植物组培2-愈伤组织的诱导
3第三章 植物组织培养简介
的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力， 的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力， 回复到分生组织状态的过程。 回复到分生组织状态的过程。
3.再分化 redifferentiation〕 3.再分化〔redifferentiation〕:
Folke Skoog(1908- )
1955年，Miller从DNA降解物中分离出6－呋喃 1955年 Miller从DNA降解物中分离出6 降解物中分离出 氨基嘌呤（激动素）， ），发现它诱导芽分化的效率比 氨基嘌呤（激动素），发现它诱导芽分化的效率比 腺嘌呤高3万倍。控制器官分化的激素模式变为激动 腺嘌呤高3万倍。控制器官分化的激素模式变为激动 生长素的比例关系 促进组培的发展。 的比例关系。 素／生长素的比例关系。促进组培的发展。
Gottlieb Haberlandt(1854-1946). He was the first to formulate clearly the principles of plant cell culture.
细胞全能性学说： 细胞全能性学说： 植物体中任何生活细胞都具有该 物种的全部遗传信息， 物种的全部遗传信息，具有相同的形态结构和一定的生理 功能。只要条件合适， 功能。只要条件合适，由一个单细胞就可以发育成为一个 新的个体。 新的个体。 该文还报道了几种植物的细胞和组织的培养实验，由 该文还报道了几种植物的细胞和组织的培养实验， 于当时的条件所限，都没有成功. 于当时的条件所限，都没有成功
第三章 植物组织培养 (tissue culture) 概述
第一节
植物组织培养的意义
植物组织培养概念(重点 重点) 一、植物组织培养概念 重点 植物组织培养理论基础(难点 难点) 二、植物组织培养理论基础 难点 植物组织培养类型(难点 难点) 三、植物组织培养类型 难点 植物组织培养特点(重点 重点) 四、植物组织培养特点 重点
组培工作总结范文(3篇)
第1篇一、前言随着生物技术的不断发展，植物组织培养技术在植物育种、繁殖、基因工程等领域发挥着越来越重要的作用。
在过去的几年里，我国植物组织培养技术取得了显著的成果。
本文将对我在组培工作中的经历和体会进行总结，以期为今后的组培工作提供借鉴。
二、项目背景1. 项目简介本次组培工作以我国常见的花卉植物为研究对象，通过植物组织培养技术对其进行繁殖和育种。
主要研究内容包括植物外植体诱导、愈伤组织诱导、芽诱导、生根诱导以及植株再生等。
2. 项目意义通过本次组培工作，不仅可以提高植物繁殖速度，降低繁殖成本，还可以为植物育种提供技术支持，为我国花卉产业的发展提供有力保障。
三、组培工作过程1. 外植体选取与消毒（1）选取健康、无病虫害的花卉植物叶片、茎段等作为外植体。
（2）对外植体进行表面消毒，常用消毒液有70%酒精、0.1%氯化汞等。
2. 培养基配制与灭菌（1）根据实验要求，配制适合不同植物组织培养的培养基。
（2）将配制好的培养基分装到无菌培养皿中，进行高压灭菌。
3. 外植体接种与培养（1）将消毒后的外植体接种到灭菌后的培养基上。
（2）将接种好的培养皿放置在适宜的温度、光照条件下进行培养。
4. 培养过程观察与记录（1）定期观察培养皿中的外植体生长状况，记录愈伤组织形成、芽诱导、生根诱导等过程。
（2）根据观察结果，调整培养条件，如光照、温度、激素浓度等。
5. 植株再生与移栽（1）当芽诱导成功后，选择生长健壮的芽进行生根诱导。
（2）待芽生根后，将植株移栽到营养土中，进行常规管理。
四、组培工作总结1. 技术要点（1）外植体选取：选择健康、无病虫害的植物组织作为外植体，提高培养成功率。
（2）消毒与灭菌：严格消毒与灭菌，防止污染。
（3）培养基配制：根据不同植物组织培养要求，配制适宜的培养基。
（4）培养条件：控制适宜的温度、光照、湿度等条件，促进植物组织生长。
2. 存在的问题及改进措施（1）外植体生长缓慢：提高外植体消毒效果，选用生长势强的外植体。
大豆愈伤组织诱导及再分化的影响因素探索
化,因此不同植物 对 光 照 强 度 也 有 不 同 要 求。 大 豆 在
体细胞胚胎发生诱 导 过 程 中 对 光 照 的 要 求 不 太 严 格,
可以是黑暗,也可 以 采 用 12~24h 光 照,光 照 强 度 的
[ ]
变化范围也较宽,在 50~6000l
另外,取材季节、外植体的大小与灭菌效果及存活率存
基中的生长素和细胞 分 裂 素 的 相 对 浓 度 有 关,当 生 长
在一定关联,在合适时间如生长旺季取样,试验材料的
素/细胞分裂素比值 高 时,促 进 根 的 分 化;比 值 低 时 则
消毒效果、成活率、诱导率及增殖率往往比在生长末期
促进芽的分化;而当 两 者 平 衡 时 则 会 一 直 处 于 愈 伤 组
分以及激素种类配比 选 取 不 同,大 豆 愈 伤 组 织 的 诱 导
导分化的成功率高,有 的 部 位 极 难 脱 分 化 或 再 分 化 率
以及再生也会相应呈现不同的效果。培养条件对大豆
组织培养的作用也 不 容 忽 视。 因 此,深 入 探 索 大 豆 组
很低。雷 海 英 等 [3]以 晋 豆 19 号 为 材 料,选 取 子 叶 节、
因
刘思言等 [9]以吉农 28、吉农 27、吉农 17 三个基因型大
2.
1 培养基的影响
2.
1.
1 培养基营养组分的影响
豆子叶节作为外植体进行植株再生的研究,结果表明,
培养基 是 外 植 体 赖 以 生 存 的 基 质。 培 养 基 的 种
类、营养组分以及培 养 基 的 状 态 等 也 关 系 着 组 织 培 养
关键。
导效果依次递减,说 明 胚 轴 是 比 较 适 合 的 外 植 体。 再
植物组培点
名词解释：1.愈伤组织：是指在人工培养基上由外植体形成的一团无序生长的薄壁细胞。
2.植物组织培养：指在离体条件下利用人工培养基对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使其长成完整的植株。
3.外植体：植物组织培养中的各种接种材料，包括植物体的各种器官、组织和原生质体等。
4.愈伤组织培养：将植物外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在儿使其细胞脱分化形成愈伤组织，然后经过再分化形成再生植株。
5.细胞全能性：一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息。
6.外植体接种：在无菌条件下，将消过毒的植物材料在超净工作台上切割、分离成适宜的外植体大小，并将其转移到培养基上的过程。
7.玻璃苗：是生长异常，叶、嫩梢呈透明或半透明的水浸状，整株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷伸，脆弱易碎的试管苗。
8.继代培养：愈伤组织在培养基上生长一段时间后，由于营养物质枯竭，水分散失，以及代谢产物的积累，必须转移到新鲜培养基上培养，这个过程叫做继代培养。
9.细胞分化：一个尚未特化的细胞发育出特征性结构和功能的过程。
10.炼苗：植物组织培养中获得的小植株，完成由异养到自养的转变，需要一个逐渐适应的驯化过程，此过程为炼苗。
11.胚状体：指在组织培养中，由一个非合子细胞(体细胞)，经过胚胎发生和胚胎发育过程形成的具有双极性的胚状结构。
12.胚培养: 是指将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，在进行组织培养，使其生长发育形成幼苗的过程。
13.植物离体授粉：人工控制条件下使离体的胚球或子房完成授粉，受精形成种子的过程。
14.人工种子：是指通过植物组织培养的方法获得的具有正常发育能力的材料，外面还被有特定物质，在适宜条件下可以发芽成苗的植物幼体。
15.微体嫁接：将0.1～0.2mm的茎尖作为接穗，假接到由试管培养，假接到由试管中培养出来的无菌实生的砧木上，继续进行试管培养，愈合成为完整的植株的方法。
16.单倍体：是指具有配子染色体数的个体或组织，即体细胞染色体数为n 。
3.植物的组织培养技术
专题3 植物的组织培养技术课题1 菊花的组织培养一、课题背景1．具有某种生物全套遗传信息的活细胞都具有发育成完整个体的能力，即全能性。
但这在生物体内并未表现出来，原因是通过基因的选择性表达而使细胞处于分化状态。
2．当植物细胞脱离原来所处的植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，细胞就可能表现出全能性，发育成完整植株。
二、基础知识（一）植物组织培养的基本过程1．细胞分化是在个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异过程。
2．愈伤组织是离体植物组织通过细胞分裂形成的、细胞排列疏松而无规则的、高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。
3．植物组织包括脱分化和再分化两个基本阶段，该过程可简单表示为：（二）影响植物组织培养的因素1．材料：植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。
菊花组织培养一般选择未开化植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。
2．营养：组织培养一般常用的培养基是MS培养基，其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有机物，如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。
3．激素：在培养基中需要添加植物激素有生长素和细胞分裂素等。
4．激素使用的先后顺序及其用量比例对细胞分裂和分化的影响。
5．环境条件：pH、温度、光等环境条件。
进行菊花的组织培养，一般讲pH控制在5.8左右，温度控制在18～22℃，并且每日用日光照射12h。
三、实验操作（一）制备MS固体培养基1．配制各种母液：大量元素配制成10倍浓缩液，微量元素配制成100倍浓缩液，微量有机物配制成1mg/mL的母液。
2．配制培养基：按配方称取琼脂、蔗糖以及各种母液，配制MS培养基。
在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，原因是菊花茎段组织培养比较容易。
3．灭菌：采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法。
【思考1】与肉汤培养基相比，MS培养基有何特点？答：肉汤培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养。
植物组织培养
矮牵牛茎尖离体培养培养
大蒜根尖培养及植株 再生
微型月季茎段离体培养
叶诱导愈伤组织
台湾百合离体培养
菊花体细胞胚胎发生及植株再生
矮牵牛茎尖离体培养培养
牡丹成熟胚的离体培养与快速繁殖
非洲紫罗兰叶片培 养
优化培养基
无蔗糖
1%蔗糖
5%蔗糖
无BAP
BAP 0.1mg/l
BAP 5.0mg/l
无NAA
种质资源的离体保存
体细胞无性系变异筛选
花粉、花药培养产生单倍体植株
幼胚拯救克服远缘杂交障碍
用于基因工程技术创造植物新种质。
3、大规模植物细胞、组织和器官培养生产次 生代谢物质；
根培养:正常根培养， 毛状根培养
4、用于植物生长发育理论研究，包括生理学、 病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。
1972年，Carlson等利用原生质体融合在两个烟草属中进行种间杂交。
1974年，Murashige等利用细胞分裂素诱导茎尖侧芽分枝。Zaenen和 Larebeke分别发现土壤农杆菌（Agribacterium）中的根瘤诱导的主 要成分是Ti质粒。 1978年，Melchers等进行了番茄和马铃薯的体细胞杂交。
五、植物组织培养技术的应用
1、优质种苗的快速无性繁殖： （1）无性繁殖作物及不易繁殖作物的快速繁殖
园艺植物种苗工厂化生产
兰科植物生产
A
B
C
E
F
G
花烛属植物
厥类植物
盆栽及切花植物的繁殖
珍贵树种
无菌苗快速繁殖
无菌苗驯化
组培苗驯化移栽
茎、芽和小植株的规模培养
经济植物快速繁殖
（2）通过茎尖培养生产脱毒健康种苗：如草莓、香蕉、
(完整word版)红掌组培
二、任务分析在红掌原产地热带雨林，红掌可用种子繁殖，但进入开花时间长。
分株繁殖是红掌以前繁殖的主要方式.红掌植株基部长出吸芽，产生根系后可分株,每年可分3～4株,繁殖系数较低，很难满足规模化生产所需的种苗.现在红掌种苗生产主要通过组织培养进行种苗的快速繁殖，也就是红掌的克隆技术。
这样可以在比较短的时间内生产整齐一致的优质种苗，供应生产的需要。
通过组织培养技术生产红掌种苗主要有再生体系的建立、增殖培养、壮苗生根、移栽和温室育苗等技术环节。
三、相关知识红掌（Anthurium andraeanum）植物界、被子植物门、单子叶植物纲、天南星科（Araceae)，花烛属（Anthurium Schott），多年生常绿草本植物,别名花烛、安祖花、火鹤花、红鹅掌、鹅掌红、红苞芋、幸运花等，原产中美洲，特别适合室内观赏,兼作鲜切花，为当前国际流行的名贵花卉。
在全球热带花卉贸易中，红掌销量居第二位，欧洲、美国、日本是红掌主要消费市场，栽培自动化程度很高，栽培面积不断扩大，我国红掌商业化生产，尤其是工厂化组培快繁，还处于起步阶段.（一)形态特征与生物学习性红掌为宿根草本，株高30~70cm，叶自短茎中抽生，革质，长心脏形，全绿,叶柄坚硬细长，长30～40厘米，宽约10厘米.花顶生，长约50厘米，佛焰苞心脏形，长10～20厘米，宽8～10厘米,表面波皱,佛焰苞具有明亮蜡质光泽，肉穗花序圆柱形,直立、长约6厘米，黄色,初看好像人造假花,花姿奇特美妍，切花寿命长达30天以上,为插花高级花材。
同类品种繁多,花色有红、桃红、朱红、白、红底绿纹、绿、橙等色，花期持久,全年均能开花。
喜空气湿度高而又排水通畅的环境，喜阴、喜温热.在白天温度不高于28℃，夜间不低于20℃的环境中可终年开花结果，高于35℃将产生日灼，低于14℃则生长受影响，低于0℃的持续低温将冻死植株。
适宜生长昼温为26~32℃,夜温为21～32℃。
光强以16000～20000Lx为宜，空气相对湿度（RH)以70%～80%为佳。
烟草植物组织培养实验报告
烟草叶片的组织培养一、实验目的本实验通过配制3种不同的培养基来实现烟草种子苗叶片诱导、分化及植株再生从而深刻理解植物细胞的全能性、学习和掌握植物组织培养技术，二、实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
培养基配方设计是组培法育苗中的关键步骤。
根据理论与实际经验，对不同种类的花卉及不同的取材部位，需设计出相适应的配方，并从中筛选出最佳者。
继代芽增殖培养：很多花卉植物经过2-6周的培养即可分化出大量的不定芽。
根据情况可以将这些增殖了大量新芽的外植体重新分割进行几代培养，以扩大繁殖规模直至满足繁殖需要为止。
三、实验材料植物材料：烟草植株药品：激素（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1N NaOH、1N HCl蒸馏水、 70%酒精、 0.01%升汞仪器：1玻璃杯、1玻璃棒、1pH试纸(5.5-9.0)1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子四、实验方法与步骤4.1 MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O 单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
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植物组培2-愈伤组织的诱导
植物组织培养-愈伤组织的诱导
一、【实验目的】
掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理。
二、【实验原理】
植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
超净工作台工作原理：
本工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备
室内空气→预过滤器(初滤) →小型离心风机压入静压箱→高效空气过滤器(精滤) →出风面吹出洁净气流(具有一定的、均匀的断面风速）→不断排除工作区原来的空气→形成高洁净的工作环境
三、【实验仪器和材料】
仪器：培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸
试剂：乙醇、2 ，4 – D （生长素类似物）、次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH 与0.1 mol/L HCl 材料：绿豆、胡萝卜、自选材料
四、【实验步骤】
（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用自来水冲洗后,用酒精棉擦拭欲取材部位表面, 或
于70%酒精中浸沾数秒钟。
（3）将材料放入已灭菌的100ml烧杯（或试剂瓶）中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。
（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。
（5）弃次氯酸钠浸泡液，用无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。
（6）将已灭菌的植物材料置于灼烧后冷却的金属盘中，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm厚的薄片，弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散，以绿豆为材料时，将绿豆纵切或横切，去皮后分别接种。
（7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。
（8）在培养瓶下部的培养基高度位置作记号。
（9）将接种后的三角瓶，培养于25℃光照条件下（烟草可用弱光），20天左右外植体逐渐膨大形成愈伤组织，愈伤组织的形成标志着接种的外植体已脱离分化状态，开始重新恢复分生能力。
无菌器皿、用具的准备：
将解剖刀及镊子放入95%的酒精中浸泡片刻，用干棉球蘸取95%的酒精擦拭盘子、解剖刀及镊子，将酒精挤在盘子上，然后引燃火，（引火棉球立即放入培养皿中加盖熄火）使盘子、解剖刀及镊子灼烧后冷却。
五、【实验结果及讨论】
实验选择了绿豆和萝卜作为实验材料，切块放在一个培养瓶中培养，其中萝卜组织共六块（3mm×3mm×3mm）,绿豆组织共两块（2mm×2mm×2mm），实验现象如下
一周后：有些萝卜组织表层出现少量愈伤组织，开始了脱分化；绿豆组织没有明显脱分化现象出现。
两周后：萝卜组织表层组织进一步脱分化，愈伤组织较一周前有增多，组织块颜色变浅，有白化趋势；绿豆组织仍不明显，或不易用
肉眼观察。
三周后：所有萝卜组织表层都脱分化成为愈伤组织，但量少，组织颜色进一步白化，变为淡肉色；绿豆组织脱分化现象仍不明显。
若干周后：所有萝卜组织表层的脱分化进行缓慢，几乎保持不变，而颜色也逐渐变淡，但仍然变化缓慢；绿豆组织仍不明显或不能用肉眼分辨。
相关图片如下：
萝卜愈伤组织
绿豆
萝卜愈伤组织
萝卜愈伤组织
萝卜愈伤组织
六、【实验注意事项】
1、所有的东西都要即时标记好，日期，名称，浓度等(标注可以组别-姓名，如1-姓名或1-姓名单字母缩写）
2、自己用过的器皿要自己洗刷，并灭菌，以备下组同学使用。
3、实验结束后用过的仪器等恢复原样，清洁实验台面，一切东西归位。
七、【思考题】
1. 以大组总瓶数为样本总数，每瓶为样本个体统计记录愈伤组织诱导培养的出愈率、污染率和其他
现象。
并简述本人的培养结果或现象。
答：我组共十人，统计结果如下
污染6人，愈伤组织明显2人，愈伤组织不明显2人
本人培养的植物组织块较小，仔细观察萝卜块，能看到表面有愈伤组织形成，但不太明显，绿豆块脱分化及不明显，几乎不能分辨其上的愈伤组织。
分析原因：
1、可能由于所切的组织块太小导致在实验操作中部分未洗净的次氯酸钠抑制了脱分化现象，导致了愈伤组织不明
显。
2、可能由于所取的萝卜组织块处于分裂不旺盛的区域导致脱分化现象缓慢，实验应取分裂旺盛的分生区细胞。
3、实验要求应有光照培养，但实际培养过程中却并没有光照条件，这可能是脱分化缓慢的主要因素。
2.你如何认识无菌操作对植物组织培养的重要性？你认为在具体操作时还应注意那些事项？
答：植物组织培养是指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养对无菌条件的要求是非常严格的，甚至超过微生物的培养要求，这是因为培养基含有丰富的营养，稍不小心就引起杂菌污染，如果受到污染则组织就不能正常生长分化，则实验失败。
在具体实验操作中我们还应注意：
（1）在接种前20分钟，打开超净工作台的风机以及台上的紫外线灯；
（2）接种员先洗净双手，在缓冲间换好专用实验服等；
（3）上工作台后，用酒精棉球搽拭双手，特别是指甲处，然后搽拭工作台面；
（4）先用酒精棉球搽拭接种工具，再将镊子和剪刀从头至尾过火一遍，然后反复过火尖端处，对培养皿要过火烤干；
（5）接种时，接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；
（6）接种完毕后要清理干净工作台，可用紫外线灯灭菌30分钟，若连续接种，每5天要大强度灭菌一次。