液相常见注意事项
液相色谱流动相的选择依据及使用注意事项
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种常用的分离和分析方法，它使用液体作为流动相，在不同组分之间进行分配和分离。
在液相色谱分析中，流动相是至关重要的，它直接影响分离效果、分析速度和结果准确度。
合理选择液相色谱流动相并注意使用时的一些问题是非常重要的。
一、液相色谱流动相的选择依据1. 样品的性质液相色谱中流动相的选择应考虑样品的性质，包括溶解性、稳定性、挥发性等。
对于极性样品，常使用极性溶剂作为流动相；对于不容易溶解的非极性样品，可以选择非极性溶剂作为流动相。
2. 柱子的选择不同的柱子需要选择不同的流动相，以保证分离效果。
对于反相色谱柱，一般使用的是乙腈或甲醇和水的混合物作为流动相；对于正相色谱柱，则需要选用不同的极性溶剂作为流动相。
3. 分离效果流动相的选择应考虑到所需的分离效果。
对于需要高分离效果的分析，流动相的组成和流速需要进行精细调控；对于一些不需要高分离效果的分析，可以适当简化流动相的组成，提高分析效率。
4. 色谱柱的保护对于某些对色谱柱有损害的物质，可以考虑在流动相中添加一些保护剂，以延长柱子的使用寿命。
二、使用注意事项1. 流动相的配制在使用液相色谱分析时，需要注意流动相的配制。
流动相的配制应准确、稳定，避免在实验中因流动相的质量问题导致结果失真。
2. 流速的控制流速的控制对于分析结果的准确性和重现性有着重要影响。
在选择流速时，需要根据分离效果的要求以及柱子的性能来进行合理的设定。
3. 流动相的贮存流动相在储存和使用过程中需要注意避免受到污染和氧化。
定期更换和清洗流动相的储存容器，保持流动相的纯净度和稳定性。
4. 流动相的回收在实验结束后，应注意对流动相进行回收和处理，避免对环境造成污染。
总结回顾：液相色谱分析中流动相的选择和使用是至关重要的。
合理选择流动相，可以提高分析的准确性和重现性；注意使用时的一些问题，可以延长柱子的使用寿命并保护环境。
需要根据样品的性质、柱子的选择以及分离效果来综合考虑流动相的配制和使用。
使用液相色谱时应注意的一些事项
在 检验 和科 研领 域 ， 液相 色谱 的使用 频率 越 来 越高 。为 了和大 家交 流 ， 更好 地使 用液 相色 谱 系统 ， 把 工作 中遇 到 的一 些 问题 介 绍 给 大 家 ， 特 以供参 考 。 １ 安全 因素
或 乙晴水 作为初 始 溶剂 ， １０ 的 甲醇 或 乙 晴 用 ０％ 作 为终止 流动 相 。
符金华 ， ： 等 使用液相色谱时应注意的一些事项
一 ４ 一 ３
使 用 液相 色谱 应 注 料 监察 所 ）
摘 要： 本文概括 了使用液相 色谱时的注意事项。 关键词 ： 液相 色谱 ； 注意事项
Ｓｏ ｅ Ａｎ ｕｎ ｅ ｅ ｔ ｔ ｑ ｄ Ｃｈ ｏ ａ ｏｇ ａ ｙ ｍ ｎｏ ｃ ｍ ｎ ｓｗｉｈ Ｌｉ ｕｉ ｒ ｍ ｔ ｒ ｐｈ
液相色谱系统的所有连接点， 都是潜在的泄
漏 源 。用户应 注 意 流动相 的毒性 和 易燃性 。 ２ 柱子 的使 用 柱 子上标 明了流 向 ， 然反 向流 动一般 不损 虽 坏柱 子 ， 除 冲洗进 口端 的堵 塞 物 外 ， 但 应避 免反 向流动 。新柱 子 含 甲醇水混 合物 ， 应小 心不 要让 任何 会 引起 沉 淀 的 流动 相 流 经 柱 子 。使 用 保 护 柱保护 分 析柱 ， 可延 长柱 子 的使 用 寿命 。避免 使 用 ｐ ０ ８或 ｐ ８ ０的 流动相 。柱 的固定 相 Ｈ＜ ． Ｈ＞ ． 在低 ｐ Ｈ值 的情 况下 具有 高稳 定性 （ ｐ 例 Ｈ＜５ 。 ） 所 有硅 基填 充柱 在 ｐ ＞ Ｈ ６的水 相 流 动相 中都 有 定 的 溶解 性 ， 此 ， ｐ ＞６的条 件 下 ， 用 因 在 Ｈ 使 硅 基质 柱时 ， 度应低 于 ４ ℃ ， 冲液浓 度 应 为 温 Ｏ 缓 ００ ．１至 ０ ０ Ｍ， 样 ， 是 可 保 持 最 大 的柱 寿 ．２ 这 还 命 。在 ｐ Ｈ＞６的情 况 下 ， 避 免使 磷 酸盐 和碳 应 酸盐 缓 冲液 流动 相 ， 这样 ， 可提 高柱 的稳 定性 。 也 ３ 流 动相 的选择 结合 的固定相 是无 极性 的 ， 好用 甲醇 水或 最 乙晴水 混合物 作 流动相 ， 加有机 成份 的量 常可 增 以缩 短色 谱峰 的保 留时 间 。流动 相粘度 高 时 ， 使 柱 温升高 到 ４ ６ ｃ 可 以提 高洗 脱效 率 ， ０— ５Ｃ， 降低 柱压 。梯 度洗 脱 时 这种 填 充柱 常 用 ５ 的 甲醇 ％
高效液相色谱的工作原理及操作注意事项
高效液相色谱的工作原理及操作注意事项高效液相色谱的工作原理及操作注意事项一、高效液相色谱的工作原理高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，主要应用于化学、生物、医药等领域。
其工作原理是利用不同物质在固定相和移动相之间的分配平衡，实现对待测组分的高效分离。
以下是高效液相色谱的工作原理：1.流动相：高效液相色谱中的流动相也称为溶剂或载体，是携带待测组分通过色谱柱的介质。
流动相的选择应根据样品的性质、检测器的类型以及分离效果等因素进行选择。
2.固定相：高效液相色谱中的固定相是色谱柱中的填料，通常是涂布在硅胶或氧化铝等载体上的高分子聚合物。
不同物质根据其在固定相和流动相之间的分配系数进行分离。
3.洗脱过程：在高效液相色谱中，待测组分随流动相通过色谱柱，经过固定相和流动相之间的分配平衡实现分离。
分离后的组分会按照其在固定相和流动相之间的分配系数依次流出色谱柱，进入检测器进行检测。
4.检测器：高效液相色谱中使用的检测器根据待测组分的性质和检测要求进行选择，常见的有紫外-可见光检测器、荧光检测器、电导检测器等。
检测器的作用是将组分的浓度转化为可测量的电信号，以便进行记录和分析。
二、高效液相色谱的操作注意事项在使用高效液相色谱进行实验操作时，需要注意以下事项：1.样品准备：在进行高效液相色谱分析前，需要对样品进行必要的处理和制备。
应尽可能避免样品中的杂质和干扰物质对分离和分析的影响。
同时，样品的浓度应适中，以避免色谱柱过载或检测器过载。
2.流动相选择：流动相的选择对高效液相色谱的分离效果和分析结果至关重要。
应根据样品的性质、实验要求以及分离效果等因素选择合适的流动相。
同时，应注意流动相的纯度和稳定性，以保证实验结果的可靠性。
3.色谱柱选择：高效液相色谱中使用的色谱柱是分离和分析的关键元件。
应根据样品的性质、待测组分的类型以及分离要求等因素选择合适的色谱柱。
同时，应注意色谱柱的粒径、孔径和填料性质等参数，以确保达到最佳的分离效果。
液相流动相的使用注意事项汇总
液相流动相的使用注意事项汇总流动相是影响液相色谱的关键因素。
一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。
高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制，选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别，会影响了色谱图和分析结果。
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。
溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合可调制再现性较好的混合溶剂，但由于操作较麻烦，通常多用体积比混合。
只要没有特别标明，就可按体积比进行混合，但在特殊情况下，如胺类粘度高的溶液混合时，有时用重量—体积比（W/V）的方法。
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
流动相溶解度达不到要求时，尽量选用流动相中含有的比例较大的成分，以减轻进样对流动相的影响造成基线不稳。
b、流动相与样品不产生化学反应，选用流动相配置对色谱峰影响最小。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
流动相组成溶剂均达不到要求时，选取的溶剂应保证在设定波长内无紫外吸收。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
下面21项注意让你更懂液相流动相。
01选择流动相应注意过滤溶剂溶剂在使用前一定要用0.5μm的过滤器过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。
本实验室有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水溶性流动相时（如甲醇/水），先用1～2mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。
高效液相色谱分析方法及注意事项3
碱性化合物:容易发生拖尾的化合物中通常包 含-NH2、-NHR、-NR2，即伯、仲、叔三种电荷 的极性基团，即伯、仲、叔三种富含电荷的极性 基团，碱性强弱为-NH2 ＜ ＜-NHR＜-NR2 ，其 碱性强弱与N原子直接连接的基团有关：
吸电子基团削弱碱性
供电子基团（如烷基）增强碱性
伯安中甲胺的碱性最弱，pKa为10.64
而pH＜2.5条件下，也仍后拖，因为-NH3足 够强，即使硅羟基以分子状态存在仍能与Si-Oδ-H δ+中氧原子产生吸引作用，导致峰形拖尾。
当pH＞12.64，99%甲胺以分子状态存在，不 会引起拖尾。因此分析有些碱性化合物，流动相 的pH需要调致强碱性条件下峰形才会变好。
3）、增加缓冲盐或增大缓冲盐的浓度
离子状态-N+H3、-N+H2R、-N+HR2，也能与Si-O-
形成较强的静电引力，但三乙胺有先占住位的优 势，使样品与硅羟基的作用大大减弱，缓解了拖 尾的产生；同时N+H（NCH2CH3）3与样品分子 中的极性基团与硅羟基的相 互产生竞争，更进一 步削弱了样品分子与硅羟基的接触机会，改善峰 形。
3）增加流动相中缓冲盐的浓度
可减少因静电的作用（可能存在于样品分子 之间，或样品他子与填料表面之间）引起前拖。
例子如下：
4）流动相中加适入适量的四氢呋喃
加入少量的四氢呋喃可以改善峰形，增大分 离度。通常加入量在5%以内即可，需要时可以加 入更大的量。 机理：很少人提及
5）升高柱温
加入缓冲盐，可增强流动相的离子强度，在NH3+和 Si-O-之间存在着许多离子的干扰，减少了样品分子与 硅羟基之间的互相作用，有助于削弱极性基团与硅羟 基之间的相互作用，改善峰形。 适合于碱性较弱（氨基的N原子与强吸电子基相 连），或碱性很强，但在刚性结构中，比较难以接近 被C18长链和封尾试剂覆盖的硅羟基。 如高乌甲素的测定：
液相内标法注意事项
注意事项：1. 称量前，将所需要的瓶子编好号码，依次摆放整齐；2. 称量使用不锈钢小勺，不要用塑料滴管称取粉末样品；3. 清理天平周围的杂物，天平周围要保持清洁。
客户建议我们要有独立的空间摆放天平，避免风的干扰和人员在附件走动带来干扰；4.在称量过程中，如果已经去皮，就不要将瓶子从天平中拿出来；5.在称量过程中，如果样品称多了，也不能将样品从瓶中取出，只得重新准备一份。
如果从瓶中取出过样品或瓶子在天平中的位置发生过改变，本次称量就是无效的；6.称量数据在3秒内不变化，才能确认数据稳定。
如果在3秒钟有变动，就再等3秒；7. 为保持数据准确性，用5位数分析天平（精确到0.00001g）。
称量时，至少保证小数点前三位数字一样；8.内标液的使用：为了避免溶液含量发生变化，内标液需要存放冰箱，客户通常先配制500ml 的内标液，再分装到5个100ml的瓶中，保存到冰箱中。
使用前从冰箱里取出瓶子后室温放置1小时以达到室温，这段时间内不要去碰它。
使用时候，要先预估本次使用需要的内标液的体积（包括润洗所需的体积），然后将内标液从容量瓶转移到一带盖的干净的锥形瓶中，便于量取。
称量后多出的内标液倒入废液缸，不要倒回容量瓶；9. 移液管的使用：移液管润洗好后，将移液管插入液面1-2cm深度，不要插入太深，以免外壁沾带溶液过多；移液时，将管的出口小端靠在一干凈容器内壁上，管身保持直立，略微放松食指，使管内溶液慢慢从下口流出，直至溶液的弯月面底部与标线相切时，立即用食指压紧管口，将尖端的滴液靠壁去掉，移出移液管。
将移液管放入接受溶液的容器中，使出口尖端靠着容器内壁，容器稍倾斜，移液管则保持垂直，放开食指，使溶液沿容器内壁自然流下，待移液管内溶液流凈后，再等待15 秒（每次保持一致），取出移液管，留在管口的少量液体不要吹出，因为移液管的标示容积已经考虑了管末端保留溶液的体积；10. 移液枪的使用：a. 预装枪头: 正确的方法是将移液枪垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合；b. 移液: 移液之前，要保证移液器、枪头和液体处于相同温度。
液相色谱注意事项及处理
速度快-通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。 灵敏度高-紫外检测器可达0.01ng，荧光和电化学检测器可达0.1pg。 柱子可反复使用-用一根色谱柱可分 离不同的化合物。
样品量少，容易回收-样品经过色谱柱后不被破坏，可以收集单一组分或做制备。
• 色谱柱：分离开待测组分和其他干扰组分，有利于分别定性、定量
• 进样器：是在色谱系统中，能定量地将分析试样送入色谱柱的装置。其原理是计量泵定量将 样品吸入定量环，通过一个切换阀转入高压流路，另外一个切换阀连接清洗溶液和清洗口， 根据设置完成对计量泵内的清洗，清洗口是用来清洗针头，进样口连接高压阀，液相进样器 的针头插在进样口处，为防止样品交叉污染，通常针头和进样口保持最小的接触面积（不是 插入），同时两个斜面通过弹簧力压紧密封，防止高压流路在此处流出。 • 检测器：将色谱柱分离的化学物质作为信号源并将其转化为电压信号或电流信号，并将信号 放大输出，以便记录，再通过工作站或处理机或手工处理得出分析数据。
液相色谱法
• 使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定 相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。 分离过程是一个分配平衡过程。 涂布式固定相应具有良好的惰性；流动 相必须预先用固定相饱和，以减少固定相从担体表面流失；温度的变化和不 同批号流动相的区别常引起柱子的变化；另外在流动相中存在的固定相也使 样品的分离和收集复杂化。由于涂布式固定相很难避免固定液流失，现在已 很少采用。现在多采用的是化学键合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱 和苯基柱。 液液色谱法按固定相和流动相的极性不同可分为正相色谱法 (NPC)和反相色谱法(RPC)。
高效液相色谱使用方法
高效液相色谱使用方法高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本文将介绍高效液相色谱的基本原理、操作步骤以及一些常见的注意事项。
一、高效液相色谱的基本原理高效液相色谱是基于溶液通过固定相的柱子进行分离的原理。
通过控制溶液的流动速度，样品中的化合物将根据其化学特性在固定相上产生不同的保留时间，进而实现分离和定量分析。
在高效液相色谱中，离子交换、尺寸排除、亲和力、反相等不同的柱填料被广泛应用。
根据不同的样品性质和需要分离的化合物，选择合适的柱填料是非常重要的。
此外，流动相的选择也是影响分离效果的重要因素。
二、高效液相色谱的操作步骤1. 样品准备：样品应经过适当的前处理，如过滤、稀释等，以确保样品中的杂质不会影响分析结果。
需要注意的是，样品的pH值也会对分析结果产生影响，因此在样品准备过程中可根据需要进行调整。
2. 样品进样：将经过适当处理的样品注入进样器中，控制进样量和进样速度。
可以选择自动进样或手动进样的方式，保证样品的稳定和准确性。
3. 流动相的配制：根据分析需要，选择适当的溶剂组合并按照一定比例进行配制。
流动相的配制既要保证溶剂的纯度，又要考虑溶剂对柱填料的影响。
4. 柱温和流速的选择：根据柱填料的要求，选择合适的柱温和流速。
在进行分析前，需要对柱温和流速进行优化和调试，以获得较好的分离效果。
5. 检测器的选择和参数设置：根据需要分析的化合物特性，选择合适的检测器，并设置相应的参数。
常见的检测器包括紫外-可见光谱检测器、荧光检测器和质谱检测器等。
6. 数据分析与结果解释：根据检测器输出的信号，利用计算机软件对数据进行处理和分析。
根据不同的化合物特性，可以采用不同的数据分析方法和曲线拟合技术来定量分析目标化合物。
三、常见的注意事项1. 制备和使用流动相前，需仔细检查溶剂纯度，避免杂质对结果产生干扰。
2. 柱子的保养和维护非常重要，定期进行柱子的清洗和再生，以保证分离效果和柱寿命。
高效液相操作步骤及注意事项
高效液相操作步骤及注意事项1、着穿：穿好实验服，戴好鞋套或换拖鞋2、卫生检查：检查实验台面，仪器是否干净，擦去灰尘，注意电源处不要太潮湿；3、仪器检查：检查仪器各附件是否完好无损，发现异常向管理员汇报4、Sealwash：准备10%的异丙醇润洗，流速控制在3秒每滴为好5、样品前处理：进液质的样品先用0.22μm，过滤6、流动相制备：流动相先用0.22μm过滤，再超声处理约15min7、仪器操作：①将准备好的流动相放置好于载物台上，10%的异丙醇也准备好（注意：将管路换瓶时，勿让滤头上的甲醇溅到按钮上，防止粘结）②先做好使用记录，打开ups电源，待输出稳定后，即指示灯变绿后，打开电脑，依上而下打开脱气机、泵柱温箱、检测器（注意：如果停电或ups电源插头没插好，输入指示灯是不亮的，且会发出警报；按钮是一次按到底后放开）。
开sealwash，打开联机（注意：甲要先开boot软件，出现七行字后再开联机）③脱气，拧松purge阀，流速调为5ml/min，对所需要用到的管路purge5min，再拧紧purge阀，压力一般小于10bar④冲柱子：接好二通，用纯甲醇或乙腈冲洗，待稳定后记录好系统压力，换柱子冲也用纯甲醇或乙腈冲洗，记录好系统压力，压力一般要小于20bar，流速为1ml/min。
（注意：在二通和换柱子后注意是否漏液，用干净滤纸垫于接口处，防漏。
万一漏了可向管理员汇报。
）⑤清洗进样针和进样器（六通阀），可用甲醇洗针，至少3遍⑥进样：进样前15min开紫外灯，走流动相，待基线稳定后进样（注意：进针时手动阀操作要快，不要把针头弄弯）⑦进样结束后，关闭紫外灯，用甲醇或乙腈冲柱子，若流动相中有盐，应先用水冲洗，代替管路中的盐，再用95%的水梯度冲洗，最后确保每个管路中充满甲醇，作好记录，换二通，也用甲醇或乙腈冲洗，也作好记录，关闭各模块，关闭联机、电脑、至下到上关闭仪器，再关电源，作好使用记录。
⑧原来是保护柱的接保护柱，原来是二通的接二通，将进样针用甲醇洗好放回原处，进样器也要清洗，将废液回收倒掉，并将借用的拖鞋归还。
高效液相使用注意事项
高效液相使用注意事项一、在使用高效液相时，必须提前写出书面申请，交由管理员统一安排。
二、实验中所用的流动相必须经微孔滤膜滤过，应特别注意对含缓冲盐溶液的流动相的过滤，过滤时应根据流动相的性质选择合适滤膜，过滤后应检查流动相里是否有不溶物存在。
三、配制的流动相如果含酸或者含有缓冲盐溶液，必须使用PH计测定流动相的PH值，以免PH超过色谱柱的可承受范围，损坏色谱柱，测定时不可使用PH试纸进行粗略测定，应使用PH计。
四、一般色谱柱的PH适应范围为2-8（不同厂家不同品牌的色谱柱的PH耐受范围不同，具体情况应参看色谱柱说明书），在实际应用中应控制流动相的PH范围在2.5-7，尽量避免使用碱性的流动相（碱性条件下会使硅胶的骨架溶解）。
五、配制流动相时，尽量不要加表面活性剂，因为它会使色谱柱填料的性质以及其选择性发生永久的不可逆的改变。
六、在配制碱性的缓冲盐溶液时，切忌使用磷酸盐，对色谱柱的损害特别大。
七、配制好的流动相在使用前应经过充分的脱气，（在现有的实验条件下一般使用超声脱气法，不推荐使用减压法进行流动相脱气，因为在减压条件下大量的易挥发的有机相会被真空抽气机抽走，使流动相的比例发生变化）。
八、在选择流动相的时候，从成本上考虑，能使用甲醇分离的就尽量不使用乙腈。
九、实验所用的样品应尽量处理干净，并用合适的微孔滤膜过滤样品，过滤后应检查样品溶液内是否有不溶物，若有，则不能进样，推荐使用流动相配制对照品和溶解样品。
十、实验所用的样品瓶以及微孔滤膜的发放将实行登记。
十一、在分析样品前，应使用流动相充分的平衡系统，然后再进样。
十二、样品的前处理应注意:1、最好使用流动相溶解样品；2、使用予处理柱除去样品中强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质；3、用微孔滤膜过滤除去微粒杂质；4、样品溶液是澄明的，除第一条外，其他条件必须都满足方可进样。
十三、在进样过程中若仪器出现异常情况，请勿私自处理，要及时与管理员联系解决。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
启动软件
：我的电脑——计算机管理——服务——LSSService——重启动
软件重装：
控制面板——先卸载SkyPDFPro虚拟打印机——再卸载Labsolution
主程序
注：重新安装软件，日志将被压缩。日志每月都压。
开关机顺序
：
开机：液相——检测器——CBM控制器——开软件。
关机正好相反。
版本问题：
用高版本可以查看低版本的文件。但是只要用高版本看过，低版本不能再查看。
Labsolution可以打开安捷伦的文件，前提是两个软件都已安装：右键——AIA格
式频道文件——到安捷伦上转换成可以打开的格式，但会有数据丢失。
查看3D图像：
需如下操作：桌面——属性——设置——高级——疑难解答——硬件加速无——
应用——确定——软件界面上的视图——3D图像。
分离异构体的色谱：
毛细管电泳——手性异构体
正相色谱——立体异构体
另外：
尺寸排阻色谱（SEC）分为凝胶渗透色谱（GPC）、凝胶过滤色谱（GFC）。其中
GPC都是等度洗脱，溶剂峰出在最后，看到溶剂峰证明所有的峰已经出完。
梯度洗脱要点：
①溶剂纯度要高，否则重现性差。
②梯度混合的溶剂互溶性要好。
③应使用对流动相变化不敏感的选择性检测器（紫外、荧光），不能使用对流动
相变化明显的通用型检测器（示差折光检测器）。
④最初的实验数据不采用。
试剂级别的影响：
分析纯级和HPLC级的溶剂例如乙腈、正己烷，吸光度差异很大，如果吸收值异
常，可考虑是否用错等级。两级别的甲醇吸光度差异不大。
溶解样品的溶剂选择
标准品和样品溶剂相同，建议使用流动相溶解，若出现主峰前面有一个大包样的
峰，建议减小进样量，加大浓度（例如进样量20μl，可进样2μl加大十倍浓度）
选择缓冲液的步骤：
①确定最佳分离状态时的流动相pH。
②选择与流动相的pH相近的pKa的缓冲液。
③确定检测波长下缓冲液是否有大的吸收。
（波长210nm附近不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）
分离模式的选择：
第一选择：反相色谱
第二选择：反相离子对色谱/正相色谱
特殊：高分子化合物、无机离子、光学异构体
色谱柱的使用：
①新色谱柱使用前用强溶剂低流速（0.2~0.3ml/min）冲洗30min，长时间未用的
柱子同样处理；先测柱效，保留色谱图和实验条件；定期检测柱效。
②流动相：高纯度、过滤，pH范围，有机溶剂与色谱柱互溶匹配，能溶解样品
③分离条件：流速、柱温、梯度的变化幅度。
④定期使用强溶剂冲洗柱子
⑤使用缓冲盐后，先用含10%甲醇水溶液冲洗，再用有机溶剂冲洗。
⑥正相反相过渡时用异丙醇过渡（最好是小流速过夜0.1ml/min）
柱温箱：
带C的可以降低室温-10℃，不带C的可以降到室温+10℃。
故障排查：
①判断样品池有无污染：
Λ=254nm下，右侧详细——检测器（两能量差越小越好）。
②判断氘灯能量是否充足：
Λ=220nm下，①看参比池能量，②看氘灯运行时间。
若要检测，可用纯水作为样品
维护：
①缓冲液阻塞，应用水（一般加点有机相）冲洗30~60min（1ml/min），再用甲
醇（60%以上）冲洗30min（考虑抑菌、柱子寿命）。注意：不能用有机溶剂冲
洗缓冲盐溶液。
②灯：氘灯寿命2000小时，不要频繁开关（3h）。如果使用达到2000小时，在
保证灵敏度的情况下可以继续使用，但是钨灯不可以。
氘灯能量低于800更换。钨灯，20A540nm下低于500更换。
③管线材料：
<1>不锈钢（可用于所有连接）
<2>PEEK（可用于所有连接）
<3>Teflon（用于柱后阻尼管、反应管和排液管。作为废液管时请勿随意缩短或
增长其长度。缩短会使得检测器内产生气泡。增长会损坏检测器）
④接头：
管路连接不好会产生死体积，使得分离度下降，重现性变差。
⑤吸滤头
2~3年的寿命。
日常维护：定期使用异丙醇（或5%的稀硝酸）清洗
故障：吸滤头堵塞，管路中有气泡生成
措施：用异丙醇（或5%的稀硝酸）浸泡并超声15min，再用蒸馏水清洗至中性
⑥单向阀：
勿拆，勿超声，难复原。