灯盏花素对氯化钾诱导的培养平滑肌细胞内游离钙的影响
钙通道阻滞剂的作用机制
钙通道阻滞剂的作用机制
钙通道阻滞剂是一类药物，通过阻断细胞膜上的钙通道，来影响细胞内外钙离子的平衡和调控。
其作用机制主要包括以下几个方面：
1. 阻断钙离子通道：钙通道阻滞剂能够与细胞膜上的L型钙
离子通道结合，形成稳定的复合物，从而阻断钙离子的进入细胞。
钙通道是细胞内钙离子进入细胞的主要通道之一，钙离子在细胞内发挥着重要的信号传导、肌肉收缩和神经传递等功能，通过阻断钙通道，钙通道阻滞剂能够抑制这些功能的发生。
2. 降低细胞内钙离子水平：阻断钙通道后，细胞内的钙离子进入减少，导致细胞内钙离子浓度降低。
这一作用可以使得细胞脱离兴奋状态，减少肌肉的收缩，从而产生抗惊厥、抗心律失常等作用。
3. 增加心脏供血：钙通道阻滞剂能够扩张冠状动脉和周围血管，增加心脏供血，改善心肌缺血状态。
4. 减少心肌耗氧：钙通道阻滞剂还能减少心肌耗氧量，通过抑制心脏收缩力、心率和心肌肌细胞内钙离子浓度的升高，从而降低心肌耗氧需求，减少心绞痛的发作。
5. 调节神经传递：钙通道阻滞剂对神经传递也有一定的影响，可以减少神经的兴奋性和突触传递，在治疗癫痫和精神障碍方面有一定的应用。
综上所述，钙通道阻滞剂主要通过阻断钙通道来调节细胞内外钙离子的平衡和调控，从而发挥其药理作用。
钙通道阻滞药-11-20(完整)
1（175 kDa）
L型钙通道
2（143 kDa）
主要功能单 位
I 亚区 II 亚区 III 亚区 IV 亚区
（ 54 kDa）
协同或调控 1亚单位功能
（ 30 kDa）
（ 27 kDa）
亚型
L T N P Q R
分布 Heart, Nerve
Heart, Nerve
Nerve
小脑浦氏细 胞 小脑颗粒细 胞 Nerve
钙流特点
作用持续时间长、激活电压 高，电导大
作用持续时间短、激活电压 低且迅速失活，电导小
作用持续时间短、激活电压 高
作用持续时间长、激活电压 高
阻滞剂 维拉帕米
氟桂嗪
钙通道结构
维拉帕米
Ⅳ
硝苯地平
钙通道由α1、α2、β、γ和δ等多个亚基所组成。其中α1构 成通道本身
α1亚单位：是主要的功能单位。 α1有4个重复结构域，每域含6个跨膜α螺旋片段，分别称 为S1、S2、S3、S4、S5、S6 。
顺应性 抑制脂质过氧化，保护内皮细胞 硝苯地平增加细胞内cAMP,提高溶酶体酶及胆固醇酯
的水解活性，有助于动脉壁脂蛋白的代谢，降低细胞 内胆固醇。
(四) 对红细胞和血小板结构与功能的影响
对红细胞膜的稳定作用
Ca2+ 能激活磷脂酶使膜磷脂降解，破坏膜结构，产生溶 血。抑制Ca2+内流，降低细胞内Ca2+浓度，保护钙泵 （ Ca2+-Mg2+-ATP酶）的活性，减轻Ca2+超载对红细胞的 损伤。
40 ~70
90 25 ~ 100 1.3
1~2
5
32
none
0 90
Nitren dipine >90
Piezo1通道激活促进大鼠冠脉平滑肌细胞内钙浓度升高的机制研究
用t 检验，多组间比较采用单因素方差分析（one -way ANOVA ）。
以P <0.05为差异有统计学意义。
结果1 细胞免疫荧光染色检测Piezo1蛋白在CASMCs中的表达采用原代细胞培养获得CASMCs ，再进行免疫荧光染色，结果显示Piezo1在原代培养CASMCs 的胞质和胞核中均有所表达，Piezo1蛋白在细胞核周围的表达较高，见图1。
2 Piezo1诱导CASMCs 胞内Ca 2+升高与L 型钙通道无关如图2所示，与DMSO 组相比，Yoda1 （10 µmol/L ）组Ca 2+荧光强度显著增加（P <0.01）；与Yoda1组相比，Yoda1+GsMTx4（3 µmol/L ；Piezo1抑制剂）组Ca 2+荧光强度显著降低（P <0.01），而Yoda1+Nif （1 µmol/L ；L 型钙通道抑制剂）组Ca 2+荧光强度没有明显变化。
3 Piezo1诱导CASMCs 胞内Ca 2+释放与IP3R 和RyR 通道无关无钙台式液中加入Yoda1 （10 µmol/L ），Yoda1组Ca 2+荧光强度与DMSO 组相比显著增加（P <0.01），见图3A 。
分别使用IP3R 抑制剂xestospongin C （0.1 µmol/L ）和RyR 抑制剂dantrolene （10 µmol/L ）抑制IP3R 和RyR 通道，实验结果表明，与Yoda1组相比，Yoda1+xestospongin C 组和Yoda1+dantrolene 组Ca 2+荧光强度无明显变化，见图3B 。
4 Piezo1诱导CASMCs 内质网和其它细胞器Ca 2+释放无钙台式液中使用SERCA2抑制剂TG （2 µmol/L ），结果如图4A~E 所示，第一峰值中TG 引起的Ca 2+荧光升高比值明显高于Yoda1（P <0.01）；第二峰值中，TG -Yoda1组Ca 2+荧光强度与对照组TG -TG 组相比显著增加（P <0.01），Yoda1-TG 组Ca 2+荧光强度与TG -TG 组相比显著增加（P <0.01）。
灯盏花素干预大鼠肝星状细胞TGFβ1、α-SMA的表达
灯盏花素干预大鼠肝星状细胞TGFβ1、α-SMA的表达孟庆媛;林明华;郭梦凡;刘东璞;卢凤美;王抒【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2011(031)023【摘要】目的研究灯盏花素对CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠TGFβ1、α-SMA表达的研究.方法本实验用CCl4诱导大鼠肝纤维化模型,喂服灯盏花素.60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、灯盏花素高剂量组、灯盏花素中剂量组、灯盏花素低剂量组、秋水仙碱组.用药4w后,测定肝纤维化模型大鼠的谷草转氨酶、谷丙转氨酶,检测平滑肌肌动蛋白mRNA和蛋白的表达,转化生长因子mRNA与蛋白的表达.结果模型组大鼠血清ALT、AST明显高于正常对照组(P＜0.05).与模型组相比较,灯盏花素高、中、低剂量组ALT、AST均明显降低(P＜0.05).模型组与正常对照组α-SMA mRNA及蛋白有显著性差异(P＜0.01)；灯盏花素不同剂量组均能使α-SMA mRNA及蛋白表达显著降低(P＜0.01).模型组与正常对照组TGFβ1 mRNA及蛋白有显著性差异(P＜0.01),灯盏花素不同剂量组均能使TGFβ1 mRNA及蛋白的表达显著降低(P＜0.01或P＜0.05).光镜显示:灯盏花素各剂量组的肝脏病理学改变较模型组减轻.结论①灯盏花素能保护肝细胞活性,促进肝细胞修复再生；降低转氨酶,具有抗肝纤维化作用.②灯盏花素可以降低α-SMA、TGFβ1表达,抑制星状细胞激活.【总页数】3页(P4618-4620)【作者】孟庆媛;林明华;郭梦凡;刘东璞;卢凤美;王抒【作者单位】佳木斯大学司法鉴定中心,黑龙江佳木斯 154007;佳木斯大学司法鉴定中心,黑龙江佳木斯 154007;佳木斯大学司法鉴定中心,黑龙江佳木斯 154007;佳木斯大学司法鉴定中心,黑龙江佳木斯 154007;佳木斯大学司法鉴定中心,黑龙江佳木斯 154007;佳木斯大学司法鉴定中心,黑龙江佳木斯 154007【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.TGF-β1 siRNA对肝星状细胞Smad3、Smad7 mRNA表达的影响 [J], 付荣泉;谭德明;彭忠田2.肉苁蓉苯乙醇总苷对大鼠肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路表达的影响 [J], 由淑萍;赵军;马龙;张石蕾;刘涛3.灯盏花素干预大鼠肝星状细胞Caspase-3、NF-κB表达的研究 [J], 林明华;孟庆媛;郭梦凡4.荔枝核总黄酮对TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞内NF-κB、α-SMA表达的影响[J], 刘燕秀;赵永忠;李彩;董勇;覃桂金;成秋宸;郑清华5.荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞的增殖抑制作用及对蛋白TGF-β_1和а-SMA表达的影响 [J], 孙旭锐;覃浩;靳雅玲;欧士钰;罗伟生因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
灯盏花素注射液
灯盏花素注射液作者：王小沙来源：《中国社区医师》2008年第20期灯盏花系菊科正蓬属植物，具有解表散寒、活血化瘀、疏经活络、止痛消积等功用。
现代研究发现灯盏花素能降低血浆中血栓素A2(TXA2)以及提高前列环素(PGI2)的水平，TXA2具有收缩动脉血管和促血小板聚集的作用，PGI2可抑制肾小管Na+和Cl－重吸收，抑制抗利尿素，使尿量增加，血容量减少，降低血压，改善前后负荷。
此外，灯盏花素还可清除自由基，抑制组胺介质的形成。
灯盏花素注射液在心脑血管疾病中的应用灯盏花素注射液应用于临床已有十余年，最初仅用于治疗脑血管疾病及其后遗症，近年来随着临床研究的深入，应用范围也扩展到各种缺血性疾病及伴有明显微循环障碍性疾病。
心脑血管是灯盏花素使用最广泛的领域，灯盏花素中的黄酮类成分具有扩张微细动脉，降低血黏度、纤维蛋白原，增加组织灌流量。
一项以自发性高血压大鼠为模型的研究证明了灯盏花素可以干预其心肌细胞凋亡，改善左心室肥厚，从而逆转高血压的心室重塑。
一项针对113例冠心病患者的随机对照临床研究证实，接受灯盏花素75mg/d治疗的患者(56例)治疗前后心绞痛发作次数、心电图改善方面与对照组(57例)硝酸异山梨酯10mg/d比较差异无显著性。
研究中共出现了10例不良反应，其中治疗组2例，1例腹胀，1～2小时后消失，1例面部潮红，滴速减慢后消失：对照组8例，均因头痛退出研究。
证实了灯盏花素对冠心病确有疗效，且不良反应发生率较低，特别适合对硝酸盐等血管扩张剂反应强烈及血压偏低的冠心病患者。
除此之外，在一项针对不稳定型心绞痛(UP)患者的临床研究中发现，灯盏花素可以通过抑制脂质抗氧化反应达到保护UP患者内皮细胞的作用，研究者得出了灯盏花素对UP患者内皮细胞的作用与其抗脂质抗氧化反应有关。
除了心血管外，缺血性脑血管疾病也是灯盏花素最常用的领域，这主要是由于灯盏花素具有扩张微细动脉，降低血黏度、抑制血小板聚集的作用。
通过增加脑血流量，降低血管阻力，达到治疗目的。
中药灯盏花对心血管系统的作用
中药灯盏花对心血管系统的作用【关键词】灯盏花灯盏花，又名灯盏细辛，系菊科植物短葶飞蓬［Erigeron breviscapus（Vant.）.］的干燥全草，分布于我国云南、广西等地。
其性寒、味苦、微辛，具有散寒解表、祛风除湿、活络止血之功效。
从灯盏花植物中分离、鉴定出的成分包括:黄酮类化合物、咖啡酸酯类化合物、酚酸类化合物等。
其中的黄酮类化合物有研究证实它有较强的非竞争性抑制蛋白激酶C（PKC）作用［1］。
由于PKC抑制剂能显著地缓解缺血性损伤，以此为基础，灯盏花克服了PKC抑制剂巨大的毒副作用和价格昂贵等缺点，在临床上得到了广泛的应用。
现将近年来文献报道的关于心血管系统疾病的主要药理作用和临床应用做一概述。
1 对缺血和缺血―再灌注（I/R）心肌的作用雷秀玲等研究［2］发现，不同剂量灯盏花注射液对异丙肾上腺素（ISO）诱导沙土鼠急性心肌缺血有减少ST段下移及ST段降低的总和（ΣΔST）的作用，提示灯盏花素抗心肌缺血的机制可能与其迅速而持久的降压，减轻心脏后负荷，从而降低心肌耗氧量有关。
灯盏花素还能够提高心肌超氧化物歧化酶（SOD）活性，降低中性粒细胞髓过氧化物酶（MDA）活性，可以减少自由基在心肌内的聚集，也能减轻ISO对心肌的损伤，提示其抗心肌缺血作用可能与其抗脂质过氧化作用有关。
卢惠生等研究［3］发现，灯盏花能降低不稳定型心绞痛(UAP)血小板表面活性蛋白即血小板颗粒膜蛋白(CD63)、溶酶体膜蛋白(CD62P)及血浆C反应蛋白(CRP)的水平。
认为灯盏花抗血小板活化及减轻炎症反应的突出作用对预防急性冠状动脉综合征的发生和发展有极其重要的临床意义。
刘兴德等［4］采用TUNUL法观察大鼠I/R与心肌细胞凋亡的关系，加用灯盏花素进行干预，显示灯盏花素能显著减少I/R后凋亡心肌细胞核数量以及凋亡心肌细胞核数的百分比(P＜，并显著上调凋亡抑制基因bcl-2蛋白(mRNA)的表达。
表明灯盏花素显著减少I/R 心肌细胞凋亡可能是抗心肌缺血，缩小心肌梗死范围的机制之一。
药理学 考试重点 整理版
1.Pharmacology(药理学)：是研究药物与机体互相作用规律及其原理的学科。
2.Pharmacodynamics(药物效应动力学)：是研究药物对机体的作用或在药物影响下机体细胞功能如何发生变化。
3.Pharmacokinetics(药物代谢动力学)：机体对药物的影响或在机体的影响下药物的吸收、分布、生物转化和排泄等体内过程。
4.简单扩散：非极性药物分子以其所具有的脂溶性溶解于细胞膜的脂质层，顺浓度差通过细胞膜成为简单扩散。
7.首过消除：从胃肠道吸收进入门静脉的药物在到达全身血液循环前必须经过肝脏，如果肝脏对其代谢能力很强，或由于胆汁排泄量大，则使进入全身血液循环内的有效药量明显减少，这种作用称为首过消除。
（舌下给药可避免）9.肠肝循环：被分泌到胆汁内的药物及其代谢产物经由胆道及胆总管进入肠腔，然后随粪便排出，经胆汁排入肠腔的部分可再经小肠上皮细胞吸收经肝脏进入血液循环，这种肝脏，胆汁，小肠间的循环称为肠肝循环。
13.半衰期：血浆药物浓度下降一半所需的时间。
15.生物利用度：经任何给药途径给予一定剂量的药物后到达全身血循环内药物的百分率称为生物利用度。
16.清除率（CL）：是机体消除器官在单位时间内清除药物的血浆容积，也就是单位时间内有多少毫升血浆中所含药物被机体清除。
17.表观分布容积（Vd）：当血浆和组织内药物分布到达平衡后，体内药物按此时的血浆药物浓度在体内分布时所需体液容积称为表观分布容积。
18.药物不良反应：与用药目的无关，并为病人带来不适或痛苦的反应统称为药物不良反应。
19.副反应：由于选择性低，药理效应涉及多个器官，当某一效应用作治疗目的时，其他效应就为副反应。
31.量效关系：药理效应与剂量在一定范围内成正比例，这就是剂量—效应关系。
34.效能（最大效应Emax）：随着剂量或浓度的增加，效应增加，当效应增加到一定程度后，继续增加药物浓度或剂量而其效应不再继续增强，这一药理效应的极限称为最大效应。
机能实验学习题(共六套)
机能实验学习题《机能实验学》习题一一．填空题:1. 家兔重2.4千克，耳缘静脉注射1%盐酸吗啡15mg/kg，应注(3.6ml )毫升。
2. 肺水肿家兔肺的特点是( 切面有白色或粉红色泡沫流出 )、( 表面饱满光滑，红白相间 )、( 有握雪感 )，兔的特点 ( 呼吸浅快 )、( 口唇粘膜青紫 )、( 肺内哮鸣音，大量白色或粉红色泡沫样痰 )。
3. 将沾有利多卡因的小滤纸贴附神经干上，利多卡因通过( 阻断Na+通道 ) 作用使动作电位( 传导受阻 ) 。
4.家兔静脉麻醉最常用药物(乌拉坦)，浓度及给药量分别为(20%)、( 5ml/kg )。
5. 小鼠缺氧实验中复制低张性缺氧动物模型时，在广口瓶中加入钠石灰的作用是( 吸收二氧化碳)，复制血液性缺氧动物模型的方法有( 一氧化碳中毒 )和( 亚硝酸钠中毒 )。
6. 常用的两栖类动物的生理代溶液是( 任氏液 ) ，其主要成份为( Nacl ) 、( Cacl2 ) 、( Kcl ) 和 ( NaHCO3 )。
其所含阳离子有维持细胞的（兴奋性）和(收缩性 )的功能；阴离子有维持细胞的( 酸碱平衡 ) 的功能。
7. 在心电图描记中，P波反映 ( 两心房去极化过程 )、QRS波群反映( 两心室去极化过程 ) 、T波反映( 心室复极化过程 )、PR间期反映 ( 兴奋由心房传导至心室的时间 ) 、ST段反映( 心室各部分心肌细胞均处于动作电位平台期 ) 、QT间期反映( 从心室开始去极化到完全复极化所经历的时间 ) 。
8. 在血管插管试验中肝素化的目的是( 抗凝，防止血液堵塞管口 )，插管后进行的三步结扎法是指第一步结扎( 远心端结扎)，第二步结扎(近心端结扎 )，第三步(远心端和近心端对扎 ) 。
9. 运动对血压的影响是使( 收缩压 ) 升高，主要原因是( 交感肾上腺髓质系统活动增加 )。
10. 在抗B血清上滴加受试者血液，数分钟后出现凝集，抗A血清未发生凝集，受试者的血型为( B型 ) 型。
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泸州医学院学报 ２００７年 第３０卷 第３期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｖｏ１．３０ Ｎｏ．３ ２００７ １８９
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灯盏花素对氯化钾诱导的培养平滑肌细胞内 游离钙的影响
雷开键，杜一平 ，刘丽 ，贾钰铭，黄启静 （宜宾市第二人民医院：肿瘤科； 心内科；四川宜宾 ６４４０００）
摘要目的：观察灯盏花素对氯化钾诱导的培养的家兔平滑肌细胞内游离钙的影响。方法：用Ｒ．Ｆ＿５０００荧光光度仪检测 Ｆｕｒａ一２ＡＭ负载的培养平滑肌细胞内游离钙的浓度。结果：在有细胞外钙存在时，静息条件下细胞内游离钙为３３０＋１００ｎｍｏｌ・Ｌ’。， 灯盏花素能轻度降低静息状态下细胞内游离钙，但无统计学意义。氯化钾５０ｒｅｔｏｏｌ・Ｌ 将细胞内游离钙增加到４２０＋＿１０４ｎｍｏｌ・ Ｌ一，而灯盏花素１０ 、１０ 、３×１０一Ｓｔｏｏｌ・Ｌ 能进一步加强由氯化钾引起的细胞内游离钙的增加。然而，在无细胞外钙时，灯盏花素 对细胞内游离钙却没有影响。结论：灯盏花素通过电压依赖性钙通道加强钙离子内流。 关键词平滑肌；培养细胞；灯盏花素；钙；Ｆｕｍ一２ＡＭ 中图分类号Ｒ７３４．２ 文献标识码Ａ 文章编号１０００—２６６９（２００７）３－０１８９’０３
ＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮ Ｂｒｅｖｉｓｃａｐｉｎｅ（Ｂｒｅ）ｉｓ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ｏｆ Ｅｒｉｇｅｒｏｎ ｂｒｅｖｉｓｃａｐｕｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｂｒｅｖｉｓｃａｐｉｎｅ Ａ（ａｐｉ— ｇｅｎｉｎ一７—０一ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ）ａｎｄ ｂｒｅｖｉｓｃａｐｉｎｅ Ｂ（ｓｃｕｔｅｌ— ｌａｒｉｎ一７－０一ｇｌｕｃｕｒｏｎｌｄｅ）．Ｔｈｅ ｌａｔｔｅｒ ｉｓ ｔｈｅ ｍａｉｎ ｐｏｒ ｔｉｏｎ［ １．Ｂｒｅ ｉＳ ｎｏｗ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｓｕｃｈ
ａｓ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ａｎｇｉｎａ ｐｅｃｔｏｒｉｓ ａｎｄ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［２－－ｏ１．Ｉｔ ｉＳ ｋｎｏｗｎ ｔｈａｔ ｍａｎｙ ｄｒｕｇｓ ａｃｔｉｖａｔｅ ｏｒ Ｂｉｏｇｒａｐｈｙ：Ｌｅｉ Ｋ ｉａｎ（Ｉ９６７一），ｍａｌｅ，ｖｉｃｅ—ｐｒｏｆｅｓｓｏｒ，ｍａｓｔｅｒ
ｍｏｄｕｌａｔｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｃａ２ ｓｉｇｎａｌｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｗｏ ｇｅｎｅｒａｌ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ：ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｘ ｏｆ Ｃａ２ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃａ２ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｌｃｉｕｍ ｓｔｏｒｅ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｖｏｌｔａｇｅ— ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃａ ｃｈａｎｎｅｌｓ／７１．ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｘ ｏｆ Ｃａ２＋ｍｅ． ｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｓｔｏｒｅ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃａ２ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｉｎ ｅｘｃｉｔａｂｌｅ ｃｅｌｌｓ嗍．Ｂｒｅ ｃｏｕｌｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｍｏｏｔｈ ＢＵＳｃｌｅ ｓｔｒｉｐ ｏｆ ｔｈｏｒａｃｉｃ ａｏｒｔａ ｉｎ ｒａｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｈｉｇｈ ｃａｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ￣９１．１１１ｅ ａｉｍ ｏｆ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｈｏｗ Ｂｒｅ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｉｎｔｒａ． ｃｅｌｌｕｌａｒ ｆｒｅｅ ｃａｌｃｉｕｍ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｈｉｇｈ
维普资讯 http://www.cqvip.com 泸州医学院学报 ２００７年 第３０卷 第３期 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｕｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣｏＨｅｇｅ Ｖｏ１．３０ Ｎｏ．３ ２００７
ｃａｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ（５０ｍｍｏｌ・Ｌ－ ）． １ ＭＡＴＥＲＩＡＬＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ １．１ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅａｇｅｎｔｓ Ｂｒｅ ｗａｓ ａｂｓｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ Ｋｕｎ ｍｉｎｇ Ｌｏｎｇｊｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．ＬＴＤ．Ｆｕｒａ一２ＡＭ（Ｓｉｇ— ｍａ）ｗａｓ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｉｎ ＤＭＳＯ ｌｇ・Ｌ－ ａｎｄ ｓｔｏｒｅｄ ａｔ－２０￣Ｃ． Ｅｇｔａｚｉｃ ａｃｉｄ（ＥＧＴＡ，Ｓｉｇｍａ）ｗａｓ ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｉｎ ３Ｍ ｓ ａｎｄ ｋｅｐｔ ａｔ ４ｑＣ．Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆＤＭＥＭ）ｗａｓ ｆｒｏｍ Ｇｉｂｃｏ；ＴｒｉｔｏｎＸ一１ ００，ＨＥＰＥＳ，Ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）ｗｅｒｅ ｆｒｏｍ Ｓｉｇｍａ．Ｏｔｈｅｒ ｃｈｅｍｉ— ｃａｌｓ ｏｆ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｐｕｒｉｔｙ ｗｅｒｅ ｐｕｒｃｈａｓｅｄ ｆｒｏｍ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｆａｃｔｏｒｙ． Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｈａｎｋ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｍｍｏｌ・Ｌ ）：．ＮａＣＩ １３７，ＫＣＩ ５，ＣａＣＩ２ １．３，ＭｇＳＯ４・７Ｈ２０ ０．８，Ｎａ２ＨＰ０４ ０．６， ＫＨ２ＰＯ４ ０．４，ＮａＨＣＯ３ ３，ｇｌｕｃｏｓｅ ５．６，ａｎｄ ＨＥＰＥＳ １０， ｐＨ７．４． １．２ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ Ｔｈｏｒａｃｉｃ ａｏｒｔａｓ ｗｅｒｅ ｅｘｃｉｓｅｄ ｆｒｏｍ ｒａｂｂｉｔｓ，ｗｅｉｇｈ— ｉｎｇ １．２５－１．５ｋｇ，ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｂｙ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｚｕｎｙｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ．卟ｅ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｗａｓ ｃａｒｅｆｕｌｌｙ ｒｅｍｏｖｅｄ ｂｙ ｇｅｎｔｌｅ ａｂｒａｓｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｓｗａｂ，ａｎｄ ｆａｔ ｗａｓ ｐｅｅｌｅｄ ｏｕｔ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ａｄｖｅｎｔｉｔｉａ．Ｔｈｅｎ ｔｈｏｒａｃｉｃ ａｏｒｔａ ｓｅｇｍｅｎｔｓ ｗｅｒｅ ｃｕｔ ｉｎｔｏ １－１．５ｍｍ。ｐｉｅｃｅｓ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｌａｓｋｓ ｉｎ ＤＭＥＭ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２０％ｆｅｔａｌ ｃａｌｆ ｓｅｌ３１ｍ（ＦＣｓ１ ａｔ ３７℃ｉｎ ａ ｃｅｌｌ ｉｎｃｕｂａｔｏｒ ｗｉｔｈ ５％ＣＯ２．ＶＳＭＣ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ”ｖａｌｌｅｙ ａｎｄ ｈｉｌｌ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ”．Ｗｈｅｎ ｃｅｌｌｓ ｂｅｃａｍｅ ｍｏｎｏｌａｙｅｒ ｏｆ ７０％～ ９０％ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｅ．ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ Ｏ．１ ２５％ ｔｒｙｐｓｉｎ ｆＡＭＲＥＳ．ＣＯ）．卟ｅ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｗａｓ ａｄｊｕｓｔｅｄ ｉｎｔｏ １￣１ ０９・Ｌ～．Ｔｒｉｐａｎ ｂｌｕｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｒａｔｅ ｏｆ ８５％－９５％． １．３ Ｆｕｒａ一２ＡＭ ｌｏａｄｉｎｇ ａｎｄ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｍｅａｓｕｒｅ— ｍｅｎｔ Ｉ ｅ ｃｅｌｌ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｗａｓ ｐｌａｃｅｄ ａｔ ３７￣Ｃ ｆ０ｒ ２Ｏ ｒａｉｎ．ｔｈｅｎ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ Ｆｕｒａ－２ＡＭ ３／￣ｍｏｌ・Ｌ『 ａｔ ３７％ ｆｏｒ ４０ ｍｉｎ ａｎｄ ｋｅｐｔ ｓｈａｋｉｎｇ． ｅ ｌｏａｄｅｄ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅｄ ａｔ １５０ｘｇ ｆｏｒ ５ｍｉｎ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｗａｓｈｅｄ ｔｗｉｃｅ ｗｉｔｈ Ｈａｎｋ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｏ．２％ＢＳＡ．Ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｕｓｐｅｎｄｅｄ ｗｉｔｈ Ｈａｎｋ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｏ．２％ＢＳＡ ｏｒ Ｃａ２ Ｌｆ＿ｒｅｅ Ｈａｎｋ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｏ．２％ＢＳＡ ｉｎ ａｃｃｏｒｄａｎｃｅ ｗｉｔｈ ｄｅｍａｎｄｓ．Ｂｒｅ ｗａｓ ａｄｄｅｄ １ ５ｍｉｎ ｐｒｉｏｒ ｔｏ ｔｈｅ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ． Ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｕｓｉｎｇ ＲＦ—－５０００ ｆｌｕｏｒｏｓｐｅｃｔｒｏｐｈｔｏｍｅｔｅｒ ａｔ ｋｅｘ ３４０ ａｎｄ ｋｅｘ ３８０ ｎｍ ａｎｄ ｋｅｍ ４８４￣１ ｎｍ（Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｏｕｒ ｅｘｐｅｒｉ— ｍｅｎｔａｌ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｋｅｍ ｗａｓ ４８４＋１ ｎｍ）．【Ｃａ２ ］ｉ ｗａｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｆｏｒｍｕｌａ：［Ｃａ２ ］ｉ＝Ｋｄ ｘ Ｒ－Ｒｍｉｎ）／（Ｒｍａｘ —Ｒ）】ＸＦＤ／ＦＳ．ｗｈｅｒｅ Ｋｄ ｗａｓ ２２４ ｎｍｏｌ・Ｌ～．Ｒ（ ｗａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ．Ｒｍａｘ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ａｄｄｉｎｇ ｔｒｉｔｏｎＸ－１ ００（Ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｃｏｎ— ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ Ｏ．１％）ａｎｄ Ｒｍｉｎ ｂｙ ＥＧＴＡ Ｔｈｅ ｆｉｎａｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ５ ｍｍｏ１．Ｌ １．Ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ＦＤ ａｎｄ Ｆｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｏｆ Ｆｕｒａ一２ ａｔ ３８０ ｎｍ ｉｎ Ｃａ２Ｌ ｆｒｅｅ ａｎｄ ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｃａ“，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ａｎｔ— ｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｗａｓ ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ ｂｅｆｏｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎ． １．４ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ Ｄａｔａ ｗｅｒｅ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｓ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｔ ｔｅｓｔ． ２ ＲＥＳＵＬ＿ＴＳ ２．１ ｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｂｒｅｖｉｓｃａｐｉｎｅ ｏｎ ｒｅｓｔｉｎｇ［Ｃａ２ｑｉ ＶＳＭＣｓ ｉｎ ａ Ｃａ２＊－ｆｒｅｅ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ２７０￣８４ ｎｍｏ卜Ｌ『 ｏｆ『Ｃａ２＋］ｉ．ＶＳＭＣｓ ｉｎ Ｃａ ＊ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｈａｎｋ’ｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ２７０￣８４ ｎｍｏ卜Ｌ『 ｏｆ『Ｃａ２ １ｉ．Ｐｒｅｉｎ— ｃｕｂａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｂｒｅ１Ｏ ，１Ｏ－６，１Ｏ－５，３×１０一 ｎｏｌ・Ｌ一 ｃｏｕｌｄ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｄｅｃｒｅａｓｅ［Ｃａ２ 】ｉ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕ— ｌａｒ ｃａｌｃｉｕｍ．ｂｕｔ ｈａｄ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｉｎ ｔｈｅ ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｌｃｉｕｍ，Ｂｒｅ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ