相比，人工种子的培育具有哪些显着的优点_________________________________（答出两点）。
②甲、乙原生质体经诱导融合完成的标志是___________。利用杂种细胞采用植物组织培养技术可以
培育成杂种植株，该技术的核心步骤是______________________和______________________。
（2）已知西湖龙井含有的茶碱是植物细胞的代谢产物，具有提神、抗衰老功效。可用植物组织培养来实现茶碱的工业化生产。
①若利用植物组织培养技术，可将龙井茶叶细胞培养到___________阶段，然后从___________（填细胞器）中提取茶碱。
②如果想获得脱毒的龙井茶苗，可以切取一定大小的___________________等进行组织培养。4．[生物—选修3：现代生物科技专题]我国一科研团队将荒漠植物TaNHX2基因转移到普那菊莴苣细胞内，获得了转基因耐盐普那菊莴苣新品种。回答下列有关问题：
（1）为保证目的基因在普那菊莴苣细胞中能够表达，运载体上应含有特定的_________（复制原点、启动子、标记基因）
（2）将普那菊莴苣幼胚接种到诱导培养基上，经过_________过程，培养出愈伤组织，然后用___法，将目的基因和相关功能片段整合到愈伤组织细胞的染色体DNA上。
（3）为验证外源基因整合到普那菊莴苣基因组后是否转录，可从转基因植株的细胞中提取所有mRNA 并反转录成_____________，再以反转录产物为模板，利用TaNHX2基因特异性引物，通过_______方法进行基因扩增。若以根细胞为材料扩增结果为阳性（有产物生成），以叶细胞为材料扩增结果为阴性（无产物生成），则说明____________________________。
（4）将生长至4叶期的转基因幼苗转入高浓度的NaCl溶液中培养，进行耐盐试验，用非转基因幼苗作为对照。培养30天后观察现象，若_____________________则说明转基因植株获得了耐盐特性。5．河流生态系统受到生活污水（含大量有机物）轻度污染后的净化过程如下图所示。下表则记录了对几种生物的相关研究结果。请回答相关问题。
请据图和表回答问题：
生物毒素产生量μg/L铵盐吸收率有机物去除率
硅藻52％0
蓝藻78％0
红假单胞光合细菌87％92％
殖的主要原因是有机物分解后形成__________________________，有利于藻类的大量繁殖。
（2）从生态系统的组成成分看，表中红假单胞光合细菌属于__________________。由于红假单胞光合细菌_____________________，所以用来治理水华效果最好。
（3）该生态系统中的线虫以藻类为食，鲫鱼以藻类和线虫为食。若植物到动物的能量传递效率10％，动物到动物的能量传递效率为20％，鱼从藻类与线虫所获得能量比是4:1，则鱼增重1千克，需要藻类是__________千克。
动物细胞工程练习
学校:___________姓名：___________班级：___________座号：___________
1．回答下列关于现代生物科技的问题：
（1）动物细胞培养时为了将组织分散成单个细胞，常用_______处理剪碎的组织块,并用培养液将细胞稀释制成_________。
（2）动物细胞培养时需要通入5%的C02,其目的是_________，为了防止杂菌污染，通常要在培养基中添加___________。
（3）动物细胞核移植时普遍使用的去核方法是________；常选用处于_______(时期）的卵母细胞作为受体细胞,主要是因为卵细胞大,易操作，含有促进_____表达的相关物质。
2．下面是以小组为对象进行的各项研究工作，请分析回答问题：
（1）在小鼠细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的__________。此时，瓶壁形成细胞层数是一层。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入培养瓶中可以____________________，从而增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。用有关的酶使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，重新配置细胞悬液后进行分瓶培养，这样的培养过程称为_________________。
（2）细胞培养过程中为创造____________环境，常在细胞培养液中添加一定的抗生素，防止培养过程中杂菌的污染，此外还要定期___________，以便清除代谢产物，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害。
若用培养的细胞进行DNA粗提取实验，所得的丝状物可用___________试剂检验，沸水浴后溶液颜色为蓝色。
（3）小鼠的受精卵经培养得到早期胚胎，可进行胚胎移植。因为受体子宫对外来胚胎基本__________，且外来胚胎可与受体子宫建立____________，使胚胎在受体子宫内存活并发育。
3．下图是某实验室做的通过动物纤维母细胞获得单抗的实验研究，据图回答相关问题。
（1）图中Y细胞的名称分别是____________。
（2）①过程类似于植物组织培养技术中的____________过程。②过程的实质是
______________________ 。
（3）③过程中需用到的化学诱导剂是________________________。
（4）④过程将Z细胞进行______________和______________从而获取大量的单抗。
（5）若用含放射性32P标记的核苷酸的培养基培养Z细胞，能测到放射性32P的细胞器是______________。研究表明，HER2/neu是一种原癌基因，它表达的H蛋白在多种恶性肿瘤特别是乳腺癌细胞中过量表达。抗H蛋白单克隆抗体能____________（促进/抑制）过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，目前已成为有效的生物治疗手段。
4．科学家发现家蝇体内存在一种抗肿瘤蛋白（且具有抗菌能力），受到研究者重视。临床使用发现此蛋白质对肿瘤确实有良好的疗效，可以通过基因工程技术导入大肠杆菌内进行大量生产。其过程大体如图所示：
（1）在基因工程中，获取目的基因的方法有___________________（至少写出两种）。
（2）图中a过程叫_______________，它是基因操作的核心步骤，该过程中切质粒和目的基因的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端要满足____________条件。
（3）将抗肿瘤基因导入大肠杆菌，并在大肠杆菌细胞内成功表达产生了抗肿瘤蛋白，由于大肠杆菌具有__________________特点，因此在短时间内就能获得大量的抗肿瘤蛋白。
（4）细胞工程可以作为辅助手段，通过获得特定的单克隆抗体并与抗肿瘤蛋白结合制成“生物导弹”，以实现“靶向杀癌”。下面是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答：
① 图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是___________细胞，要获得能产生抗肿瘤蛋白抗体的杂交瘤细胞至少要经过__________次筛选。从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是____________________。
② 为检测杂交瘤细胞是否成功的合成了单克隆抗体，可以采用____________的方法。
5．回答下列关于草原生态系统的问题。
（1）草原上不同地段上分布着种类和密度不同的牧草，在水平方向上它们通常呈_________________分布。草原上的植被能防风固沙、保持水土，对于缓解相邻地区的沙尘天气有一定的作用，这体现了生物多样性的______________价值。
（2）蝗灾已成为草原农牧业生产的重大危害之一。图甲示研究者对草原上四种主要蝗虫密度对牧草产量（牧草产量=牧草补偿量-蝗虫取食量）影响的实验结果；图乙为农业部门对某次“亚洲小车蝗”的爆发和防治过程中种群密度的调查结果。
①由图甲可知，该实验的因变量是______________，甲图为研究者依据实验结果建立的_____________模型。当狭翅雏蝗密度小于5头/m2时，牧草产量增加，原因是______________，说明蝗虫只有达到一定量才会导致危害，因为生态系统具有______________。
②若图乙是对蝗虫的幼虫跳蝻进行调查所获得的结果，则该调查采用的方法是____________。由图乙可知，农业工作者在图中__________点进行了农药防治，随农药使用次数的增多防治效果变差；图中________点是引入害虫的天敌进行生物防治，利用生物间的____________关系，使防治效果持久而稳定；从种群特征考虑，致使“亚洲小车蝗”的数量在e→f点变化的直接原因是______________。
（3）严重的草原火灾会破坏生态系统，但适当的“地面火”能烧掉枯枝落叶，加速生态系统的__________，还可使部分位置获得更多光线，促进植物的光合作用，利于植被生长。
植物细胞工程练习参考答案
1．植物细胞的全能性茎尖(或芽尖或根尖) 植物分生区附近(茎尖)病毒极少，甚至无病毒特有的结构和功能再分化秋水仙素聚乙二醇（PEG）植物体细胞杂交（技术）
2．（1）酶解法（纤维素酶、果胶酶）（2）诱导融合物理方法化学方法
（3）a+b a+b /2 秋水仙素a+b 克服远缘杂交不亲和的障碍
（4）灭活的病毒
3．生产不受季节、气候和地域的限制；一般不会出现性状分离、能保持优良品种的遗传特性新细胞壁的形成脱分化再分化愈伤组织液泡茎尖
4．启动子脱分化农杆菌转化法cDNA（互补DNA）PCR 目的基因（TaNHX2基因）仅在根细胞中转录，未在叶细胞中转录转基因幼苗的存活率高于非转基因幼苗（其它合理答案也可给分）
5．好氧型细菌分解有机物消耗水中的溶解氧，藻类植物数量的减少导致产氧量少大量NH4+等无机盐离子生产者和分解者不产生毒素，对铵盐的吸收率高和有机物去除率高18
动物细胞工程练习参考答案
1．胰蛋白酶（胶原蛋白酶）细胞悬液维持培养基的pH 抗生素显微操作去核法MⅡ中期(减数第二次分裂中期) 细胞全能性
2．接触抑制扩大细胞贴壁生长的附着面积传代培养无菌、无毒更换培养液二苯胺不发生免疫排斥反应组织和生理联系
3．浆细胞（或已免疫的B淋巴细胞）脱分化基因的选择性表达聚乙二醇（PEG）克隆化培养专一抗体检测核糖体、线粒体抑制
4．鸟枪法、人工合成法pCR 构建基因表达载体严格互补、繁殖快、代谢速度快 B 二特异性的抗原抗原抗体杂交
5．镶嵌间接牧草产量数学牧草补偿量大于蝗虫取食量自我调节能力(抵抗力稳定性) 样方法a、b、c、d e 捕食、寄生出生率小于死亡率物质循环
动物细胞培养基本操作
实验一动物细胞培养 细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。 细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。 细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等 为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。 本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。 Ⅰ清洗与灭菌 一、实验目的 能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。 二、实验原理 清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。 三、实验材料、用品
(完整word版)2015 动物细胞培养技术实验报告
一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。 动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。 原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。 传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室 无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。 孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。 制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。 储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。 清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施： 荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。 细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒 新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗： 硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水； 冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。 所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工
植物细胞与动物细胞的比较
植物细胞与动物细胞的比较 构成动物体或植物体的细胞有基本相同的结构体系与功能体系。很多重要的细胞器与细胞结构，如细胞膜、核膜、染色质、核仁、线粒体、高尔基体、内质网、核糖体、微管与微丝等，在不同细胞中不仅形态结构和成分相同，功能也一样。近年来在植物细胞内发现了类似动物细胞的中等纤维和溶酶体的结构，植物细胞的圆球体和糊粉粒具有类似溶酶体的功能。 植物细胞也有一些特有的细胞结构与细胞器是动物细胞所没有的，如细胞壁、液泡、叶绿体及其他质体。 细胞壁细胞壁是在植物细胞分裂过程中形成的，先在分裂细胞之间形成胞间层，主要成分是果胶质，再在胞间层之间形成有弹性的初生壁，有些细胞还形成坚硬的次生壁。细胞壁的主要成分是纤维素，还有果胶质、半纤维素与木质素等。细胞壁的某些部位有间隙，原生质可以由此沟通，形成胞间连丝。 液泡液泡是植物细胞的代谢库，起调节细胞内环境的作用。它是由脂蛋白膜包围而形成的，内部是水、无机盐、糖和色素等物质，溶液的浓度可以达到很高的程度。液泡是随着细胞的生长，由小液泡合并与增大而成为大液泡的。液泡还可以使植物细胞保持膨胀的状态。 叶绿体叶绿体是植物细胞内最重要、最普遍的质体，它是进行光合作用的细胞器。叶绿体利用叶绿素将光能转变为化学能，把二氧化碳与水转变为糖。叶绿体是世界上成本最低、创造物质财富最多的“生物工厂”。除叶绿体外，植物细胞中还有白色体、有色体等质体。
模拟制作植物细胞 1.除需准备制作动物模型的物品外，还应准备透明塑料小盒、小塑料食品袋、糖水。 2.在制作植物细胞模型时，先在小塑料袋内注入糖水，并用线扎紧。将小塑料袋放入已装有琼脂和果脯的较大塑料袋中，然后将较大塑料袋放在塑料小盒中盖好。 3.其余制作过程同动物细胞模型的制作。 在制作的植物细胞模型中，透明塑料盒相当于细胞壁，小塑料袋及其内的糖水相当于液泡。还可以增加若干颗绿色果脯(如青梅)，表示叶绿体。
观察动物细胞和植物细胞教学设计
台州学院生命科学学院 09科学教育2班实验教案 实验名称：观察动物细胞和植物细胞 姓名：____________ 参与人员：景双双钱志扬柳长隆郑如观察动物细胞和植物细胞教学设计
姓名：景双双钱志扬柳长隆郑如学号：35 36 37 38 课题七年级上第二章第4节细胞（第三课时）观察动物细胞和植物细胞 2011版课程标准对本节内容的要求与活动建议1、学会制作简单的临时装片。 2、熟练掌握显微镜的使用，观察装片，学会绘制简单的生物图。 3、知道细胞的基本结构。 学习者的认知起点 学习者是七年级的学生，学生在之前的课中认识了生物，认识了生物的分类，也认识了微观的细胞和其结构。细胞作为生物体结构和功能的基本单位是生物学的基础知识，其重要性是显而易见的。上一节课也已经学习使用了显微镜，所以在本节课中要学会如何制作临时装片来进一步巩固显微镜的使用并且进一步对细胞进行观察以及学习生物实验绘图的方法。 基于学习者实际所设计的具体教学目标知识与技 能目标 1、熟练掌握显微镜的使用和观 察方法。 2、学习如何绘制生物绘图，并能 够掌握画图技巧。 3、进一步明确动植物细胞的区 别。 4、会根据植物细胞装片的制作 自己推出动物临时装片制作 的过程，并自己动手操作。 学习者 达到教 学目标 的证据 和表现 1、自己能够使用显微镜观 察装片，并且说出一些主 要步骤及注意事项。 2、能够观察装片并且具有 绘制生物图的能力。 3、能够在观察的基础上说 出动植物细胞的不同点 和相同点。 4、可以较好的完成动物临 时装片的制作。 过程与方 法目标 观察和分析实验及相关的实验注 意点的探究学习方式。 学生具有敏锐的观察和良好 的归纳能力，学会自己制作动 物细胞的临时装片。 情感态度 与价值观 目标 1、体会对事物的观察要透过现象 看本质； 2、感受科学的发展往往需要付出 几代人的共同努力，是一个长期 的过程，从而培养协作的精神； 3、初步感受物质世界的统一性和 多样性。 4、体会归纳思想的重要性，学会 自己去发现和解决问题。 1、能够理论联系实际，将之 前所学的动植物细胞的 结构与自己制作的临时 装片进行对比。 2、学会归纳思想，并且应用 到生活实际。 科学、技 术、社会 与环境 （STSE） 目标 知道细胞是生命活动的基本单 位，我们只有通过这样对微观世 界的学习才能更好的了解生命的 本质，为例如农业、生物等提供 一些本质性的帮助，为社会服务。 体会到细胞对于生命的 意义，学会透过现象看本质的 方法，科学地看待事物，更好 的为以后的学习和工作服务。
观察动物细胞和植物细胞)
第4节细胞（4 观察动物细胞和植物细胞） 一、填空题 1、观察自己制作的临时装片，发现视野中有许多黑色圆圈，这是由于原因造成的，需要重新盖或重新制作。 2、生理盐水的浓度是，但亚甲基蓝溶液的浓度是，并且它的作用是。 3、观察洋葱表皮临时装片时，发现细胞有严重重叠现象，这可能是由于洋葱表皮细胞撕得太，或者是洋葱表皮细胞未在载玻片上。 4、人的口腔上皮细胞所具有的结构是、、。 5、在显微镜下观察到的动物细胞和植物细胞在结构上的不同部分是，植物细胞具 有和，动物细胞则没有。 二、选择题 6、用显微镜观察的正确方法是（） A、右眼睁开左眼闭 B、左眼睁开右眼闭 C、左眼观察右眼也睁开 D、以上均可以 7、制作洋葱表皮细胞临时装片时，染色的正确方法是（） A、将碘液直接滴在洋葱表皮上 B、先滴上碘液，再盖上盖玻片 C、先盖上盖玻片，再将碘液滴在盖玻片的一侧，用吸水纸在另一侧吸 D、先在载玻片滴碘液，再将洋葱表皮展平在其中 8、取显微镜的正确方法是（） A、两手握镜臂 B、两手托镜座 C、右手握镜臂 D、右手握镜臂，左手托镜座 9、用普通的显微镜看不到洋葱表皮细胞的结构是（） A、细胞壁 B、细胞膜 C、液泡 D、细胞核 10、用镊子撕取少量洋葱表皮细胞制成的临时玻片标本属于（） A、临时切片 B、临时装片 C、临时涂片 D、永久装片 三、简答题 11、下面是“观察人口腔上皮细胞”的步骤，请在空白处填写正确答案。 用滴管在载玻片中央滴一滴______。 用凉开水把口漱净。用牙签从口腔______处轻刮几下。 把刮下的东西放在______的______中。 盖上______，注意不要留下______。 把制成的口腔上皮细胞装片用______染色，然后放在______下观察。 12、下面是制作洋葱表皮细胞装片过程中的几个主要操作步骤。①盖上盖玻片；②用滴管在载玻片中央滴上一滴清水；③用镊子撕下一小块洋葱表皮；④把洋葱鳞片切成小块；⑤用镊子把洋葱表皮展平。 以上步骤正确的顺序是 13、绘制一个自己所看到的洋葱表皮细胞，并注明细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、液泡等名称。
实验四 动物细胞的传代培养
实验四动物细胞的传代培养 1. 实验目的 （1）了解动物细胞培养的基本知识。 （2）了解体外培养细胞的的基本形态类型；学会通过镜检判定体外细胞生长的状态。 （3）掌握动物细胞的传代培养法。 2.实验背景与原理 2.1 动物细胞培养的基本概念 （1）组织培养：把来自机体内的细胞、组织或器官放在类似于体内的外环境中，使之成活、生长和繁殖。严格又分为细胞培养、组织培养和器官培养。值得注意的是和植物组织培养不同，目前动物组织培养在一般培养条件下难以维持组织的结构和功能，常最终转变成为细胞培养，所以动物细胞与组织培养并无严格区别。（2）原代培养：直接从供体取来的细胞，组织或器官进行的初次培养。通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。 （3）传代培养：原代培养物长成单层细胞，达到一定密度时，营养消耗殆尽，需要补充营养，分开扩大培养，使之继续增殖。注意的是传代的这个“代”与细胞分裂的一个世代不同，一代细胞约分裂3~5次，不要混淆。 （4）细胞系：原代培养后的细胞经传代即可成为细胞系。若其形态均一，生长增殖稳定，生物性状明确，即可称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。不同种类的细胞成系的难易程度也不同，一般胚胎、更新组织的细胞如造血、上皮等以及
癌细胞较容易成系，而神经等细胞则较难成系。按照其生存期可分为有限细胞系（生存期有限的正常二倍体细胞）和无限细胞系（生存期无限的癌细胞、转化细胞等，大多异倍体） 2.2 动物细胞培养的基本条件 体外培养细胞的条件总原则就是要尽可能模拟细胞在体内生长的环境，因此必要的营养、适宜的胞外环境以及严格的无菌条件是主要的三个方面。 （1）营养：早期培养主要采用天然的生物性液体，但其成分不确定，难以控制营养成分。现广泛使用的是化学成分明确的各种商品化的合成培养基，其主要成分包括各种氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等必要的营养物质。培养基中还含有酚红指示剂，使培养基的颜色可显示细胞生长状态。随着细胞数目的增长，酸性代谢物增多，培养基变黄。污染的培养物也会使培养基迅速变黄。 培养基在使用前还要加血清，它的主要作用有三点：一是提供生长因子、激素、酶等营养；二是中和有毒物质，对细胞起着保护作用，尤其可中和培养中使用的胰蛋白酶的毒性。第三是提供黏附和伸展因子，是贴壁细胞附壁生长所必不可少的。所以，血清的品质对细胞的生长有很大影响，通常换用新的批次的血清要预先进行血清的筛选实验。一般进口的胎牛血清更有利于细胞的生长，但价格较昂贵，可根据培养细胞的要求选用。另外，有些细胞培养中还需要添加谷氨酰胺（Gln）。 （2）胞外环境条件：主要是温度、气体和pH条件。这些胞外环境条件应该符合细胞在体内的生长环境。哺乳动物适宜的培养温度是37℃，鸟类是39℃，爬行类是22~25℃等；大多动物细胞适宜的pH条件都是7.2~7.4，以不超过pH6.8~7.6为宜。在动物细胞培养过程中随着代谢产物的积累，酸性产物增多，
动物细胞培养技术实验
实验十五动物细胞培养技术及其应用 一．实验目的 通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。 二. 实验内容 1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术； 2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术； 3.细胞污染检测方法与技术； 4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。 三．实验用品 1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等 2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH 计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液 管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、 24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH 试纸、酒精棉球等 3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、 Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris 碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、 DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。 四．实验方法与步骤 （一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏 1. 缓冲液及培养基配制 Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。4℃下保存。 胰蛋白酶液： 称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s 液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。 4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。 MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。4℃下保存。Grace培养基：取一份GIBCO公司的Grace培养基粉剂，按说明用量加入1000ml三蒸水100单位／毫升青、链霉素，充分混匀使溶解，调节pH值至6.8左右。 0.22 μm 滤膜抽滤除菌，4℃下保存。此为基础培养基。使用前加入10%胎牛 血清。 细胞冻存液：基础培养基加入10%DSMO，20%胎牛血清，用前配制。 PBS缓冲液：137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 8.1 mmol/L Na2HPO4, 1.5 mmol/L KH2PO4,
实验五 动物细胞的原代培养
实验五动物细胞的原代培养 一、实验目的 1．了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。 2．学习细胞消化、营养液的配制及酸碱度的调节。 3．初步掌握无菌操作方法。 二、实验原理 细胞培养（cell culture）是用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养，使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、分化以及衰老等过程。 细胞培养的突出优点是：便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；便于人们对细胞内结构（如细胞骨架等）、细胞生长及发育等过程的观察。因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的一种简便易行的实验技术，同时也不可忽略另一个困素，那就是它脱离了生物机体后的一些变化。 细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等。 为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的内基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞（primary culture cell）与传代细胞（subculture cell）有一个基本的了解。 原代细胞培养又称原代培养（primary culture），是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，在体外培养，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。 细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节；二是严格控制无菌条件。 三、实验仪器、材料和试剂 1．器材：解剖剪、解剖镊、眼科剪（尖头、弯头）、眼科镊（尖头、弯头）、
动物细胞培养及外源基因的导入
“细胞生物学大实验”实验指导 动物细胞培养及外源基因的导入 细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。常用的细胞系均是性质均一的细胞，需要时还可采用克隆化等方法使细胞进一步纯化；四是研究的内容便于观察、检测和记录。体外培养的细胞可采用显微镜，电镜等直接观察记录，充分满足实验的要求。另外还具有研究范围比较广泛，研究费用相对经济等优点。 然而，细胞培养也有其局限性。由于培养的细胞脱离了机体复杂的环境条件，其细胞形态和功能都会发生一定程度的改变。尤其是体外反复传代、长期培养的细胞，有可能发生染色体非二倍体改变等情况。因此，应将体外培养的细胞视为一种既保持动物体内原细胞一定的性状又具有某些改变的特定的细胞群体。 由于细胞培养技术的优点是其他实验方法和技术所不能比拟的，所以近年来细胞培养技术在分子生物学、细胞生物学、遗传学、老年学、免疫学、肿瘤学和病毒学等很多领域都得到了广泛的应用，其中对于分子生物学家及细胞生物学家而言，应用细胞培养对感兴趣的基因产物进行定位、运动及功能研究变得越来越重要。在克隆一个基因后的下一步，往往是将其导入不同类型细胞，以分析其表达，测定表达对细胞生长的影响，或将高表达的基因产物纯化。将外源DNA 导入哺乳动物细胞有两种途径：稳定（永久）或暂时性转染。稳定转染的目的是将转移基因整合到细胞染色体DNA上，形成稳定表达转移基因的细胞系。一般需要共转染一个选择标记，用于追踪转染成功的细胞或转染效率。暂时性转染的目的是为了分析转移基因的暂时转录或表达，一般在转染后1-4天内进行。针对培养细胞的外源DNA导入已发展出多种技术，其中常用的有磷酸钙介导的转染，DEAE-葡聚糖介导的转染，脂质体介导的转染，电穿孔法等。这4种方法除DEAE-葡聚糖法外，均可用于暂时性转染和永久性转染。但它们有各自适用的细胞系。培养的细胞不同，其在摄取和表达外源DNA的能力上可能存在几个数量级的差异。因此针对细胞系优化并比较几种不同方法的效率很重要。 Graham和Vander EB（1973）首次报告了用Ca3(PO4)2-DNA沉淀将腺病毒SV40导入哺乳动物细胞的方法，Wigler等（1978）证明这种方法也能用于导入并在哺乳动物染色体上稳定整合外源DNA。至今对于磷酸钙介导的DNA转染的确切机理仍不清楚。一般认为转移DNA通过内吞作用进入细胞质，然后进入细胞核，而CaPO4处理被认为是产生了一种能促使DNA附着在细胞表面的环境。
动物细胞基本结构
动物细胞 编辑 动物细胞立体结构图组成动物体的细胞称为动物细胞，植物细胞和动物细胞大体上相同，都有细胞核、细胞质和细胞膜。但是也有不同的地方：这就是植物细胞在细胞膜外面，有一层厚而坚硬的细胞壁，而动物细胞是没有细胞壁的；植物细胞中有扁球状的叶绿体．而动物细胞里没有这种结构，植物细胞中有囊状的液泡，而动物细胞里的液泡却不明显。 目录 1简介 2结构特征 3培养 4培养液的成分 5培养液的特点 6培养 7基本过程 8动植物组织培养区别 9动物细胞培养的应用 10相关词条 1简介 动物细胞立体结构图组成动物体的细胞称为动物细胞，人体或动物体的各种细胞虽然形态不同，基本结构却是一样的，都有细胞膜、细胞质和细胞核。 2结构特征
中心粒 核糖体 滑面内质网 高尔基小泡 高尔基体 微绒毛 核仁 细胞核 核被 粗面内质网 溶酶体 线粒体 质膜 滑面内质网 动物细胞有细胞核、细胞质和细胞膜，没有细胞壁，液泡不明显，含有溶酶体,动物细胞的结构有细胞膜、细胞质、细胞器、细胞核；它们的主要作用是控制细胞的进出、进行物质转换、生命活动的主要场所、控制细胞的生命活动。细胞内部有细胞器：细胞核，双层膜，包含有由DNA和蛋白质构成的染色体。内质网分为粗面的与滑面的，粗面内质网表面附有核糖体，参与蛋白质的合成和加工；光面内质网，表面没有核糖体，参与脂类合成。
3培养 细胞培养是指细胞在体外条件下的生长，动物细胞在培养的过程中不再形成组织。 概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 4培养液的成分 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。动物细胞培养成功的关键在于培养液中是否含有动物血清，因为由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶，可以促进细胞的发育。 5培养液的特点 液体培养基、含动物血清。 6培养 .动物细胞培养液的成分：体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 2.动物细胞培养液的特点：液体培养基、通常含动物血清。 3.动物细胞培养的条件： ①无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。 ②营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等）。 ③血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份) 。 ④温度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4）。 ⑤气体环境（95%的空气+5%CO 2的混合气体）。 其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定。
动物细胞培养总结!!!!
动物细胞培养总结 一．实验准备 1.实验器械、器皿的清洗和消毒 （1）清洗和包装 离心管，2ml,15ml)若干，冻存管若干放进铝饭盒，用牛皮纸包裹，系紧棉绳，用笔在饭盒上和牛皮纸上标记盒内所装物品名称、数量、日期和所属人名称。 蓝枪头两盒，黄枪头白枪头各一盒用牛皮纸包裹，用棉绳扎紧。 取适量蒸馏水于4L玻璃瓶，瓶盖拧松半圈。 过滤器，250ml玻璃瓶，500ml玻璃瓶用自来水毛刷洗涤剂刷洗，蒸馏水润洗，烘干。 过滤器两部分分别包裹，先将瓶口部位用锡纸包裹后，再罩以牛皮纸，再用棉布密包起来，用棉绳扎紧。 玻璃瓶拧下瓶盖，瓶身浸酸。浸酸时应注意安全，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁以便浸酸结束后清洗耐酸手套，防止走动时酸液滴到地板上不好清洗。瓶口慢慢沉入液面下，注意缓慢降低瓶身，使液体慢慢浸入瓶内，以免产生气泡溅出酸液，发生危险。浸酸时器皿要充满酸液，勿留气泡，浸泡过夜。取出瓶身时，须穿戴耐酸手套和白大褂，注意保护好面部和身体裸露部分，提前备好一盆水在旁，取出后将瓶身放入盆内水中在转移至水池边清洗，以免酸液滴落地板不好清洗。换水洗几次，待水澄清后开始冲洗，每瓶都用自来水灌满，倒掉，重复15次，再用
蒸馏水漂洗5次，去离子水漂洗3次，烘干备用。 （2）消毒灭菌 1>全自动高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，放入物品，瓶类物体须拧松盖子后放最上面一筐，盖上灭菌锅盖，拧紧盖子至温度显示栏的左上角有一红点亮灯，按start开始升温。若灭有无菌水或玻璃瓶待降温至常温再打开，打开后立即拧紧，无菌水瓶口封上封口膜。若没灭瓶类物品，降温至80度左右即可打开灭菌锅，须戴上线手套取出。 2>手提式高压灭菌锅：插电源，打开开关，检查水位，若水位不足加蒸馏水补足，检查设定是否为121度20分钟，放入物品，盖上灭菌锅盖，注意导气管一定插到锅底并不能堵塞，用手对称地拧紧锅盖螺栓，再用扳手继续拧紧。加温升压之前，先打开排气阀门，加温约半小时后见排气阀处开始排残留在锅内的冷空气，排气五分钟，关闭排气阀，继而开始升压。灭菌后不要立即打开气阀放气以免水汽喷出。待自然降温至常压才能打开气阀。 玻璃瓶须拧紧，饭盒，枪头灭菌后放入烘箱烘干备用。 2.无菌间消毒及设备检查 用84消毒液拖地，用原液按照1：29的比例兑水，抹布、拖把擦洗。配400ml 75%酒精于盆中，用酒精棉仔细擦拭CO2培养箱，超净台，超净台内物品，显微镜，桌面，若培养箱内未培养细胞可以再打开高温灭菌模式将培养箱灭菌一次。 用蒸馏水擦拭清洗水浴锅内壁，注意底座不要沾水。
常用的五种动物细胞培养方式
?一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系 统，悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点： ·培养物的体积逐步增加； ·可进行多次收获； ·细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。 二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。该模 式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。
动物细胞与植物细胞的区别 导学案
植物细胞与动物细胞的比较 复习总结课 一、知识回顾： 1.制作洋葱鳞叶表皮临时装片的步骤： 擦，滴，撕，展，盖，染，吸 2.制作人口腔上皮细胞临时装片的步骤： 擦，滴，刮，涂，盖，染，吸 3.植物细胞的基本结构是： 细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体、叶绿体、液泡 4.动物细胞的基本结构是 细胞膜、细胞质、细胞核、线粒体 5.植物细胞与动物细胞的区别： 动物细胞有的结构植物细胞都具有； 植物细胞特有的结构是：细胞壁、叶绿体、液泡 6.制作人的口腔上皮细胞临时装片时，漱口的目的是清除口腔中的食物残渣；用生理盐 水而不用清水的原因是保持细胞的正常形态，避免细胞吸水破裂；滴加碘液的目的是染色，便于寻找和观察细胞。 7.口腔上皮细胞呈椭圆形，染色后，显微镜下看到的细胞呈橘黄色。 二、达标测评： 1.请分析回答细胞临时装片制作、观察等相关问题： (1)制作人口腔上皮细胞临时装片过程中，应先在载玻片中央滴一滴______________； 染色时所用的染剂是____________________。 (2)若显微镜的目镜为5×，物镜为40×，则观察到的物像放大__________倍。
若视野内有污点，移动临时装片和转动目镜后，污点均不动，说明污点在 ____________ 上(3)人口腔上皮细胞结构与上图中的_______（填“甲”或“乙”）相同， 判断依据是______________。 2.黄瓜果肉细胞与人的口腔上皮细胞都有的结构是 ①细胞壁 ②细胞膜 ③细胞质 ④细胞核 ⑤线粒体 ⑥叶绿体 ⑦液泡 A ．①⑥⑦ B ．②③④⑤ C ．②③④⑤⑦ D ．①②③④⑤⑥⑦ 3.与植物细胞比较，动物细胞没有的结构是（ ） A.细胞膜 B.细胞质 C.细胞核 D.细胞壁 4.制作人的口腔上皮细胞临时装片时，用到的材料和用具有（ ） ①镊子 ②生理盐水 ③稀碘液 ④清水 ⑤消毒牙签 ⑥刀片 A.①②③⑤ B.①③④⑥ C.①②④⑤ D.②③⑤⑥ 5.如图甲和图乙“观察人的口腔上皮细胞”实验的部分操作，如图丙所示显微镜的结构，如图镜观察到的人的口腔上皮细胞，据图回答下列问题： （1）图甲中滴加的液体是_______________,目的是____________________________。 （2）图乙中滴加的液体是_______________,目的是_______________________ （3）使用显微镜观察时，先要转动[ ]______________，使镜筒缓缓下降，直到接近拨片标本，此时眼睛一定要注视着[ ]_____________ （4）如果要将图丁中左下方的细胞物象移到视野中央，应该向___________方移动装片． （5）为更好地观察口腔上皮细胞，需要将视野调暗，应当改用___________和平面反光镜． 6．下列能正确表达动物细胞各结构之间位置关系的是（ ） A B C D
细胞实验室
一．建设方案之动物细胞培养实验室（设备片） 在生命科学科领域中细胞学有着至关重要的地位，近年来细胞学发展迅速，并取得了相当大的进展，细胞学相关实验室的建设也是各个研究院及院校生物学科必备的实验室。 细胞相关实验所需仪器及耗材种类繁多，接下来就细胞培养实验室常用仪器作下简单介绍：一、纯水系统 细胞培养用水一般要求双蒸水（0.8MΩ以上），实际上普通蒸馏水经玻璃器皿中按标准方法蒸馏二次得到的双蒸水是不能满足要求的，而且水中的内毒素直接参与细胞凋亡，血清中内毒素含量越低，对细胞毒性越小，越利于细胞的生长和传代；内毒素含量过高，会直接导致细胞提前老化。因此建议配置正式的水纯化系统。 二、液氮罐 为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。 三、超净工作台/生物安全柜 细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。 四、CO2培养箱 CO2培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO2培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。 五、恒温水浴 从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37℃水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴也是细胞实验室必备仪器。 六、超低温冰箱 细胞的冻存过程需要一系列程序降温，一般4℃下存放30 min，转放-20℃ 1 hour，再转入-70至-80℃过夜，之后才可以转移到液氮内(-196℃)，这时就必须配备一台-86℃超低温冰箱。一般超低温冰箱保存细胞可达数月，对于不需要长期冻存的细胞，可暂时放于超低温冰箱保存。 七、离心机 细胞培养需要离心收集传代细胞，所以需要配置低速的常温离心机，对于后期细胞内容物的
植物细胞与动物细胞的区别(吉林张硕)
植物细胞 动物细胞 人七第四期点对点辅导 植物细胞与动物细胞的区别 既然植物和动物都是由细胞构成的，那么植物细胞和动物细胞都一模一样吗?如果你在显微镜下观察一下这两类细胞，就会发现，它们 大体上相同，都有细胞核、细胞质和细胞膜。但 是也有不同的地方： 1、在植物细胞膜外面，有一层厚而坚硬的 细胞壁，细胞壁的主要成分是纤维素，对细胞有 保护和支持作用，所以小麦等植物才会既坚韧又 结实。而动物细胞是没有细胞壁的。 2、植物细胞中有扁球状的叶绿体，所以大 多数植物都是绿色的，而动物细胞里没有这种结构。 3、植物细胞中有囊状的液泡，液泡在植物的生命活动中有着重要的作用，液泡就像植物的大水库，植物每天吸收的水，大部分都储藏在液泡里，把液泡胀得鼓鼓的，形成了一种膨压，植物便因此而挺拔起来。一旦植物缺水，液泡就像泄了气的皮球那样又瘪又软，植物的茎叶便委靡不振了。 液泡里充满着细胞液，而细胞液中有许多复杂的物质， 如糖类、盐类、有机酸等，我们吃西瓜时感到甜滋滋的，番茄吃起来有一种带酸的甜味，水果未成熟时吃起来又涩又苦，这些都是因为液泡中细胞液所含的成分不同的缘故。而动物细胞里的液泡却不明显。 【典例分析】 例1、洋葱表皮细胞和人的口腔上皮细胞都具有的细胞结构是 （ ） A 、细胞壁 细胞膜 细胞质 B 、细胞膜 细胞质 细胞核 C 、细胞壁 细胞核 细胞质 D 、细胞膜 细胞质 液泡 【解析】此题考查的知识是植物细胞与动物细胞结构的相同点，它们共同具有的结构是细胞 膜、细胞质和细胞核。因此答案是B 例2、与植物细胞相比，在观察草履虫时，它没有植物细胞的 、 、 等结构。 【解析】植物细胞与动物细胞的主要区别是植物细胞有细胞壁、液泡和叶绿体，而动物细胞 没有这些结构。因此答案是细胞壁、液泡、叶绿体。 练习： 1、挤压水果可以得到果汁，这些液体主要来自于细胞结构中的 ( ) A 、细胞质 B 、细胞膜 C 、液泡 D 、叶绿体 2、某同学在显微镜中观察到一个细胞有细胞壁和液泡，那么他观察的是 （ ） A ．活细胞 B ．植物细胞 C ．死细胞 D ．动物细胞 3、（1）图中属于植物细胞的是 图，属于动物细胞的是 图。
动物细胞培养及应用发展史
细胞培养技术
细胞培养发展史及其应用 （一）前言 20世纪初，人们不知道神经纤维是由神经细胞的细胞质向外突出形成的，还是由神经细胞周围的其他细胞融合而成的。生物学家们就这个问题展开了激烈的争论。1907年，美国生物学家哈里森(Harriso n)从蝌蚪的脊索中分离出神经组织，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培养。蝌蚪的神经组织存活了好几周，并且从神经细胞中长出了神经纤维。哈里森的实验不仅解决了神经纤维的起源问题，而且开创了动物组织培养的先河。此后，在许多科学家的不懈努力下，动物组织培养不断改进并逐渐发展成为动物细胞培养。 所谓动物细胞培养(亦称组织培养)既有别于植物细胞培养，又与微生物的培养完全不同。所谓动物细胞培养是指离散的动物活细胞在体外人工条件下的生长、增殖过程，在此过程中细胞不再形成组织。 由于动物细胞培养是在人工条件下进行的，便于调控和观察，因而成为现今研究动物的物质代谢过程、染色体的形态变化、以及遗传物质的表达调控等高难领域的既便利而又有效的新方法。同时，随着现代生物化学、分子生物学、分子遗传学、以及现代医学的发展，细胞培养也在许多应用领域充分展示了其巨大的发展潜力，并已为世人所关注。尽管如此，动物细胞培养仍是一门年轻的新学科，在发展之初被混淆于动物组织培养之中。 （二）细胞培养技术及其历史 细胞培养的历史最早可追溯到19 世纪末，据可考证的资料记载W ilhelm Roux是第一个进行动物组织培养实验的人。 1885年Wilhelm Roux 将鸡胚髓板放置于温热盐水中使之维持存活了数天，是有记录的第一个体外移植成功的例子。 1887年Arnold把恺木的木髓碎片接种到蛙的身上。当白细胞侵入这些木髓碎片后，他把这些白细胞收集在盛将盐水的小碟中，接下来观察到这些白细胞在运动，并存活了一个短的时间。
动物细胞传代培养
细胞工程实验报告 实验课程：细胞工程 实验内容：动物细胞传代培养 一实验目的 掌握消化法细胞传代培养的原理 了解细胞传代培养所需专用设备、试剂 学习细胞传代培养操作 二实验原理 ●动物细胞原代培养成功，细胞生长增殖形成单层细胞后，会 进一步扩展汇合，覆盖整个培养瓶底，细胞会因生存空间不 足或密度过大，发生接触抑制，并引起营养物质枯竭和代谢 产物积累，发生细胞中毒，影响正常生长。这时需要进行分 离培养，细胞由原培养瓶按1：2或1：3稀释后传到新的培 养瓶的过程称之为传代。80%汇合或刚汇合细胞是理想的传 代阶段。 ●消化法细胞传代培养，是用一定含量的胰蛋白酶来进行消化， 使贴壁的单层细胞脱离下来，形成分散的细胞悬液，然后用 新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。 三实验试剂及器具 ?改良吸管加样器
?培养瓶（玻璃、塑料） ?PE液 ?0.25%胰蛋白酶液 ?MEM+10%小牛血清液 ?抽滤装置 ?超纯水器 ?倒置显微镜 ?二氧化碳培养箱 四实验步骤与操作 ●75%酒精消毒双手、工作台面、培养瓶、瓶盖、试管， 并过火焰。 ●用酒精棉球擦拭培养用液瓶盖，打开瓶盖在酒精灯火焰 上一过，盖上瓶盖，但不必拧紧 ●将培养瓶内的旧培养液倒入烧杯中 ●旧培养液倒掉后，镜下观察细胞十分干净、清晰 ●从布袋中取出已消毒的吸管，插入加样器 ●从布袋中取出已消毒的吸管，插入加样器，注意吸管的 刻度面向上，加样器的柄面偏左侧，以便于操作时观察。 ●将吸管过火焰（竖向） ●将吸管过火焰（横向） ●吸取PE液5ml ●从侧面加入瓶内
●平放轻摇40下，放置2~5分钟 ●将PE液倒出 ●吸取胰酶0.3ml ●将胰酶加入瓶中，加入时直冲细胞贴壁处，平放轻摇， 使酶液漫过整个瓶底部，放置1-2分钟，可于镜下观察，并轻拍 ●在倒置显微镜上观察，发现细胞质渐渐回缩，细胞间隙 增大，细胞慢慢变圆时 ●用手掌拍打瓶底和瓶侧，使细胞从瓶壁脱落下来并悬浮 和流动起来，再在显微镜下观察。 ●准备好一个新瓶，松开瓶盖一圈，吸取MEM培养液5ml ●准备加入培养瓶 ●将培养液加入原培养瓶 ●用吸管向瓶壁吹吸数次，混合成均匀的细胞悬液后，吸 出2ml，装入一新瓶内，剩余的留于瓶内，再在两瓶中分别加入1ml和2ml的新鲜培养液 ●将培养瓶口及盖过火焰后拧紧 ●做上标记 ●将传代好的培养瓶放置于合适温度的培养箱中（视不同 细胞要求而确定培养温度）培养 ●细胞由刚传代好时的圆球型（游离期）→贴附（贴壁期） →伸展（铺展）→扁平或梭型或多边形→繁殖→长满整
动物细胞培养技术小鼠脾脏细胞
姓名：XX 系年级：2013级XX班学号：201300XXXXXXX 实验题目:动物细胞培养同组者: XXXXX 动物细胞培养技术 【实验目的】 1.学习掌握细胞培养的基本原理以及具体方法，并对小鼠脾细胞进行原代培养； 2.掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 3.学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法； 4.学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数，计算细胞存活率； 【实验原理】 （一）. 动物细胞培养技术 动物细胞培养技术是指从动物体内取出组织或细胞，在体外模拟动物体内的生理坏境，在无菌，适当温度和一定的营养条件下，使之生存，生长和繁殖，并维持其结构和功能的方法。 细胞培养的意义:⑴.具有其他生物技术无可比拟的优点；⑵.培养条件易改变和控制，便于 单因子分析；⑶.便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察；⑷.在生物学的各个领域（如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等）已被广泛应用 细胞培养的局限性：（1）.在脱离机体复杂环境下，细胞培养条件与躯体环境有一定距离； (2).观察到的结果有时难以正确反映机体内的状况；(3).细胞培养得到的产物少。 培养细胞的生存条件有水的质量、无菌环境，最适温度、渗透压、气体条件、最适PH、营养条件和培养基质等。 细胞培养的方法：1. 原代培养：直接从生物体内获取细胞，组织或器官，进行体外培养直 至第一次传代为止。2. 传代培养：当培养的细胞增殖达到一定密度之后，则需要再做培养，即将培养的细胞分散后，从一个容器以1:2或其他比例转移到另一个容器中的扩大培养。原代细胞培养的方法有：单层细胞培养法和组织块培养法 细胞传代培养包括：贴附生长细胞的传代：洗细胞——酶消化——接种——观察 悬浮生长细胞的传代：A.直接传代 B.离心传代 单层培养细胞的生长过程分为：游离期，吸附期，繁殖期，维持期，衰退期 培养细胞的形态分型：A. 贴附型 B.悬浮型 （二）. 细胞死活鉴定 细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。 活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异： ①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只
植物细胞和动物细胞
植物细胞和动物细胞 一、选择题 1、下列有关番茄细胞结构功能的说法错误的是（） A．遗传物质主要存在于细胞核中 B．番茄汁中的酸味物质存在于液泡中 C．番茄的细胞壁具有支持保护和控制物质进出细胞的作用 D．番茄叶肉细胞中被称为能量转化器的结构有叶绿体和线粒体 2、在制作洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片时，可以直接将撕取的洋葱鳞片叶内表皮细胞置于载玻片上的清水中也不会使其因过度吸水而胀破，主要取决于洋葱鳞片叶内表皮细胞的哪个结构（） A．细胞膜B．细胞壁C．细胞质D．液泡 3、各种植物的细胞通常具有一定的形态，这主要是因为（） A．细胞壁的保护作用B．细胞壁的支持作用 C．细胞膜的保护作用D．细胞膜的支持作用 4、细胞是生物体结构和功能的基本单位．如图为植物细胞结构模式图．据图判断，正确的是（） A．②是细胞壁 B．⑤是细胞核，细胞生命活动的控制中心 C．切西瓜或削水果时流出的汁液通常来自于③ D．动、植物细胞都有①②③⑤ 5、小明用显微镜观察下列细胞，其中具有细胞壁但无叶绿体的是（） A．菠菜叶肉细胞B．洋葱鳞片叶内表皮细胞 C．人体口腔上皮细胞D．血涂片中的红细胞 6、在人体的细胞中，没有的结构是（） A．细胞壁、叶绿体、液泡B．细胞膜、细胞质、细胞核 C．细胞核、细胞质、线粒体D．细胞膜、细胞质、线粒体 7、小明用显微镜观察一个细胞，他判断为植物细胞，这是因为他看到了（） A．细胞膜、细胞核B．细胞核、芽孢 C．细胞质、细胞核D．细胞壁、叶绿体 8、洋葱鳞片叶表皮细胞与人的口腔上皮细胞都有的结构是（） ①细胞膜②细胞质③细胞核④细胞壁⑤线粒体⑥叶绿体⑦液泡． A．①②③④⑤⑥⑦B．①②③⑤C．①②③④⑥⑦D．④⑥⑦ 9、下列四个实验中都用到碘液，使用目的与其它三个实验不同的是（） A．观察人的口腔上皮细胞 B．观察洋葱内表皮细胞 C．观察酵母菌细胞 D．观察玉米种子的结构 10、制作人口腔上皮细胞的临时装片时，用于漱口的液体、载玻片上滴加的液体、染色用的液体分别是（） A．碘液、生理盐水、自来水B．碘液、生理盐水、凉开水 C．碘液、自来水、生理盐水D．凉开水、生理盐水、碘液