微生物限度检查法纯化水验证方案
纯化水清洁消毒验证方案
车间工艺用水系统清洁消毒验证资料工艺用水系统清洁消毒验证方案1、概述（General）车间纯化水水系统包括：纯化水储罐、纯化水分配消毒系统及相应的水泵。
纯化水系统清洁、消毒对确保生产的纯化水的质量起着重要作用，为防止纯化水的污染、保证医疗器械的质量安全，对纯化水系统的清洁消毒方法进行验证。
本次验证的目的是按照规定的清洁消毒方法及频率对纯化水系统进行定期清洁消毒，能否保证纯化水的质量，达到预期的清洁消毒目的，不会对产品造成污染。
2、验证目的及范围（Verification purpose and scope）2.1 本次验证为车间纯化水清洁消毒验证，目的为验证《纯化水罐及管道清洗、消毒操作规程》规定的清洁消毒方法及周期能够保证该系统达到清洁消毒效果。
本方案适用于车间纯化水系统清洁消毒效果的验证。
2.2 验证范围：纯化水系统清洁方法。
3、验证小组成员及职责（Verification team members and responsibilities）3.1小组成员与职责3.2部门职责(Department duty)车间：负责验证方案、报告的起草及按验证方案进行实施。
生产部：负责验证方案、报告的审核；质检中心：负责样品的取样方法确定、取样检验。
质量部：负责验证方案、报告的审核及验证实施，仪器校验并及时出具检验报告书，指导验证方案的实施。
管理者代表：负责最终方案报告的审核3.3培训3.3.1验证前，由验证组组长对验证小组成员进行培训，验证小组成员接受培训并明确自己的职责。
3.3.2由车间工艺质量管理负责人对验证实施人员进行培训，培训内容包括验证实施过程中的操作要求及注意事项。
4、验证实施过程(Validation implentation)4.1验证前的准备工作对与验证有关的所有仪器进行校验或确认其在有效期内，并确定其精密度符合验证的使用要求。
表1：验证相关仪器一览表评价人：年月日审核人: 年月日4.2 纯化水系统消毒确认4.2.1验证项目及验证周期4.2.1.1验证项目4.2.1.1.1连续生产，每月对纯化水系统消毒一次方法及频率确认。
纯化水微生物限度检测
如果取10ml，两片膜共长1000个菌以下并不定是不合格的。
因为取水10ml，只能每次取5ml，各用于两片膜的过滤，每张膜只能培养出细菌或霉菌，不能同时出细菌和霉菌，所以结果计算时体积只能算5ml，按5ml计，两片膜有1000个，则每1ml有200个了所以应判为不合格，只有在500个以下才能算合格的。
应该说05年版药典的标准比00年更为合理，因为采用薄膜过滤法，取样量可以加大(平板法时只取1ml)，更能培养微生物，对于检验更有代表性。
一般不可能平板计数法不合格，而采用过滤法确能合格，取样量加大后，培养出微生物的机率更大。
若相反，要查一下原因，是不是检测有问题。
采用薄膜过滤法可以通过验证来确定取样量，也并不一定取5-10ml，若纯化水中含微生物量较少，则取样量可加大，但不能培养出太多菌落导致无法点计，影响计数结果。
若含微生物较多，则取用量可减少，总之，在不影响计数的前提下，尽可能加大取样量。
我们公司是取水25-50ml。
供参考，我们是采用平板法时，一般都没有培养出菌落。
另采用薄膜过滤法可以不必加无菌水稀释，直接滤过即可。
纯化水验证方案
纯化水验证方案1. 引言纯化水是一种经过特殊处理的纯净水，用于实验室、医疗设施和工业生产等领域。
纯化水的质量对于确保实验准确性和产品质量至关重要。
因此，建立一个有效的纯化水验证方案是非常必要的。
本文将介绍一种纯化水验证方案，以确保纯化水的质量符合要求。
2. 纯化水验证的目的纯化水验证的目的是评估和确认纯化水系统是否满足预定的纯度要求。
通过验证，可以确保纯化水系统的设计、安装和运行是否合理，以及纯化水是否符合要求的质量标准。
3. 纯化水验证方案的步骤3.1 确定验证目标和验证参数首先，需要明确纯化水验证的目标和验证参数。
验证目标可以包括纯化水的电导率、总溶解固体、微生物质量、有机物质、重金属等。
验证参数是对这些目标进行具体测量和评估的指标，如使用电导率计测量电导率，使用光谱仪测量有机物质等。
3.2 制定验证计划和验证方法在制定验证计划和验证方法时，需要按照验证目标和验证参数的要求进行。
验证计划应包括验证过程的时间、地点、人员和步骤等信息；验证方法应包括具体的实验操作步骤、所需设备和试剂等。
3.3 进行纯化水系统的运行条件评估在验证前，需要对纯化水系统的运行条件进行评估。
包括检查设备的状态和维护记录，确认纯化水系统是否正常运行，是否存在异常。
3.4 进行纯化水验证实验在验证实验中，可以通过取样分析等方法对纯化水的质量进行评估。
根据验证参数，采集纯化水样品，进行实验室分析和测试。
比如，可以使用电导率计、pH 计、微生物培养等仪器和方法进行测量。
3.5 分析和评估验证结果根据验证实验的结果，对纯化水的质量进行分析和评估。
如果验证结果符合预期的要求，则纯化水系统可以被确认为合格；如果验证结果不符合要求，则需要进行问题分析和改善措施的制定。
3.6 编写验证报告最后，根据验证实验结果和分析，编写一份验证报告。
验证报告应包括验证目标、验证参数、验证方法、实验步骤、验证结果和分析、结论和建议等内容。
4. 验证频率和验证计划的制定纯化水系统的验证应根据需要进行定期验证。
纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数验证方案
纯化水细菌、霉菌及酵母菌计数验证方案1 概述：本本法是用于建立微生物检查法时，根据中国药典2005年版二部分要求，需对细菌、霉菌及酵母菌的计数方法进行验证。
故计划于2006年9月份对细菌、霉菌及酵母菌的计数方法进行验证。
2 原理：根据不同的样品，制备成供试液，再将规定量的供试液通过膜微过滤系统真空抽滤，将滤膜进行培养，对形成的菌落计数，或通过采用平皿法对形成的菌落计数，从而了解供试品的微生物含量。
3 菌种：大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）65301]白色念珠菌[CMCC（B）98001]黑曲霉[CMCC（B）98003]4 培养基：营养琼脂培养基改良马丁琼脂培养基5 试剂：pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液0.9%无菌氯化钠溶液6 设备：MILLPORE 微膜过滤系统7 检测方法：7.1菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养琼脂培养基中培养37℃培养18-24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液将培养物制备成菌悬液，用细菌比浊管比浊，其浊度与标准比浊管相当后，经梯度10倍稀释至10-5-10-7，约为50-100CFU/ml，供活菌计数及验证试验用。
接种白色念珠菌新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基中25-28℃培养18-24小时，用0.9%无菌氯化钠溶液将培养物制备成菌悬液，用细菌比浊管比浊，其浊度与标准比浊管相当后，经梯度10倍稀释至10-5-10-6，约为50-100CFU/ml，供活菌计数及验证试验用。
接种黑曲霉孢子液至改良马丁琼脂培养基中，经25℃培养5-7天，加入3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸取孢子悬液，用细菌比浊管比浊，其浊度与标准比浊管相当后，经梯度10倍稀释至10-4，约为50-100CFU/ml，供活菌计数及验证试验用。
7.2活菌计数分别取上述大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌10-5-10-7稀释液各1ml加入平皿，再用不超过45℃的营养琼脂培养基20ml注皿，每个菌株各测定2皿，30-35℃培养48小时，计算菌落数。
纯化水需氧菌检查R2A培养基适用性试验方案
纯化水需氧菌检查R2A培养基合用性实验方案目录1.概述2.验证目旳和范畴3.组织及职责4.验证进度筹划表5.验证所需要旳仪器设备旳确认6.验证所需要旳菌种、培养基、试剂、检查样品旳确认7.验证项目和验证措施7.1实验菌株7.2菌液制备7.3培养基合用性检查7.4计数措施合用性实验（薄膜过滤法）8.偏差与漏项控制9.验证报告会审1.概述我公司自制纯化水微生物限度检查项目为需氧菌总数检查。
参照《中国药典》四部附录1105：微生物计数法旳规定，须对纯化水检查所用旳R2A培养基进行合用性实验。
通过合用性实验以确认所采用旳培养基合用于纯化水旳需氧菌检查。
本验证方案通过实验菌株旳回收率测试，验证R2A琼脂培养基与否合用于本品旳需氧菌总数检查。
2.验证目旳和范畴验证纯化水旳需氧菌检查所用R2A培养基旳合用性，对其有效性进行评价，保证检查成果旳可靠性。
本验证方案采用1批按GMP规定组织生产旳纯化水，并进行R2A培养基合用性检查。
3.组织及职责3.1验证方案和验证报告旳起草、审核、批准验证方案由质量部QC组负责起草，由质量部审核，最后由质量负责人批准。
验证方案实行完毕后，由QC组负责汇总需氧菌检查法验证旳成果、撰写报告，由质量部审核，最后由质量负责人批准报告。
3.2验证方案旳培训验证方案在经质量负责人批准后，由QC组组长对本次验证明施旳有关人员组织培训工作，并将该次旳培训记录归档。
3.3验证方案实行过程中旳变更和偏差验证方案实行过程中如有变更和偏差，质量负责人应当组织进行评估并采用相应旳控制措施。
3.4验证工作小构成员表4.验证进度筹划表本次R2A培养基旳合用性实验旳筹划安排时间是8月至9月。
5.验证所需要旳仪器设备旳确认重要检查仪器设备确认表检查人/日期：复核人/日期6.验证所需要旳菌种、培养基、试剂、检查样品旳确认6.1.实验菌种检查表检查人/日期：复核人/日期6.2实验所需旳培养基检查检查人/日期：复核人/日期：6.3试剂检查人/日期：复核人/日期6.4.试剂及培养基配制pH7.0氯化钠一蛋白胨缓冲液（冲洗液）：称取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液干粉16.09g。
制药用水微生物限度检验方法学确认2015.11
制药用水-微生物限度检验方法学确认目录一、引言1、概述2、验证的目的二、验证方法合格标准三、主要材料确认1、仪器设备确认2、辅助材料确认3、人员确认4、商品培养基及灭菌培养基确认5、菌种及菌液的制备四、样品制备1、稀释液2、供试液制备3、操作方法五、方法验证1、需氧菌总数的计数方法验证2、计算菌回收率公式六、验证结果及评价七、再验证周期八、验证结论批准一、引言1、概述：根据《中国药典》2015年版三部通则“1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（以下简称《药典》）的要求，对内控标准中有“微生物限度”检查项的产品进行该项验证。
根据《中国药典》2015年版三部纯化水进行方法学确认。
2、验证目的：确保药品微生物限度检查实验的准确性，在建立药品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌总数计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该样品的需氧菌总数的测定。
二、验证方法合格标准1.前提条件：培养基适用性实验应符合规定，即：被检R2A培养基上菌落平均数与对照培养基上菌落平均数比值应为0.5~2，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致。
2.计数方法适用性试验：在3次独立的平行试验中，若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值与菌液对照组的平均菌落数的比值）均在0.5～2范围内，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的需氧菌总数。
三、主要材料确认1、仪器、设备确认检查结果：检查人：复核人：日期：2、辅助材料确认2.1移液器、接种环、酒精灯、记号笔、酒精棉球、试管架、试管、玻璃平皿、止血钳等2.2需灭菌物品见《微生物限度检查法验证记录》2.3一次性无菌用具见下表检查结果：检查人：复核人：日期：3、人员确认化验员经设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，考核合格后上岗。
4、商品培养基及灭菌培养基4.1 所用培养基均不得有结块、吸潮、异味、颜色发生改变等现象。
培养基检查结果，如下检查结果：检查人：复核人：日期：4.2已灭菌培养基的检查结果及结论见《微生物限度检查法验证记录》。
纯化水微生物限度检查标准操作规程
纯化水微生物限度检查标准操作规程1目的规定纯化水微生物限度检查操作。
2适用范围本文件适用于纯化水微生物限度检查操作。
3职责微生物限度检查操作人员。
4微生物限度检查方法纯化水采用薄膜过滤法进行检查。
滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。
5内容5.1设备洁净工作台、恒温培养箱（30~35℃）、恒温水浴锅、电热干燥箱（250~300℃）、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果检查并应定期请有关部门检定）。
5.2仪器及器皿5.2.1薄膜过滤器、放大镜、显微镜。
5.2.2玻璃器皿：蓝盖试剂瓶（250ml）、培养皿（90mm）、吸管（l0ml分度0.l）、载玻片、盖玻片。
玻璃器皿用前应洗涤干净无残留抗菌物质。
吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm的适宜疏松棉花，置吸管桶内或用牛皮纸包好。
玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30min，烘干备用。
5.3用具5.3.1大、小橡皮胶头（放于干净带盖的容器中，并应定期用75%乙醇溶液浸泡）。
纯化水微生物限度检查标准操作规程5.3.2无菌衣、帽、口罩、手套（洗净后配套，用牛皮纸包严）灭菌，备用。
也可用一次性无菌衣、帽、口罩、手套。
5.3.3酒精灯、酒精棉球、灭菌剪刀、灭菌镊子、试管架、无菌滤杯、无菌滤膜、打火机、记号笔、接种环、灭菌抹布等。
5.4消毒液5.4.10.1%苯扎溴铵溶液（供洗手、擦拭操作台面用）。
5.4.275%乙醇溶液5.4.33~5%来苏尔溶液5.5培养基R2A琼脂培养基5.5.1灭菌前后应对培养基的pH值进行校验。
5.5.2配制的培养基不应有沉淀，如有沉淀，应于溶化后趁热过滤灭菌后使用。
5.5.3培养基的分装量不得超过容器的2/3，以免灭菌时溢出。
包装时，塞子必须塞紧以免松动或脱落造成染菌。
5.5.4培养基配制后应在2h内灭菌，避免细菌繁殖。
5.5.5灭菌后的培养基在2~8℃处保存备用，放置时间不能过长，以免水分散失及染菌。
已熔化的培养基应一次用完，开启后不宜再用。
微生物限度检测方法验证
微生物限度验证1.概述1.1试验背景为保证微生物限度检验结果的准确可靠，当建立产品的微生物限度检查法时，应进行方法的试验，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计，所采用的方法适合于该产品的微生物限度检查。
按照《中国药典》2015年版要求，检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，检查方法应进行重新试验。
根据15年版药典及药品微生物实验室质量管理指导原则要求，检测环境由原来的为C 级背景下局部A级空气单向流，变更为在C级背景下，生物安全柜中进行微生物限度检测, 试验用菌株有原来的大肠埃希菌变更为铜绿假单胞菌、接种用培养基随之发生变化；实验组及对照组制备发生变更。
现针对纯化水微生物限度试验方法确认，以证明所采用的方法适合该药品的微生物限度检查。
1.2方案说明验证过程中严格按照经批准的方案规定的内容进行，若因特殊原因需要变更时，应填写方案变更申请及批准书（附件1），报验证领导小组批准。
2.试验目的及要求按照《中国药典》2015年版规定对纯化水微生物限度检查方法进行试验，在现有检验程序、检测条件及培养条件下，通过试验以确认所采用的方法适合于纯化水需氧菌的测定；根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据试验结果判断是否符合试验标准。
3.试验小组4.风险分析:4.1风险等级标准A、严重程度（S）：测定风险的潜在后果，主要针对可能危害产品质量、患者健康及数据完整性的影响，分为以下四级：评分严重程度描述4 关键直接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性，可能导致产品不能使用直接影响GMP原则，危害生产区活动3 高直接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性，可能导致产品召回或退回未能符合一些GMP原则，可能引起检查或审计中产生偏差2 中（不重要的）对产品或数据无相关影响，但间接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性可能造成资源的严重浪费或对企业形象产生较坏影响1 低（可以忽略）对产品或数据无相关影响，但对产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性仍产生较小影响B、可能性程度(P)：测定风险产生的可能性，为建立统一基线，建立以下四个等级：评分可能性描述4 极高极易发生，约一星期一次或者更频繁3 高偶尔发生，约一个月一次2 中很少发生，约一年一次1 低发生可能性极低，三年甚至更长时间都不大可能发生C、检测能力（D）:在潜在风险造成危害前，检测发现的可能性，设为以下四个等级：评分检测能力描述4 极低失败很可能被忽视，因此没有检测到（无检测机制，无人工或视觉校验）3 低不检测，但可能被发现，如：作为现场检查的审计2 中定期检测，如：常规的手动控制或分析可检测到错误1 高始终检测到，如：自动控制装置到位，故障报警或错误后无法下一流程操作4.2风险评估：根据确定的风险标准对已经识别并分析的风险进行评价，即通过评价风险的严重性和可能性从而确认风险的等级。
纯化水控制菌检查方法验证方案及验证报告
纯化水控制菌检查方法验证方案及验证报告验证方案：1.确定验证目标：纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
2.确定验证方法：选取一批纯化水样品进行验证，分别使用纯化水控制菌检查方法和参比方法进行测定。
3.确定验证指标：验证指标包括检出限、准确度和重复性。
-检出限：比较两种方法在检测纯化水样品中的最低检出限。
-准确度：比较两种方法在检测纯化水样品中的测定结果的准确性。
-重复性：比较两种方法在检测纯化水样品中的测定结果的重复性。
4.验证步骤：a.准备样品：准备一批代表性的纯化水样品，确保样品之间的差异尽可能小。
b.纯化水控制菌检查方法测定：按照该方法进行纯化水样品的检测，记录结果。
c.参比方法测定：选取一种已经被广泛认可的纯化水控制菌检查方法作为参比方法进行测定，记录结果。
d.分析比较：比较两种方法的检出限、准确度和重复性。
e.结果分析与判定：根据比较结果判断纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
5.验证报告：根据验证结果编写验证报告，包括验证目标、验证方法、验证过程、比较结果和结论等内容。
验证报告：验证目标：本次验证旨在验证纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
验证方法：本次验证选取了一批代表性的纯化水样品，分别使用纯化水控制菌检查方法和参比方法进行检测。
验证指标：本次验证的指标包括检出限、准确度和重复性。
验证步骤：a.准备样品：准备了10个代表性的纯化水样品，确保样品之间的差异尽可能小。
b.纯化水控制菌检查方法测定：按照该方法进行纯化水样品的检测，记录结果。
c.参比方法测定：选取了参比方法A进行纯化水样品的检测，记录结果。
d.分析比较：比较了两种方法的检出限、准确度和重复性。
e.结果分析与判定：根据比较结果判断纯化水控制菌检查方法的准确性和可重复性。
比较结果：1.检出限：纯化水控制菌检查方法的检出限为10CFU/mL，参比方法A的检出限为5CFU/mL。
2.准确度：在10个样品中，纯化水控制菌检查方法的准确度为90%，参比方法A的准确度为95%。
药品微生物限度检查方法验证方案
药品微生物限度检查方法验证方案2014年1月15日方 案 审 批1方案起草2方案会签 3方案批准 4方案实施目录1. 概述2. 仪器设备3. 供试液的制备4. 细菌、霉菌及酵母菌计数5. 控制菌检查6. 验证品种项目表1微生物限度检查法概述微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括细菌数、真菌数、酵母菌数及控制菌检查。
微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。
检查全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。
单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
除另有规定外，本检查法中细菌的培养温度为30～35℃，真菌、酵母菌的培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为（36±1）℃。
检验结果的报告以1g、1ml、10g、10ml为单位报告。
检验量即一次试验所用的供试品。
除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml。
检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，一般应随机抽取不少于检验用量（两个以上最小包装单位）的三倍量供试品。
2 仪器设备2.1 YXQ-LS-30SII型立式压力蒸汽灭菌器2.2 双人净化工作台2.3 150A型培养箱2.4 HH.B11-500型培养箱2.5 202-2型干燥箱2.6 微波炉2.7 架盘天平2.8 YJA-电动匀浆仪3 供试液的制备根据供试品的理化特征与生物学特征，可采取适宜的方法制备供试液。
供试液制备若需要用水浴加热时，温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
液体供试品：取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
固体供试品：取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10供试液。