人血免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法
人血免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法（新增）
本法系依据过量的6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）在一定条件下和氨基酸形成稳定的衍生产物（柱前衍生），用高效液相色谱法测定衍生产物，根据衍生产物的含量计算甘氨酸含量。
照高效液相色谱法（附录III B）测定
色谱条件和系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为基质的C18反相色谱柱，颗粒度4μm，内径3.9mm,柱长150mm；柱温为37℃;以140mmol/L乙酸钠、17mmol/L 三乙胺pH 5.65、1μg/mlEDTA二钠盐为流动相A液，以100%乙腈为流动相B液，以纯水为流动相C液,流速为每分钟1.0ml，梯度洗脱32分钟（见梯度表），检测波长为248nm。甘氨酸与相邻色谱峰之间分离度应≥1.5；拖尾因子（T）为0.95～1.40之间(甘氨酸和α-氨基丁酸峰)。重复性RSD≤2.0%（甘氨酸对照品峰面积测量值）。
内标溶液的制备精密称取α-氨基丁酸对照品4.0g, 加超纯水至100ml定容。
对照品溶液的制备(1)精密称取甘氨酸标准2.5g加超纯水至100ml定容。(2)精密量取(1)项氨基酸标准溶液1.0ml，加9.0ml 1.5%磺基水扬酸，混匀静置2小时以上3000rpm离心10分钟，留取上清备用。①分别精密量取上清液50μl、100μl、125μl、150μl、200μl，置10ml容量瓶中，用纯水定容。②分别精密量取①项中各甘氨酸标准溶液0.1 ml，加0.4ml纯水，加内标0.02ml混匀备用。精密量取(2)②项甘氨酸标准溶液10μl放入衍生管中加70μl硼酸缓冲液(pH8～10)涡旋混和并加入20μl AQC衍生剂涡旋混和15秒，备用。
供试品溶液的制备精密量取供试品溶液1.0ml，加9.0ml 1.5%磺基水扬酸，混匀静置2小时以上3000rpm离心10分钟，留取上清备用。（1）精密量取离心上清液1.0ml，置10ml容量瓶中，用纯水定容。（2）精密量取（1）项中供试品溶液0.1 ml，加0.4ml纯水，加内标0.02ml混匀备用。精密量取(2)项供试品溶液10μl放入衍生管中加70μl硼酸缓冲液涡旋混和并加入20μl AQC衍生剂涡旋混和15秒, 备用。
测定法精密量对照品溶液与供试品溶液,分别注入液相色谱仪，记录色谱图32分钟。进样量为10μl。按内标法计算。
梯度表
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23例直接抗人球蛋白试验阳性患者输血结果分析及血液成分选择_徐静
23例直接抗人球蛋白试验阳性患者输血结果分析及血液成分选择 徐静 （赣州市人民医院输血科，江西赣州341000） 摘要：目的：对使用微柱凝胶交叉配血中直接抗人球蛋白试验阳性结果进行分析，探讨解决疑难配血的处理方法，并选择合适的血液成分。方法：对使用微柱凝胶交叉配血中23例直接抗人球蛋白试验阳性患者的临床资料进行回顾分析。结果：23例直接抗人球蛋白试验阳性患者微柱凝胶交叉配血试验中2例为不规则抗体阳性、主次侧均为阳性，21例为不规则抗体阴性、主侧阴性次侧阳性。结论：不规则抗体阳性、主次侧均为阳性的为自身溶血性贫血患者，宜选择不规则抗体对应抗原阴性的滤白洗涤红细胞；不规则抗体阴性、主侧阴性次侧阳性的血液病及尿毒症患者宜选择滤白洗涤红细胞；药物导致的不规则抗体阴性、主侧阴性次侧阳性贫血患者可选择滤白悬浮红细胞。 关键词：直接抗人球蛋白试验；疑难配血；血液成分 中图分类号：R457．1+3文献标志码：A文章编号：1001－5779（2012）06－0875－02 在输血前微柱凝胶交叉配血试验中常发现不相容，究其原因是患者直接抗人球蛋白试验（DAT）阳性，给治疗带来困难。直接抗人球蛋白试验（DAT）是利用抗人球蛋白血清与体内已被不完全抗体或补体致敏的试验。这些患者血清中往往含有自身抗体，当这些患者需要输血治疗时，自身抗体或同种抗体给输血前的交叉配血和血液成分的选择造成了很大的困难。1资料与方法 1．1一般资料本院2012年3 9月23例DAT阳性患者，年龄21 73岁，其中男12例，女11例，其中血液病7例，肾脏疾病6例，自身溶血性贫血1例，骨髓移植1例，外科使用头孢类药物引起的疾病8例。 1．2材料 — 578 —
人血免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法
人血免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法（新增） 本法系依据过量的6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）在一定条件下和氨基酸形成稳定的衍生产物（柱前衍生），用高效液相色谱法测定衍生产物，根据衍生产物的含量计算甘氨酸含量。 照高效液相色谱法（附录III B）测定 色谱条件和系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为基质的C18反相色谱柱，颗粒度4μm，内径3.9mm,柱长150mm；柱温为37℃;以140mmol/L乙酸钠、17mmol/L 三乙胺pH 5.65、1μg/mlEDTA二钠盐为流动相A液，以100%乙腈为流动相B液，以纯水为流动相C液,流速为每分钟1.0ml，梯度洗脱32分钟（见梯度表），检测波长为248nm。甘氨酸与相邻色谱峰之间分离度应≥1.5；拖尾因子（T）为0.95～1.40之间(甘氨酸和α-氨基丁酸峰)。重复性RSD≤2.0%（甘氨酸对照品峰面积测量值）。 内标溶液的制备精密称取α-氨基丁酸对照品4.0g, 加超纯水至100ml定容。 对照品溶液的制备(1)精密称取甘氨酸标准2.5g加超纯水至100ml定容。(2)精密量取(1)项氨基酸标准溶液1.0ml，加9.0ml 1.5%磺基水扬酸，混匀静置2小时以上3000rpm离心10分钟，留取上清备用。①分别精密量取上清液50μl、100μl、125μl、150μl、200μl，置10ml容量瓶中，用纯水定容。②分别精密量取①项中各甘氨酸标准溶液0.1 ml，加0.4ml纯水，加内标0.02ml混匀备用。精密量取(2)②项甘氨酸标准溶液10μl放入衍生管中加70μl硼酸缓冲液(pH8～10)涡旋混和并加入20μl AQC衍生剂涡旋混和15秒，备用。 供试品溶液的制备精密量取供试品溶液1.0ml，加9.0ml 1.5%磺基水扬酸，混匀静置2小时以上3000rpm离心10分钟，留取上清备用。（1）精密量取离心上清液1.0ml，置10ml容量瓶中，用纯水定容。（2）精密量取（1）项中供试品溶液0.1 ml，加0.4ml纯水，加内标0.02ml混匀备用。精密量取(2)项供试品溶液10μl放入衍生管中加70μl硼酸缓冲液涡旋混和并加入20μl AQC衍生剂涡旋混和15秒, 备用。 测定法精密量对照品溶液与供试品溶液,分别注入液相色谱仪，记录色谱图32分钟。进样量为10μl。按内标法计算。 梯度表 1
免疫比浊法检测免疫球蛋白
免疫比浊法检测免疫球蛋白 一、实验目的 利用免疫比浊法绘制标准曲线，并检测样品中免疫球蛋白的浓度。（本小组检测的为IgG样品） 二、实验原理 1.抗原抗体反应(Antigen-antibody reaction)：抗原与其刺激机体产生的相应抗体在体内或体外发生特异性结合的反应。反应特点有：特异性、比例性、可逆性、敏感性。影响因素有：电解质、温度、酸碱度。 2.免疫比浊法：合适比例的抗原抗体形成的免疫复合物，在PEG作用下形成微粒，使样品浊度发生变化。当一束光线通过溶液受到光散射和光吸收两个因素的影响而使光的强度减弱，根据光的强度改变可测得微粒浓度。 分类：①透射比浊法（Transmission tubidimetry）当一定波长光线通过浊度发生变化的反应混合物时，由于被不溶性免疫复合物吸收而减弱，故在一定范围内吸光度与免疫复合物量呈正相关。当抗体浓度固定（过量），样品的浊度与其中所含抗原量成正比。（特点）透射比浊操作简便，适用于普通的自动生化分析仪和普通的分光光度计，几乎所有的实验室均能开展。不足的是灵敏度和精密度均不够理想，所需的抗血清量大，检测的时间较长。②散射比浊法（Nephelometry）光线通过检测溶液时，被其中所含的抗原抗体复合物折射而部分偏转，产生散射光，其强度与复合物的数量和散射夹角成正比，与光的波长成反比。（特点）优点是灵敏度、精密度均较高，检测快速。其缺点是需特定的分析仪器，试剂价格高。 本实验采用透射法。 3.聚乙二醇PEG的作用：在免疫反应中，为增强抗原抗体反应常使用增聚剂，3~4％的聚乙二醇，可破坏抗原抗体的水化层，促进抗原抗体靠近反应，但如浓度不适合，会影响其它溶质或产生非特异性聚集影响结果。 三、实验材料 免疫球蛋白A,G(IgA,IgG)测定试剂(试剂1[PEG]，试剂2[羊抗人IgA, IgG]）（1管/每组）免疫球蛋白A, G(IgA,IgG)校准品，蒸馏水，血清样本（1管） 微量加样枪、ep管（1.5mL离心管） 酶标仪、水浴箱 四、实验步骤 1.在7个EP管中各加250μL IgG试剂1（PEG）。 2.7管分别加入蒸馏水、校准品原液、1：2校准品、1：4校准品、1：8校准品、1：16校准品、样本各2μL。 3.混匀后37℃水浴5min。 4.7管各加入85μL IgG试剂2（羊抗人IgG）。 5.混匀后37℃水浴10min。 6.分别吸取200μL至96孔酶标板中，用酶标仪在700nm处读取OD值。 五、实验结果与数据处理 2.标准曲线
直接抗人球蛋白试验操作规程
XXX医院 直接抗人球蛋白试验操作规程 1、目的保证试验结果的准确性,确保临床输血安全。 2、适用范围XXX医院输血科。 3、职责输血科具有专业技术的工作人员负责本院患者直接抗人球蛋白检测,但只对该单份标本负责。 4、相关文件 试剂采购、保存与使用管理程序 设备采购、使用管理程序 消毒与清洁管理程序 标本采集、运输、保存与报废管理程序 5、相关记录 仪器设备的采购、使用与维护记录 仪器的温度记录 恒温水温箱的换水与消毒记录 消毒液的配置记录 清洁消毒记录 试剂采购、使用记录 标本交接与报废记录 6、实验原理 抗球蛋白试验(Coombs试验)就是测定结合在红细胞上的抗体与/或补体的主要方法。直接Coombs试验就是检测体内已被抗体与/或补体致敏的红细胞。间接Coombs试验时通过血清与细胞的孵育,证实抗体与/或补体在体外的结合。 抗体分子与补体成分都就是球蛋白。用人球蛋白免疫动物使其产生抗体即抗人球蛋白。抗人球蛋白试剂可凝集被人球蛋白致敏的红细胞。抗人球蛋白试剂可以与致敏在红细胞上的人球蛋白反应,通过桥梁作用使致敏红细胞出现凝集,呈现阳性反应。 7、仪器设备 玻璃试管(75X12mm)、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、交叉配血专用离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。 8、试剂 生理盐水、抗D(IgG)试剂(效价≧1:8),直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d),均为有合格证件的正品。 9、试剂保存与性能指标
9、1、保存:直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d)应置于2~8℃冷藏保存,切勿反复冻融。储存条件下有效期为24个月。 9、2、性能指标:直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d)为多特异性试剂。 外观:应澄清透明,无杂质; 灵敏度试验:分别与强抗体[抗D(IgG)],中等强度抗体(抗Jka)与弱抗体(抗Fya)致敏细胞反应,结果均为阳性。 效价:与IgG(抗D)致敏细胞凝集效价≧1:4;与C3致敏细胞凝集效价≧1:1。 特异性试验:阴性对照试验——与加入AB血浆的Rh(D)阳性细胞反应,结果为阴性;阳性对照试验——与抗D(IgG)致敏细胞反应,结果为阳性。 10、标本收集与处理 ①应使用EDTA抗凝标本,可反映体内红细胞被补体致敏的真实情况。 ②若怀疑冷抗体引起的直接抗球蛋白试验阳性,其血液标本凝固应保持在37℃,直到血清被分离出来为止。 11、实验方法与步骤 ①用生理盐水制备受检者3%红细胞悬液备用。 ②将1滴受检者3%红细胞悬液加入干净的试管中,用生理盐水洗涤3次[3400转/分钟(1000g),每次离心1分钟,离心后将上清液全部倒出]。 ③加入2滴抗IgG,C3d,以3400转/分钟(1000g)离心15秒。 ④将取出的试管持一定角度并轻轻摇动直至松动所有的细胞,然后反复倾斜试管,直至呈现均匀的细胞悬液(阴性)或凝集物(阳性)为止。 ⑤用肉眼或借助光学显微镜观察凝集情况,并按凝集程度进行初步判读结果并记录。 ⑥若初步判读结果为阴性,则在室温中放置5~10分钟,再离心一次,重新判读结果并记录。 ⑦阳性对照试验(IgG抗D致敏细胞): 将1滴阳性对照细胞加入干净的试管中;再加入2滴直接抗人球蛋白试剂(抗IgG,C3d);以3400转/分钟(1000g)离心15秒;将取出的试管持一定角度并轻轻摇动直至松动所有的细胞,然后反复倾斜试管,直至呈现均匀的细胞悬液(阴性)或凝集物(阳性)为止;再进行初步结果判读。 对初判为阴性结果的,再在试管中加入1滴阳性对照细胞,进行再离心、再悬浮与再判读结果。如果在制备阳性对照细胞悬液时,能充分去除所有未结合的球蛋白,则此步对照试验结果为阳性。(此步对照很关键,它就是检测细胞就是否洗涤充分的唯一方法。) ⑧阳性对照细胞(IgG抗D致敏细胞)制备:
甘氨酸检验标准操作规程
1. 目的 建立甘氨酸检验标准操作规程，规范操作。 2. 范围 适用于甘氨酸的检验。 3. 依据： 中国药典2010版二部。 4. 职责 4.1 起草：QC 审核：质量保证部负责人批准人：质量管理负责人。 4.2QC实施本规程。 4.3QA监督本规程的实施。 5. 内容 5.1 性状 本品为白色至类白色结晶性粉末；无臭，味甜。 本品在水中易溶，在乙醇或乙醚中几乎不溶。 5.2 鉴别 5.2.1 鉴别（1） 5.2.1.1 试液及仪器 一般实验仪器。 5.2.1.2 分析步骤 取本品与甘氨酸对照品各适量，分别加水溶解并稀释制成每1ml中约含10mg的溶液，作为供试品溶液与对照品溶液。吸取上述两种溶液各2μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丙醇-氨水(7:3)为展开剂，展开约10cm，晾干，在80℃干燥30分钟，喷以茚三酮的正丙醇溶液（1→100），在105℃加热至斑点出现，立即检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点的位置和颜色相同。 5.2.2 鉴别（2）
5.2.2.1 试液及仪器 一般实验仪器和红外可见分光光度仪。 5.2.2.2 分析步骤 用红外分光光度仪检测，采用压片法，取残渣约1～1.5mg，置玛瑙研钵中，加入干燥的 溴化钾或氯化钾细粉约200～300mg（与供试品的比约为200:1）作为分散剂，充分研磨混匀，置于直径为13mm的药片模具中，使铺展均匀，抽真空约2min，加压至（0.8×106）kPa（约8～10T/㎝2），保持压力2min，撤去压力并放弃后取出制成的供试片，目视检测，片子应呈透明状，其中样品分布应均匀，并无明显的颗粒状样品。亦可采用其他直径的压膜制片，样品与分散剂的用量需相应调整以制得浓度适合的片子。测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集929图）一致。 5.3 检查 5.3.1 酸度 5.3.1.1 试液及仪器 一般实验仪器。 5.3.1.2 分析步骤 取本品1.0g，加水20ml溶解后，依法测定（附录Ⅵ H），pH值应为5.6～6.6。 5.3.2 溶液的透光率 5.3.2.1 试液及仪器 一般实验仪器和紫外-可见分光光度仪。 5.3.2.2 分析步骤 取本品1.0g，加水20ml溶解后，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA），测定时，以配制供试品溶液的同批溶剂为空白校零，采用1 c m的石英吸收池，在430nm波长处测定透光率，不得低于98.0%。 5.3.3 氯化物 5.3.3.1 试液及仪器 一般实验仪器。 稀硝酸：取確酸105ml，加水稀释至1000ml,即得。本液含HN03 应为9.5%～10.5%。 硝酸银试液：即硝酸银滴定液。 5.3.3.2 分析步骤 取本品1.0g，加水溶解使成25ml，再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml 纳氏比色管中，加水使成约40ml，摇匀，即得供试品溶液。另取7.0ml标准氯化钠溶液〔称取
体液免疫球蛋白测定题库2-2-10
体液免疫球蛋白测定题库2-2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]多发性骨髓瘤患者血清中有（） A.游离的轻链和重链 B.异常Ig轻链升高 C.无免疫功能的Ig重链 D.单克隆IgM增高 E.大量的M蛋白 多发性骨髓瘤患者血清中有大量的M蛋白；巨琼蛋白血症患者血清中单克隆IgM增高；重链病患者血清和尿中存在着无免疫功能的Ig重链；轻链病患者血清中异常Ig轻链升高；良性单克隆丙种球蛋白白血病患者血清和尿中无游离的轻链和重链。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]男，45岁，因骨盆骨折住院。X线检查发现多部位溶骨性病变。实验室检查：骨髓浆细胞占25%，血沉50mmh，血红蛋白为80gL，尿本周蛋白阳性，血清蛋白电泳呈现M蛋白，血清免疫球蛋白含量IgG8gL、IgA12gL、IgM0.2gL。如进一步对该患者进行分型，则应为（）A.A.IgG型 B.IgA型 C.IgD型 D.IgE型 E.非分泌型
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]男，45岁，因骨盆骨折住院。X线检查发现多部位溶骨性病变。实验室检查：骨髓浆细胞占25%，血沉50mmh，血红蛋白为80gL，尿本周蛋白阳性，血清蛋白电泳呈现M蛋白，血清免疫球蛋白含量IgG8gL、IgA12gL、IgM0.2gL。目前最常用的鉴定M蛋白类型的方法为（）A.A.免疫固定电泳 B.免疫扩散 C.ELISA D.比浊法 E.对流电泳 https://www.360docs.net/doc/473413661.html,/ 打屁股小游戏
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]男，45岁，因骨盆骨折住院。X线检查发现多部位溶骨性病变。实验室检查：骨髓浆细胞占25%，血沉50mmh，血红蛋白为80gL，尿本周蛋白阳性，血清蛋白电泳呈现M蛋白，血清免疫球蛋白含量IgG8gL、IgA12gL、IgM0.2gL。该患者最可能的临床诊断是（） A.A.一过性单克隆丙种球蛋白病 B.持续性多克隆丙种球蛋白病 C.多发性骨髓瘤 D.冷球蛋白血症 E.原发性巨球蛋白血症
甘氨酸含量测定和甲硫氨酸含量测定
甘氨酸含量测定 甲硫氨酸含量测定 一、方法原理 根据《中国药典》甘氨酸含量测定：取本品约70mg，精密称定，加无水甲酸1.5ml使溶解，加冰醋酸50ml，照电位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于7.507mg的甘氨酸。 甘氨酸含量：药典2010版二部86页 二、实验仪器及推荐配置 雷磁自动电位滴定仪 231-01 pH玻璃电极217-01甘汞参比电极 三、实验试剂 1、滴定液：0.1mol/L高氯酸溶液配制 取无水冰醋酸（按含水量计算，每1g水加醋酐 5.22ml）750ml，加入高氯酸（70%-72%）8.5ml，摇匀，在室温下缓缓滴加醋酐23ml，边加边摇，加完后摇匀，放冷，加无水冰醋酸适量使成1000ml，摇匀，放置24小时。 2、基准纯邻苯二甲酸氢钾：在105℃干燥至恒重 3、样品 四、样品分析及结果计算 1、标定 取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰醋酸20ml使溶解。在自动电位滴定仪上滴定至终点，每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。 按下列公式计算 C HClO4=0.1(m邻苯二甲酸氢钾/0.02042)/V HClO4 0.1 –高氯酸标准溶液理论浓度（mol/L） C HClO4–高氯酸标准溶液浓度（mol/L） V HClO4 - 滴定至终点时消耗高氯酸的体积（ml） m邻苯二甲酸氢钾- 称取的邻苯二甲酸氢钾质量（g） 0.02042 - 与1.00ml高氯酸标准溶液[c(HClO4)0.1mol/L]相当的邻苯二甲酸氢钾的质量（g）2、样品分析 取样品约70mg，精密称定，加无水甲酸1.5ml使溶解，加冰醋酸50ml，在雷磁
体液免疫球蛋白测定
体液免疫球蛋白测定 第一节血清IgG、IgA、IgM测定 血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM定量测定方法一般有单向环状免疫扩散法、火箭免疫电泳法、ELlSA、免疫比浊法、放射免疫分析法等。临床常用单向环状免疫扩散法和免疫比浊法来测定血清免疫球蛋白含量。 一、血清IgG、IgA、lgM测定 （一）单向环状免疫扩散法 该法的原理是将抗血清均匀地分散于琼脂或琼脂糖凝胶内，胶板上打孔，孔内注入抗原或待测血清，抗原在含有抗血清的胶内呈放射状（环状）扩散，在抗原抗体达到一定比例时形成可见的沉淀环。在一定条件下，抗原含量越高，沉淀环越大。 （二）免疫比浊法 该法具有检测范围宽、测定结果准确、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）、敏感度高、稳定性好等优点。 二、血清IgG、IgA、IgM测定的临床意义 （一）年龄 新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。 （二）免疫球蛋白IgG、IgA、IgM均升高 慢性肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化患者血清中可见3种Ig均升高。慢性细菌感染如慢性支气管炎、肺结核，血IgG可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。SLE患者以IgG、IgA升高较多见。类风湿关节炎患者以IgM增高为主。 （三）单一免疫球蛋白升高 主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g／L以上，这种异常增多的免疫球蛋白其理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（MP）即M蛋白。此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白。由它所致的疾病称为免疫增殖病如多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。 （四）免疫球蛋白降低 先天性低Ig血症，主要见于体液免疫缺陷病和联合免疫缺陷病。IgA缺乏患者，易发生反复呼吸道感染。IgG缺乏患者，易发生化脓性感染。IgM缺乏患者，易发生革兰阴性细菌败血症。 第二节血清IgD和IgE测定 正常人血清中IgD含量很低，仅占血清免疫球蛋白总量的0.2%。膜结合型IgD（mIgD）构成BCR，是B 细胞分化发育成熟的标志。未成熟的B细胞仅表达mIgM，成熟B细胞可同时表达mIgM和mIgD。活化的B 细胞或记忆B细胞其表面的mIgD逐渐消失。 IgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌。其重要特征为糖含量高达12%。IgE为亲细胞抗体，可引起Ⅰ型超敏反应。IgE可能与机体抗寄生虫免疫有关。 第1页
1L--色氨酸含量的测定
1L--色氨酸含量的测定 1.1实验仪器与试剂 色氨酸样品，甲醇，STI501液相色谱仪梯度系统，UV501紫外检测器，7725I手动进样阀，N2000色谱工作站，0.03%KH2PO4溶液 1.2HPLC色谱分析条件 流动相为0.03%KH2PO4溶液(A)-甲醇(B)，线性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长276nm。 流动相时间(t/min) 5101520 A(%)80908070 B(%)20102030 1.3标准溶液的配制 精密称取色氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。 1.4标准直线的制作 精密称取色氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg的溶液，注入液相色谱仪，以色氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。 1.5发酵液中样品中色氨酸含量的测定 取发酵液，稀释配制成约500μg/ml的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。 2L-精氨酸含量的测定 2.1实验仪器与试剂 L-精氨酸标准样品，乙腈，STI501液相色谱仪梯度系统，UV501紫外检测器，7725I 手动进样阀，N2000色谱工作站，磷酸二氢铵。 PH计，磷酸，
2.2HPLC色谱分析条件 流动相:以磷酸二氢铵溶液(称取磷酸二氢铵1.15g,加水800m溶解后,用磷酸调节pH值至 2.0±0.1,加水稀释至1000ml)-乙腈为流动相，线性梯度淋洗;柱温为30℃检测波长为206nm；进样量：25μl。 2.3标准直线的制作 精密称取精氨酸标准标准品50mg，置100ml容量瓶中，振摇，用流动相溶解到刻度，作为供试品溶液，另取色氨酸样品适量，同法操作。精密称取精氨酸标准样品适量,分别稀释制成每1ml中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg的溶液，注入液相色谱仪，以精氨酸峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标，制作回归标准直线。 2.4发酵液中样品中精氨酸含量的测定 取发酵液，稀释配制成约500μg/ml的溶液，摇匀，过滤，取25μl进样，在高效液相色谱仪下测量，记录峰值面积，作图。 3L-甘氨酸含量的测定 3.1实验仪器和试剂 乙酸铵溶液；乙腈；L-甘氨酸标准样品；STI501液相色谱仪梯度系统，UV501紫外检测器，7725I手动进样阀，N2000色谱工作站。 3.2ＨＰＬＣ色谱分析条件 流动相:A为0.02%mol/L乙酸铵溶液(PH=6.5):B为乙腈，线性梯度淋洗；流速:110mL/min；柱温:30℃；进样量:２0μL。 梯度洗脱表3 流动相时间(t/min) 102030405060 A(%)806040406080 B(%)204060604020 3.3标准直线的制作 方法同2.2节
甘氨酸铁铜锰锌含量测定方法
甘氨酸铁含量的测定 1 试剂和溶液 1.1 稀盐酸：2+3溶液； 1.2 正二氮杂菲试液（邻菲罗啉）：以700mg硫酸亚铁溶于100ml水中作溶剂，配成含邻菲罗啉15mg/ml溶液； 1.3 硫酸高铈：0.1mol/L的标准溶液； 1.4 硫酸试液：1+9 溶液； 1.5 磷酸试液：1+9 溶液。 2 测定方法 称取0.8g试样（准称至0.0002g）于250ml三角瓶中，加入盐酸溶液25ml溶解。加100ml 水，6ml硫酸和2ml磷酸，再加指示剂5滴，用硫酸高铈标准溶液滴定至绿色，同时做空白校正。 3 结果计算 甘氨酸铁中铁的百分含量按下式计算： 0.05585×Ｃ·(Ｖ–Ｖ0) ×100 m 式中：C——硫酸高铈标准溶液的摩尔浓度mol/L； V——样品消耗硫酸高铈标准液体积ml； V0——空白试验消耗硫酸高铈标准液体积ml； 0.05585——每毫摩尔铁的质量克数； m——试样质量g。
1 原理 锰离子与乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na ）生成络合物（EDTA-Mn ）比镁离子与EDTA-2Na 生成络合物（EDTA-Mg ）稳定。将试样用水溶解，在PH 大于6时，于试验溶液中加入过量的EDTA-2Na ，与锰离子络合。在PH 大于10时，用镁标准溶液滴定过量的EDTA-2Na ，指示剂铬黑T 在终点时由蓝色转为紫红色。 2 试剂 2.1 抗坏血酸； 2.2 酒石酸； 2.3 氨-氯化铵缓冲液(PH=10)； 2.3 1:1稀氨水试液； 2.4 铬黑T 指示剂（5g/L ）； 2.5 乙二胺四乙酸二钠约为0.1mol/L ； 2.6 硫酸镁标准溶液0.1mol/L ； 3 操作方法 称取0.3g 试样，称准至0.0002g ，置于250ml 三角瓶中，加100ml 水溶解，再加0.5g 抗坏血酸，溶解后，再加1g 酒石酸，加5ml 稀氨水试液；准确加入25.00ml 乙二胺四乙酸二钠溶液，加热至60－70℃，冷却，再加10ml 氨-氯化铵缓冲溶液，5滴铬黑T 指示剂，摇匀，用硫酸镁标准溶液滴定，试验液由蓝色转为紫红色为终点。 4 结果计算 甘氨酸锰中锰的百分含量按下式计算 式中： C ——硫酸镁标准溶液的浓度 mol/L ； Ｖ0——空白试验所消耗的硫酸镁标准溶液的体积 ml ； V ——试样液消耗硫酸镁标准溶液的体积 ml ； 0.05494——每毫摩尔锰的质量克数； m ——试样质量 g ； 0.05494×Ｃ·(Ｖ0—Ｖ) m ×100
甘氨酸全面介绍资料讲解
甘氨酸 科技名词定义 中文名称：甘氨酸 英文名称：glycine;Gly 定义：学名：2-氨基乙酸。非手性分子，最简单的天然氨基酸。L-甘氨酸是蛋白质合成中的编码氨基酸，哺乳动物非必需氨基酸，在体内可以由葡萄糖转变而来，因具有甜味而得名。符号：G。 应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；氨基酸、多肽与蛋白质（二级学科） 以上内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 甘氨酸 (Glycine)又名氨基乙酸，为非人体必需氨基酸。名称缩写：Gly 甘氨酸是氨基酸系列中结构最为简单，人体非必需的一种氨基酸，在分子中同时具有酸性和碱性官能团，在水溶液中为强电解质，在强极性溶剂中溶解度较大，基本不溶于非极性溶剂，而且具有较高的沸点和熔点，通过水溶液酸碱性的调节可以使甘氨酸呈现不同的分子形态。 目录 成分及性质 1.基本信息 2.性能描述 3.物理参数 4.用途说明 5.危险说明 6.物化性质
成分及性质 基本信息 甘氨酸 产品编号：FZS118 中文名称：甘氨酸 中文别名：甘氨酸；氨基乙酸，氨基醋酸 英文名称：Aminoacetic acid
英文别名：Gly ;Amino acetic acid;Aminoethanoic acid;Glycine 线性分子式：NH2CH2COOH 分子结构式 [1] 等级：AR CAS号：56-40-6 分子式：C2H5NO2 分子量：75.07 相对密度1.595[2] 熔点182℃[2] 性能描述 外观描述：白色结晶或结晶性粉末。味甜。溶于水，微溶于吡啶，不溶于乙醚。 物理参数 熔点：182℃ 密度：1.595沸点：233°C[2] 用途说明 用作络合滴定指示剂，色层分析用试剂；缓冲剂；比色法测定氨基酸时作标准用。检验铜、金和银。制备组织培养基。在有机合成和生物化学中用作生化试剂和溶剂。 脊髓抑制性神经递质，NMDA受体的变构调节 分子生物学级用做缓冲液组分，在耦联磷酸激酶反应中用于末端标记限制性酶切片段；Tris -甘氨酸缓冲液组分，用于SDS -聚丙烯酰胺凝胶电泳中的体外翻译产物应用中。 贮存运输：密封保存，采用塑料袋，外套丙纶编织袋、麻袋或圆木桶包装，每袋25kg。贮于阴凉通风干燥处。按一般化学品规定贮运。 危险说明
免疫球蛋白IgA测定
免疫球蛋白IgA测定 1检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2原理 免疫透射比浊法 抗免疫球蛋白A抗体和样本中的抗原形成抗原抗体复合物，出现凝集，进行透射比浊检测。通过加入PEG可促使反应迅速达到终点，可增加灵敏度，降低样本中抗原过剩导致假阴性的风险。 3标本要求 3.1使用新鲜血清,不使用血浆. 3.2在采集血液后2h分离血清. 3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次. 3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.
4试剂 4.1 试剂：上海罗氏诊断产品有限公司IgA试剂盒,国械注进20142405056 YZB/GER 5724-2014） 4.1.1 试剂组成 R1:TRIS 缓冲液：20 mmol/l，pH 8.0；氯化钠：200 mmol/L；PEG：3.6%；防腐剂和稳定剂。 R2:抗人免疫球蛋白A抗体（羊）：取决于滴度；TRIS缓冲液：20 mmol/l；氯化钠：150 mmol/L；防腐剂。 4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 4.1.3 试剂稳定性与贮存：2-8°C下保存期限：见试剂标签上的有效期。机上稳定期：90天。 4.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染则试剂不能使用。 4.2 校准品：使用罗氏多项生化校准品提供的IgA校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。 5 仪器
AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪 6 操作步骤 6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。 6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。 6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。 6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。 7 质量控制 在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
甘氨酸衍生测定
附录 A (规范性附录) 标志性成分测定方法 A．1甘氨酸的测定 A.1.1试剂与材料 本标准使用的水符合GB/T 6682规定的一级水，除另有规定外仅使用分析纯试剂。 A.1.1.1甲醇色谱级 A.1.1.2乙腈分析纯 A.1.1.3 乙酸铵分析纯 A.1.1.4巯基乙醇分析纯 A.1.1.5 硼酸钠 A.1.1.6邻苯二甲醛（OPA） A.1.1.7 甘氨酸储备液：精密称取甘氨酸对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）适量，加水溶解制成每1L含1g的溶液，即得。 A.1.1.8衍生试剂：称取0.1gOPA用10mL甲醇溶解，加0.1mL巯基乙醇,用 0.4moL/L硼酸钠缓冲液定容至100mL 。 A.1.2 仪器 A.1.2.1 高效液相色谱仪：带荧光检测器 A.1.2.2 分析天平:感量0.1mg A.1.2.3 滤膜：孔径为0.45μm A.1.3 分析步骤 A.1.3.1标准工作曲线的制作 甘氨酸标准溶液: 0 ,1 ,5，10 ,15 ,20 mg/ L ,分别准确吸取甘氨酸标准储备液0 、0.1 , 0.5 、1.0 、1.5 、2.0 mL 加水定容至100mL 。 A.1.3.2 样品处理 精密量取样品液5ml,加15ml乙腈振摇，滤纸过滤（待样品出现絮状沉淀后过滤），滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试液。
A.1.3.3衍生反应 标准曲线: 分别准确吸取甘氨酸标准溶液0.5mL 于2mL 的棕色自动进样瓶中,临进样前加入0.5mL OPA 衍生试剂,反应1min 后,立即进样。 样品衍生:用移液器准确移取样品滤液0.5 mL于2 mL 的棕色自动进样瓶中,再准确加入0.5 mLOPA 衍生试剂,反应1 min 后,立即进样。经HPLC分析,测定峰面积,从标准曲线查得测定液中甘氨酸的含量。 A.1.3.4 色谱条件 ( 416 ×250mm) A.1.3.4.1色谱柱：Agilent Eclipse XDBC 18 A.1.3.4.2 流动相 流动相A：0.02mol/L乙酸铵溶液；流动相B：25%乙腈；流动相C：10%甲醇A.1.3.4.3 流速：1.0ml/min； A.1.3.4.4 检测波长：210nm； A.1.3.4.5 进样量：10μl A.1.3.4.6柱温：30℃ A.1.3.4.7荧光检测器：E x=330nm Em=460nm A.1.3.5 结果计算 X = c ×F 式中：X—试样中游离甘氨酸的含量；g/L； F—样品稀释倍数
附录人血免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法(新增)(精)
附录人血免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法（新增） 本法系依据过量的6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯（AQC）在一定条件下和氨基酸形成稳定的衍生产物（柱前衍生），用高效液相色谱法测定衍生产物，根据衍生产物的含量计算甘氨酸含量。 照高效液相色谱法（附录III B）测定 色谱条件和系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为基质的C18反相色谱柱，颗粒度4μm，内径3.9mm,柱长150mm；柱温为37℃;以140mmol/L乙酸钠、17mmol/L 三乙胺pH 5.65、1μg/mlEDTA二钠盐为流动相A液，以100%乙腈为流动相B液，以纯水为流动相C液,流速为每分钟1.0ml，梯度洗脱32分钟（见梯度表），检测波长为248nm。甘氨酸与相邻色谱峰之间分离度应≥1.5；拖尾因子（T）为0.95～1.40之间(甘氨酸和α-氨基丁酸峰)。重复性RSD≤2.0%（甘氨酸对照品峰面积测量值）。 内标溶液的制备精密称取α-氨基丁酸对照品4.0g, 加超纯水至100ml定容。 对照品溶液的制备(1)精密称取甘氨酸标准2.5g加超纯水至100ml定容。(2)精密量取(1)项氨基酸标准溶液1.0ml，加9.0ml 1.5%磺基水扬酸，混匀静置2小时以上3000rpm离心10分钟，留取上清备用。①分别精密量取上清液50μl、100μl、125μl、150μl、200μl，置10ml容量瓶中，用纯水定容。②分别精密量取①项中各甘氨酸标准溶液0.1 ml，加0.4ml纯水，加内标0.02ml混匀备用。精密量取(2)②项甘氨酸标准溶液10μl放入衍生管中加70μl硼酸缓冲液(pH8～10)涡旋混和并加入20μl AQC衍生剂涡旋混和15秒，备用。 供试品溶液的制备精密量取供试品溶液1.0ml，加9.0ml 1.5%磺基水扬酸，混匀静置2小时以上3000rpm离心10分钟，留取上清备用。（1）精密量取离心上清液1.0ml，置10ml容量瓶中，用纯水定容。（2）精密量取（1）项中供试品溶液0.1 ml，加0.4ml纯水，加内标0.02ml混匀备用。精密量取(2)项供试品溶液10μl放入衍生管中加70μl硼酸缓冲液涡旋混和并加入20μl AQC衍生剂涡旋混和15秒, 备用。 测定法精密量对照品溶液与供试品溶液,分别注入液相色谱仪，记录色谱图32分钟。进样量为10μl。按内标法计算。 梯度表
血清免疫球蛋白测定(一)
血清免疫球蛋白测定(一) B-淋巴细胞受抗原刺激后，引起一系列细胞形态与生化特性变化，转化为淋巴母细胞并增生繁殖，最后演化为浆细胞，合成免疫球蛋白。免疫球蛋白普遍存在于生物体的血液、体液、外分泌液及某些细胞（如淋巴细胞）的细胞膜上。免疫球蛋白是一组具有抗体特性的球蛋白，其分子量很大，含有1000个以上的氨基酸分子，均由其共同抗原的两个相同的轻链（L链）和具有特异性抗原的两个不同的重链（H链）组成。 1分类 根据重链的氨基酸组成不同，免疫球蛋白可分为分五类：免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）。 1.1IgG IgG是人体的主要免疫球蛋白，也是唯一能通达胎盘的免疫球蛋白。根据IgG的重链氨基酸顺序的差别，可分为IgG1，IgG2，IgG3，IgG4各亚类。IgG是主要抗感染抗体，对各种细菌、病毒有抗体活性，并有激活补体的作用。 1.2IgA IgA是分泌液中主要抗体，可分为IgA1和IgA2两个亚类。存在于血清中的称血清型IgA，存在于泪液、乳汁、胃肠道、呼吸道和泌尿生殖道分泌液中的称分泌型IgA，对局部粘膜有抗菌和抗病毒作用。 1.3IgM IgM可分为IgM1和IgM2两个亚类。是抗原刺激最先产生的免疫球蛋白，有较强的固定补体、溶解细菌及细胞的能力。IgM是抗革兰氏阴性菌和异体红细胞的主要抗体，也是存在于B淋巴细胞表面的主要免疫球蛋白。 1.4IgD 其作用与过敏反应有关。据报道，IgD可对某些抗原起反应，如青霉素、胰岛素、核抗原、甲状腺抗原等。它存在于B淋巴细胞表面，构成早期的膜受体，具有识别抗原，制动B淋巴细胞的分化作用。 1.5IgE 与I型变态反应有关，具有亲细胞特性。IgE通过Fc段与肥大细胞、嗜碱粒细胞上的Fc受体结合，故属亲同种细胞性抗体。当机体再次接触同种抗原后，过敏原即与结合在细胞表面的IgE作用，使细胞释放介质，引起平滑肌痉挛，血管通透性增加等过敏反应，还具有抗寄生虫感染作用。 2正常参考值 IgG：8～16g/L，IgA：1～4g/L，IgM：0.5～1.9g/L，IgD：0.01～0.4g/L，IgE：0.001～0.009g/L。3临床意义 3.1血清免疫球蛋白降低 血清免疫球蛋白水平取决于免疫球蛋白合成和分解代谢的速率以及由体内丢失的程度。血清免疫球蛋白降低可由于合成不足，丢失增多和分解加快引起。合成不足：血清免疫球蛋白降低可由于原发性或继发性合成缺陷所致。原发性免疫缺陷病有性联先天性丙种球蛋白缺乏症、婴儿暂时性丙种球蛋白低下症、伴IgM升高的性联低丙种球蛋白血症、选择性IgA缺乏症、选择性IgM缺乏症、选择性IgG亚类缺乏症等。继发性免疫缺陷病有慢性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症和恶性肿瘤等。丢失增多：从胃肠道丢失的见于溃疡性结肠炎、消化道癌肿、吸收不良综合征、淋巴瘤、肠淋巴管扩张症。从皮肤丢失的有急性灼伤、特异反应性皮炎。从浆膜腔丢失的有胸膜炎、腹膜炎、反复抽胸腹水。从肾脏丢失的有肾小球肾炎（微小病变型、膜性、增殖性）、肾静脉血栓形成、SLE和淋巴瘤。主要是由于蛋白从尿中丢失或毒素抑制免疫球蛋白合成，后者首先影响IgM，其次影响IgA，然后再影响IgG。分
间接抗人球蛋白试验标准操作规程
间接抗人球蛋白试验标准操作规程 (微柱卡式法) 一、目的 为规范抗人球蛋白（Coombs 试验）的技术操作，保证试验的结果的准确性，为临床诊断及治疗提供依据，特制定本规程。 二、使用范围 适用于输血科进行抗人球蛋白试验的操作。 三、职责 输血科技术人员负责抗人球蛋白试验的操作。 四、原理 利用抗人球蛋白血清可与体内已被不完全抗体或补体致敏红细胞产生凝集反应，可检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，如新生儿溶血病(胎儿红细胞被母亲血型抗体致敏)、溶血性输血反应(输入的不相合红细胞被受血者不完全抗体致敏)、自身免疫性溶血性贫血(患者红细胞被自身抗体致敏)以及药物诱导产生的自身抗体（由甲基多巴类药物、青霉素等所致）。 五、试剂及材料 (一)试剂：抗人球蛋白检测卡（西班牙 Diagnostic Grifols,S.A公司生产）、IgG 抗D、正常人AB血清 (二)设备：戴安娜专用离心机（型号：DG SPIN）、戴安娜专用孵育器（型号：DG THERM）、微量移液器、离心机、试管等 六、标本要求： (一)抽取受血者抗凝（抗凝剂为EDTA.K2）静脉血2-3ml,在3000r/min条件下离心5分钟备用。 (二)标本保存：血液样本必须密封，2-8℃保存7天。 七、操作步骤 (一)标本及其他试剂处理：
1、实验前将未开的抗人球蛋白检测卡放置于戴安娜专用离心机离心9分钟左右，取出待用 2、离心标本取血清备用（或准备已知抗体的血清） 3、配制1%已知抗原红细胞悬液（或1%受检红细胞悬液） 4、1%D阳性红细胞：任选3个O型D阳性红细胞混合，配成1%红细胞悬液 (二) 在抗人球蛋白检测卡上标明患者姓名、病房床号、阴性和阳性对照，撕掉卡上的封条 (三)按下表将各种反应物加入相应反应孔中。 间接抗人球蛋白试验操作步骤 反应物待测孔阳性对照孔阴性对照孔血清（已知或受检）25ul －－ 1%红细胞悬液（受检或已知）50ul －－ IgG抗D血清－25ul － 1%D阳性O型红细胞悬液－50ul 50ul AB型血清－－25ul (四) 将卡放入37℃孵育箱15分钟，移出放入离心机9分钟，取出观察结果。 八、结果判定： 阳性对照孔凝集，阴性对照孔不凝集，待测孔凝集者为阳性，表示受检血清中有不完全抗体（或受检红细胞上有相应抗原），待测孔不凝集为阴性。如阳性或阴性对照出现不规则结果应分析原因。 九、注意事项： 如受检血清中检出有不完全抗体，可将受检血清以盐水作倍量稀释后，按上法进行测定。
实验报告甘氨酸的含量测定
甘氨酸的含量测定——电位滴定法 生药1011 第四组 一、应用范围： 本方法采用滴定法测定甘氨酸原料药中甘氨酸的含量。 本方法适用于甘氨酸原料药。 二、方法: 供试品无水甲酸溶解后，加冰醋酸，照电位滴定法，用高氯酸滴定液滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，根据滴定液使用量，计算甘氨酸的含量。三、原理： 和一COOH，为两性物质，在水溶液中，它的酸式电氨基酸分子中含有一NH 2 离和碱式电离的趋势都很弱(如氨基乙酸其羧基上的氢Ka=2．5×10-10，氨基作为碱Kb=2．2×10-12)，因此无法准确滴定。 作滴定剂，结晶紫为指示剂准确但在非水介质(如冰乙酸)中，可以用HC10 4 滴定氨基酸，产物为氨基酸的高氯酸盐，呈酸性。 结晶紫在强酸介质中为绿色，pH=2左右为蓝色，pH>3时为紫色，可以指示此反应的滴定终点。(由紫色到蓝色到蓝绿到绿色到黄色变化) 四、实验材料 1、试剂： （1）冰醋酸 （2）无水甲酸 （3）高氯酸滴定液（0.1mol/L） （4）结晶紫指示液 （5）基准邻苯二甲酸氢钾 2、仪器设备：电位滴定仪、酸度计或电位差计、容量瓶、烧杯、磁力搅拌器、搅拌子等 五、操作步骤 1.高氯酸滴定液（0.1mol/L）试样制备 配制：取无水冰醋酸（按含水量计算，每1g水加醋酐5.22mL）750mL，加入高氯酸（70~72%）8.5mL，摇匀，放冷，加无水冰醋酸适量使成1000mL，摇匀，放置24小时。若所测供试品易乙酰化，则须用水分测定法测定本液的含水量，再用水和醋酐调节至本液的含水量为0.01%~0.2%。 2.结晶紫指示液 取结晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解。 3.标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾约0.16g，精密称定，加无水冰醋酸20mL使溶解，加结晶紫指示液1滴，用本液缓缓滴定至蓝色，并将滴定结果用空白试验校正。每1mL高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于20.42mg的邻苯二甲酸氢钾。根据本液的消耗量与邻苯二甲酸氢钾的取用量，算出本液的浓度。 4.酸度计的校正 （1）接通电源，开机预热5min。