糖化血红蛋白(HbA1c)测定的原理方法与仪器解析及临床意义
糖化血红蛋白的检测和临床应用
糖化血红蛋白的检测和临床应用糖化血红蛋白（HbA1c）是体内红细胞内部的一种特殊化合物，它是血红蛋白与葡萄糖结合生成的产物。
血糖水平高时，血液中的葡萄糖会与血红蛋白结合，形成糖化血红蛋白，因此糖化血红蛋白水平可以反映出过去2-3个月的平均血糖水平。
目前，糖化血红蛋白检测已成为世界范围内诊断和监测糖尿病的重要手段之一，也被广泛应用于临床医学中，有助于改善糖尿病患者的管理和预后。
一、糖化血红蛋白的检测方法糖化血红蛋白的检测方法主要包括离心法、免疫分析法和离子交换色谱法。
免疫分析法是目前应用最为广泛的方法之一。
免疫分析法通过将样本中的糖化血红蛋白与特定的抗体结合，再结合辅助酶和底物发生反应，产生可定量测定的物质，从而确定糖化血红蛋白的浓度。
该方法具有操作简单、重复性好、灵敏度高、检测速度快等优点。
二、糖化血红蛋白与糖尿病的关系糖尿病是一种代谢性疾病，其特点是血糖水平过高。
过高的血糖水平会加速血液中的葡萄糖与血红蛋白结合成糖化血红蛋白，因此糖化血红蛋白水平可以客观地反映出糖尿病患者的血糖控制情况。
根据国际糖化血红蛋白标准化组织（IFCC）的建议，糖化血红蛋白水平在6.5%以上可以诊断糖尿病，而在5.7%至6.4%之间则可以判断患者处于糖尿病前期状态。
通过监测糖化血红蛋白可以及时发现糖尿病的发病和进展情况，有助于及早干预和治疗。
三、临床应用1. 诊断糖尿病糖化血红蛋白作为糖尿病的重要诊断指标之一，在糖尿病的诊断和筛查中发挥着重要作用。
与单次测定的血糖水平不同，糖化血红蛋白反映的是过去2-3个月的平均血糖水平，可以更准确地评估患者的血糖控制情况，避免由于进食、运动等因素导致的血糖测定误差。
通过检测糖化血红蛋白水平，可以及时发现患者的血糖控制情况，有助于早期发现和干预糖尿病。
2. 监测糖尿病患者的血糖控制情况糖尿病患者需要定期监测血糖水平，以评估治疗效果和指导药物使用。
而糖化血红蛋白可以客观地反映出患者过去2-3个月的血糖控制情况，通过定期检测糖化血红蛋白水平，可以及时了解患者的血糖波动情况，缩小测定时间和频率，降低了患者的不适感，从而提高了患者的依从性。
糖化血红蛋白临床意义
糖化血红蛋白临床意义《糖化血红蛋白临床意义》：一、糖化血红蛋白（HbA1c）：葡萄糖通过非酶反应与血红蛋白发生反应，β是一种由氨基酸链末端缬氨酸残基结合产生的特异性糖基化血红蛋白。
HbA1c监测的临床意义：1。
有助于糖尿病的诊断。
-hba1c水平较之ogtt更适于高血糖的诊断，其主要原因就在于hba1c可反映近几个月来的血糖整体水平而不是某一时刻的浓度，因此较少受到干扰。
2、用于指导糖尿病的临床治疗-在糖尿病治疗中，HbA1c是评价血糖控制质量的重要标准。
同时测量血糖和糖化血红蛋白，并通过换算公式计算平均血糖的毫摩尔。
与同时检测到的血糖值相比，如果计算值较低，则表明近期血糖控制非常好，无需调整治疗方案以治疗症状。
如果高，治疗计划可能需要调整。
3.有助于判断糖尿病患者的预后。
-如对妊娠糖尿病仅测定血糖是不够的，一定要监测糖化血红蛋白，使其保持在8％以下，如此可避免巨大胎儿、死胎和畸形胎儿的发生。
4、降低糖尿病患者并发症的危险性-预测微血管并发症，评估糖尿病慢性并发症的发生和发展。
降低HbA1c与降低并发症风险密切相关。
二、hba1a（果糖糖化血红蛋白，糖化血红蛋白a1β链)?链nh2端与其它糖成分结合的产物：包括hba1al(果糖-1，6-二磷酸的糖化)和hba1a2(葡萄糖-6-磷酸的糖化)。
为可逆性结合的糖化血红蛋白。
三、 Hba1b：（乳糖糖基化血红蛋白，反应部分未知的HbA1）Hba1b由丙酮酸和β组成，由链的氨基端结合缬氨酸形成，是HbA1c进一步代谢的产物。
它是可逆结合的糖化血红蛋白。
有临床研究认为在肾功能不全及酒精中毒等情况下，许多非一糖基化的加合物会使hba1a和hba1b组份假性升高。
四、血红蛋白：胎儿血红蛋白的主要成分。
70-80%的新生儿血液；在出生后6个月至2年内，其浓度可降至成人正常浓度的1%以下。
HbF的临床意义在于HbF的升高是β-地中海贫血的重要诊断依据。
其增长幅度与疾病的早晚发作和疾病的严重程度有一定的相关性贫hbf增高最显著。
糖化血红蛋白HbA1c
HbA1c是反映近2-3个月血糖控制情况的指标，对于妊娠期 糖尿病患者，HbA1c水平越高，血糖控制越差。
指导治疗方案调整
根据HbA1c水平，医生可以调整患者的饮食、运动和药物治 疗方案，以更好地控制血糖。
妊娠糖尿病对母婴健康的影响
对母体的影响
妊娠期糖尿病可能导致孕妇发生感染、流产、早产、羊水过多、胎膜早破等并发症。此外，孕妇还可 能并发妊娠期高血压疾病、酮症酸中毒等。
预测并发症风险
高糖化血红蛋白HbA1c水平与慢性 肾脏病并发症的发生和发展密切相 关，因此可以预测患者的并发症风 险。
慢性肾脏病对糖化血红蛋白HbA1c的影响
肾功能下降
随着慢性肾脏病的进展，肾功能 逐渐下降，胰岛素代谢和清除受
影响，可能导致血糖升高。
胰岛素抵抗
慢性肾脏病患者常存在胰岛素抵 抗，导致胰岛素需求增加，进而 影响糖化血红蛋白HbA1c水平。
评估血糖控制
糖化血红蛋白HbA1c可以反映患者过 去2-3个月的平均血糖水平，有助于 评估患者的血糖控制情况。
指导治疗调整
预测并发症风险
长期高血糖可能导致一系列并发症， 如心血管疾病、视网膜病变、肾脏病 变等。糖化血红蛋白HbA1c水平越高 ，并发症的风险也越大。
医生可以根据糖化血红蛋白HbA1c的 结果调整患者的治疗方案，如增加胰 岛素剂量、更换降糖药物等。
饮食限制
慢性肾脏病患者需要限制蛋白质 摄入量，这可能影响患者的饮食
结构，进而影响糖化血红蛋白 HbA1c水平。
06
糖化血红蛋白HbA1c的预防与 控制策略
生活方式干预与健康教育
01
02
03
饮食调整
控制碳水化合物摄入，增 加蛋白质、脂肪和膳食纤 维的摄入，以改善血糖控 制。
糖化血红蛋白高效液相色谱法
糖化血红蛋白高效液相色谱法
糖化血红蛋白高效液相色谱法（HPLC）是一种用于测量血液
中糖化血红蛋白（HbA1c）含量的分析方法。
糖化血红蛋白是指红细胞中被糖分子非酶性地糖化的血红蛋白分子。
HPLC是一种高效、精确和可靠的分析方法，已经成为测量糖
化血红蛋白的金标准方法。
该方法基于血红蛋白分子与糖分子的化学反应，通过将血液样本经过预处理后注入高效液相色谱仪进行分离和定量分析。
糖化血红蛋白HPLC法的工作原理是利用血红蛋白分子与糖
分子的化学反应特性，将糖化血红蛋白与非糖化血红蛋白分离。
在HPLC系统中，通过特定的柱和溶剂系统，糖化血红蛋白
和非糖化血红蛋白可以被分离成不同的峰。
然后，通过检测器测量这些峰的强度，并通过与标准曲线比对，可以确定糖化血红蛋白的含量。
糖化血红蛋白高效液相色谱法具有灵敏度高、重复性好、准确性高等优点，广泛应用于糖尿病的诊断与治疗过程中。
糖化血红蛋白的测量可以帮助评估糖尿病患者的长期血糖控制情况，并用于疾病的监测和预后评估。
糖化血红蛋白测定标准化
糖化血红蛋白测定标准化糖尿病(Diabetes Mellitus)是一种多病因的代谢疾病，特点是慢性高血糖，伴随因胰岛素分泌不足或/和作用无效引起的糖、脂肪和蛋白质代谢紊乱，可导致不同脏器的(长期) 损伤、功能障碍和衰竭。
2003年全球糖尿病患者数量接近2亿，预测2005年将再增加1倍，人群患病率将从0.67%上升到2.3%。
中国现有糖尿病患者4000万，占全球总数的1/5。
我国每年用于治疗糖尿病的直接医疗成本超过180亿，占医疗总费用的4%。
监测血糖水平，对糖尿病的诊治是非常重要的，监测结果可用于评价治疗效果、调节饮食、活动和治疗，以达到最好的血糖控制效果。
血、尿葡萄糖和尿酮体测定对糖尿病的日内管理提供了有用的信息，但无法评价一段时期内的平均血糖控制水平。
糖化蛋白测定，主要是糖化血红蛋白和血清蛋白测定，进一步完善了糖尿病的实验室检测手段，其检测结果可以定量过去数月和数星期的血糖平均水平。
糖化血红蛋白(Glycated hemoglobin, GHB)实验通常是检测由血红蛋白和葡萄糖经缓慢过程且非酶促反应所形成的稳定部分，其合成速率与红细胞所处环境中糖的浓度成正比，积累并持续于红细胞120天生命期中。
由于红细胞允许葡萄糖自由渗透，血液样本中糖化血红蛋白水平反应过去120天内的平均血糖水平。
GHB检测用于常规实验室始于二十世纪七十年代末期，且稳定发展至今，成为评价血糖控制水平的重要指标。
临床实验室中应用的GHB 检测方法主要分为两大类，一类方法基于GHB与非GHB的电荷不同，如离子交换色谱、电泳和等电聚焦方法；另一类方法基于血红蛋白上糖化基团的结构特点，如亲和层析和免疫实验，每种方法各有优缺点，对临床实验室而言，尚无“最佳”方法可以选择。
虽然方法不同，结果的表示不同，但在正确操作和解释的情况下，方法间可以有较好的相关性，并能为临床提供有用的信息。
基于在美国进行的糖尿病控制和并发症临床研究(diabetes control and complications trial, DCCT)，表明了糖尿病患者病程的发展和合并症与血糖控制的密切关系，及血浆葡萄糖水平与HbA1c水平间的关系。
糖化血红蛋白测定在糖尿病诊断中的应用价值
糖化血红蛋白测定在糖尿病诊断中的应用价值糖化血红蛋白(HbA1c)是指红细胞中被糖分子长期结合的血红蛋白分子，其浓度能够反映血液中平均血糖水平的情况。
糖化血红蛋白测定已经成为糖尿病诊断和控制的重要指标之一。
本文将从糖化血红蛋白测定的原理、临床应用以及其在糖尿病诊断中的价值等方面进行探讨。
糖化血红蛋白测定的原理是利用在高血糖状态下，糖分子能够与血红蛋白A长期结合，形成HbA1c。
人体中红细胞的寿命通常为120天左右，因此测定血液中HbA1c的浓度能够反映近3个月内的平均血糖水平。
糖化血红蛋白的测定方法主要有离子交换色谱法、高效液相色谱法和免疫测定法等。
糖化血红蛋白测定在糖尿病的诊断中有着重要的应用价值。
与空腹血糖和餐后血糖相比，糖化血红蛋白在诊断糖尿病方面具有以下优势：1. 反映更稳定的血糖控制水平：由于糖化血红蛋白反映了过去3个月内的平均血糖水平，相对于单一的血糖值，更能全面评估患者的血糖控制情况，避免单一时刻的血糖值受饮食和情绪等因素的干扰。
2. 提供个性化的治疗指导：根据糖化血红蛋白的水平能够评估患者的血糖控制状况，并进行相应的治疗调整。
较高的糖化血红蛋白水平意味着患者血糖控制较差，需要增加药物治疗或调整饮食和运动等生活方式。
通过定期测定糖化血红蛋白，可以及时调整治疗方案，帮助患者达到良好的血糖控制。
3. 预测患者的糖尿病并发症风险：多项研究表明，糖化血红蛋白的水平与糖尿病的并发症风险密切相关。
高水平的糖化血红蛋白意味着血糖控制较差，患者更容易出现糖尿病相关的并发症，如心血管疾病、肾病和眼病等。
定期监测糖化血红蛋白不仅有助于评估患者的血糖控制情况，还能够提前发现并预防糖尿病的相关并发症。
糖化血红蛋白测定在糖尿病的诊断和治疗中具有重要的应用价值。
通过测定糖化血红蛋白的水平可以全面评估患者的血糖控制情况，提供个性化的治疗指导，并预测患者的并发症风险。
糖化血红蛋白测定不仅是糖尿病诊断和控制的重要指标，也是评估糖尿病患者的疗效和病情进展的重要工具。
糖化血红蛋白的检测及临床意义
糖化血红蛋白的检测及临床意义摘要】目的探讨胶乳凝集法测定糖化血红蛋白(HbA1c)及在临床中的应用价值，以便更好地服务于临床，帮助糖尿病患者控制血糖水平。
方法利用胶乳凝集反应法测定糖化血红蛋白，并对精密度、线性范围、准确度进行了分析，并检测100例健康人及92例糖尿病及高危人群。
结果健康人群HbA1c参考范围为5.0％±1.2%，糖尿病及高危人群HbA1c均值为7.30％±2.3%，线性范围：3％～14%，准确度：相对偏差≤±15%，精密度：批内CV 2.5%～3.98%，批间CV3.6%～4.88%。
结论该法特异性好，精密度高，结果准确，受到了临床医生及糖尿病患者的好评。
【关键词】糖化血红蛋白(HbA1c) 检测临床意义HbA1c的形成是一种无需酶催化、缓慢、连续、不可逆的化学反应，其生成速度与血糖浓度成正比，在红细胞生成的120d内，此反映自始至终进行着。
因此HbA1c水平所反映的是检测前120d内的平均血糖水平，而且与采血时间、患者是否空腹、是否用胰岛素等因素无关。
它稳定可靠地反映以前数周内的血糖水平控制情况，更适合作为糖尿病的监控指标[1]。
1 材料与方法1.1标本来源 2010年5月至12月来本院检测的糖尿病患者共92例，男55例，女37例，年龄为48岁～72岁。
2010年健康体检者100例，男64例，女36例，平均年龄44岁。
1.2试剂及仪器设备材料仪器为日立7180全自动生化分析仪。
1.3方法原理本法是利用抗原抗体反应直接测定总Hb中HbAlc中的百分含量的方法。
样品中总Hb和HbAlc与胶乳有相同的非特异性吸附而固相化,当加入HbAlc的特异性单克隆抗体后形成胶乳-HbAlc-鼠抗人HbAlc单克隆抗体的复合物，此复合物由于羊抗鼠lgG抗体而形成凝集，凝集量因胶乳表面固相化的HbAlc量的不同而不同。
通过测定其吸光度并与HbAlc百分度的标准曲线比较后，可求出样品中的HbAlc占Hb的百分含量。
糖化血红蛋白检测技术和质量控制管理
糖化血红蛋白检测技术和质量控制管理糖化血红蛋白（HbA1c）是一种血红蛋白与血糖结合后形成的糖化产物，是临床上评估血糖控制情况的重要指标。
其测定是糖尿病管理中不可或缺的一部分，能够提供有关患者在过去2-3个月内的血糖水平的信息。
糖化血红蛋白检测技术和质量控制管理对于确保检测结果准确可靠、提高糖尿病患者的治疗效果和生活质量具有重要意义。
一、糖化血红蛋白检测技术1.1 HbA1c检测原理HbA1c检测是通过高效液相色谱法（HPLC）、离子交换色谱法（IEC）、免疫测定法（IHA）等技术对血液中的糖化血红蛋白进行定量检测。
HPLC法是目前用于糖化血红蛋白检测的常用方法，其原理是根据血红蛋白A1c（HbA1c）与其他血红蛋白组分的不同特点，在特定的色谱条件下分离并定量测定。
HbA1c检测技术具有操作简便、结果准确可靠、对样本要求较少等优势。
与其他血糖检测方法相比，糖化血红蛋白检测不受进食、运动等因素的干扰，能够更好地反映患者长期血糖控制情况，因此被广泛应用于糖尿病患者的血糖管理和治疗监测中。
随着现代医学技术的不断进步，糖化血红蛋白检测技术也在不断完善和发展。
近年来出现的免清洗技术、毛细管电泳、质谱法等新技术不断拓展了糖化血红蛋白检测的领域，为提高检测效率和准确性提供了新的途径。
2.1 质量控制体系建设建立完善的质量控制体系对于保证糖化血红蛋白检测结果的准确性和可靠性至关重要。
包括建立内部质量控制体系、参加外部质量评价、制定检测流程和操作规范、保持检测仪器的良好状态等。
只有做好质量控制管理，才能确保检测结果的准确性和稳定性。
内部质量控制是指通过每天运行常规的质控品，监测和评价实验室的分析性能和结果可靠性，及时发现实验室检测系统的偏差和波动，以确保分析结果的准确性和可靠性。
通过制定合理的内部质量控制计划、及时检验、记录和汇总实验结果、发现和处理异常情况等措施，可有效降低实验室检测过程中的系统误差和随机误差，提高检测结果的准确性。
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糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，
而我国糖尿病的发病率亦达2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。
糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。
临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。
近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。
有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。
测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。
1HbA1c的临床意义
糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。
能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。
1．1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。
此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。
1．2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。
1．3作为糖尿病的病情监测指标
1．3．1作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。
1．3．2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。
1．3．3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。
1．4当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。
临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。
1．5对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。
1．6对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。
1．7对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸中毒等急性合并症的发生。
2临床常用的测定糖化血红蛋白HbA1c的方法
2．1乳胶凝集反应法
乳胶凝集反应法是利用抗原抗体直接测定总血红蛋白Hb中的糖化血红蛋白HbA1c的百分含量。
目前有国内外几家厂商可以提供HbA1c测定的试剂盒。
这种免疫反应是由被测血样品中的总Hb和HbA1c与试剂中的抗体结合而形成凝集，凝集量随HbA1c浓度的大小而变化。
使用生化分析仪器来进行比浊测定HbA1c的浓度，采用终点法，生化仪通过测定反应液的吸光度值，可直接反映出凝集量的多少；推算出HbA1c占Hb的百分含量，测定时，仪器多采用660nm单色光做主波长，800nm 单色光做副波长，通过标准曲线得出实测值。
由于这种试验其标准曲线是非线性的，所以在测定前，首先用随试剂盒一起带有的5种不同浓度的定标液，做出5点非线
性标准曲线。
曲线和数值存在生化仪的贮存器中，测定样品时，实测出的吸光度值A与标准曲线比较，由仪器CPU求出实测样品中的HbA1c百分含量。
乳胶凝集反应法测定HbA1c简便、不用增加仪器，可直接用自动生化分析对样品进行快速测定。
该方法也可以用手工的方法，在酶标仪进行测定，是目前使用较多的方法。
但是乳胶凝集反应法其准确性和重复性均有欠缺。
2．2离子交换高压液相色谱法HPLC
使用离子交换高压液相色谱HPLC（high pressure liquid chromatography）来测定HbA1c的百分含量目前被认为是分析HbA1c的金标准。
采用HPLC方法工作的全自动糖化血红蛋白分析仪器，以其快速、简便、精巧、准确等特点，受到越来越多用户的欢迎。
色谱分析是一类利用混合物的各组分在不同相上的分配差别，在两相物质相对运动过程中，将混合物中的各种成份分离开的一种分析技术。
液相色谱是以液体或固体为固定相，以液体为液动相的色谱法的总称。
色谱法又叫色层或层析，这一技术在生命科学研究中用于生物活性物质的分析；生物活性物质是以混合物形式存在，人类血液中的蛋白质有上千种，只有把混在一起的被测蛋白分离出来，才能准确测定；在HbA1c的测定时，可以通过高精度HPLC，将HbA1c从Hb中分离出来，才能得到准确的数值。
在生命科学研究中，活性物质的分离主要应用的是液相柱色谱。
这种技术诞生于20世纪初叶，俄国化学家茨维特把植物色素混合液置于装有碳酸钙吸附剂的玻璃管顶端，用石油醚洗脱后，在玻璃柱上出现了几组颜色不同的色带，这些色带随着不断的洗脱，越分越开，先后从玻璃柱下端流出，茨维特把这样一种用流体洗脱色素混合液，使之通过碳酸钙做固定相从而实现分离的技术，起名叫“色谱法”。
这种方法被推广用于分离许多混合物中的各种物质，被分离物质已和颜色无关了，但“色谱”分析的名称仍沿用至今。
当然更贴切的名称应该叫“层析法”。
早期的“色谱柱”体积大，做固定相的物质颗粒大，分离时需要大量的洗脱液。
并且洗脱液靠重力流动，分离时间长，效率低。
随着科学技术的进步，20世纪60年代，人们研制出新型液相柱，同时采用高压输液泵自柱上端为洗脱液加压，大大加速了洗脱液的流速，开发出相应的高灵敏度的检测器，新的分析仪器—高压液相色谱仪在70年代诞生，很快就占领了分析化学的舞台。
特别是在生命科学的研究中，HPLC技术由于对被测物活性影响小，几乎可以测定生物医学中所有的非发挥性物质，如近年来利用离子交换HPLC法测定血液中的HbA1c的百分含量，被认为是糖尿病诊断的金标准。
3糖化血红蛋白自动分析仪
糖化血红蛋白自动分析仪采用离子交换HPLC法测定HbA1c。
离子交换HPLC 法，是利用能交换离子的材料为固定相来分离离子型化合物的方法。
仪器使用阳离子交换柱进行HbA1c的百分比测定；当一定量的全血样品被取样针吸入到进样装置内，在稀释部分被溶血，释放出红细胞中的血红蛋白Hb，并由稀释液稀释，稀释好的已经溶血的样品，由高压泵注入离子交换柱。
柱内的固定相是最新开发的非多孔性，不溶和可渗透的交联高聚物，上面分布固定的带电荷基团和能游动的配衡离子；样品通过过滤器从交换柱顶端加入后，由三种不同浓度的盐洗脱缓冲液（流动相）洗脱，使样品向下移动。
此时溶液中所含血红蛋白（Hb）的各种组份即与固定相上能移动的离子进行交换，样品中的血红蛋白多种组分在固定相上连续进行可逆的交换吸着和解吸作用，而3种不同离子浓度的盐液，形成线性梯度洗脱，洗脱液No1叫起始缓冲液，含低离子浓度的盐，洗脱液No2、No3缓冲液，其离子浓度依次增高很多，这种流动相离子浓度的改变对分离效果的影响非常明显，前面洗脱出来的
组分分离效果好，色谱峰很窄，后面组分也能在很短时间内洗脱出来，大大缩短了分离时间；所以全自动血红蛋白分析仪，在1分多钟内、Hb中的多种成份被分离成6个部分，其中的HbA1c、HbF、HbA1被有效、精确的分离；由交换柱流出的Hb 成分到达仪器的检测器，检测器内装有发射单色光的发光二极管，通过双波长可见光比色法测定HbA1c、HbF、HbA1三个参数。
仪器的检测器检测出分离后HbA1c、HbF、HbA1组分的吸光度值，与HbA1c标准品吸光度值比较，分析计算出结果，最后以百分率表示的Hb组分结果与色谱图一起打印出来。
离子交换柱HPLC法对全血直接测定HbA1c，其批内和批间变异系数CV均可以小于1%（CV < 1%），结果精确，HbA1c检测结果不受存在的变异型血红蛋白及其衍生物的影响，特别适合于糖尿病人的监控。