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最全的液相色谱知识（包括原理,维护,基础操作,处理方法）
最全的液相色谱知识（包括原理,维护,基础操作,处理方法）最全的液相色谱知识（包括原理，维护，基础操作，处理方法）L、基线漂移原因和解决方法1、柱温波动。
（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。
通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。
）解决方法：控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。
（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。
）解决方法：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。
流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体解决方法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。
如有需要，可以用1N的硝酸。
（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。
（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）解决方法：取出阻塞物或换管子。
参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化解决方法：更改配比或流速。
为避免问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时解决方法：用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成解决方法：检查流动相的组成。
使用高品质的化学试剂及HPLC 级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。
解决方法：使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂，但检测器未调整。
解决方法：重新设定基线。
当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。
解决方法：将波长调整至最大吸收波长处M、基线噪音（规则的）原因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气解决方法：流动相脱气。
冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2、漏液解决方法：检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。
如有必要，更换泵密封。
液相色谱的原理以及操作要点
液相色谱的原理以及操作要点液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种常用的分离和分析技术，它基于不同物质在流动相中的分配行为来实现分离。
本文将介绍液相色谱的原理，同时探讨液相色谱的操作要点。
一、液相色谱的原理液相色谱的原理主要基于两个关键概念：分配系数和吸附性质。
1. 分配系数分配系数（Distribution coefficient）是指样品在固定相和流动相之间的分配比例。
它是液相色谱中物质分离的基础。
分配系数的大小决定了物质在固定相上停留的时间，从而实现了不同成分的分离。
2. 吸附性质液相色谱还涉及到物质在固定相上的吸附行为。
当样品溶液通过固定相时，固定相表面上的吸附剂与样品物质发生相互作用，使得物质被吸附，从而发生分离。
二、液相色谱的操作要点为了有效地进行液相色谱实验，以下是一些操作要点需要注意：1. 样品制备样品制备是液相色谱分析的首要步骤。
样品应准备恰当，并考虑到溶解度、稳定性以及待分析物之间的相互干扰。
此外，样品需要经过适当的前处理（如过滤、稀释等）以达到分析要求。
2. 流动相选择流动相的选择对液相色谱分离效果起到至关重要的作用。
合适的流动相应能够与待分析物有良好的相容性，并且具有适当的溶解性和流动性。
常用的流动相包括水、有机溶剂和缓冲溶液。
3. 固定相选择固定相是液相色谱中的另一个关键部分。
不同的固定相具有不同的化学性质，因此会影响到分离的选择性和效果。
根据待分析物的特性，选择合适的固定相对于分离效果至关重要。
4. 色谱柱选择色谱柱是液相色谱系统中用于分离的核心组成部分。
不同的色谱柱具有不同的长度、直径和固定相材料，这些参数会影响到分离性能和分析时间。
根据待分析物的特性和分离要求，选择合适的色谱柱尤为重要。
5. 色谱条件优化为了获得最佳的分离效果，需要进行色谱条件的优化。
例如，可以调整流速、梯度程序和柱温等参数，以达到更好的分离和峰形。
6. 数据处理和解释液相色谱实验完成后，需要对得到的色谱图进行数据处理和解释。
液相色谱仪注意事项
液相色谱仪注意事项
液相色谱仪是一种常见的分析仪器，在使用过程中需要注意以下几点：
1. 样品的准备：样品的制备要求高质量，样品应该尽可能的纯净。
在制备样品的过程中，需要避免有任何的污染物质进入其中，否则会影响分析结果。
2. 仪器的操作：在操作液相色谱仪时需要认真仔细，正确操作仪器的每一个部分。
特别是在设置检测条件时，需要根据实际样品情况进行调整，以确保获得准确的分析结果。
3. 注射器的使用：注射器是液相色谱仪的重要组成部分之一，使用不当会影响数据质量。
在使用注射器时，需要注意注射量和注射速度的控制，以及避免注射器污染。
4. 流动相的选择：流动相的选择对于分析结果有很大的影响。
在选择流动相时，需要考虑样品的性质，并进行适当的优化调整，以获得更好的分离效果。
5. 仪器的维护：液相色谱仪是一种高精度的仪器，需要经常进行维护和保养，以确保仪器的稳定性和准确性。
如定期更换柱子等。
总之，液相色谱仪是一种高精度的分析仪器，在使用前需要认真准备，操作时要仔细认真，严格遵守操作规程和安全操作规范，以获得更好的分析结果。
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高效液相色谱仪操作三要点 液相色谱如何操作
高效液相色谱仪操作三要点液相色谱如何操作高效液相色谱仪操作三要点高效液相色谱仪（HPLC）现已成为有机化学分析的紧要手段之一、同样，在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC也已成为不可或缺的分析仪器。
和其它分析仪器一样，你若想让HPLC 很好地为你工作、得到牢靠的数据，首先你要保养好它，使它处于一个良好的待机状态，这样你操作它进行分析时就可以比较顺当地获得理想的结果。
而且良好规范的操作习惯可以延长仪器使用寿命。
大家在学校或接受仪器公司培训的时候，老师或工程师会提出很多的操作注意事项。
但要是总结归纳一下，较为紧要的有三点：脱气、过滤和冲洗。
本文围绕这三点进行讨论，给新从事HPLC分析的工一点操作建议，希望能对正确的操作仪器有一点帮忙。
更欢迎有阅历的专家介绍使用阅历，提出好建议。
一、脱气流动相脱气对于避开HPLC系统出问题，顺当得到一个理想的数据是一个很有效的措施。
HPLC系统内是不希望有气泡存在的。
HPLC泵在输送液体时要产生很大的气力，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，你将察看到瞬间的流速降低和系统压力下降。
假如这个气泡充分大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且假如压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。
有些泵设计可以很好地排出气泡，而也有一些泵设计当气泡存在时将停止运转。
当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。
但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会显现不规律的毛刺。
为解决这个问题，有些仪器公司设计一个反压掌控器，这样可以在检测器出口供应充分的压力保持气泡始终溶解在流动相中直到它们流出检测器。
当然，这个压力不能超过流通池所能承受的压力极限，否则可能损坏检测器。
紫外/可见光（UV/VIS）检测器的液相色谱图中的噪音毛刺通常是气泡进入并通过流通池的征兆。
有些检测器对空气的存在也特别敏感，但表现出的征兆与UV/VIS不同，例如有报导说，当使用荧光（FL）检测器时，流动相中溶解氧的存在可能会使一些化合物失去荧光性。
高效液相色谱法知识汇总大全集(最新最值得收藏的资料整理)
高效液相色谱法知识汇总大全集（最新最值得收藏的资料整理）HPLC应用一、样品测定1．流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度及填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相（按经验，主峰一般应调至保留时间为6~15分钟为宜）。
所以建议第一次检验时请少配流动相，以免浪费。
弱电解质的流动相其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱。
2．样品配制：①溶剂；②容器：塑料容器常含有高沸点的增塑剂，可能释放到样品液中造成污染，而且还会吸留某些药物，引起分析误差。
某些药物特别是碱性药物会被玻璃容器表面吸附，影响样品中药物的定量回收，因此必要时应将玻璃容器进行硅烷化处理。
3．记录时间：第一次测定时，应先将空白溶剂、对照品溶液及供试品溶液各进一针，并尽量收集较长时间的图谱（如30分钟以上），以便确定样品中被分析组分峰的位置、分离度、理论板数及是否还有杂质峰在较长时间内才洗脱出来，确定是否会影响主峰的测定。
4．进样量：药品标准中常标明注入10ml，而目前多数HPLC系统采用定量环（10ml、20ml 和50ml），因此应注意进样量是否一致。
（可改变样液浓度）5．计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。
6．仪器的使用：①流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤维。
有请重新滤过。
②柱在线时，增加流速应以0.1ml/min的增量逐步进行，一般不超过1ml/min，反之亦然。
否则会使柱床下塌，叉峰。
柱不线时，要加快流速也需以每次0.5ml/min的速率递增上去（或下来），勿急升（降），以免泵损坏。
③安装柱时，请注意流向，接口处不要留有空隙。
④样品液请注意滤过（注射液可不需滤过）后进样，注意样品溶剂的挥发性。
⑤测定完毕请用水冲柱1小时，甲醇30分钟。
如果第二天仍使用，可用水以低流速（0.1~0.3ml/min）冲洗过夜（注意水要够量），不须冲洗甲醇。
液相色谱注意事项及处理
液相色谱注意事项及处理液相色谱（HPLC）是现代化学分析中广泛应用的一种方法，它基于样品在流动相中的分离性质，通过分离和测定样品中的化合物。
以下是一些液相色谱操作中需要注意的事项以及常见的问题处理方法。
1.选择适当的柱子和固定相：-根据样品的性质、需要分离的化合物以及分离条件，选择适当的柱子和固定相。
柱子和固定相的选择对分离效果和分析结果至关重要。
2.准备好合适的流动相：-流动相的成分和性质直接影响分离效果。
需要注意流动相的溶剂纯度、特性以及配置方法。
合适的流动相可提高分离效果。
3.样品溶解及进样：-样品的溶解度及进样方法是分离的关键。
应根据样品特性选择适当的溶剂进行溶解，并确保进样量适中。
过高的样品浓度可能导致柱子堵塞或在检测器中引起峰形变。
4.良好的柱温控制：-柱温的控制对于提高分离效果和重现性至关重要。
柱子的工作温度应控制在恒定的范围内，以减小流动相的变化对结果的影响。
5.流速控制：-流速对分离时间、峰形和峰分离度有很大影响。
根据分析要求和实验条件选择合适的流速。
过高的流速可能导致峰形变差，而过低的流速可能导致分离不完全。
6.运行条件的优化：-运行条件的优化对提高方法的灵敏度和分离效果至关重要。
可以通过调整流动相的成分、柱温、流速等参数来优化方法。
试验不同条件，并选择最适合的条件。
7.检测器使用和校准：-液相色谱中常用的检测器包括紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
使用检测器时，注意校准和灵敏度调整。
8.数据分析和结果解释：-得到的色谱图需要进行数据分析和结果解释。
尽可能使用专业的数据分析软件进行峰面积的计算和样品的定量分析。
常见问题处理方法：1.噪声问题：-噪声问题可能由仪器本身的电子噪声或环境噪声引起。
可以尝试提高信号峰值，调整积分时间或使用峰值选定的方法来处理噪声。
2.色谱峰形变差：-色谱峰形变差可能是由于流动相成分变化、柱子老化或柱温不稳定引起的。
可以尝试更换柱子、重新配置流动相、调整柱温或优化运行条件来解决此问题。
液相色谱仪操作注意事项
液相色谱仪操作注意事项流动相：1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；3、使用双泵时，A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
样品：1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；3.手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；色谱柱：1、使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；2、使用符合要求的流动相；3、使用保护柱；4、如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。
5、色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；6、不要高压冲洗柱子；7、不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；使用过程中注意轻拿轻放。
操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。
2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。
液相色谱技术的操作细节与注意事项
液相色谱技术的操作细节与注意事项液相色谱技术是一种广泛应用于化学、生物、医药和环境等领域的分析技术。
本文将从液相色谱的基本原理出发，讨论其操作细节与注意事项。
一、液相色谱的基本原理液相色谱是一种基于物质在流动溶液中的相互作用性质，通过与固定相的相互作用不同而进行分离的方法。
其基本原理是将待分离的混合物溶解在流动相中，经过搅拌后，按照溶质与固定相之间的作用力不同，使其在柱子上的停留时间不同，从而实现分离。
二、操作细节1. 选择适当的流动相和固定相液相色谱的关键在于选择合适的流动相和固定相，以实现对样品的分离。
在选择流动相时，需要考虑到样品的性质和分离目标，如溶解度、极性等。
而选择固定相时，则要考虑到样品与固定相之间的作用力，如吸附、分配等。
2. 优化柱子的操作条件柱子是液相色谱中的核心部件，其操作条件的选择对分离效果有着重要影响。
首先是选择合适的柱子类型和柱子尺寸，如反相柱、离子交换柱等，以及柱子的长度和内径等。
此外，还需要控制柱子的温度、流速和压力等参数，以获得最佳的分离效果。
3. 样品的制备和进样在液相色谱中，样品的制备和进样过程同样重要。
首先是样品的制备，包括固相萃取、前处理等步骤，以获得符合分析要求的样品。
进样时应注意避免气泡和杂质的进入，以免对分析结果产生干扰。
4. 优化检测条件液相色谱中的检测方式多样，包括紫外-可见光谱检测、电化学检测、质谱检测等。
要根据分析需要选择合适的检测方式，并优化检测条件，如选择合适的检测波长、电位等，以提高检测灵敏度和选择性。
三、注意事项1. 避免固定相的选择错误在选择固定相时，要充分考虑样品的性质和分离目标，避免选择错误的固定相类型。
同时，固定相的储存也需要注意，应存放在干燥、避光和低温的条件下，避免水分和光线的影响。
2. 控制流动相的质量流动相的质量对液相色谱的分离效果有着重要影响。
在使用过程中，要定期更换和维护流动相，以保证其纯度和稳定性。
另外，要注意流动相的pH值和缓冲体系的选择，以确保分离过程的稳定性。
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液相色谱使用者必须谨记的秘诀
液相色谱对于多数人来说都是很好上手的仪器了，但是就算是用过几年、经验丰富的分析员都会习惯于一些错误的操作（师傅教错了？），经常导致一些仪器故障。
方便快捷的分析过程固然重要，但是为了多做样品而忽略了一些必不可少的步骤，往往得不偿失，哪些操作不能做？哪些懒儿不能偷？哪些小概率的故障师傅没教怎么办？液相使用过程中有哪四大关键因素要注意？本文一一告诉
你哦！
一、流动相不过滤
因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。
流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。
泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。
输液泵的滤器应经常清洗或更换。
二、使用后没有及时清洗泵
流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。
如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。
因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。
三、流动相走空
泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。
四、没有流动相流出，又无压力指示怎么办？
可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量（如5ml/min）下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。
另一个可能原因是密封环磨损，需更换。
五、压力和流量不稳了？
原因可能是气泡，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。
有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸（如4mol/L硝酸）内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。
六、压力为啥过高或过低？
可能是管路被堵塞，需要清除和清洗。
压力降低的原因则可能是管路有泄漏。
检查堵塞或泄漏时应逐段进行。
在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：
PS：（在液相色谱中对组分复杂的样品采用梯度洗脱的方法。
在同一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。
从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
梯度洗脱的优点：1.缩短分析周期；2.提高分离能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加灵敏度。
但有时引起基线漂移。
）
七、梯度洗脱的流动相选择不当
要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。
有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。
当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。
八、忽略的空白梯度洗脱
头后会被强溶剂洗脱下来。
用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。
九、忽略了溶剂混合所带来的粘度变化
混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。
例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。
因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。
十、关于六通阀的正确使用和维护
①样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。
②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。
③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。
通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。
十一、关于色谱柱的使用和维护
色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
调节流速太快。
避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱
从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓（如前所述）。
反冲色谱柱。
预柱和保护柱。
选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。
有时可以在
进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。
保护柱一般是填有相似固定相的短柱。
保护柱可以而且应该经常更换。
十二、来自前辈的经验】小概率故障如何排除？
【1】泵压跳动，跳动范围10bar左右。
解决方法：
1、原先小白头有点脏，更换后尚未解决；
2、将主动阀上的阀芯取出后，发现有类似气泡存在，浸入甲醇-水溶液超声5min，
以试着去除气泡，重新将其安装后再观察，仍未解决；
3、更换新的阀芯，将其安装后，不再有跳动，观察一段时间后比较平稳，成功
解决。
【2】发生故障：
①plug homing over pressure
② 灌注及设流速时均无压力也不见液体流出
③检测器光闸不能复位
④进完大浓度样品后，进空白相应位置也出峰。
可能原因：
①在线过滤器堵了
②泵头下单向阀堵了
③有可能是检测池脏了，也有可能是光路有点堵，再不行可能是灯寿命到了
④小抹布脏了，需要换
解决方法：
①在线过滤器卸下来，置烧杯，加纯化水煮沸5-10分钟后甲醇超一下一般就可以了，如果还堵的话就拿稀硝酸泡，还不行的话就换新的了，这本身是个消耗。
②把泵头下单向阀卸下来，两个都有可能堵，刚卸下来时竖着在耳边摇一摇是听不到声音的。
简单的拿洗耳球把单向阀吹吹就行了（注意方向），吹了没反应可以拿溶剂超声，但不可水煮，一般超至在耳边摇能听见声音就不影响实验
③先用溶剂把检测池冲冲，用啥试具体样品而定；若冲了还不行，把检测池卸下，看灯能量，若能量还可以（有个几千），可能得清洗光路了。
第一次清洗的话建议还是叫工程师来，因为待清理的部件在检测器的最下方，有一个黑色片片，中间有一条缝，而且那一块的螺丝都是八角的，卸起来很麻烦。
④把5个样品盘都拿出来，可以看见里面有一个黑色突起（看不清用手电筒），平时进样针就是从那个地方吸样的。
手伸进去就可以卸下来，里面有一个小白圈圈（用多了自然就黑了），换一个新的就行了，买仪器时一般配有10个。
十三、液相色谱在使用过程中的四大关键因素
1.液相色谱仪本身：
对于仪器本身一般不会有问题，特别是刚买回来的新仪器。
对于仪器本身最重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），确认顺利通过后，再请国家或省级仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。
2.色谱条件：
色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。
流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18.2兆欧级别，试剂试液要求用色谱级别的，原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。
色谱柱会因不同的品种而有不同的要求，但每根色谱柱都有它的清洗要求，这个在色谱柱说明书上都可以找到，一定要根据上面的要求进行，否则会造成色谱柱效下降和色谱柱的使用寿命缩短，检测波长也会因品种的不同有不同的要求，这里需要指出的是要注意观察检测器氘灯能量的变化，比如基线波动大，活性成分的响应值突然变小等，都有可能是氘灯的能量不足所引起的，氘灯一般建议使用800小时，但实际上使用时间不止，可根据实际情况更换。
流速也因品种的不同而不同，一般为1.0ml/min，流速是不可随意改动的，特别是作为QC人员，但是作为研发人员，有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证，会对流速进行改变以评价方法的适用性。
对于进样量因不同的品种也有不同规定，进样量这块现在都使用自动进样，所以进样精密度都很好，不需强调什么。
3.操作人员：
首先，作为液相操作人员，一定要认真学习液相的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护保养，掌握最基础故障的排除和维修。
一般液相的操作规程也是有操作人员起草的，所以只要严格按照操作要求进行操作，一般不会出现问题，当然这里需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要，比如流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗、溶剂过滤头的清洗等，倘若不坚持，很容易导致色谱柱堵塞、系统压力过大、
色谱峰异常等不必要的故障，浪费时间。
其次，操作人员在配制液相分析用样品溶液时，最好由同一个人单独完成，以免不必要的偶然误差。
4.液相安装环境：
液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对人体的危害。