梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)SOP
梅毒螺旋体抗体检测（TPPA）
（凝集法）
1.目的：规范实验室TPPA检测操作。
2.范围： xxx 院 xxx 科
3.测定原理：
将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test,PA法）由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且用来测定抗体的效价。
4.标本：
4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。
4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。
4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。
5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。
5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。
5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。
5.3试剂组成
5.3.1溶解液（液体）：用于调制致敏粒子和未致敏粒子。
5.3.2血清稀释液（液体）：用于样品的稀释。
5.3.3致敏粒子（冷冻干燥）：调制浓度为1%的梅毒螺旋体（Nichols株）致敏明胶粒子。
5.3.4未致敏粒子（冷冻干燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。
5.3.5阳性对照血清（液体）用抗梅毒螺旋体（Nichols株）家兔免疫血清调制成抗体效价为1：320(最终稀释倍数)。
6.临床标本测定
6.1试剂的调制
6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。
6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。
6.1.3致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。
6.1.4未致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。
6.1.5阳性对照血清（液体）：按照操作规则使用。
6.2 手工操作步骤
6.2.1 用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至第4孔各滴入1滴（25ul）。
6.2.2 用微量移液管取样品25ul至第1孔中，然后用微量加样器或微量移液管以倍比稀释
的方式从第1孔稀释至第4孔中。
6.2.3用试剂盒中提供的滴管在第3孔中加入1滴(25ul)未致敏粒子，在第4孔中加入1滴（25ul）致敏粒子。
6.2.4用平板混匀器以不会导致微量反应板中的检测物溅出的强度混合30秒钟，加盖后于室温（15~30℃）下水平静置。2小时后，在观察镜上记录并观察其反应图像，即使静置至次日也不影响结果的判定。
6.3.1 能够确认每例样品未致敏粒子的反应（最终稀释倍数1:40）均是（-）
6.3.2能够确认每次检查中血清稀释液和致敏粒子以及未致敏粒子的反应均是（-）（介质对照）。
6.3.3每个试剂盒中的阳性对照血清都要与样品用相同的测定方法进行试验，阳性对照血清调制成抗体效价为1：320（最终稀释倍数）。
6.4吸收操作
对于未致敏粒子和致敏粒子均显示（±）以上的凝集样品，要按照下列顺序在完成吸收操作的基础上进行再试验。
6.4.1取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小试管中。
6.4.2加入样品50ul混合，于室温（15~30℃）下放置20分钟以上。
6.4.3 离心分离（2000rpm，5分钟），然后分取上清液【吸收完毕的稀释样品（1:20）】50ul 至反应板第3孔中，特别注意不要混入粒子。
6.4.4从第4孔以后，要预先各滴入25ul血清稀释液，从第3孔至最后一孔用微量加样器倍比稀释。以后就与检验方法中同样的操作后进行判定。通常情况下可以用上述的吸收操作吸收完全，但如果吸收不干净时，请用其他的检测方法。
7.性能指标:
7.1特异性试验：自存标准样品按规定进行试验时，阳性标准样品的抗体效价相对于标准值在±1管以内，阴性标准样品在1:80(最终稀释倍数)下不会显示凝集图像。
7.2灵敏度试验：试剂盒中带有的阳性对照血清按规定进行试验时，抗体的效价相对于标准值（最终稀释倍数1:320）在±1管内。
7.3重复性试验：对同一样品（最终稀释倍数在1:160以上）重复进行5次测定，各抗体效价最大频数在±1管以内。
7.4相关性：取样品391例，研究它们和对照品（间接红细胞凝集反应）的一致率，结果在±1管以内的一致率为100%。
8.方法的局限性:
8.1 由于抗原，抗体反应的血清学试验方法的检测灵敏度具有一定的局限性，所以本试剂检测结果只能提示血清或者血浆中有无梅毒螺旋体抗体的存在，而不能作为临床诊治的唯一标准。
8.2抗体测试阴性的样品并不能排除梅毒感染的可能。
9.检测结果的解释
9.1反应图像的判定
在判定用观测板上静置微量反应板，观察粒子的反应图像。将反应图像与介质比照的图像进
9.2判定基准
阳性：未致敏粒子（最终稀释倍数1:40）的反应图像判定为（-）。致敏粒子（最终稀释倍数1:80以上）的反应图像判定为（+）时，最终判定为阳性。
阴性：无论未致敏粒子呈现何种反应图像，只要致敏粒子（最终稀释倍数1:80）的反应图像显示为（-）时，最终判定为阴性。
保留：未致敏粒子（最终稀释倍数1:40）的反应图像判定为（-），且致敏粒子（最终稀释倍数1:80）的反应图像判定为（±）时，最终判定为保留。
10.注意事项
10.1 操作前仔细阅读使用说明书，严格按照试剂盒说明书进行试验操作。
10.2 避免在恶劣的环境（如含有84消毒液、次氯酸钠、酸碱或乙醛等高浓度腐蚀性气体及
灰尘的环境）条件下进行试验。
10.3 用本试剂判定结果为保留时，请用其他的检测方法进行检测。
10.4 本试剂是用来测定样品中的梅毒螺旋体的抗体效价，不是用来测定梅毒螺旋体。在判
定为抗体阳性的情况下，请结合其他的检查结果以及临床症状来进行综合判定。10.5 样本中若存在沉淀物、悬浮物等可见杂质会影响试验结果。此类样本不得使用。10.6 梅毒螺旋体感染早期，有可能不产生抗体，或者产生很少量的抗体。如果坏意感染，
即使本试剂的判定结果为阴性，也要经过一段时间再进行检查并且于其他检查的结果和临床症状结合起来综合判定。
10.7 试剂需在有效期内使用。剩余试剂要及时密封，放置2~8℃条件下贮存。
10.8 血清免疫反应要注意前区现象。
10.9 服用含有免疫球蛋白血液制品的患者样品中，由于可能因服用制剂所致的阳性反应。
要注意判定。
10.10本试剂的溶解液，血清稀释液和阳性对照血清中含有0.1%的叠氮钠防腐剂，在废弃时要用大量的水冲洗，避免生成具有爆炸性的金属叠氮钠。
10.11不同批号的试剂绝对不能混用。
11.临床意义
梅毒是梅毒螺旋体（Treponema pallidum，TP）引起的一种性传播疾病，人是梅毒螺旋体的唯一宿主。梅毒具有较强的传染性和慢性复杂的病理，它几乎可以引起全身所有系统的组织和脏器的损害及病变，导致功能失常，组织破坏，乃至死亡。2009年，梅毒报告病例数在我国甲乙类传染病报告中居第三位，其病程漫长，危害严重，早期侵犯生殖器和皮肤，
晚期侵犯全身各器官，尤其是心血管和中枢神经系统。TP不仅严重损害成人身体的健康，同时还可由母体经胎盘垂直传播给胎儿，侵犯胎儿肝、脾、肾上腺、牙齿、骨骼、眼及脑神经等全身器官系统，引起早产、流产、死胎、畸胎、或胎传梅毒儿（又称先天性梅毒），严重影响出生人口质量。梅毒螺旋体抗体是梅毒感染人体后由免疫系统产生的特异性抗体，是梅毒感染的特异性指标。
12.安全防护措施及处理：
12.1 按要求穿白大褂，带一次性手套。
12.2处理试剂和样本时需戴一次性手套，操作后应彻底洗手。所有样本及使用后的试剂盒
应视为潜在的传染性物质，废弃处理时，按照当地政府和有关国家规定进行。
12.3如果发生污染，视污染范围，部位选择合适的处理方法（以下浓度84消毒液均由原液
配置成）：
12.3.1 血液标本污染台面，用7000mg/L的84消毒液浸泡抹布，擦拭污染区域，小心处理
容器碎片，消毒后置于利器盒内
12.3.2 血液标本溅洒在白大褂上，应脱去衣物，并用300mg/L的84消毒液消毒。
12.3.3 血液标本溅洒在眼睛上，应立即用洗眼器冲洗眼部15min后，上报主任，并去眼科
就诊。
12.3.4 血液标本在离心机内破损，应在第一时间停止离心机运行，待其完全停止后，等
30min内部气溶胶散去，并带口罩后，用7000mg/L的84消毒液浸泡抹布，擦拭污染区域，小心处理容器碎片，消毒后置于利器盒内
13.相关记录文件
试剂出库记录
14.参考资料
梅毒螺旋体抗体检测试剂盒（凝集法）使用说明书
编者：审核：批准：
批准时间：年月日
NJKM-SOP0301.18 梅毒TPPA抗体检测作业指导 Edition2.0
梅毒TPPA抗体检测作业指导书 1、试验原理： 梅毒抗体检测是采用抗原抗体凝集反应中的抗原抗体凝集反应。其原理如下：将梅毒(Nichols 株)的精制菌体成分包被在人载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体（TP）抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test;PA法），由此可检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体（TP）抗体，并且可用来测定抗体效价。 2、样本收集和贮存： 血清或血浆1ml，标本应无溶血，无脂血，无微生物污染。不满足上述要求的标本拒收，标本的采集应使用清洁，无菌的一次性的干燥管。 标本用量最少50ul，七天内检测的标本应在2-8℃保存，贮存在-20℃可保存4W，同时避免反复冻融血清。 3、安全防范： 3．1此试剂盒内含人血成分。尽管所有的对照及定点对照都已经过试验验证并且发现对于乙型肝炎表面抗原，丙型肝炎抗体，HIV抗体均为阴性；但仍认为它们具有潜在的感染性。 3．2移液过程禁止用口。 3．3在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。 3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。 3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。 3．6试剂的溶解液，血清稀释液和阳性对照血清含有叠氮钠作为防腐剂,叠氮钠可以和铅铜反应形成爆炸的金属叠氮化合物.为防止金属叠氮化合物的形成,应用大量的水冲洗以免其堆积. 4、试剂： 4．1 储存与稳定性： 试剂应在2-10℃保存。 冻干试剂必须在复溶后的当天使用，如果保存在2-10℃最多可使用7天。4．2 试剂盒组成：（由富士瑞士欧公司出产） （1）溶解液（液体）8mL×1瓶 用于调制致敏粒子和未致敏粒子。 （2）血清稀释液29mL×1瓶 用于样品的稀释。 （3）致敏粒子（冷冻干燥）
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：TPPA；组合项目申请：RPR+TPPA，临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1标本采集 2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.8下列标本为不合格标本 2.1.8.1标本量不足。 2.1.8.2严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.8.3无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.8.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2标本保存 2.2.1标本保存时间：立即测定或放置2～8℃冰箱内。 2.2.2已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 3、方法原理 凝集法。将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。 4、试剂及其他用品准备 溶解液8ml/瓶×1，血清稀释液60ml/瓶×1，致敏粒子(冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，未致敏粒子 (冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，阳性对照血清 (液状) 0.6ml/瓶×5。 5 质控品与室内质控规则 5.1 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。 5.2 质控品测定：在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。 5.3质控规则：阴性和阳性对照符合即可。 5.4如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。 6操作步骤 6.1将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至最后一孔各滴
梅毒螺旋体抗体检测(TPPA)SOP
梅毒螺旋体抗体检测（TPPA） （凝集法） 1.目的：规范实验室TPPA检测操作。 2.范围： xxx 院 xxx 科 3.测定原理： 将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样本中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应（Particle Agglutination Test,PA法）由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且用来测定抗体的效价。 4.标本： 4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。 4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。 4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。 4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。 4.5血清样品即使钝化也不会影响检测结果。 5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。 5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。 5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。 5.3试剂组成 5.3.1溶解液（液体）：用于调制致敏粒子和未致敏粒子。 5.3.2血清稀释液（液体）：用于样品的稀释。 5.3.3致敏粒子（冷冻干燥）：调制浓度为1%的梅毒螺旋体（Nichols株）致敏明胶粒子。 5.3.4未致敏粒子（冷冻干燥）经单宁酸处理调制浓度为1%的明胶粒子。 5.3.5阳性对照血清（液体）用抗梅毒螺旋体（Nichols株）家兔免疫血清调制成抗体效价为1：320(最终稀释倍数)。 6.临床标本测定 6.1试剂的调制 6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。 6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。 6.1.3致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。 6.1.4未致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。 6.1.5阳性对照血清（液体）：按照操作规则使用。 6.2 手工操作步骤 6.2.1 用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至第4孔各滴入1滴（25ul）。 6.2.2 用微量移液管取样品25ul至第1孔中，然后用微量加样器或微量移液管以倍比稀释
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
. 梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：TPPA；组合项目申请：RPR+TPPA，临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 2.1 标本采集 2.1.1 常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 2.1.3 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。 2.1.8 下列标本为不合格标本 2.1.8.1 标本量不足。 2.1.8.2 严重溶血、严重浑浊的标本。 2.1.8.3 无法确认标本与申请单对应关系的。 2.1.8.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 2.2 标本保存 2.2.1 标本保存时间：立即测定或放置2～8℃冰箱内。 2.2.2 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 方法原理、3凝集法。将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅 毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。 试剂及其他用品准备、4溶解液8ml/瓶×1，血清稀释液60ml/瓶×1，致敏粒子(冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，未致敏粒子 (冷冻干燥) 0.6ml/瓶×5，阳性对照血清 (液状) 0.6ml/瓶×5。 5 质控品与室内质控规则 5.1 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。 5.2 质控品测定：在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。 5.3 质控规则：阴性和阳性对照符合即可。 5.4 如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。 6操作步骤 6.1将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至最后一孔各滴入1滴（25ul）。 6.2吸取样品25ul至第1孔中。然后以2n 的方式从第1孔稀释至最后一孔。 . . 6.3用试剂盒中提供的滴管在第3孔中滴入1滴（25ul）未致敏粒子，从第4孔至最后一孔滴 入1滴（25ul）致敏粒子。
梅毒TPPASOP
梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA） 1.原理 梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）是用超声裂解梅毒螺旋体抗原致敏明胶粒子，致敏粒子与待检血清（浆）中的梅毒螺旋体抗体结合，产生肉眼可见的颗粒凝集。 2.方法 2.1仪器耗材： 1)TPPA检测试剂盒 2)移液器 3)保湿盒 2.2检测流程： 1)试剂准备：试验前30分钟将待检标本和试剂从冰箱中取出，恢复至室温。 2)加稀释液：每份样本作4孔，用移液器将血清稀释液滴入微量反应板第1孔 （100μl），从第2孔-第4孔各滴25μl。 3)样本稀释：用移液器取待检血清25μl置第1孔中，然后以2n 的方式从第1 孔稀释至第4孔。 4)加对照液：用移液器在第3孔滴入25μl未致敏粒子；在第4孔滴入25μl 致敏粒子。 5)混合：以不会导致微量反应板内容物溅出的强度混合30秒钟。 6)反应：加盖置湿盒内，于室温（15℃-30℃）下水平静置。2小时后观察并记 录结果。 附：重吸收试验 对于未致敏粒子和致敏粒子均显示±以上凝集的样品，要按照下列程序在完成吸收操作的基础上进行再试验。 1)取用定量的溶解液调制好的未致敏粒子0.95ml至小试管中。 2)加入样品50μl混合，于室温（15℃-30℃）下放置20分钟以上。 3)离心分离（2000rpm、5分钟），然后分别吸取上清液【吸收完毕的稀释样品 （1：20）】50μl至反应板第3孔中，特别注意不要混入粒子。 4)从第4孔以后，要预先各滴入25μl血清稀释液，从第3孔至最后一孔用移 液器以2n 的方式进行稀释。
5)之后的步骤同上。 3.结果 3.1结果判读 首先观察未致敏粒子反应孔是否出现凝集（第3孔），判断试验有效性后，再根据致敏粒子与标本反应孔（第4孔）与致敏粒子是否产生1+ ～2+凝集反应凝集反应，判断结果。如未致敏粒子反应孔出现凝集（第3孔）为无效试验，需要对标本进行重吸收试验后再进行检测。 ++ ：产生均一的凝集，凝集粒子在底部，呈膜状延展； + ：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱的凝集在周围； ±：粒子形成小环状，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形； - ：粒子呈纽扣状聚集，呈现出外周边缘均匀且平滑的圆形。 3.2结果报告 阳性：未致敏粒子反应孔（第3孔）不出现凝集，致敏粒子反应孔（第4孔）出现1+～2+凝集反应，报告阳性。 阴性：未致敏粒子反应孔（第3孔）和致敏粒子反应孔（第4孔）均未出现凝集反应，报告阴性。 弱阳性：未致敏粒子反应孔（第3孔）不出现凝集，致敏粒子反应孔（第4孔）出现±凝集反应，报告弱阳性。 4.临床意义 1)梅毒螺旋体一旦感染人体后约2-4周即可检测到抗梅毒螺旋体抗体，此抗体 特异性高可达98%以上，所以检测到梅毒螺旋体抗体阳性可确证为现在或既往有过梅毒螺旋体感染。 2)患者感染梅毒螺旋体后产生的抗梅毒螺旋体抗体一般能保持终生，梅毒患者 即使经过正规疗程的抗梅毒治疗后，梅毒螺旋体抗原血清学试验仍可阳性，故梅毒螺旋体抗原血清学试验不能作为疗效观察的指标。 3)梅毒螺旋体抗原血清试验亦不能区分既往感染和现症感染，试验阳性结果应 进一步进行非梅毒螺旋体抗原血清试验，以判断是否为梅毒现症感染。 5.注意事项 1)若未致敏粒子孔出现凝集反应，血标本需要进行吸收后再重复试验，或改用
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程
梅毒螺旋体抗体测定T P P A标准操 作规程(总3页) --本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可-- --内页可以根据需求调整合适字体及大小--
梅毒螺旋体抗体测定TPPA标准操作规程 1 检验申请 单独检验项目申请：TPPA；组合项目申请：RPR+TPPA，临床医生根据需要提出检验申请。 2 标本采集与处理 标本采集 常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录 标本的状态，对不合格标本予以拒收。 下列标本为不合格标本 标本量不足。 严重溶血、严重浑浊的标本。 无法确认标本与申请单对应关系的。 其他如标识涂改、标本试管破裂等。 标本保存 标本保存时间：立即测定或放置2～8℃冰箱内。 已完成测试的标本保持完整的识别号，置4～8℃冰箱内保存7天。 3、方法原理 凝集法。将梅毒的精制菌体成分包被在人工载体明胶离子上.这种致敏离子和样品中的梅毒螺旋体抗体进反应发生凝集,产生粒子凝集反应,由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体,并且可用来测定抗体效价。 4、试剂及其他用品准备 溶解液8ml/瓶×1，血清稀释液60ml/瓶×1，致敏粒子(冷冻干燥) 瓶×5，未致敏粒子(冷冻干燥) 瓶×5，阳性对照血清 (液状) 瓶×5。 5 质控品与室内质控规则 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。 质控品测定：在每一批标本中测定阴性和阳性对照各一次。 质控规则：阴性和阳性对照符合即可。 如出现失控情况，按室内质控标准操作程序采取各种有效的纠正措施及时纠 正，并在确认重新回复到控制状态后开始标本检测。 6操作步骤 将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至最后一孔各滴入1滴（25ul）。 吸取样品25ul至第1孔中。然后以2n 的方式从第1孔稀释至最后一孔。
梅毒螺旋体抗体测定SOP
梅毒螺旋体抗体测定标准操作程序（SOP） 【目的】 指导免疫项目梅毒螺旋体抗体的测定。 【适用仪器】 酶标仪ST-36O、洗板机ST-36W等。 【该SOP变动程序】 本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。 【方法原理】 ELISA法：用HTP特异性抗原包被酶联板，待检血清中的抗TP抗体与包被抗原反应，再与酶标IgG结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据OD值判定有无TP抗体的存在。 【标本要求】 种类：血清、血浆。 【试剂】 试剂盒：样品稀释液、阴性和阳性对照、浓缩洗液、酶标抗体、底物液A、底物液B、终止液。 保存条件及有效期：2--8℃储存。自生产日期起，有效期半年。 【质控品】 试剂盒中的阴性和阳性对照、省临检中心下发的，依说明书4–8℃冷藏。 【操作步骤】 1.加样：每次试验设空白对照1孔；阴性对照3孔，阳性对照2孔，分别加 入HCV阴、阳性对照10微升。除空白孔外，其余孔加入50微升样本。 2.温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育60分钟。
3.洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。 4.加酶:空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物100微升。 5.温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。 6洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。 7.显色：每孔加入底物缓冲液50微升，再加入底物液50微升，振荡混匀， 盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。 8.终止：每孔加入终止液50微升，混匀。 9.用酶标仪读值，零置酶标仪450nm或双波长450nm/630nm下测定OD 值。 结果判定 1.阴、阳性对照和被检样品的OD值减去空白对照OD值即为计算值。 2.试剂空白需<0.08，阴性对照孔值≤0.120，阳性对照孔值≥0.300。 3．临界值（cut off值）的设定：cut off值=0.100+阴性对照OD均值 4．被检样品的OD值>=临界值应判为HCV抗体阳性反应，<临界值为阴性反应。 注意事项 1．各步加液均应使用加液器并经常校对其准确性，以避免实验误差。 2．封口胶只限一次性使用，以避免交叉污染。 3．洗涤时各孔均需加满洗液，防止因洗涤不充分造成非特异性反应。 4．HCV抗体试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。 5．微孔条从冷藏环境中取出应在室温平衡后再打开密封袋，未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。 6．不同批试剂不能混用。 7．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。