梅毒螺旋体检测(TRUST)
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专业资料整理 南三医检验
免疫作业指导书 梅毒螺旋体(TP)抗
体（TRUS ）T 文件编号：NSYJ-SOP-MY-066 版本：A/0 生效日期：2010-01-01
梅毒螺旋体（TP ）抗体检测（TRUST ）
【检测用途】
本试剂采用VDRL 抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。供在白色卡片上
进行试验，以检测血清或血浆中反应素用。可作为梅毒病人的诊断和疗效之参考。
【检测原理】
梅毒非特异抗体检测是采用抗原抗体凝集反应。其原理如下：采用VDRL 抗原（牛心磷脂、 卵磷脂及胆固醇）重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，供在白色卡片上进行实验，以检 测血清或血浆中反应素用。
【试剂组成】
120人份480人份
1.抗原悬液
2.5ml ×1瓶10ml ×1瓶
2.阳性对照血清1ml ×1支1ml ×1支
3.阴性对照血清1ml ×1支1ml ×1支
4.试验专用卡120人份480人份
5.专用滴管和针头1套1套
6.使用说明书1份1份
【储存条件及有效期】
试剂盒于2℃~8℃保存，有效期为12个月
【使用方法】
1.定性试验
（1）分别吸取50微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。
（2）取待检血清或血浆50微升（不需灭活）置于纸卡的另一圆圈中。
（3）用专用滴管及针头垂直分别滴加TRUST 试剂1滴于上述血清中。
（4）按每分钟100转摇动8分钟，肉眼观察结果。
2.定量试验
将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后按上述定性方法进行试验，以呈现明显凝集反应的 最高稀释度作为该血清的凝集效价。
【结果判断】
1.阳性反应（+++~++++）：可见中等或较大的红色凝聚物。
2.弱阳性反应（+！++）：可见较小的红色凝聚物。
3.阴性反应（—）：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物。
【注意事项】
1.本试验在23~29℃条件下进行。
2.TRUST 试剂使用前充分摇匀。
3.本试验系非特异性反应，需结合临川进行综合分析，必要时需做梅毒螺旋体抗体特异性试 验。
梅毒trust tppa tpha
>梅毒螺旋体血球凝集试验(trepomema palidum hmagglutination assay,TPHA) 利用间接血凝法测定人血清或血浆中的梅毒螺旋体的特异性抗体，只要有微量的抗体(血清通常用作1∶80以上稀释)就可使致敏的红细胞发生凝集作用。试验方法中，试剂盒配置的血清吸收剂可消除试验中的生物学假阳性反应，提高试验的特异性。此试验用于确诊梅毒，具有快速、简便、敏感和特异等特点。 梅毒螺旋体明胶凝集试验(treponema pallidum particle assay,TPPA)的试验原理与TPHA基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏的红细胞，此致敏颗粒与人血清或血浆中的梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶颗粒为洋红色，在操作步骤上也较为方便，出结果较快。梅毒快速检测试纸条是根据双抗原夹心免疫层析原理，在硝酸纤维素膜上包被TP重组抗原，在玻璃纤维上吸附胶体金标记TP重组抗原，样品中的TP抗体首选与金标抗原结合形成复合物，顺膜渗透至包被反应区，与包被TP抗原结合，形成由胶体金抗原-TP抗体-抗原组成的紫红色反应带。本法简单，无需特殊设备，全部试验过程可在30分钟内完成，故特异性好。 TPHA梅毒螺旋体抗原血清试验其敏感性和特异性高，主要被用于梅毒确诊试验，但对疗效观察意义不大。TPHA是目前梅毒诊断的确诊试验，一旦试验呈阳性反应后，即使经过治疗，也终身不会转阴。TPPA是在TPHA基础上建立的一种新试剂，具有操作简便、不需其他仪器、操作中无需等待血液吸收、2小时读结果的优点。 甲苯胺红不加热血清试验（tolulized red unheated serum test,TRUST）是一种非梅毒螺旋体抗原血清试验，主要用于梅毒的筛选和疗效观察。 梅毒螺旋体感染人体后，宿主迅速对螺旋体表面的脂质作出免疫应答，在3~4周产生抗类脂质抗原的抗体（反应素），此时TRUST试验可呈阳性。 2原理编辑本段 用正常牛心肌的心类脂（Cardiolipin 二磷酸酰甘油衍生物）作为抗原，而不是用螺旋体作为抗原，来测定病人血清中的反应素（非特异性抗体---抗心磷脂抗体）。用来初步筛查
NJKM-SOP0301.17---梅毒TRUST检测作业指导书--Version4.0
梅毒TRUST检测作业指导书 1、试验原理： 梅毒非特异抗体检测是采用抗原抗体凝集反应。其原理如下：采用VDRL抗原（牛心磷脂、卵磷脂及胆固醇）重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，供在白色卡片上进行实验，以检测血清或血浆中反应素用。 2、样本收集和贮存： 标本仅限于血清或血浆。适宜标本量为血清或血浆500ul，最少标本用量为血清或血浆200ul，三天内检测的标本应在2-8℃保存，三天内不检测的标本应贮存在-20℃，同时避免反复冻融血清。 对于出现以下情况之一的标本应拒收：送检血清或血浆低于最少用量；蛋白变性标本；标本中含有颗粒物质；严重溶血、严重脂血的标本；有微生物污染的标本。 3、安全防范： 3．1检测试剂盒及内容物视为有传染性物质，属于生物危害物品。 3．2移液过程禁止用口。 3．3 在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 ^ 3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 4、试剂： 4．1 储存与稳定性： 试剂应在2-8℃保存，效期1年。 4．2试剂盒组成：（上海荣盛） TRUST抗原悬液×1瓶 阳性对照血清 1mL×1支 阴性对照血清 1mL×1支 实验专用卡片 120人份 专用滴管及针头 1套 ' 说明书 1份 5、仪器设备： 5. 1振荡器
5. 2微量移液器 6、操作步骤： 6. 1分别吸取阴性和阳性对照，各滴加l滴(50UL)（或用加样枪吸取50 UL)到反应卡的二个圈内铺匀。 6. 2吸取血清或血浆50UL (不需灭活)均匀涂满到白色卡片的另一个卡圈内。 6. 3轻轻摇匀抗原悬液，用加样枪吸取50 UL于血清圈内。 6. 4按每分钟100转振荡或摇动卡片8分钟后，立即肉眼观察结果。 6. 5结果记录于《免疫室夜班项目操作表2》。 7、结果解释 ？ 7．1肉眼见到较大或较小的红色凝聚物，定为阳性反应。代表该标本中可以检测出反应素。建议双份复查。 7．2 肉眼见到均匀的抗原颗粒而无凝集物，定为阴性反应。代表该标本中尚未检测出反应素。 7. 3 任何阳性结果需要与临床相联系来判定。 8、正常参考范围： 阴性(与年龄，性别，种族无关) 9、质量控制： 9．1只有全部使用本试剂盒内的试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。 9．2每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果经过稀释或改动都会导致检测的敏感度的降低。 9．3开始试验前，将所有试剂置于室温。 9．4 试验结果的可重复性依赖于充分混合试剂。使用前振荡装有对照血清及抗原悬液。9．5为避免干扰结果，高血脂的，溶血的，或污染的血清不要用于检测，样品不应加热灭活。 ； 9．6为排除专用滴管及针头所带来的加样量的不准确性，在每次加样血清标本及抗原悬液时需使用经校准过的加样枪。 9．7在每次更换新批号时为了验证试剂反应的标准性，需与旧批号平行的进行比对，应使用外部阳性血清及阴性血清。 10、方法学特性： 10．1精密度: 批内：平行做10个测试同一份标本，结果一致；
ELISA、RPR、TRUST、TPPA四种方法检测梅毒螺旋体抗体的价值
ELISA、RPR、TRUST、TPPA四种方法检测梅毒螺旋体抗体的价 值 目的：探讨ELISA、RPR、TRUST、TPPA四种方法检测梅毒螺旋体抗体的价值。方法：收集本院确诊为梅毒患者的血清标本，共计400份。同时选择朱诊断为梅毒的人群400例作为对照。将上述400份梅毒标本随机分为4份，分别接受ELISA、RPR、TRUST、TPPA检测。分析ELISA、RPR、TRUST、TPPA四种方法阳性检出情况及假阳性检出情况。结果：TPPA阳性检出率及假阳性检出率明显优于RPR、TRUST、TPPA三种检测方法。结论：本文作者认为TPPA操作繁琐，依赖人工，但是诊断特异性和敏感性高，RPR可以作为梅毒诊断的初筛试验，但是易受梅毒之外疾病的影响。ELISA自動化程度高，减少人为操作的影响，对梅毒早期辅助诊断较好。TRUST有助于判断梅毒再感染及复发。 标签：ELISA；RPR；TRUST；TPPA 梅毒为常见的性传播疾病，传染力强，危害性大，已经成为危害公共安全的疾病。2010～2011年梅毒发病率分别为：15.6/10万、17.5/10万，美国2010年发现梅毒发病率仅为0.2/10万，可见我国梅毒疾病防控形式不容乐观。梅毒检测不可避免存在假阳性和假阴性现象，如何选择灵敏度高、特意性强的指标成为本次研究的重点。因此本文作者对2010年1月至2017年2月本院采集的梅毒血清样本，分析ELISA、RPR、TRUST、TPPA四种方法的检测价值。 1资料与方法 1.1资料 收集2010年1月至2017年2月本院确诊为梅毒患者的血清标本，共计400份，样本来源为男性202例，女性198例，年龄17～62岁，平均年龄（38.51±15.24）岁。同时选择未诊断为梅毒的人群400例作为对照。将上述400份梅毒标本随机分为4份，分别接受ELISA、RPR、TRUST、TPPA检测。 1.2仪器 全自动加样器、离心机、全自动酶联免疫分析仪、振荡器、背光式读片灯等。 1.3测定方法 1.3.1TPPA检测待测血清和TPPA混合，用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与血清中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的凝集反应。 1.3.2ELISA检测纯化的梅毒螺旋体的重组蛋白为抗原以包被固相板条，加梅毒血清和辣根过氧化物酶标记的抗人体IgG抗体。
梅毒检验参考
梅毒检验参考梅毒为定性检测，临界值为1，在定标通过，质控通过的情况下，建议按以下步骤发单： 磁微粒Anti-TP 梅毒螺旋体抗体检测比较特殊，其检测标志物有两种，一种为梅毒螺旋体自身的物质引起机体免疫反应产生的抗体称为梅毒特异性 抗体，另一种为梅毒螺旋体破坏机体细胞后，释放心磷脂等物质，这些物质作为抗原引起机体免疫反应产生的抗体称为梅毒非特异性抗体，因此梅毒在临床上的检测与筛查需要同时检测这两种标志物并根据其结果来共同鉴定。 目前常用的梅毒特异性抗体检测方法有酶联免疫（EIA），化学发光（CIA），凝集法（TPPA），荧光吸收法（FTA-ABS）等，梅毒非特异性抗体检测方法有凝集法（RPR/TRUST），性病实验室玻片试验（VDRL）等。图7为中国疾病预防与控制中心（CDC）2010年发布的梅毒检测流程，用酶联免疫或化学发光法进行初筛，阴性结果报梅毒阴性，阳性结果进行非特异性抗体检测，阳性结果报阳性，阴性结果再用TPPA 进行确认。 图1 美国CDC梅毒检测流程
异性抗体检测 临床意义 RPR/VDTL TPPA /FTA-ABS EIA/CIA 检测结果 － － s/co < 1.0 未感染 / 初期感染 / 潜伏期 － ＋ s/co ≥ 1.0 晚期梅毒 / 既往感染 ＋ － s/co < 1.0 非特异性反应或假阳性 ＋ ＋ s/co ≥1.0 梅毒感染
安图磁微粒TP为梅毒特异性抗体定性检测试剂，临界值为1，检测结果S/CO＜1报梅毒特异性抗体阴性，检测结果S/CO≥1报梅毒特异性抗体阳性，阳性样本需加做非特异性抗体检测。 另外有文献研究显示某些疾病如恶性肿瘤、癌症、心血管疾病、肝炎、自身免疫性疾病、妊娠等，这些疾病患者体内含有某些治疗性抗体、类脂嗜异性抗体、自身抗糖尿病体、类风湿因子、甲胎蛋白等， 易 性抗体结果与之比较，其中 S／CO ＜1 的标本 200 份，TPPA 试验结果也为阴性；S／CO≥1 的标本 239 份，其中 TPPA阳性者 171 例，阴性 68 例，表明在 S／CO ＜1 ，阴性预测值达到 100％。而 S／CO≥1 的标本中，真阳性率为 71．6％（ 171／239 ），假阳性率为 28．5％（ 68／239 ）；将 S ／CO 分为 1 ~ 3 ， 5 ~7 ， 7 ~ 9 ，≥9 共 4 个组时，各组阳性预测值分别为 17％，56％，88％，92％，99％（注：阴性预测值是指真阴性人数占实验结果阴性人数的百分比，表示试验结果阴性者属于非病例的概率，因此，化
梅毒检测方法分类、结果临床意义、临床检查优缺点、试验筛查策略及检测结果解释
梅毒检测方法分类、结果临床意义、临床检查优缺点、试验筛查策略及检测结果解释 在医学上梅毒常用的检测方法主要分为两类，一类是病原学检测；另一类是血清学检测。 病原学检测法：以直接观察病原体为目的的检测，目前在临床上应用的较少，能够开展的医院也不多。 病原学检测 1、暗视野显微镜检查 2、镀银染色检查 血清学检测 血清学检测则又包括两大类： 1、以非梅毒螺旋体抗原的血清试验： （1）VDRL(性病研究实验室试验) （2）USR（不加热血清反应素试验） （3）RPR(加速血浆反应素环状卡片试验) （4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验) 目前RPR和TRUST是我国主要采取的两种非梅毒螺旋体抗原血清检测方法。 2、以梅毒螺旋体抗原的血清试验： （1）FTA-ABS（密螺旋体荧光抗体吸收） （2）TPPA/ TPHA(梅毒密螺旋体凝集试验) （3）TP-ELISA(酶联免疫吸附试验)
（4）CIA（发光法） （5）GICA（胶体金免疫层析法） （6）WB（蛋白印迹试验） （7）PCR聚合酶链反应 （8）梅毒螺旋体IgM抗体检测 通过检查血液中的抗体来判断是否感染的检测，是在临床上广泛被采用的检验梅毒的手段，血清学检查主要有以下几点优点： 1、实验过程更为方便，更利于用于普遍的筛查，部分实验可以实现自动化。 2、实验结果更为稳定，更为直观，可作为梅毒的确诊实验。 3、实验结果临床意义更丰富，不仅可以作为梅毒的确诊标准，也可以用于观察疗效，复发等。 缺点：由于使用的不是梅毒的特异性抗原，非特异性抗原（心磷脂）可以和很多疾病产生交叉的阳性反应，导致结果出现假阳性结果，大部分的假阳性滴度小于1:4。 梅毒血清学试验较容易出现生物学假阳性反应，可分为急性及慢性两类。 急性生物学假阳性反应见于很多非梅毒的感染性疾病，如：风疹、麻疹、水痘、传染性单核细胞增多症、病毒性肝炎、牛痘疹、活动性肺结核、丝虫病、回归热及钩端螺旋体病等。随着疾病的消退，在6个月内一般都转为阴性。 慢性生物学假阳性反应见于系统性红斑狼疮、麻风、干燥综合征、系统性硬化症、慢性肝脏疾病、类风湿性关节炎、老年等。可持续数月或数年，甚至终身。
梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)
梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 1. 测定原理： 采用VDRL抗原等特制的甲胺红溶液制成悬液。若样本含有梅毒螺旋体抗体，抗原抗体反应形成肉眼可见的红色凝集块。 2. 标本要求 2.1 血液:血浆（EDTA抗凝）血清。 2.2 测定量：50ul血清或血浆 3. 试剂： 3.1 上海荣盛试剂盒（供梅毒血清学试验用） 3.2 试剂盒组成； TRUST抗原悬液 2.5mL×1瓶 阴性对照血清 1ml×1支 阳性对照血清 1ml×1支 专用滴管及针头 1套 试验专用卡片 120人份 3.3 保存条件：2-10℃ 4. 质控；梅毒抗体质控血清，保存条件-15－-20℃，使用前放置室温（18-25℃），颠倒混匀。 5. 操作程序 5.1 标本测定 5.1.1 分别吸取50ul梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。 5.1.2 取待测血清或血浆50ul（不需失活）置于纸卡的另一圆圈中。 5.1.3 用专用滴管及针头垂直分别滴加TRUST试剂一滴于上述圆圈中。 5.1.4 按每分钟100转摇动8分钟。肉眼观察结果。 5.2 注意事项； 5.2.1 本实验在23-29℃环境下进行。 5.2.2 TRUST试剂使用前应充分摇匀。 5.2.3 如做定量试验，可将待检血清用生理盐水作倍比系列稀释，然后按上述定性方法进行试验， 以呈现明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。 5.2.4 本试验系非特异性反应，需结合临床进行综合分析，必要时需作特异性密螺体试验。 6. 结果判断。 6.1 阳性：可见中等或较大的红色凝集物。 6.2弱阳性：可见较小的红色凝集物。 6.3阴性：可见均匀的抗原颗粒而无凝集物。
联合检测TRUST和TPPA在梅毒诊断中的作用
联合检测TRUST和TPPA在梅毒诊断中的作用 【摘要】目的由于TRUTS可能发生“前带”现象,如果临床仅做单项TRUST,不做TPPA,就会有部分梅毒患者可能漏诊。方法采用梅毒甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和梅毒螺旋体抗体凝集法(TPPA)联合检测门诊病例中的300人次。结果门诊病例300人次中,梅毒急性期患者TRUST阳性滴度可达1:32以上,与TPPA抗体检测均为阳性,符合率100%;治疗后患者,TRUST可转为阴性,转阴率3%,但是TPPA抗体检测仍为阳性。TRUST阴性的患者或TRUST弱阳性可疑反应者,如果TPPA阳性,TRUST需稀释做滴度,从而避免“前带”现象的发生,导致强阳性样本出现假阴性的结果,滴检率5%。结论为了减少漏检,提高诊断率,两试验应同时做,以便及时发现漏检现象。 【关键词】梅毒;漏检;TRUST和TPPA联合检测 梅毒是梅毒螺旋体引起的一种慢性传播疾病,在人工培养上尚不易培养成功,只能作动物(家兔)接种来保存毒力菌种。当人体感染梅毒螺旋体后,血中可出现一定量的非特异性反应素和特异性抗体[1]。因此检测非特异性反应素和特异性抗体是诊断梅毒的重要手段。本院采用TRUST(不加热血清反应素试验)试剂检测非特异性反应素,它同附着者活性炭颗粒的VDRL(性病研究实验室试验)抗原发生凝集反应,呈红色凝块阳性反应。而检测特异性抗体采用TPPA试验,是将含梅毒螺旋体可溶性抗原的致敏粒子同血中TP(梅毒)抗体发生体外被动凝集反应。但由于TRUST试验是非特异性抗体试验,会受到其他疾病如系统性红斑狼疮、风疹、传染性肝炎、活动性肺结核等的干扰影响,TPPA试验是特异性抗体反应,抗体量难量化且持续时间长,不利于疗效观察[2]。因此笔者对临床300例样本采取联合检测TRUST和TPPA,进行统计分析,结果报道如下。 1 材料与方法 1.1 标本来源300例患者均为2008年10~12月本院门诊患者化验梅毒者。 1.2 试剂TRUST试剂盒是上海荣盛生物技术有限公司生产;TPPA试剂盒是日本东京富士瑞必欧株式会社生产。 1.3 方法TRUST 是快速血浆反应凝集试验。根据说明书进行操作,如果定性阳性或弱阳性,需生理盐水稀释1:2、1:4、1:8、1:16、1:32做半定量试验(滴度);TPPA是梅毒螺旋体抗体体外被动凝集试验。操作中,先在U型微量反应板中将血清1:5、1:10、1:40稀释,加致敏粒子,混合每孔的内容物,盖上盖后静置反应2 h,无论未致敏粒子呈何种反应图象,只要致敏粒子(最终稀释倍数1:80)的反应图象显示为㈠时,最终判定为阴性;未致敏粒子(最终稀释倍数1:40)反应图象判定为阴性,致敏粒子(最终稀释倍数1:80以上)的反应图像判定为(+)时,最终判定为阳性。 2 结果
TPPA＼TRUST和电化学发光法检测梅毒螺旋体效果比较
TPPA＼TRUST和电化学发光法检测梅毒螺旋体效果比较 目的回顾性分析TPPA、TRUST和电化学发光法测定三种血清学检测方法,对不同梅毒患者的血清进行测定,并分析各检测方法的优缺点,为临床选择最佳的梅毒检测方法提供参考。方法2009年1月至2010年1月我院皮肤科确诊梅毒患者136例,以及同期我院正常健康体检者50例。结果一、二、三期梅毒患者TPPA法检测阳性率分别为94%、100%、100%;TRUST法阳性率分别为78%、92%、83%;电化学发光法阳性率均为100%。结论三种检测方法中电化学法检测阳性率略高。 标签：TPPA;TRUST;电化学发光法;梅毒 梅毒(syphilis)是由苍白(梅毒) 螺旋体引起的慢性、系统性性传播疾病。临床上可有硬下疳、皮疹、发热等症状,严重者可侵犯皮肤、黏膜、骨骼、内赃、心血管、神经系统,危及生命。梅毒绝大多数是通过性途径传播,根据临床表现可分为一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒和潜伏梅毒[1]。 目前诊断梅毒主要依靠血清学检验。现在实验室诊断中,有多种梅毒检测方法[2]。本研究回顾性分析梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)和梅毒螺旋体电化学发光法测定三种血清学检测方法,对不同梅毒患者的血清进行测定,并分析各检测方法的优缺点,为临床选择最佳的梅毒检测方法提供参考。 1 材料与方法 1.1 标本来源2009年1月至2010年1月我院皮肤科确诊梅毒患者136例,其中男74例,女62例;年龄23~65岁,平均35岁;梅毒患者中一期梅毒65例,二期梅毒53例,三期18例。正常对照组为同期我院正常健康体检者50例。 1.2 试剂与仪器TPPA试剂购自日本富士公司,TRUST试剂购自上海荣盛生物技术有限公司,梅毒电化学发光试剂购自罗氏公司,检测仪器为罗氏i2000电化学发光分析仪。 1.3 检测方法TPPA检测采用凝集法,阳性结果做特异性抗体滴度检测;TRUST检测采用凝集法,阳性结果做非特异性抗体滴度检测;电化学发光法检测由仪器完成。所有操作均严格按照说明书要求进行。 1.4 统计学分析统计学据分析采用SPSS 13.0 软件进行分析,TPPA、TRUST 和电化学发光法检测梅毒螺旋体抗体定性检测采用阳性率表示,检测结果比较采用χ2检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义。 2 结果
梅毒螺旋体的几种实验室检测方法
梅毒螺旋体的几种实验室检测方法 摘要] 梅毒是一种严重危害人类健康的性传播疾病，临床上主要依靠实验室检测 进行诊断。当前，有多种实验室检测方法被使用。本文主要对直接检测法、血清 学检测法及PCR检测法进行综述。 [关键词] 梅毒；检测方法；血清学；分子生物学 梅毒（Syphilis）是由苍白螺旋体（又称为梅毒螺旋体）引起的慢性、系统性 性传播疾病。它主要通过性途径传播，临床上表现为一期梅毒、二期梅毒、三期 梅毒、潜伏梅毒和先天梅毒（胎传梅毒）等[1]。本文综述了目前应用于梅毒实验 室检测的三类方法，一是病原体直接检测，二是血清学方法，三是分子生物学技术。 1. 病原体直接检测 梅毒螺旋体直接检测适用于一期梅毒。一期梅毒仅在接触部位发病，主要表 现为皮肤黏膜的损害，标志性特征为硬下疳。此时血清中抗原抗体还未达到可测 水平，因此梅毒螺旋体检测对梅毒的早期诊断尤为重要。 1.1 暗视野显微镜检查（DFM）可直接观察病灶分泌物中的梅毒螺旋体，是 诊断早期梅毒的主要方法。用暗视野显微镜观察，可根据典型的形态、大小和运 动方式，结合临床症状进行诊断，特异性较高。但由于病程、取材、实验人员计 术水平等多种因素的影响，敏感性较低。 1.2 镀银染色法（Warthin-starry）由于梅毒螺旋体具有亲银性，镀银染色法 能将梅毒螺旋体染成棕褐色或黑褐色，形态清晰易辨，且标本可永久保存。缺点 是镀银染液需新鲜配制，且存在其他类似的干扰物质，故临床应用较少。 1.3 直接免疫荧光抗体染色（DFAT）用荧光素标记的抗梅毒螺旋体抗体直接 染色标本，利用抗原抗体特异性反应，通过暗视野显微镜观察，从免疫学和形态 学两方面检测梅毒螺旋体，敏感性和特异性均较高。但同时，对显微镜设备和技 术条件要求也较高，目前还没有被实验室广泛使用。 1.4 多功能显微镜诊断仪（MDI）是美国科学家布拉德福博士历经20年发明 的一种屏幕线性放大40-20000倍的高清晰度显微镜，集现代光学、光电学、电子学、医学影像和多媒体计算机技术于一体的医学显微设备。可直接从患者身上获 得样本且不需做任何染色及任何加工处理，直接进行观察和诊断，方便快捷。 2. 血清学方法 2.1非特异性梅毒螺旋体抗体实验该类方法检测的是反应素，由于多种疾病 患者（如某些感染性疾病、免疫性疾病、肿瘤患者）、怀孕早期妇女、老年人群 等均可能存在类似的类脂质抗体，常会发生低滴度生物学假阳性反应，需要结合 特异性梅毒螺旋体抗体试验确证，并结合临床表现进行鉴别。 2.1.1 性病研究实验室试验（VDRL）以卵磷脂、心磷脂及胆固醇的混悬液作为 抗原，与机体产生的反应素发生抗原抗体反应。属于微量玻片法，操作简单、快速，是唯一推荐用于检测脑脊液反应素的试验，对诊断神经梅毒具有重要价值。 可作定量及定性试验，操作简单，试剂及对照血清已标准化，费用低，但是技术 要求高，抗原悬液不稳定，要求待测血清新鲜而且需要加热灭活，且需要显微镜 观察。 2.1.2 不加热血清反应素玻片试验（USR）是VDRL的改良方法，在抗原悬液中加入了二胺四乙酸二钠灭活补体从而使悬液更加稳定，又在悬液中加入了氯化胆 碱可对待检血清直接化学灭活而不需要加热灭活，从而在检测时更加快速、方便。
三种实验梅毒检测(抗-TPTRUSTTPPA)联合检测在梅毒诊断中 应用
三种实验梅毒检测（抗-TP、TRUST、TPPA）联合检测在梅毒诊断 中应用 摘要：目的：探究三种实验梅毒检测联合检测方式在梅毒诊断中的应用效果。方法：对本院60例梅毒患者的标本进行检测，按照试剂说明书对标本同时进行梅毒螺旋体抗体 酶免试验（抗-TP）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA），对比三种检测方法以及联合检测阳性率。结果：在早期梅毒、一期梅毒、三期 梅毒检测中，TRUST检测阳性率低于其他两组检测阳性率。TPPA的阳性检出率高于抗-TP、TRUST，组间差异性对比无统计学意义：P值>0.05。三组检测结果对二期梅毒阳性检出率 对比无统计学差异性：P>0.05。结论：三种实验梅毒检测方式联合检测效果更佳，有利于 提高梅毒检出率，值得推荐。 关键词：不同实验室检测方式;抗-TP;TRUST;TPPA;联合检测 梅毒（syphilis）属于世界性公共健康问题，该疾病作为常见的性病，具有传染性， 近年来发病率有所上升。该疾病主要是由于苍白螺旋体病毒引起的慢性、系统性疾病，临 床上将其临床表现分为：一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潜伏期梅毒和先天性梅毒。梅 毒患者的皮肤、黏膜中均含有梅毒螺旋体，因此当未患病患者在与梅毒患者性接触或皮肤 黏膜存在细微破损均可发病。在所有梅毒患者中，大部分患者是通过无保护性行为传染、 少数通过输血、接吻等传染[1]。 该疾病早期会侵犯患者皮肤黏膜，晚期则逐渐侵犯患者神经、心血管、骨骼等组织器官，严重危害到患者的生命安全。由于该疾病临床表现复杂，而且无典型性表现特征，导 致患者入院就诊时容易发生漏诊、误诊等情况，影响治疗效果。目前临床上针对梅毒检测 主要是通过（抗-TP、TURST、TPPA）等方式，其中相关研究表明TRUST检测效果一般，而 抗-TP检测结果中存在假阳性，从而影响诊断准确性，因此为梅毒患者选择合适的诊断方 式十分必要。在本次研究中，针对上述三种检测手段进行分析，讨论三种检测方式联合检 测结果，以下是详细的报道内容。 1 资料、方法 1.1 资料 对2017年12月-2018年12月在本院接受治疗的梅毒患者中，采用随机抽样法抽选出60例患者作为研究样本，所有患者均确诊为梅毒患者，并采集患者血液作为标本进行检测。 在这60例梅毒患者中，男性患者34例、女性患者26例，年龄范围22～68岁，平均 年龄值：（38.6±4.2）岁，其中早期潜伏梅毒患者14例、一期梅毒患者18例、二期梅 毒患者18例、三期梅毒患者10例。 由于本次研究属于组内对比，患者的一般性资料对此次研究内容并无明显影响，可以 进一步比较分析：P>0.05。
梅毒螺旋体检测标准操作规程
目 的：规范的梅毒螺旋体检验操作，确保检测结果准确。 适用范围：性病实验室工作人员 责 任 人：实验操作者 1、标本的采集与处理 1.1标本采集的基本要求 1.1.1操作应规范化。 1.1.2所有标本都应当被视为具有传染性，医务人员应戴手套谨慎操作。 1.2梅毒标本采集 梅毒的实验室诊断主要有病原体检测和血清学检测方法，各期梅毒的检测方法及部位见下表。 1.2.1血液 1.2.1.1血清标本
根据需要，用一次性真空采血针与促凝采血管抽取静脉血2-5 ml，室温静置1-2小时（或37℃静置30分钟），待血液凝固、血块收缩后，3000r/min离心10-15分钟，分离新鲜血清，备用。也可采用保存于2-8℃或-20℃的血清。溶血、脂血或污染的标本可影响试验结果。 1.2.1.2血浆标本 根据需要，用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min离心10-15分钟，分离血浆，备用。血库血浆以及EDTA 抗凝血浆同样可以用于梅毒血清学实验（一般仅用于RPR实验，），但易出现假阳性反应（需用血清复试），如用其他抗凝剂应首先评价后再用。 1.2.1.3末梢全血 消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择手指或耳垂，1岁以下儿童采用足跟部）。一次性采血针刺破皮肤，用无菌棉签擦掉第一滴血。收集滴出的血液，立即用于检测。 1.2.2皮损部位组织液 1.2.2.1用于病原学检查 用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，取渗出液与预先滴加在载玻片上的生理盐水混合后加盖玻片立即用于暗视野显微镜检测，或取渗出液直接涂片，用于镀银染色试验。 1.2.2.2用于核酸检测 用无菌生理盐水浸湿的棉拭子擦去皮损表面的污物，钝刀/刮勺轻刮、挤压皮损部位，刮取渗出液，加入有DNA保存液（1ml/管）的标本管中，备用。 1.2.3淋巴液 无菌操作下穿刺腹股沟淋巴结，注入0.3ml无菌生理盐水并反复抽吸2-3次，取少量的淋巴液直接滴于载玻片上，加盖玻片后立即进行暗视野镜检或备用。 1.2.4脑脊液 操作由专业人员进行，一般用腰椎穿刺术获得。患者侧卧于硬板床，两手抱膝紧贴腹部，头向前胸屈曲，使躯干呈弓形，以髂后上棘连线与后正中线的交点为穿刺点，相当于第3-4腰椎棘突间隙，消毒处理后，用2%利多卡因自皮肤到椎间韧带作局部麻醉。术者用左手固定穿刺皮肤，右手持穿刺针以垂直背部方
TPPA、TP—AbELISA、TRUST三种方法检测血清梅毒结果分析
TPPA、TP—AbELISA、TRUST三种方法检测血清梅毒结果分析 目的分析TPPA、TP-Ab（ELISA）、TRUST三种方法检测血清梅毒的结果。方法采用梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附试验（TP-Ab）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）来对比检测150例临床确诊的梅毒阳性血清标本和70例正常血清标本。结果TP-Ab、TPPA检测方面的灵敏性、特异性显著高于TRUST检测方法，P＜0.05。结论TPPA具有较高的特异性，可以将其作为梅毒确证实验；TP-Ab（ELISA）法的灵敏度、特异性与TPPA法比较接近，是现阶段对梅毒抗体进行检测的首选方法；TRUST法的特异性较差，可以将其当成TP-Ab（ELISA）法的补充。 标签：TPPA；TP-Ab（ELISA）；TRUST；检测；血清梅毒 梅毒作为慢性全身性性传播疾病，主要是因为梅毒螺旋体感染导致的，梅毒的病程较长，临床表现复杂，表现为多样性，会对患者的全身各个器官造成损害；疾病早期主要对黏膜和皮肤造成侵犯，疾病后期则会对中枢神经系统、心血管系统等器官造成侵犯。现阶段因为人们滥用抗生素药物，导致部分梅毒患者表现为隐性感染，缺乏临床表现，因此在临床诊断中容易出现误诊和漏诊的情况[1]。世界卫生组织认为，全球输血不安全是导致没有有效筛选传染性因子的主要原因。所以采用高灵敏度、强特异性的筛选方式，对安全输血非常重要。本研究主要分析了TPPA、TP-Ab（ELISA）、TRUST三种方法检测血清梅毒的结果，现将情况做如下分析。 1 资料与方法 1.1一般资料 1.1.1标本选择选择2014年1月～2016年1月经我院临床确诊的梅毒感染输血患者输血前的标本150例，并选择同期非梅毒感染输血患者的血清标本70例，对血清进行分离后再进行检测。 1.1.2试剂和方法TPPA试剂盒选择富士瑞必欧株式会社所提供的；TP-Ab 试剂盒则是由珠海丽珠试剂有限公司提供；TRUST试剂盒则是由上海荣盛生物技术有限公司所提供；选择SUNRISE酶标仪、新康医疗器械有限公司提供的XK-96型梅毒旋转振荡器和HydroFLex洗板机。 1.2方法同时采用梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA）、酶联免疫吸附试验（TP-Ab）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）来对150例临床确诊的梅毒阳性血清标本和70例正常血清标本进行梅毒检测。如果任何一种试剂检测结果为阳性，则应用检出阳性的试剂双孔进行复试，一孔或者两孔阳性则均视为阳性。上述各项试验操作和结果的判断都应严格按照试剂说明书和操作规则来开展，试剂应在有效期内。全部检测操作都选择盲法控制，检测前，随机排列阴性标本和阳性标本。
梅毒检测技术规范(100808)
全国梅毒检测技术规范（试行讨论稿） 中国疾病预防控制中心 二○一○年八月
前言 为了加强全国梅毒检测工作的管理，提高检测质量，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《中国预防与控制梅毒规划（2010-2020）》的精神，在卫生部及中国疾病预防控制中心的领导下，性病控制中心组织国内相关领域的专家制订了《全国梅毒检测技术规范》（下称"规范"）。 本“规范”是基于我国目前梅毒检测工作的需要以及梅毒检测技术的发展，对梅毒检测相关的样品采集、检测方法、检测策略、质量管理等做出具体的规范要求，经上报卫生部并获准由中国疾病预防控制中心下发，适用于全国各级医疗、疾病预防控制、妇幼保健、采供血、出入境检验检疫等提供梅毒检测服务的机构。 本“规范”起草单位：中国疾病预防控制中心性病控制中心 本“规范”参加编写单位：中国疾病预防控制中心艾滋病性病预防控制中心、中国疾病预防控制中心妇幼保健中心、广东省皮肤性病控制中心、江苏省疾病预防控制中心、天津疾病预防控制中心、上海市皮肤性病医院 本“规范”参加编写及审核人员：尹跃平、王千秋、王宝玺、邢文革、王临红、郑和平、傅更峰傅更锋、顾伟鸣、郑钟洁、龚匡隆、陈祥生。 本《规范》编写工作联系人：魏万慧 本《规范》适用于全国所有的梅毒检测实验室。 本《规范》解释权属于中国疾病预防控制中心。
目录 第一章梅毒及其病原体 第二章样品的采集和处理 第三章梅毒血清学检测 第四章梅毒体病原学检测 第五章梅毒核酸检测 第六章实验室生物安全 第七章梅毒血清学检测实验室质量管理
第一章梅毒及其病原体 梅毒是由梅毒苍白螺旋体（Treponema pallidum）引起的一种性传播疾病，可引起神经、心血管等多系统损害，严重影响人群的身体健康。此外，梅毒亦可通过胎盘传给胎儿，导致自发性流产、死产或先天梅毒等。20世纪80年代，梅毒在我国重新出现，90年代末以来，全国梅毒报告病例数明显增加，呈快速流行的趋势，已成为我国重要的公共卫生问题。 梅毒可分类为早期梅毒（一期、二期和早期隐性梅毒）和晚期梅毒（三期和晚期隐性梅毒），许多梅毒患者的临床表现并不明显或者缺乏临床症状，病例的发现往往依赖于实验室的检测。梅毒的早期发现和及时治疗对有效预防和控制梅毒的流行具有重要的意义，梅毒的检测是病例发现、临床诊断和疗效观察的重要手段。 梅毒的检测方法不仅一直沿用许多传统的方法，而且，随着科学技术的发展，其新的检测技术与方法不断出现并广泛应用。因此，规范各种检测方法、制定不同检测策略、加强质量控制和开展试剂评估等对确保梅毒临床服务和现场防治的质量具有重要的意义。